Observación e Identificación de células sanguíneas

Esteban Garcés1, Denyss Guilcazo1, Marbel Torres2

1
Departamento de Ciencias de la Vida y de la Agricultura,
2
Laboratorios de docencia de Ingeniería en Biotecnología,
Universidad de las Fuerzas Armadas – ESPE, Sangolquí, Ecuador.
Fecha de entrega: noviembre 24 del 2017
E-mail: eagarces2@espe.edu.ec, kdguilcazo@espe.edu.ec

RESUMEN
Las células sanguíneas están constituidas por tres grupos celulares: eritrocitos, leucocitos y plaquetas,
las cuales se producen en la medula ósea. Los leucocitos o glóbulos blancos se distinguen por sus
características morfológicas y funcionales. Se puede separar en dos tipos diferentes: leucocitos
granulocitos (neutrófilos, basófilos, eosinófilos) y leucocitos no granulocitos (linfocitos, monocitos).
Los eritrocitos poseen sistemas de antígenos, de los cuales los más importantes son ABO y RH, la
presencia o ausencia de antígenos específicos en la membrana de los eritrocitos permite la
clasificación de grupos sanguíneos. Los resultados obtenidos muestran los diferentes tipos de
leucocitos presentes en sangre, además la muestra tras reaccionar con los reactivos de distintos
anticuerpos (A, B, D), no presento aglutinación alguna, lo cual indica que el paciente pertenece al
grupo sanguíneo O Rh-. El presente trabajo tuvo como objetivo distinguir morfológicamente los
diferentes grupos de leucocitos a través de tinción Wright e identificar el grupo sanguíneo mediante
pruebas de aglutinación.
Palabras Claves: leucocitos, neutrófilo, eosinófilo, basófilo, monocito, linfocito, aglutinación.

ABSTRACT
The blood cells are made up of three cell groups: erythrocytes, leukocytes and platelets, which are
produced in the bone marrow. Leukocytes or white blood cells are distinguished by their
morphological and functional characteristics. It can be separated into two different types: granulocyte
leukocytes (neutrophils, basophils, eosinophils) and non-granulocyte leukocytes (lymphocytes,
monocytes). The erythrocytes have systems of antigens, of which the most important are ABO and
RH, the presence or absence of specific antigens in the membrane of the erythrocytes allows the
classification of blood groups. The results obtained show the different types of leukocytes present in
blood, besides the sample after reacting with the reagents of different antibodies (A, B, D), don´t
present any agglutination, which indicates that the patient belongs to the blood group O Rh- . The
objective of this study was to distinguish morphologically the different groups of leukocytes through
Wright stain and to identify the blood group by means of agglutination tests.
Key words: leukocytes, neutrophil, eosinophil, basophil, monocyte, lymphocyte, agglutination.

