I.

INTRODUCCIÓN

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en

concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el
crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el
Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación,
conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los
resultados obtenidos. En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes
tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en
forma sólida. Usualmente para preparar un medio sólido se parte de un medio
líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina. Los
medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus
constituyentes en: Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias
complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas
por la adición de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los
componentes ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Realizar correctamente el plaqueo de Agar

OBJETIVO ESPECIFICO

Preparar adecuadamente los medios de cultivos.

 II. REVISION BIBLIOGRAFICA

2.1. Agar manitol salado

El agar manitol salado es un medio selectivo usado para el

aislamiento de estafilococos patógenos, especialmente Staphylococcus aureus,
considerado un patógeno bacteriano serio desde que desarrolló resistencia a la
penicilina en 1950. El agar manitol salado ha sido empleado también en estudios
de resistencia a antibióticos, en los cuales ha demostrado una especificidad de
98,1 % y una sensibilidad de 95,1 % con cepas de Staphylococcusoxacillina
resistentes.
El agar manitol salado incluye en su composición el indicador
de pH: rojo fenol. Este indicador es de color rojo a pH 8,2 y cambia a amarillo a
pH por debajo de 6,8. Cuando se desarrollan las colonias de Staphylococcus
aureusfermentadoras de manitol, se produce ácido en el medio, el cual reacciona
con el indicador y forma las áreas de color amarillo alrededor de las colonias,
reacción característica de los estafilococos patógenos.

Sin embargo, la alta concentración del indicador puede

afectar la calidad del medio de cultivo porque la mayoría de estos indicadores
son tóxicos para los microorganismos. Además, la cantidad excesiva de
indicador sulfoftaleínico (como el rojo fenol) proporciona al medio de cultivo una
capacidad de buffer adicional y disminuye la difusión de los ácidos metabólicos.
Por otra parte, es necesario que el medio de cultivo posea una adecuada
composición de bases nutritivas para contrarrestar el efecto inhibitorio de la alta
concentración de cloruro de sodio y lograr una rápida y eficiente recuperación de
estafilococos.

Por todo lo anterior mencionado y en respuesta a las

exigencias actuales del diagnóstico microbiológico, se decidió realizar
modificaciones a la formulación original del medio agar manitol salado,
buscando mayor velocidad en la identificación. (Lesli S. Garza Martinez. 2011)
2.2. Preparación de medios de cultivo

En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se

encuentran comercializados; normalmente bajo la forma de liofilizados a los que
es preciso rehidratar. En estos casos la preparación del medio de cultivo se
reduce sencillamente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en
agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias
termolábiles, se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los componentes
después de que estos hayan sido previamente esterilizados en el autoclave y
enfriados a temperatura ambiente a 40-50ºC si se trata de medios con agar.

Antes de su esterilización los medios líquidos se reparten en

los recipientes adecuados (tubos, matraces, etc.). Si es un medio sólido y se ha
de distribuir en tubos o en matraces será necesario fundir el agar en baño María
u horno microondas, una vez fundido y homogenizado, se distribuye en caliente
a los tubos o matraces (no en placas Petri) se tapa y se esteriliza en el autoclave.
Una vez finalizada la esterilización los medios se dejarán enfriar a temperatura
ambiente y en el caso de medios sólidos contenidos en tubos deberán, en su
caso, inclinarse para que al solidificarse adopten la forma de agar inclinado o
pico de flauta (slant) si tal es su finalidad.

Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y

estéril dentro de ellas y en un ambiente aséptico (por ejemplo, en la proximidad
de la llama de un mechero Bunsen) es conveniente homogenizar el medio en el
transcurso de la operación para evitar que el agar sedimente en el fondo del
recipiente y no se distribuya por igual en todas las placas. También es posible
conservar el medio destinado a preparar placas Petri solidificado y estéril en
tubos que se fundirán al baño María en el momento de la preparación de las
mismas.

Los caldos y medios sólidos pueden conservarse, una vez

esterilizados, a temperatura ambiente, pero para reducir su deshidratación y el
consiguiente cambio en las concentraciones de sus componentes es preferible
conservarlos a 4ºC. (DANNA CUELLAR. Noviembre 2014)
 III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. LUGAR Y FECHA

La presente práctica se realizó el día 01 de Octubre del 2018,

en el laboratorio de Sanidad Animal, Facultad de Zootecnia; Universidad
Nacional Agraria de la Selva; en la ciudad de Tingo María; distrito de Rupa Rupa;
provincia de Leoncio Prado; región de Huánuco. Geográficamente se ubica a 9°
17’ 08” de latitud sur, y 75° 59” 52’ de latitud oeste; a 650 msnm y a una
temperatura de 24° C, con una precipitación pluvial de 3182mm y con una
humedad relativa de 85% promedio.

La práctica duro aproximadamente 02 horas, dando inicio a

las 10:00am y culminando a las 12:00pm.

3.2. MATERIALES

 Placas Petri
 Papel klaf
 Mechero de alcohol
 Agar
 Autoclave
 Alcohol

3.3. METODOS
El método empleado por el docente fue practico.

3.3.1. PROCEDIMIENTO

Plaqueo de Agar
 Primeramente, debemos empezamos esterilizando los materiales a
utilizar.
 Empaquetamos las placas Petri y ponerlos en el autoclave durante 20
minutos a 121°C.

 Una vez esterilizado los materiales, debemos esterilizar con un poco de

alcohol el lugar de trabajo.

 Seguidamente, verter el agar en la placa Petri hasta cubrir toda la base de

este.

 Finalmente, trasladar el agar a la refrigeradora hasta 24 o 48 horas

aproximadamente hasta ver que las bacterias crezcan.
 IV. RESULTADOS

Los resultados de la practica fueron positivos, ya que, se

realizó correctamente el plaqueo de Agar (Agar Manitol Salado Staphylococus)
con la debida precaución para realizar esta práctica, lo cual cumple con los
objetivos propuestos.

V. DISCUSIÓN

Al buscar información en diferentes fuentes encontré un dato muy interesante

que la preparación adecuada de un medio de cultivo (Agar Manitol Salt
Staphylococus) nos permite disponer de los nutrientes y condiciones
necesarias para favorecer el crecimiento de los microorganismos en el
laboratorio. (Lesli S. Garza Martinez. 2011)

VI. CONCLUCIONES

Al concluir esta práctica tuvimos un aprendizaje muy bueno y

a la ves descubrimos que el plaqueo de agar para los medios de cultivo son
importantes porque con ellos podemos determinar el tipo de microorganismo, el
cual nos permite tener una idea de cómo podemos contrarrestarlos si este se
encuentra dentro del cuerpo de un animal.
 VII. BIBLIOGRAFÍA

 DANNA CUELLAR, ERIK TORRES y XIOMY ARIAS. Preparación de medios

de cultivos del medio ambiente. Noviembre 2014. [en línea].
https://www.academia.edu/11984159/informe_pr%c3%81ctica_3_preparaci%
c3%93n_de_medios_de_cultivo_y_microorganismos_del_ambiente_danna_
cuellar_erika_torres_xiomy_arias_presentado_a_alejandro_patarroyo_conve
nio_servicio_nacional_de_aprendizaje_senacorporaci%c3%93n_tenol%c3%
93gica_de_bogot%c3%81_noviembre_2014

 Lesli S. Garza Martinez. Práctica # 03: Preparación de medios de cultivos.

Noviembre 2011. [en línea]. https://es.slideshare.net/lilyles/reporte-3-
17067176