FACULTAD DE EDUCACIÓN Y CIENCIAS

PROGRAMA DE BIOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR
PRÁCTICA DE BIOLOGÍA MOLECULAR N°1
RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS Y REACTIVOS UTILIZADOS EN BIOLOGÍA
MOLECULAR

Jaraba D, Cárdenas M, Baleta Y, Rivero K, Lleras A.

OBJETIVOS

 Conocer las normas generales de un laboratorio de biología molecular.

 Reconocer equipos y reactivos que se estarán utilizando en las prácticas de biología
molecular.

MARCO TEÓRICO

La biología molecular tiene como objetivo el estudio de los procesos que se desarrollan en
los seres vivos desde un punto de vista molecular.
La biología molecular pretende explicar los fenómenos de la vida a partir de sus
propiedades macromoleculares. Dos macromoléculas en particular son su objeto de estudio:
1) Los ácidos nucleicos, entre los cuales el ácido desoxirribonucleico (ADN), el
componente de genes.
2) Las proteínas, que son los agentes activos de los organismos vivos.
La manipulación del ADN conlleva una serie de técnicas que consisten en cortarlo,
amplificarlo, secuenciarlo, expresarlo, sintetizarlo, mutarlo e incluso visualizarlo.

Por eso el laboratorio de biología molecular tiene una serie de condiciones especiales
relacionadas con el manejo de reactivos, elementos y equipos que pueden influir en la salud
del personal así como repercutir en el medio ambiente. Por ende, es importante conocer las
normas establecidas, familiarizarse con el uso de cada uno de los materiales de trabajo para
evitar cometer errores o sufrir accidentes durante su manipulación.

Los conocimientos realizados durante el desarrollo de una práctica de laboratorio, haciendo

uso de los materiales, instrumentos y equipos de laboratorio, constituyen una oportunidad
única para familiarizarse de los hechos y leyes que rigen el desarrollo de
las ciencias químicas.
Es muy importante que los equipos y reactivos de uso en el laboratorio se identifiquen por
su nombre correcto y uso específico que tiene cada uno, pero más importante es saber
manejarlo correctamente en el momento oportuno, teniendo en cuenta los cuidados y
normas especiales para el uso de aquellos que así lo requieran.

MATERIALES Y MÉTODOS

En el laboratorio se procedió a recorrer con ayuda del auxiliar de laboratorio quien explicó
el manejo y funcionamiento de los diferentes equipos y reactivos encontrados en este que
se utilizarán en las diferentes prácticas.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Se encontró:

EQUIPOS: REACTIVOS:

Autoclave Fenol

Cámara de electroforesis 2-Mercaptoetanol

Centrifuga refrigerada Alcohol isoamilico

Micro pipeta Syber Safe o Gel Red

Termociclador Cloroformo

Balanza analítica Tris

Centrifuga Acetato de sodio

Freezer Polivinilpirrolidona (PVP)

Regulador de voltaje Isopropanol

Transiluminador 2-Octanol

Dodesil Sulfato de sodio o (SPS)

Etanol Adsoluto

EDTA

Acetato de amonio.
 EQUIPOS

TERMOCICLADOR:

Un termociclador -máquina de PCR o reciclador térmico de PCR es un aparato usado

en Biología Molecular que permite realizar los ciclos de temperaturas necesarios para la
amplificación de diversas hebras de ADN en la técnica de la PCR (Reacción en cadena
de la polimerasa).

CÁMARA DE ELECTROFORESIS:

La electroforesis es un método básico en el campo de la biología molecular para el

análisis (Separación, purificación, preparación) de los ácidos nucleicos y proteínas.

El principio de la electroforesis consiste en la migración de las moléculas a través de un

gel u otro tipo de matriz de naturaleza porosa, en el cual, por acción de un campo
eléctrico, serán separadas de acuerdo a su tamaño o peso molecular. En la electroforesis
de tipo vertical, se analizan tanto moléculas de ADN como proteínas, mientras que en la
electroforesis horizontal generalmente se trabaja con ADN o ARN.
 REGULADOR DE VOLTAJE:

Es un dispositivo que tiene varios enchufes, se encarga de mantener el voltaje estabilizado

y libre de variaciones (el voltaje es la fuerza con que son impulsados los electrones a través
de los cables de la red eléctrica), ello porque comúnmente la electricidad llega con
variaciones que provocan desgaste de los elementos electrónicos a largo plazo en
las fuentes de alimentación de las computadoras y elementos electrónicos. Lo que el
regulador hace es estabilizar la electricidad a un nivel promedio constante para que no
provoque daños en los equipos.

BALANZA ANALÍTICA:

La balanza analítica es el principal instrumento usado en el análisis cuantitativo; son

capaces de pesar con una apreciación 0,0001 mg. Normalmente el primer paso en un
análisis es pesar una porción de muestra. También se pesan precipitados o sustancias puras
para preparar soluciones de concentración conocida.
CENTRIFUGA:

Modelo: MIKRO 120

La centrífuga es un equipo de laboratorio que genera movimientos de rotación, tiene el

objetivo de separar los componentes que constituyen una sustancia.