INTRODUCCIÓN cuando el organismo los necesita. Los

glóbulos blancos viven en la sangre unas doce
Los glóbulos blancos o leucocitos son las
horas y se diferencian de los glóbulos rojos
células encargadas de defender al organismo
porque poseen núcleo y son más grandes.
de las infecciones. Se producen a partir de la
(Carr & Rodak, 2010)
célula madre en la médula ósea, donde se
almacenan, y se liberan al torrente sanguíneo
Estas son células nucleadas que, en contraste
con los eritrocitos, no constituyen un grupo
celular unitario. Su número es de 4000 – 10000
µl de sangre. La forma de los leucocitos o la
morfología de su núcleo, sus propiedades
funcionales, la afinidad tintorial de sus
granulaciones citoplasmáticas y su origen,
constituyen la base para su subdivisión en los
siguientes grupos: granulocitos (neutrófilos,
eosinófilos, basófilos), monocitos, linfocitos.
(Thews, Mutschler, & Vaupel, 1993)
Los neutrófilos defienden el organismo contra
bacterias y otro microorganismo y presentan
divisiones en su núcleo de entre 3 a 5 lóbulos.
Los basófilos poseen gránulos de heparina e
histamina los cuales son mediadores de la
inflamación, estos son grandes y oscuros que
generalmente ocluyen la vista del núcleo. Los
eosinófilos poseen actividad fagocítica,
presenta gránulos pequeños y numerosos. Los
monocitos poseen actividad fagocítica
bactericida y posee un núcleo de forma
arriñonada. Los linfocitos constituyen una
población minoritaria y cuya función es la
inmunidad especifica o adquirirla; presentan
un núcleo esférico de gran tamaño llegando a
ser el citoplasma casi escaso. (González, 2007)
La Tinción Wright es un tipo de tinción usada
en histología para facilitar la diferenciación de
los tipos de células de la sangre.
Principalmente se la usa para teñir frotis de
sangre periférica y punciones medulares, para
ser examinadas bajo el microscopio. (Rodak,
2005)
Es una tinción de tipo Romanowsky, es decir,
consiste en una mezcla que contiene azul de
metileno y sus productos de oxidación como
eosina; tiene como base diversos colorantes
como los de Wright, Giemsa o Leishman. Esta
tinción permite distinguir la forma, tamaño y
contorno de los hematíes, leucocitos y
plaquetas y el núcleo, citoplasma y
granulaciones de las distintas células, a través
de una coloración purpura a los núcleos de los
leucocitos y a los gránulos neutrofílicos y de
una coloración rosa a los eritrocitos.
(Koneman, 2008)
La prueba de aglutinación se parece a la de
precipitación en que también se produce la
unión entre un antígeno y un anticuerpo para
dar lugar a un agregado visible de moléculas,
fácilmente detectable. Esta prueba puede ser
directa o indirecta. En las pruebas de
aglutinación directa interviene antígenos o
anticuerpos que forman parte de una manera
natural de una partícula de mayor tamaño,
como un microorganismo o un eritrocito. En la
prueba de aglutinación indirecta los antígenos
o los anticuerpos se adsorben de forma
artificial a una partícula, por ejemplo, una
partícula de látex.
El reactivo de la prueba contiene antígenos
microbianos conocidos; la prueba es positiva
si los antígenos del reactivo aglutinan con los
anticuerpos del suero del paciente y es
negativa si no se produce la aglutinación.
(Ingraham & Ingraham, 1998)
El objetivo de este trabajo fue distinguir
mediante tinción Wright los distintos tipos de
leucocitos y observarlos bajo microscopio
óptico, además identificar el grupo sanguíneo
mediante reacciones de aglutinación.
MATERIALES Y METODOS
Extracción de sangre venosa de la región
antecubital del brazo
1. Ubicar al individuo de estudio en una silla
cómoda que le brinde soporte al brazo del
cual se va extraer la sangre.
2. Colocar un torniquete alrededor del brazo
del individuo entre 5 a 10 centímetros sobre
el sitio de punción.
3. Identificar la posición de la vena de la cual
se va a extraer la sangre en la región
antecubital.
4. Desinfectar el área de punción empleando
alcohol al 70% y torundas de algodón. Para
la desinfección se debe realizar un
movimiento circular desde el centro hacia
el exterior evitando pasar el algodón dos
veces sobre la misma superficie.
5. Ajustar la aguja del vacutainer y colocar el
tubo con anticoagulante EDTA (tapa
morada) dentro del mismo, sin presionar.
6. Destapar la aguja e insertarla con el bisel
hacia arriba en el sitio de punción definido.
7. Una vez que la aguja se encuentre dentro de
la vena, empujar firmemente el tubo con
anticoagulante EDTA evitando el
movimiento del vacutainer para evitar
lesiones en el individuo.
8. Cuando el tubo haya recolectado
aproximadamente 3mL de sangre, retirarlo
del vacutainer.
9. Una vez retirado el tubo, quitar el
torniquete y sacar la aguja del brazo del
individuo. Colocar una torunda con alcohol
al 70% sobre el área de punción y presionar
durante 1 minuto aproximadamente.
10. Desechar adecuadamente la torunda de
algodón y colocar un curita sobre la zona
de punción.
11. Finalmente, homogenizar la sangre dentro
del tubo durante 1 minuto.
Frotis sanguíneo
1. Lavar dos portaobjetos con jabón líquido y
alcohol al 70%. Posteriormente, secar
ambos portaobjetos empleando una toalla
de papel.
2. Colocar una gota de sangre proveniente del
tubo con anticoagulante en el costado de un
portaobjetos, como se muestra en la Figura
2.
Figura 1: Ubicación de la gota de sangre sobre el
portaobjetos. Fuente: Marrero & Figueroa, 2012.
3. Ubicar el segundo portaobjetos sobre la
gota de sangre con una inclinación de
aproximadamente 45° y esperar a que la
sangre difunda por el filo del portaobjetos
como se muestra en la Figura 3.
Figura 2: Colocar el segundo portaobjetos sobre la gota
de sangre con una inclinación de aproximadamente
45° y esperar a que se difunda por el filo del
portaobjetos Fuente: Marrero & Figueroa, 2012.
4. Mover el portaobjetos a una velocidad
constante hacia el extremo opuesto del
primer portaobjetos, hasta obtener una
película fina de sangre (Figura 4).
Figura 3: Mover el portaobjetos a una velocidad
constante hacia el extremo opuesto del
portaobjetos de soporte. Fuente: Marrero &
Figueroa, 2012.
5. Esperar a que la lámina de sangre se seque.
Tinción empleando colorante Wright
1. Colocar el frotis sanguíneo sobre una
cubeta de tinción con la sangre hacia arriba.
2. Cubrir completamente el portaobjetos con
el colorante Wright gota a gota y dejarlo en
reposo de 5 a 8 minutos aproximadamente.
Se debe tener en cuenta que el colorante
debe cubrir toda la placa y se debe agregar
más colorante en caso de que este se
evapore.
3. Al cabo del tiempo de espera, lavar el frotis
empleando una piseta o a su vez mediante
un chorro leve de agua de llave. Se debe
lavar el frotis hasta que presente un aspecto
rosado a simple vista.
4. Eliminar restos de colorante presentes en el
dorso del portaobjetos mediante el uso de
alcohol al 70%.
5. Secar la placa al aire.
Tinción empleando colorante Giemsa
1. Colocar el frotis sanguíneo sobre una
cubeta de tinción con la sangre hacia arriba.
2. Cubrir completamente el portaobjetos con
el colorante Giemsa gota a gota y dejarlo en
reposo de 5 a 8 minutos aproximadamente.
Se debe tener en cuenta que el colorante
debe cubrir toda la placa y se debe agregar
más colorante en caso de que este se
evapore.
3. Al cabo del tiempo de espera, lavar el frotis
empleando una piseta o a su vez mediante
un chorro leve de agua de llave. Se debe
lavar el frotis hasta que presente un aspecto
rosado a simple vista.
4. Eliminar restos de colorante presentes en el
dorso del portaobjetos mediante el uso de
alcohol al 70%.
5. Secar la placa al aire.
Determinación de grupo sanguíneo y factor
Rh
1. Lavar un portaobjetos con tres cavidades
empleando jabón líquido y alcohol al 70%.
Secar el portaobjetos con papel toalla.
2. Colocar una gota de sangre en cada
cavidad.
3. Agregar una gota de anticuerpo Anti A,
Anti B y Anti D, en la primera, segunda y
tercera cavidad, respectivamente.
4. Homogenizar el contenido empleando
palillos de dientes.
5. Observar la presencia o ausencia de
aglutinación e interpretar los resultados
obtenidos.

