Espectrofotometria Uv – Visible:

Aplicaciones en el analisis químico

Curso: Quimica Analítica II

2012
Profesor: Juan Carlos Sturm
¿Fotómetro o espectrofotómetro ?

emisor LED Microprocesador Display

525nm Fotodiodo
detector LCD

Muestra

¿No faltan algunos componentes en este instrumento?

 Fuentes de radiacion electromagnetica para
espectroscopia

Fuente region λ usos

Lamp. H2 – D2 continua, 160-380 nm absorción molecular UV
L. Tungsteno, continua 320 -2400 nm absorción molecular visible
L. Arco de Xe continua 200 – 1000 nm e. molecular fluorescente
Alambre de nicron continua 0,75 – 20 µm e. absorción IR
L. Cátodo hueco líneas Uv-Vis. E Absorción atómica
Laser línea , UV-Vis Abs atómica , molecular, fluoresc.
L. vapor de Hg líneas fluorescencia molecular
diodo línea -vis Abs. Molec vis.

Fuente Fuente
continua de
lineas
 Transductores para espectroscopia optica

Detector clase rango λ señal

fototubo foton 200-1000 nm corriente
Fotomultiplicador foton 110 – 1000nm corriente
Fotodiodo de Si foton 250 – 1100 nm corriente
Fotoconductor foton 750 – 6000 nm carga- resistencia
celda fotovoltaica foton 400- 5000 nm voltaje o corriente
termocupla termico 0.8- 40 µm voltaje
Termistor termico 0.8- 40 µm variacion resistencia
 Monocromador

• Filtros ópticos
• Prismas
• Rejillas de difracción

Ancho de
banda :
 Características de la espectroscopia
molecular

• Aplicación en sistemas orgánicos e inorgánicos

• Límites de detección bajos ( 10-4 a 10-5 M)
• Selectividad moderada a alta
• Buena exactitud ( incertidumbres relativas < 2% )
• Medición y adquisición de datos simple
 Aplicaciones

• Determinación de iones metálicos y complejos de

elementos de transición ( Ni+2, Cu+2, Co+2, Cr2O7 -2 )

• Complejos de transferencia de carga

ej: Fe(II –1,10 Fenantrolina , Fe(III)– tiocianato

•Compuestos orgánicos con enlaces conjugados,

heterociclos

• Campos: industrial, clínico, forense, medio

ambiente
Espectros de absorción molecular
Espectro de absorción de ácido acetil salicílico en HCl 0,05 M

2,5 a)
a) AAS = 25 mg/l
b) AAS = 12,5 mg/l
2,0
Absorbacia

1,5

1,0 b)

0,5

0,0
200 220 240 260 280 300 320 340 360
λ ( nm )
La concentración de la solución no modifica la forma del espectro
 Análisis Cuantitativo, procedimiento:
• Selección de la longitud de onda
de medición: ( si se
desea la mas alta sensibilidad se elige una
longitud de onda correspondiente a un
pico máximo)

• Verificar cumplimiento de la ley de

Beer
A=abC
T = P/P0 -log T = a b C
existen variables que influyen en la
absorbancia como: tipo de disolvente, pH de la
solución , temperatura , sustancias interferentes

• Selección del rango de concentraciones para la medición con

menor error
Ley de Beer - ideal : A = abC ,
Señal = constante * conc. de analito
Ambas ecuaciones
representan rectas
Ley de Beer - real : A = abC + n A vs C
n= intercepto señal de fondo (blanco)
1,2
Pendiente = sensibilidad
1,2

1,0 1,0

Absorbancia
0,8 0,8
Absorbancia

0,6 0,6

0,4 0,4 rango lineal

0,2 0,2

intercepto
0,0 0,0
0 2 4 6 8 10 0 2 4 6 8 10
Concentración Concentracion
 Otras técnicas espectroscópicas sin intercambio de
energía
• Nefelometría scattering
• Turbidimetría
• Refractometría refracción
• Difraccion difracción de rayos x
• Dispersión dispersión óptica rotatoria

Ver tambien : Modern Analytical Chemistry

D. Harvey , Mc Graw Hill , cap 10
 Métodos de cuantificación

• Curva de calibración con estándares externos

• Método de adición estándar:

- a volumen final constante
- a volumen variable
Curva de calibración con estándares externos
Los estándares de calibración deben aproximarse en lo
posible a la composición general de las muestras

muestra
blanco

A0 A1 A2 A3 A4 A5 A6 Ax
 Curva de calibración
Concentracion Absorbancia 0,6

mg/L
0,5
0 0,010
2 0,100

Absorbancia (A)
0,4
4 0,200
0,3
6 0,300
8 0,405 0,2 A = 0,0066 +0,0490*C
10 0,500
r = 0,9997
12 0,590 0,1

muestra 0,340
0,0
0 2 4 6 8 10 12

Cx = 6,80 mg/L Concentración ( mg/L)