En el laboratorio las centrífugas se usan generalmente en procesos como la separación por

sedimentación de los componentes sólidos de los líquidos biológicos y, en particular, en la
separación de los componentes de la sangre: glóbulos rojos, glóbulos blancos, plasma y
plaquetas, entre otros, y para la realización de múltiples pruebas y tratamientos.

MICROPIPETA:

La micro-pipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir

pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas.
Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más
habituales, denominados p20, p200 y p1000, admiten un máximo de 20, 200 y 1000μl,
respectivamente.

Es de destacar que el uso de micro-pipetas permite emplear distintos líquidos sin tener que
lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plástico, que habitualmente
son estériles. Existen varios tipos de puntas: por ejemplo, las amarillas para pipetear
volúmenes pequeños (por ejemplo, 10μl), y las azules para pipetear volúmenes grandes (por
ejemplo, 800μl).

FREEZER:

FUNCIÓN: Conservar las muestras y reactivos.

El refrigerador en los laboratorios es uno de los equipos más importantes. Su función

consiste en mantener, en un ambiente controlado (espacio refrigerado), diversos fluidos y
sustancias para que los mismos se conserven en buenas condiciones (mientras más baja sea
la temperatura, menor actividad química y biológica).

CENTRÍFUGA REFRIGERADA:

Modelo: Eppendorf 5424 R

Se basa en diferencias en las velocidades de rotación que tienen sólidos y líquidos,

permitiendo separar solidos dispersos en líquidos. Consta de un sistema que mantiene la
muestra refrigerada para evitar la degradación de dicha muestra, especialmente cuando se
manipulan ácidos nucleicos.
La Centrifuga 5424 R con refrigeración se caracteriza por su tecnología de enfriamiento de
última generación que garantiza una eficiencia energética y una alta exactitud de
temperatura para lograr una máxima protección de las muestras. Para un manejo más
cómodo y ahorro de tiempo, la Centrifuga 5424 R se enfría a 4 °C en tan solo 8 minutos.

TRANSILUMINADOR:

El Transiluminador sirve para la visualización de bandas fluorescentes de proteína

y DNA en geles electroforéticos. El transiluminador para la visualización y fotografía de
bandas fluorescentes de proteína y DNA en geles electroforéticos comprende por lo menos
una fuente de luz, un filtro de excitación sobre el que se coloca un gel electroforético a
analizar que contiene bandas de proteína o DNA teñidas con colorantes fluorescentes, y por
lo menos un filtro de detección, que se caracteriza por el hecho de que dicha fuente de luz
emite radiación visible, dicho filtro de excitación seleccionan un intervalo de longitudes de
onda comprendido dentro de la región visible y dicho filtro de detección presentan
transmisión a longitudes de onda superiores a las de dicho intervalo.
AUTOCLAVE:

Un autoclave de laboratorio es un dispositivo que sirve para esterilizar material de

laboratorio, utilizando vapor de agua a alta presión y temperatura, evitando con las altas
presiones que el agua llegue a ebullir a pesar de su alta temperatura. El fundamento del
autoclave es que coagula las proteínas de los microorganismos debido a la presión y
temperatura, aunque recientemente se ha llegado a saber de algunas formas acelulares, tal
como los priones, que pueden soportar las temperaturas de autoclave.

Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generación de vapor de agua pero

restringiendo su salida, hasta obtener una presión interna de 103 kPa, lo cual provoca que el
vapor alcance una temperatura de 121 grados centígrados. Un tiempo típico de
esterilización a esta temperatura y presión es de 15-20 minutos.

REACTIVOS

FENOL:
Es una masa cristalina blanco/incolora con fuerte olor
característico. Cáustico, tóxico, soluble en agua y en solventes orgánicos como éter, alcohol
y
acetona.
Su fórmula química es C6H5OH.
2-MERCAPTOETANOL:
El 2-mercaptoetanol (también conocido como β-mercaptoetanol, BME, 2BME o β-met) es
un compuesto químico con fórmula HOCH2CH2SH. Es un híbrido entre el etilenglicol,
HOCH2CH2OH, y el 1,2-etanoditiol, HSCH2CH2SH. El ME o βME, como comúnmente se
abrevia, se emplea profusamente en el laboratorio para reducir los puentes disulfuro y
puede actuar como antioxidante biológico, reciclando radicales hidroxilo (entre otros) Se
emplea ampliamente debido a que el grupo hidroxilo le confiere buena solubilidad en agua,
a la vez que disminuye la volatilidad. Debido a su reducida presión de vapor, su olor,
aunque desagradable, es menos molesto que el de otros tioles relacionados.

ALCOHOL ISOAMILICO:

El alcohol isoamílico (2-Metil-4-Butanol) es un líquido incoloro de olor característico. Se

utiliza en química analítica, en síntesis de productos orgánicos, como disolvente y en la
determinación de grasa (Gerber) en leche como antiespumante.
SYBER SAFE O GEL RED:

Son una nueva generación de manchas de ADN fluorescentes diseñado para sustituir el
bromuro de etidio altamente tóxico (EtBr).