Observación al microscopio óptico de campo

claro
1. Inspeccionar cada placa teñida empleando
el objetivo 40X y una vez identificada
alguna célula sanguínea de interés, emplear
el objetivo 100X y aceite de inmersión.
2. Identificar las células sanguíneas y anotar
los resultados, así como las diferencias
evidenciadas entre ambos tipos de tinción
utilizados.

RESULTADOS
Identificación de células sanguíneas
Las muestras sanguíneas se tiñeron con tinción Wright y fueron observadas bajo el microscopio óptico
a 100x con aceite de inmersión.

A B C
 D E
Figura 4. Células sanguíneas teñidos con reactivo Wright y observadas en el microscopio óptico (100X). Los eritrocitos
se observan de color rosado. Los leucocitos se muestran con su núcleo de color violeta y citoplasma de color rosa;
(Fig. 1A) monocito, (Fig. 1B) neutrófilo, (Fig. 1C) linfocito, (Fig. 1D) basófilo, (Fig. 1E) eosinófilo.

Prueba de Aglutinación
Las muestras sanguíneas reaccionaron con los reactivos de distintos anticuerpos (A, B, D)
ocasionando una aglutinación o formación de grumos en la muestra.

Anti B Anti D Anti A

Figura 2. Prueba de grupo sanguíneo y Rh. Las placas con las muestras sanguíneas reaccionaron con los anticuerpos
anti-A, anti-B, anti-D; y no mostraron aglutinación al reaccionar con los distintos anticuerpos.