 Método de adición de estándar:
a volumen final constante y varias adiciones
Las dificultades de contar con un patron con una composición general que se
asemeje a la de las muestras hace recomendable este método. Requisito: se
cumple la ley de Beer

blanco

Ajuste 0 Vx Vx Vx Vx Vx
Vst1 Vst2 Vst3 Vst4

A TOTAL = Ax + Ast
Graficar A vs Vst :
Cx ∗Vx a ∗ b ∗ Cst ∗Vst
AT = a ∗ b ∗ + recta con pendiente β e
VT VT intercepto α
α β
 Cx ∗Vx a ∗ b ∗ Cst ∗Vst
AT = a ∗ b ∗ +
VT VT

• Entonces: A T = α + β Vst

• Dividiendo α Cx ∗ Vx Vt
= a ∗b ∗ ∗
β Vt a ∗ b ∗ Cst
Despejando
α ∗ Cst
Cx =
β ∗Vx
 Método de adición de estándar:
a volumen final variable y una adición

Vx Vx + Vst

A1 A2

 VxCx + VstCst 
A1 = abCx A2 = ab 
 Vx + Vst 
A1 abCx (Vx + Vst )
=
A2 ab(VxCx + VstCst )
 A1 CxVx + CxVst
=
A2 VxCx + VstCst
A2CxVx + A2CxVst = A1VxCx + A1VstCst
A2CxVx + A2CxVst − A1VxCx = A1VstCst

factorizando Cx[( A2 − A1 )Vx + A2Vst ] = A1VstCst

A1VstCst
Cx =
( A2 − A1 )Vx + A2Vst
 Ejercicio 1
• Se desea determinar el manganeso en un acero. Se disolvió una muestra de acero
de 0,4895 g , el manganeso se oxidó a MnO4- y la solución se diluyó a 100 ml en
un matraz aforado. La absorbancia a 525 nm en una celda de 1 cm fue 0,396 .
Una solución de MnO4- de 3x 10-4 M presenta una absorbancia de 0,672

Ast = a· b ·Cst 0,672= a·1 ·3x10-4 a = 2240

Ax = a· b· Cx 0,396 = 2240·1·Cx Cx = 1,77 x 10-4M

Otra forma de cálculo:

Ast a·b·Cst 0,672 3 ·10−4

= =
Ax a·b·Cx 0,396 Cx
 Cálculo del porcentaje de Mn en acero :
ver en versión internet

• Ejercicio 2: Ver en versión internet

• Curva de calibracion con patrones independientes
• Interpolacion de una muestra tratada de la misma
forma que los patrones

• Ejercicio 3 : Ver en versión internet

• Cálculo de concentración mediante adición estándar y
volumen constante

•Ejercicio 4: Ver en version internet

•Adición de estándar con un punto e incremento de volumen
 Calcular el porcentaje de Mn en el acero
En el matraz de 100 ml encontramos una concentración 1,77· 10 -4
M de MnO4- .
Calculemos los mg de Mn en 100ml
El PA Mn = 54,94; 1,77·10-4 · 54,94 = 9,7· 10-3 g/L Mn
0,97mgMn X
=
0,4895 100 9,7 mg/1000mL Mn
0,97 mg /100 ml Mn
Calculemos los mg de Mn por 100 g de muestra ( porcentaje)
En los 100ml se disolvieron 0,4895 g de acero y hay 0,97 mg
de Mn. ¿ Cuantos mg de Mn hay en 100g de acero ?)

X = 198,2 mg Mn / 100g muestra

% = 0,2 g Mn /100g muestra
X = 0,2 %
 Ejercicio 2
El hierro forma un complejo con 1,10 fenantrolina el cual
presenta un máximo de absorción a 510 nm.
A partir de una solución patrón de 1000 mg/l de hierro se
preparó una curva de calibración , obteniéndose los siguientes
datos:
25,0 ml de una muestra de agua subterránea se
conc A colocaron en un matraz de 50,0 ml después de ser
tratada para formar el complejo coloreado , al igual
( mg/L)
que la curva de calibración , fue aforada. La
2 0.160 absorbancia fue de 0,203 .
4 0.313 Calcular la concentración de Fe de la muestra de
agua en mg/L
6 0.460
8 0.619 La ecuación de la recta es : A = 0,007 + 0,0762·Cx
muestra 0,203 r = 0,9998
Interpolando el valor de A de la muestra :Cx = 2,57 mg/L (conc en el matraz de 50)
Conc. real de la muestra : 2 x 2,57 = 5,14 mg/L ( por la dilución de 25 ml a 50ml )
 Ejercicio 3
Basado en el ejercicio anterior plantearemos la siguiente metodología :
25,0 ml de una muestra de agua subterránea se colocaron en un matraz de
50,0 ml después de ser tratada para formar el complejo coloreado Fe/1-10
fenantrolina , fue aforada. La absorbancia fue de 0,203 .
En otros matraces iguales fueron colocados 25 ml de la muestra , el reactivo
complejante y respectivamente : 0, 1 ; 0,2 y 0,3 ml de solución patrón de Fe de
una concentración de 1000 mg/L. Calcule la concentración de Fe en la muestra
Estamos aquí frente a un método de adición estándar con volumen final fijo :