CLOROFORMO

El cloroformo es un líquido incoloro, volátil y no inflamable con un característico olor

dulzón. Fórmula química CHCl3. El cloroformo es un reactivo químico útil debido a
la polarización de sus enlaces C-Cl, por lo que es una herramienta apreciada en síntesis
orgánica, al proporcionar el grupo CCl2.
Se utiliza habitualmente como disolvente y desengrasante en muchos procesos industriales
y en diversos laboratorios, siendo especialmente común el empleo de su
derivado deuterado en los laboratorios de química orgánica y farmacéutica.

TRIS

Es el nombre abreviado del compuesto orgánico conocido como tris (hidroximetil)

aminometano, de fórmula (HOCH2)3CNH2. Se utiliza ampliamente
en bioquímica y biología molecular, en particular para preparar disoluciones tampón (por
ejemplo, tampones Tris-HCl, Tris-Gly, TAE y TBE).
ACETATO DE SODIO

El acetato de sodio, también llamado etanoato de sodio, es la sal de sodio del ácido acético.
Es un producto químico económico producido en cantidades industriales para una amplia
gama de usos.

ISOPROPANOL

Es un alcohol incoloro, inflamable, con un olor intenso y muymiscible con el agua. Es

un isómero del 1-propanol y el ejemplo más sencillo de alcohol secundario, donde el
carbono del grupo alcohol está unido a otros dos carbonos.

EDTA

El ácido etildiaminotetraacético, también denominado DTA, es una sustancia utilizada

como agente quelante que puede crear complejos con un metal que tenga una estructura de
coordinación octaédrica. .
ACETATO DE AMONIO

Es un sólido blanco cristalino (como la arena) con un ligero olor similar al del vinagre. Se
utiliza en análisis químicos, coloración de textiles.

CONCLUSIONES

Los equipos de laboratorio son herramientas científicas complejas, por lo tanto conocer
acerca del manejo y funcionamiento de estas nos puede evitar causar efectos secundarios
peligrosos si no se utiliza de manera correcta, ya que no saber qué se está haciendo puede
retrasar de muchas maneras e incluso dañar o arrojar resultados no confiables.

Un reactivo químico es toda sustancia que interactuando con otra (también reactivo) en una
reacción química da lugar a otras sustancias de propiedades, características y conformación
distinta, denominadas productos de reacción o simplemente productos.

La pureza de los reactivos es fundamental para la exactitud que se obtiene en cualquier

análisis, por ende es de vital importancia conocer sus características de manejo,
precauciones y usos.

ACTIVIDADES

1. Defina 5 tipos de PCR

A.) PCR anidada

Técnica muy sensible de PCR en la que el producto de una amplificación es utilizado como
molde para realizar una segunda amplificación con cebadores que se ubican dentro de la
primera secuencia amplificada. Este tipo de PCR es muy específica.
B.) PCR Multiplex

Es un tipo de PCR en el cual se amplifica más de una secuencia en una misma reacción, en
este tipo de PCR se utilizan múltiples pares de primers (hasta 8) lo que da una serie de
productos, los amplificados pueden verse como múltiples bandas en un gel, este tipo de
PCR es frecuentemente usada en diagnóstico médico.

C.) PCR in situ

Es una PCR realizada sobre preparaciones fijas sobre un portaobjetos, consiste en una
reacción de PCR en secciones histológicas o células, donde los productos generados pueden
visualizarse en el sitio de amplificación. En la técnica de in PCR-in situ se realiza primero
amplificación de ADN blanco y luego detección mediante hibridación in situ convencional
con sondas ADN/ARN. De esta manera pueden detectarse cantidades pequeñísimas de
genoma.

D.)RT-PCR
Donde el molde inicial es ARN y se requiere de una enzima denominada transcriptasa
inversa, para realizar la conversión del ARN a un tipo de ADN llamado ADNc (ADN
complementario). Es especialmente útil cuando solo se dispone de pequeñas cantidades de
ARN, esta técnica se utiliza para amplificar genes específicos

En esta PCR se requiere de dos tipos de cebadores: un cebador denominado Antisentido

que inicia la reacción de RT-PCR y el cebador denominado Sentido (sense) que realiza el
duplex de ADNc, además requiere una ADN polimerasa dependiente de ARN, la RT-
PCR puede ser usada para construir bibliotecas de ADNc.

E.) PCR tiempo real

Permite cuantificar, la cantidad de ADN o ARN amplificado en cada momento. Para la

detección de la cantidad de ADN específico se emplea una sonda unida a
dos fluorocromos que hibrida en la zona intermedia entre el cebador directo (forward) y el
inverso (reverse), cuando la sonda está intacta, presentan una transferencia energética de
fluorescencia por resonancia (FRET). Dicha FRET no se produce cuando la sonda está
dañada y los dos fluorocromos están distantes, producto de la actividad 5'-3' exonucleasa
de la ADN polimerasa. Esto permite monitorear el cambio del patrón de fluorescencia y
deducir el nivel de amplificación del gen.
 BLIBLIOGRAFIAS

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