CRECIMIENTO

MICROBIANO

Claudia Constanza Pérez Rubiano

Fisión binaria:
Lag Exponencial
 Ocurren funciones celulares:
metabolismo energético y procesos
biosintéticos
 MÉTODOS DIRECTOS
RECUENTO EN PLACA

•  Económico
•  Se visualizan
 RECUENTO EN PLACA
RECUENTO EN RECUENTO EN RECUENTO EN
PROFUNDIDAD SUPERFICIE SANDWICH
Menor Mayor posibilidad Menor
contaminación de contaminación contaminación
Medios Medios opacos Medios opacos
transparentes
Detecta menor de 10 Detecta a partir de Detecta menor de
UFC/ml de 100 UFC/ml 10 UFC/ml
 RECUENTO EN CÁMARA
PETROFF HAUSER HOWARD
•  Recuento de levaduras
•  Recuento de hifas de
•  No diferencia células hongos
viables de no viables
•  Determina calidad de
•  Coloración supravital materias primas
•  Azul de metileno •  Industria de salsa de
•  Cerveza, licor y jugos tomate y jugos
•  Se diluye a 8 grados Brix.
Hemocitómetro o Cámara cuenta
glóbulos
Este sistema tiene 2 áreas de conteo
separadas, cada una debe contener de 0.1
mm3 de muestra cuando se cubre con un
cubre objetos especial. Áreas de conteo
 Cubre objetos especial
•  Un cubreobjetos
especial, grueso se
monta sobre dos
barras de cristal y
Bar
esto forma las dos
cámaras.

Bar
 Cuadrículas de conteo
Líneas finas en el piso de
la cámara ayudan con el
conteo celular.


El # células por ml =
P r o m e d i o d e l # d e
células de los cuadros de
las esquinas x 104.


Cámara cuenta hongos de Howard

F  ue diseñada especialmente para contar

hongos y levaduras en un volumen dado
de alimento.

 L a estructura es similar a la del

hemocitómetro pero no tiene cuadrícula
en el piso de la cámara.

 Un disco ocular de Howard en el ocular

del microscopio se usa para facilitar el
conteo.
Howard
FILTRACIÓN POR MEMBRANA
•  M u e s t r a l í q u i d a n o
viscosa, licores, jugos
agua
•  Alta sensibilidad
•  Muy costoso
•  Bomba de vacio
•  Filtros de nitrocelulosa
(o.45, 0.22um)
•  Filtra mínimo 100 ml y
maximo 300 ml
•  Mesófilos, coliformes,
Pseudomonas, E. coli
MÉTODOS INDIRECTOS
-NMP
•  NMP/100ml
Escala de mac farland
 QUIMIOSTATO

Permite el control de la
densidad de población y la
velocidad de crecimiento del
cultivo.

Constituyen un medio para mantener

p o b l a c i o n e s c e l u l a r e s e n f a s e
e x p o n e n c i a l d u r a n t e p e r i o d o s
prolongados.

Control: Velocidad de dilución,

c o n c e n t r a c i ó n d e l n u t r i e n t e
limitante.
 CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE
MICROORGANISMOS

•  Disponibilidad de nutrientes adecuados (C, N, S, P

y sales inorgánicas)
•  Consistencia adecuada del medio
•  Presencia de oxigeno y otros gases
•  Condiciones adecuadas de humedad
•  Luz ambiental
•  pH
•  Temperatura
•  Esterilidad del medio

INFLUENCIA DE FACTORES MEDIOAMBIENTALES
SOBRE CRECIMIENTO MICROBIANO
 Temperatura
•  Conforme la T° aumenta, dentro de
cierto límite, la proliferación y las
funciones metabólicas aumentan hasta
un punto en donde se inician las
reacciones de inactivación. Por encima
de este punto, las funciones celulares
caen drásticamente.
•  Temperatura mínima (por debajo del
cual no tienen lugar la proliferación),
temperatura óptima (el crecimiento es
más rápido) y temperatura máxima (por
e n c i m a d e l a c u a l n o e x i s t e
crecimiento).
•  La temperatura óptima siempre está
más cerca de la máxima que de la
mínima.