DATOS: 0 0.203

0.1 0.363

0.2 0.516

0.3 0.663
 Cst = 1000 mg/L 0,7 A = 0,2063 + 1,533 Vst
Vx = 25 ml 0,6

α= 0.2063 0,5

Absorbancia
-----------------
A 0,2063
β= 1,533 0,4 B 1,533
-----------------

0,3 R

α ∗ Cst ---------------

Cx =
0,99982
0,2 ---------------
β ∗Vx 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30
ml de estandar agregado
0.2063 * 1000 206.3
Cx = = = 5.30
1.533 * 25 38.32

Concentración de la muestra = 5,30 mg/L; Ojo : no hay factor de dilución

ya que tanto muestra como Patrones se sometieron a la misma dilución.
 Ejercicio 4
Una solución ácida de ión cúprico tiene una absorbancia de 0,062 a la
longitud de onda de máxima absorción.
A 5,0 ml de esta solución se le agregó 1,0 ml de solución 0,01 M de ión
cúprico y se determinó que la absorbancia fue de 0,102 a la misma
longitud de onda : ¿ Cual es la concentración de la muestra ?

R: La muestra con un volumen de 5 ml fue enriquecida con patrón aumentando

el volumen a 6 ml ( adición std. con un punto y con incremento de volumen)

A1 = a·b·Cx 0,062 Cx·6

=
CxVx + CstVst 0,102 Cx·5 + 0,01·1
A2 = a·b·
Vx + Vst 0,612Cx = 0,31Cx + 0,00062
Cx = 2,1x10 −3 M
A1 Cx(Vx + Vst )
=
A2 CxVx + CstVst Tarea : verifique el
resultado usando la
formula deducida
anteriormente
 Limitaciones de la ley de Beer

·Solo es aplicable a soluciones diluídas (<10-2M)

(Interacciones entre iones o moléculas afectan la absorción de
radiación, variación del índice de refracción)
•Desviaciones químicas debido a la asociación o
disociación del analito ( se forman productos con características
absorbentes distintas al analito. Ej : indicadores acido base)( desv.
positiva o negativa )

•Desviaciones por radiación policromática y radiación

parásita ( limitaciónes instrumentales ) (desviacion negativa )
Fluorescencia y Turbidez ( disminución de absorbancia por
radiación emitida o aumento de absorbancia por partículas en
suspensión )
 Desviaciones químicas
Cuando un analito se disocia , se asocia o reacciona con el disolvente
para dar un producto con espectro de absorción diferente al del
analito se producen desviaciones de la ley de Beer.

HIn ⇔ H + + In −
Ka = 1,34 x 10-5
Color 1 Color 2
La siguiente tabla * muestra el desplazamiento del equilibrio motivado
por la dilución ( solucion no tamponada)

HIn, M [HIn] [In-] % A 430 A570

X 105 X 105 disociado
2,00 x 10-5 0.88 1.12 56 % 0.236 0.073
4,00 x 10-5 2.22 1.78 44.5% 0.381 0.175
8,00 x 10-5 5.27 2.73 43.1% 0.596 0.401
12,00 x 10-5 8.52 3.48 29 % 0.771 0.640
16,00 x 10-5 11.9 4.11 25.7 % 0.922 0.887

* Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 407-408

Desviaciones quimicas

A medida que la concentración

aumenta la disociación es
menor dando una curvatura
positiva a 570 nm

Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 407-408

Desviaciones instrumentales por radiación policromática

En el espectro (grafico superior) la

absortividad del analito es casi
constante en la banda A.
En la grafica de la ley de Beer, al
usar la banda A hay una relación
lineal.
En el espectro la banda B muestra
cambios notables de la absortividad
resultando en una marcada
desviación de la ley de Beer

Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 409

 Cuando la medición de
absorbancia se efectúa con
radiación compuesta por
diversas longitudes de onda , la
absorbancia es una combinación
dada por las absortividades
diferentes a cada longitud de
onda .

* Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 410

Desviación aparente de la ley de Beer por diversas
cantidades de radiación parásita ( o difusa)
Radiación parásita o difusa:
Cualquier radiación que llega
al detector pero que no
sigue la vía óptica entre la
fuente y el detector

La radiación parásita limita la

absorbancia máxima de
respuesta lineal ya que cuando
la absorbancia es alta la
potencia radiante que llega al
detector se vuelve pequeña,
similar o menor al nivel de luz
parásita.

Skoog, West, Holler, QUIMICA ANALITICA, VI Ed. Pag 411

Error instrumental en función de la transmitancia

Se ha visto que la incertidumbre en la medida

espectrofotométrica de la concentración varía en forma
no lineal con la magnitud de la transmitancia
x − xt ∆C
error relativo = x 100 % x 100
xt C

El error relativo en la concentración para una medida

espectrofotométrica esta dada por la siguiente expresión :

∆C 0,434 ∆T ∆T = error fotométrico

= (incertidumbre absoluta para la
C T log T transmitancia)
Por ejemplo 0,005 = 0,5%T
Ejercicio
Calcular el error relativo en concentración porcentual para
mediciones con absorbacias de ; 0,125 ; 0,434 y 0,900
suponiendo que existe una incertidumbre fotométrica instrumental
de un 1 %
0,125 = 74,9 %T
A 0,434 = 36,8 %T
0,900 = 12,5%T
∆C 0,4343 · 0,01
= = −0,046 = 4,6%
C 0,749 log 0,749
∆C 0,4343 · 0,01
=
C 0,368 log 0,368 = -0,027 ; = 2,7%

∆C 0,4343 · 0,01
= = -0,038 ; = 3,8%
C 0,125 log 0,125
 ∆C 0,434 ∆T
=
C T log T

Conclusión: se eligirá un rango de concentraciones de trabajo tal que la

transmitancia se mantenga en el rango 20%T – 70%T (0,7A -0,15A)
 Determinación de mezclas
Se basa en que, a una determinada longitud de onda la absorbancia
observada es igual a la suma de las absorbancias de cada
componente
2,0 λ1
AAS 25 ppm
CAF 10 ppm
Mezcla
1,5

λ2
1,0
A

0,5

0,0
200 220 240 260 280 300 320

λ/nm
 ATOTAL λ1= aAAS,λ1·b·CAAS + aCAFλ1·b·CCAF
ATOTAL λ2= aAAS,λ2·b·CAAS + aCAFλ2·b·CCAF

Resolver este sistema de ecuaciones simultáneas para las

incógnitas CAAS y CCAF

Para que la exactitud y precisión de los resultados sean buenas es necesario

seleccionar ambas longitudes de onda de forma que aAAS < aCAF a una de las
longitudes de onda y lo inverso a la otra longitud de onda . La precisión
optima se logra cuando la diferencia de absortividades sea lo mas grande
posible . Se deben fijar las condiciones de pH para evitar la presencia de
especies en equilibrio variable.
Ejercicio
Se pueden determinar las concentraciones de una mezcla de Fe+3
y Cu +2 formando el complejo con hexacianorutenato (II) ,
Ru(CN)6-4, que forma un complejo de color azul- violáceo con el
Fe+3 ( λmax = 550 nm) y un complejo gris pálido con el Cobre
(λmax = 396 nm) Las absortividades molares de los complejos de
metal se resumen en la tabla siguiente:

ε 550 ε 396
Fe +3 9970 84 Cuando una muestra que contiene
Cu+2 34 856 Fe+3 y Cu+2 se analiza en una cubeta
de 1 cm de paso óptico la
absorbancia a 550 nm fue de 0,183 y
la absorbancia a 396 nm fue de
0,109. ¿Cuál es la concentración molar
de Fe +3 y Cu+2 en la muestra ?
 a 550 nm : 0,183 = 9970 CFe + 34 CCu
a 396 nm : 0,109 = 84 CFe + 856 CCu

Despejamos C Cu en la primera ecuación

0,183 − 9970CFe
C Cu =
34
y sustituimos en la segunda

 0,183 − 9970·CFe 
0,109 = 84·C Fe +856 
 34
= 4,607 − ( 251x105 )·CFe
Despejando : CFe = 1,80 x 10 -5M
C Cu = 1,26 x 10-4 M

Ref: D:Harvey, Química Analítica Moderna , pag. 281

 Otras aplicaciones
· Determinación de constantes de equilibrio
( p.ej. La constante de acidez de un indicador acido-
base)

· Caracterización de la estequiometría de un
complejo metal-ligando
( p. ej. ML; ML2, ML3 etc.)

. Titulaciones espectrofotométricas
(usa graficas de absorbancia vs volumen de titulante,
formación de un producto absorbente o decoloración
de un reactivo titulante coloreado)
http://en.wikipedia.org/wiki/Beer%E2%80%93Lambert_law