Estudio de

Linfomas No Hodgkin y
Neoplasias de Celulas Plasmaticas
por Citometria de Flujo

Primera Parte

Conceptos Generales

Bioq. Mariela B. Monreal

 Introducción
Aportes de la Citometria de Flujo
en el estudio de Linfoma
1- Herramienta DIAGNOSTICA
Diferenciar NORMAL – REACTIVO – NEOPLASICO

2- CLASIFICACION
Reconocimiento de ENTIDADES NEOPLASICAS distintas
Relación con el pronóstico
Reconocimiento de grupos de riesgo diferente, nuevos
protocolos de tratamiento

3- Evaluación de EFECTIVIDAD del TRATAMIENTO

Detección de Enfermedad Mínima Residual
Estudio de CMF para en el diagnostico de Linfomas
Enfoque actual

Sintomas
Presentación Clínica Resultados de Laboratorio

Morfología / Citoquímica

Citogenético
Inmunofenotipo

Biología Molecular - FISH

Biología Molecular - FISH
 Cómo / Cuándo solicitar CMF?

Frecuentemente, NO es necesario /efectivo (costo / beneficio) realizar

varios CMF y/o en diferentes muestras…..

El Consenso Internacional de Citometría (2006, Bethesda) identifica

situaciones clínicas en las que la citometría es UTIL en la identificación de
neoplasia y caracterización de la misma.

La clasificación de la WHO establece la importancia de

la evaluación conjunta de morfología, genética y
fenotipo para la correcta clasificación de diferentes
entidades.

Realizar los estudios en un mismo centro que pueda

CORRELACIONAR datos de las diferentes metodologias
realizadas ES INDISPENSABLE - sobre todo en ciertas
situaciones diagnósticas.
 Diferentes centros: Limitación diagnóstica
Mujer joven, derrame pericárdico

Posteriormente, hematólogo provee MAS DATOS :

gran masa mediastinal , derrame pleural.
Biopsia de tumor derivada a otro centro.
Citometria de Flujo : una herramienta extremadamente UTIL
…..que necesita de DATOS para realizarse correctamente

Historia clinica (diagnosticos previos!, tratamientos recibidos).Edad, sexo

Indicacion medica actual– datos clinicos, laboratorio…que motivan el
estudio.
Datos de CMF previas !

Las decisiones del TEST de CMF a REALIZARSE son tomadas

en
BASE A ESTOS DATOS

Anemia severa, MDS?

 Citometría de Flujo
Análisis de células en suspención

Detectores de luces
Computadora
Rayo Laser

Células en suspención
“Marcadas” con
•Almacenamiento
Anticuerpos
de datos
Monoclonales
Células pasan en fila una a una •ANALISIS
conjugados a •Gráficos-Reporte
fluorocromos
 Identificación de Neoplasia Linfoide de celula B madura
(B- CLPD , B-NHL) . CMF “convencional”

RESTRICCION DE CADENAS LIVIANAS de Ig - K o L

FENOTIPO ABERRANTE – COMPARACION CON FENOTIPO NORMAL

Evaluación de 4 antigenos
Multiples combinanciones con CD19 y CD45
como marcadores comunes
CD45

CD19
 Evaluación de fenotipo. Detección de anomalías.
Asociacion a entidades clinico patológicas de la WHO

CD5+ CD10- CD5- CD10+

PLL
HCL
MZL
LPL
DLBCL (Richter)
MZL
LPL-B
MCL
CD5- CD10- : GRUPO MUY HETEROGENEO CD5+ CD10+
Entidades mas infrecuentes
DLBCL
FCL
MCL
CLL
BL
MCL CD5neg ; FCL CD10neg

Para cada grupo, CMF ADICIONAL , morfologia y biologia molecular /

citogenetico colaboran en la mejor definicion de las ENTIDADES
 NUEVA TECNOLOGIA
Evaluación de fenotipo en combinaciones multiples

CD45
CD20 Evaluación de 8 antigenos
SIMULTANEAMENTE
CD19
MAS INFORMACION

VENTAJAS :

DEFINIR MEJOR LAS PATOLOGIAS (DCO)

 MAYOR ESPECIFICIDAD (MRD)

 MAYOR SENSIBILIDAD (MRD)
 MAS INFORMACION en pocas CELULAS
 NUEVA TECNOLOGIA
Evaluación de fenotipo en combinaciones multiples
INFORMACION PANEL 8 COLORES

SITUACION MAS COMPLEJA

SE REQUIERE
UN CAMBIO
PARA ABORDAR ESTA
NUEVA TECNOLOGIA
 ESTANDARIZACION TOTAL DE LA METODOLOGIA

RESULTADOS TOTALMENTE COMPARABLES (en el tiempo / entre centros)