30
 Membrana
semifluida

Temperaturas óptimas
bajas
•  Psicrófilos: Se encuentran en ambientes
p e r m a n e n t e m e n t e f r í o s y m u e r e n
rápidamente si se exponen a temperatura
ambiente. Temperatura optima 15C, o más
baja, una máxima por debajo de 20 y una
mínima de OC o menor.
•  S e e n c u e n t r a n e n a m b i e n t e s
permanentemente fríos, como en las regiones
polares y sus sedimentos marinos, y mueren
rápidamente si se exponen a temperatura
ambiente normal
•  En estos organismos predominan los ácidos
grasos insaturados en sus membranas,
aminoácidos polares y alto contenido de hélices
alfa. Producen enzimas que funcionan
óptimamente en frio y que se desnaturalizan a
rápidamente a temperaturas moderadas.
•  Psicrotolerantes: Crecen a O C, temperatura
optima 20 a 40C. Pueden aislarse de suelo y
aguas de climas temperados; carne leche, otros
lácteos, sidra, vegetales y frutas almacenados en
refrigeración 4C.
•  M e s ó f i l o s : c o n t e m p e r a t u r a s ó p t i m a s
moderadas, animales de sangre caliente y en
medios acuáticos y terrestres de latitudes
templadas y tropicales. Crecen entre 15 y 45C con
óptimo de 35°C.

•  Termófilos: con altas temperaturas óptimas.
Temperatura óptima por encima de 40C
Presentan lípidos ricos en ácidos grasos saturados
que permiten que las membranas permanezcan
funcionales y estables a elevadas temperaturas
•  Los hipertermófilos, en su mayoría Archaea,
no presentan ácidos grasos en sus membranas
sino carbohidratos de tipo C40 compuestos de
unidades repetitivas isoprenoides de cinco
átomos de carbono que se unen al enlace éter
al glicerol. (monocapa lipídica, y esta
estructura es más termoresistente que la
bicapa de bacteria y Eucarya).
•  Termófilos e hipertermófilos catalizan
reacciones a altas temperaturas. Taq
polimerasa de Thermus aquaticus.
•  C ó m o p u e d e n p r o s p e r a r a a l t a s
temperaturas? Sus enzimas y otras proteínas
celulares son mucho más sensibles al calor que
los de los mesófilos.
Arroyos hirvientes, algunos crecen a
temperaturas superiores a 100C y Temperaturas óptimas
han de ser crecidos en contenedores muy elevadas
presurizados
•  La estabilidad de la temperatura de proteínas
de estos microorganismos se incrementa como
r e s u l t a d o d e p u e n t e s d e s a l y u n
empaquetamiento altamente hidrofóbico del
interior de las proteínas.
•  1. En general, los organismos procarióticos
son capaces de crecer a las temperaturas más
elevadas que los eucarióticos.
•  Los termófilos de todos los procariotas son
algunas especies de Archaea.
•  Los organismos no fototróficos son capaces de
crecer a temperaturas más elevadas que las
formas fototróficas
 pH

Suelos
carbonatados y
lagos
bicarbonatados.
Bacillus sp.
•  En un medio de cultivo no renovado el pH puede
cambiar durante el crecimiento. Debido a esto se
utilizan: tampones para mantener el pH del medio.

42
-HALOFILOS: NaCl

Solutos compatibles: Solutos que se acumulan en el

citoplasma para ajustar su actividad de agua, no debe
-OSMOFILOS ser inhibitorio para la bioquímica celular; azúcares,
a.a., polialcoholes.
-XEROFILOS
 Oxígeno
Los microorganismos son muy variables en cuanto a la
necesidad del oxigeno.
Se dividen dependiendo del efecto del oxigeno:

1. Aerobios estrictos: los que requieren oxigeno como
aceptor terminal de electrones, no proliferan en
ausencia de O2. ej. Mycobacterium bovis.

2. Microaerofilos: utilizan O2 a niveles muy bajos. Un

12%. No proliferen en la superficie de un medio sólido.
Ej. Haemophillus suis
 Oxígeno
3.  Anaerobios estrictos: las que no emplean oxigeno
para su metabolismo, sino que obtienen su energía
de reacciones fermentativas. Ej. Clostridium tetani
4.  Anaerobios aerotolerantes: pueden crecer en
presencia o ausencia de oxigeno, pero la energía la
obtienen por fermentación. Ej. Bacterias
acidolacticas.
 Oxígeno
5.  Anaerobios facultativos:
son bacterias que proliferan mediante
procesos oxidativos, utilizando oxigeno como
aceptor terminal de electrones, o en
anaerobiosis, empleando reacciones de
fermentación para obtener energía.
Ej. Streptococcus, E. coli

CONTROL DE CRECIMIENTO MICROBIANO
 Limitando el
crecimiento
INHIBICIÓN microbiano
(reducción)

Muerte o eliminación de todos los

ESTERILIZACIÓN organismos viables de un medio de
cultivo

Agentes que destruyen

BACTERICIDAS o matan bacterias

BACTERIOSTÁTICOS Agentes que inhiben el

crecimiento bacteriano
 Productos químicos que matan los
Desinfectantes microorganismos , se usan sobre
objetos inanimados

Agentes químicos que matan o inhiben el

Antisépticos crecimiento de los microorganismos, y son
suficientemente no tóxicos para aplicárseles a
los organismos vivos
Métodos de desinfección