EXTRACION DE ADN

INTRODUCCION: El presente informe contempla una serie de pasos que describiremos

detalladamente a continuación y la explicación conceptual de cada uno de los avances que se
realicen en el proceso de extracción.

Tras la substracción de sangre a partir de una muestra de sangre (camélidos), se obtiene la

extracción del ADN, ésta requiere un orden de etapas elementales de separación en donde se
retira material que se encuentra alrededor del ADN para lograr su liberación en forma de mota
para su posterior observación. En el siguiente laboratorio, seguiremos minuciosamente
pasos adecuados para su extracción e indagación.
El ácido desoxirribonucleico es una biomolécula que permite la continuidad y evolución de
las especies, el ADN almacena la información genética codificada, éste, está presente en
todas las células de los seres vivos y siempre tiene la misma composición (bases
nitrogenadas, ácidos fosfóricos y pentosas). La extracción de las células donde se halla
confinado, es una serie de pasos previos analíticos y diagnósticos los cuales llevaremos a
cabo, junto con ciertas precauciones de contacto que evitaran la contaminación por
material biológica humana, la contaminación microbiológica, e incluso química.

MARCO TEORICO: El ADN es el código genético universal; presenta una estructura general
de doble hélice en donde se encuentran las bases nitrogenadas las cuales brindan
características genéticas a cada individuo, estas bases se unen a través de enlaces
químicos generando tripletes formando cerca de 20 aminoácidos esenciales para la vida.
Dichos tripletes se encuentran dispuestos de una manera lineal y continua, de manera que
en ellos no exista algún espacio para alguna otra estructura diferente a la que conforma
este ácido nucleico.

Figura 1. Triplete de ADN.

Darwin y su evolución: ADN,
eslabón ignorado.

La imagen de las dos hélices, es una imagen paradigmática del gran avance logrado por la
genética a partir de mediados del siglo XX.

El ADN fue identificado inicialmente en 1868 por Friedrich Miescher, biólogo suizo, en los
núcleos celulares del pus obtenido de los vendajes quirúrgicos desechados y en el
esperma del salmón. Él llamo a ésta sustancia nucleína. Aunque no fue reconocida hasta
1943 gracias al experimento realizado por Oswald Avery.

Oswald Avery, uno de los primeros biólogos moleculares, dedicó gran parte de su vida a la
biología molecular y a la inmunoquímica, es reconocido por su descubrimiento en 1944 en
donde, trabajando con cepas de neumococo, reveló la existencia de material genético en
los seres vivos. Éste experimento consistía en homogeneizar y filtrar la capa virulenta (es
decir, con neumococo) y filtrarlo en un Erlenmeyer. Posteriormente se realizaba un
tratamiento de filtrado con enzimas que destruían el ARN, las proteínas y el ADN,
terminado este paso se procedía a añadir un cultivo de X cepas las cuales no contenían
virus alguno. Los resultados obtenidos eran cepas transformadas, cada cultivo de cepas no
virulentas se trataban con un Erlenmeyer diferente, (con ADN, ARN y proteínas), los cultivos
tratados con ARN o proteínas contenían unas cepas completamente transformadas y los que eran
tratados con ADN aparecían las mismas cepas X añadidas al principio del experimento. Esto llevo a
la conclusión de que el principio transformante era el ADN y en él se encontraba la herencia
genética principal de cada individuo Otros precursores de su descubrimiento fueron Macleod y
Colin Munro.

MacLeod era un genetista canadiense-estadounidense. Nacido en Port Hastings, Nueva Escocia,

Canadá MacLeod entró en la Universidad McGill a la edad de 16 años, y completó sus estudios de
medicina a los 23 años.

MacCarty, quienes demostraron que el ADN de bacterias muertas podía influir en el material
genético de las bacterias vivas (explicado en el anterior experimento). La estructura molecular del
ADN es una pareja de larga cadenas de nucleótidos, una larga hebra de ácido nucleico está
enrollada alrededor de la hebra formando un par entrelazado. Dicha hélice mide 3.4 nm de paso
de rosca y 2.37 nm de diámetro, y en cada vuelta se encuentra formada por 10.4 pares de
nucleótidos enfrentados entre sí por sus bases nitrogenadas.

El hallazgo de dicha estructura de doble hélice y el mecanismo por el cual ésta se duplica y realiza
una trasmisión de información a células hijas fue llevada a cabo por los biólogos Crick y Watson en
un laboratorio de investigación de Cambridge, basándose en radiografías de ADN tomadas por
Wilkins, por lo que recibieron los tres el premio Nobel de Medicina y Fisiología en 1962.
 PROCEDIMIENTO A SEGUIR PARA LA EXTRACCION DE ADN

1) Primeramente añadimos 20 µl de proteinasa k a 200 µl de sangre entera y luego llevamos

al vortex unos 2-5 segundos.
2) Adicionar 400 µl de LYSIS SOLUTION y luego llevamos al vortex de 2-5 segundos.
3) Incubar a 56 °c por 10 minutos (vortex de vez en cuando).
4) Añadir 200 µl de etanol (96-100) con el uso de pipetas, usamos vortex de 2-5 segundos.
5) Luego transferimos a la columna de spin.
6) Centrifugar 01 minutos a 6000 gravedades.
7) Transferir la solución a un nuevo tubo.
8) Adicionar 500 µl de WASH BUFFER NBI (con etanol).
9) Centrifugar por 01 minutos a 8000 gravedades.
10) Colocar en un nuevo tubo la mezcla.
11) Adicionar 500 µl de WASH BUFFER II (con etanol), luego centrifugar por 03 minutos a
velocidad máxima.
12) Podemos repetir por 01 minutos más a velocidad máxima.
13) Transferimos a un nuevo tubo con tapa de 1.5 ml.
14) Adicionamos 200 µl de ELUTION BUFER.
15) Incubamos a T° ambiente durante 2 minutos.
16) Centrifugamos por 01 minutos a 8000 gravedades.
17) Finalmente procedemos a utilizarlo para la cuantificación, así obtener los resultados
esperados.

ANEXOS:

Figura 1. Centrifuga para realizar la Figura 2. Vortex. Utilizado para la Figura 3. Micropipeta, regulada para la
centrifugación necesaria. mezcla de las muestras a continuación extracción de muestra en microlitros de
de la lisis. cada lisis.
 Figura 4. Puntas para micropipetas Figura 5. Tubos de eppendorf para Figura 6. Se agrega la cantidad
de laboratorio. (Cada color tiene una verter sangre en él. necesaria de sangre a un tubo
capacidad diferente). eppendorf.

CONCLUSIONES:

 La técnica de extracción de ADN depende del kit utilizado para la práctica, cada kit trae
diferentes metodologías y diferentes reactivos.
 Con el ADN extraído podemos realizar muchas prácticas como la cuantificación, etc.
 Una extracción de ADN es fuente de ciencia en cuanto a la contribución en este caso a
medicina veterinaria.
 La práctica fue realizada sin ningún inconveniente ni mal resultado.
 UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA

GENETICA ANIMAL

INFORME: EXTRACCION DE ADN EN CAMELIDOS

DOCENTE: M.V.Z.Ph.D. Carola Melo Rojas

ALUMNO: Renzo Cañari Huillca

SEMESTRE 2017- II