DISCUSIÓN que el anti B y anti D provocan hemolisis

La prueba del grupo sanguíneo y factor Rh
se basa en la producción de hemolisis
debido a la reacción entre las proteínas que
se encuentran presentes en la superficie de
la membrana celular de los glóbulos rojos
y los reactivos anti A, anti B y anti D
(Cruz, Moreno, & Forero, 2012). Durante
la práctica se identificó sangre de tipo O-,
la cual en presencia de anti A, anti B o anti
D no provoca aglutinación, esto es
corroborado por Carmona (2006), quien
afirma que el compuesto anti A produce
hemolisis únicamente cuando está
presente el antígeno de tipo A, mientras
en presencia del antígeno B y antígeno Rh.
La tinción Wright produce una coloración
diferencial que permite observar la
coloración de los núcleos de las células
sanguíneas de un color purpura, debido a
su composición de azul de metileno y
eosina (Torres, Zamora, Esparza, &
Flores, 1999), mientras que la tinción
Giemsa consta de azul de metileno, Azure
A, Azure B y eosina que permite dar una
coloración rosácea a las células
(Coromias, Perez, Rodriguez, & Cordero,
2014). En la práctica se utilizaron ambas
tinciones para la búsqueda de células
sanguíneas, sin embargo la tinción Giemsa
presentó un menor rendimiento en
comparación a la tinción Wright, debido a
la formación de cristales que dificulto la
observación, esto es explicado por Perea
(2003), quien afirma que la tinción Giemsa
es un procedimiento muy efectivo para la
visualización de células sanguíneas, sin
embargo por errores del operario en la
manipulación del frotis, la exposición
prolongada de la placa al sol o un roce con
el aparato de dispersión del colorante en el
frotis, puede provocar la formación de
artefactos indeseados como cristales o
burbujas, que distorsionaran la
visualización.
Para futuros estudios se recomienda tener
más cuidado en el procedimiento de
tinción con Giemsa para evitar la
formación de cristales, además del conteo
de los distintos tipos de células sanguíneas
para identificar una relación numérica del
estadio del paciente con la presencia de
cada una de estos tipos de células.
CONCLUSIONES
La identificación de grupos sanguíneos y
Rh se realiza en base al hemolisis de la
sangre provocada por una reacción entre
las proteínas que se encuentran en el
glóbulo rojo y los reactivos anti A, anti B
y anti D, las cuales permitieron identificar
que las tres muestras del obtenidas eran de
tipo AB+, A+ y O+. Además, por medio
de observación en el microscopio de
campo claro utilizando las tinciones
Wright y Giemsa se logró identificar
neutrófilos, linfócitos, eosinófilos,
monócitos y blastócitos.
REFERENCIAS
Carr, J., & Rodak, B. (2010). Atlas de
Hematología Clínica. Argentina -
Buenos Aires : Medica
Panamericana.
Coromias, Perez, Rodriguez, & Cordero.
(2014). Protocolo de sospecha de
parasitosis. Medicine, 3252-3257.
Cruz, Moreno, & Forero. (2012).
Caracterización de donantes
voluntarios de sangre por grupo
sangíneo A,B, o y Rh que asistieron
aun banco de sangre de la ciudad de
Tunja. Archivos Medicos, 50-62.
González, L. (2007). Wordpress. Obtenido de
Cátedra de Microbiología e
Inmunología . Facultad de Ciencias
Veterinarias -UCV :
https://marianelacastes.files.wordpres
s.com/2013/05/cc3a9lulas-y-
c3b3rganos-del-sistema-inmune.pdf
Ingraham, J., & Ingraham, C. (1998).
Introduccion a la Microbiología.
Barcelona - España: Reverté S.A.
Koneman, E. (2008). Koneman. Diagnostico
Microbiológico. Texto y Atlas en
color. Buenos Aires - Argentina:
Medica Panamericana.
Rodak, B. (2005). Hematología.
Fundamentos y Aplicaciones clinicas.
Buenos Aires - Argentina: Médica
Panamericana.
Thews, G., Mutschler, E., & Vaupel, P.
(1993). Anatomía, Fisiología y
Patofisiología del hombre. España -
Madrid: Reverté S.A.
Torres, Zamora, Esparza, & Flores. (1999).
Eritrocitors micronucleados de niños
con o sin quimioterapia.
Bol.med.Hosp.Infant.Mex, 56-60.