 LST : TUBO SCREENING para B, T o NK SLP

LST
IDENTIFICA LINFOCITOS ANORMALES
Combinacion de 12 anticuerpos monoclonales (8 colores)
LST : TUBO SCREENING para B, T o NK SLP

12 muestras de SP NORMAL , DIFERENTES DONANTES SANOS

A LO LARGO DE DOS MESES
 Identificación de Neoplasia Linfoide de celula T madura

FENOTIPO ABERRANTE – COMPARACION CON FENOTIPO NORMAL

SCREENING INICIAL TUBO LST
 Fenotipo T sin anomalias
Intensidad de CD3 en celulas CD4 y CD8
Identificación de Neoplasia Linfoide de celula T madura
 NEOPLASIAS DE CELULAS T MADURAS
(PERIFERICAS) WHO
PREDOMINANTEMENTE LEUCEMICAS /DISEMINADAS
• Leucemia Prolinfocítica T
• Leucemia de Células Grandes Granulares T
• Leucemia NK Agresiva
• Leucemia/Linfoma T Del Adulto (HTLV-1+)
PREDOMINANTEMENTE NODALES
• Linfoma T Angioinmunoblástico
• Linfoma T Periférico sin otra caracterización (NOS)
• Linfoma De Grandes Células Anaplásico, T o Nulo, Primario Sistémico
PREDOMINANTEMENTE EXTRANODALES
• Micosis Fungoides / Síndrome de Sezary
• Linfoma De Grandes Células Anaplásico, T o Nulo, Primario Cutáneo
• Linfoma T Subcutáneo Paniculítico
• Linfoma Extranodal T/NK, Tipo Nasal
• Linfoma T Intestinal Tipo Enteropatía
• Linfoma T Hepatoesplénico 
PANEL EUROFLOW para B-CLPD
 UTILIDAD CLINICA PRINCIPAL
NUEVO ENFOQUE DIAGNOSTICO en base a FENOTIPO
1- El total de la información de los 5 tubos del panel es UNIFICADO en
un solo “TUBO” (unico FILE)

2- El fenotipo TOTAL de la población de interés (por ej, CELULAS B) , se

ubica en una zona de los nuevos gráficos llamados “APS” :
Separador Automático de Poblaciones

B-CLPD panel APS

CLL vs MCL

1 sIgM 14.02
2 CD200 13.76
3 CD79b 11.94
4 CD23 8.57
5 CD38 7.73
CLL MCL
 UTILIDAD CLINICA PRINCIPAL
NUEVO ENFOQUE DIAGNOSTICO en base a FENOTIPO
 B- CLPD panel :
Comparacion de un caso problema vs. varios grupos de referencia
 ENFERMEDAD MINIMA RESIDUAL
Conceptos generales

Nuevos regimenes de tratamiento en Linfoma No Hodgkin – B prolongan

sustancialmente la SLE (sobrevida libre de enfermedad) y sobrevida
global.
 Inmunoquimioterapia : Combinaciones de anti CD20 con
diferentes regimenes de altas dosis de quimioterapia

 Transplante autólogo
Sin embargo, ciertos pacientes sufren de recaídas tempranas.

Es de gran interés predecir tempranamente la duración y calidad de la

respuesta, que posibiliten tomar decisiones terapéuticas alternativas.

Después del tratamiento, es posible identificar pacientes con depleción de

células neoplásicas a muy bajos niveles (EMR), lo cual se asocia a
pronostico favorable.
La erradicación de la enfermedad se plantea actualmente como un
objetivo necesario para superar riesgo de recaida o progresion.
 CONCLUSIONES

En los últimos 15 años, la citometría de flujo ha evolucionado enormemente como

metodología diagnóstica .

Lejos de ser considerada una técnica auxiliar de estudios morfológicos, provee

información extremadamente útil y completa, en menos de 24 horas.
La misma debe ser considerada CONJUNTAMENTE con los resultados anatomo-
patologicos , para la correcta clasificación de muchas de la entidades ya descriptas.

Los ENORMES avances tecnológicos de los ultimos 5 años, han planteado la

necesidad imperiosa de ESTANDARIZACION de esta COMPLEJA metodologia con la
que hoy contamos, para lograr aprovechamiento total de los datos, y obtener
resultados COMPARABLES entre laboratorios, y a lo largo del tiempo.

ESTE trabajo ha sido lanzado por el grupo EUROFLOW.

El análisis de fenotipo cambia radicalmente a partir de esta propuesta.

Esta NUEVA citometría permite identificar y subclasificar las mayoría de
las entidades definidas (WHO actual) , y permitirán el reconocimiento de
nuevos grupos de patológías.
Seguimos con fenotipo normal
y algunos ejemplos!