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com/tato762
Asignatura: Microbiología
Práctica No.8
1. TEMA
Tinción de Gram.
2. OBJETIVO GENERAL
3. OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
4. REVISIÓN DE LITERATURA
La tinción de Gram fue creada por Hans Christian Gram a fines del siglo XIX. La
Tinción de Gram (o método de Gram) es un método para diferenciar especies
bacterianas en dos grandes grupos (Gram-positivas y Gram-negativas). El nombre
proviene de su inventor, Hans Christian Gram.
Tinción de Gram diferencia las bacterias por las propiedades químicas y físicas de sus
paredes celulares mediante la detección de peptidoglicano, que está presente en una
capa espesa en las bacterias Gram positivas. Los resultados Gram positivos se denotan
por un color púrpura / azul, mientras que las gram negativas son rosa / rojo.
La tinción de Gram es casi siempre el primer paso en la identificación de un organismo
bacteriano. Mientras que la tinción de Gram es una herramienta de diagnóstico valiosa,
tanto en entornos de investigación clínica, no todas las bacterias pueden ser clasificadas
definitivamente por esta técnica. Esto da lugar a grupos de Gram-variables y Gram-
indeterminado. (Forbes, 2009)
5. EQUIPOS:
Microscopio estereoscopio
Microscopio compuesto
Estufa de incubación
Estufa de esterilización
Cámara de flujo laminar
Autoclave
Cocineta eléctrica
6. MATERIALES:
Cultivos bacterianos
Placas porta objeto
Laminas cubre objeto
Vasos de precipitados
Kit de disección
Mechero de alcohol
Platos petri conteniendo medio de cultivo
Sacabocado
Asas de inoculación
Goteros
7. REACTIVOS E INSUMOS:
Alcohol antiséptico
Agua destilada
Cristal violeta
Alcohol cetona
Yoduro de potasio
Safranina
Aceite de inmersión
8. PROCEDIMIENTO:
Tinción simple
Se limpió bien las placas portaobjeto, eliminando la grasa y pelusas. Las grasas serán
eliminadas con xilol y las pelusas haciendo una o dos pasadas de la placa por sobre la
columna de calor del mechero,
- Frotis. Consiste en extender o repartir la suspensión de bacterias sobre la placa
portaobjeto, una vez que ha sido depositada la gota de agua-bacteria, éste extensión se
hará con la ayuda de un asa o placa portaobjeto limpia, lo que permitirá realizar una
mejor observación
- Fijación. Fije las bacterias a la placa haciendo pasar tres veces el portaobjeto en la
llama del mechero de alcohol a una altura prudencial, para no deformar las agrupaciones
bacterianas que pudieran existir.
- Tinción. emplee un solo colorante como el azul de metileno, fuscina, rojo congo,
tiñe la placa completamente y deje actuar el colorante por un minuto.
- Retire el colorante, enjuague y luego séquela a la columna del mechero de alcohol o
por simple exposición al aire con movimientos horizontales
- Agregue una gota de aceite de inmersión sobre el frotis y observe las bacterias al
microscopio, utilizando el lente húmedo o de inmersión.
Tinción Compuesta
9. RESULTADOS
10. CONCLUSIONES
11. CUESTIONARIO.