Universidad Francisco José de Caldas.

Facultad de ciencias y educación.

Licenciatura en Biología.

EXTRACCIÓN DE ADN.

Daniela Moreno Solano, 20152140045; Camila Castellanos González,

20152140017.

RESUMEN.

El ADN es una macromolécula química, ésta pertenece al grupo de los ácidos

nucleicos. Forma los cromosomas del núcleo presentes en las células y es
portador de la información genética de cada individuo. El código genético
(formado por el ADN) es un lenguaje basado en combinaciones que se
pueden formar a partir de la guanina, timina, citosina y adenina, (Uracilo en
vez de timina en el ARN). Cualquier característica biológica está determinada
por su orden y forman un triplete; cada triplete es una palabra cifrada o señal
que conduce a un aminoácido. Éste constituye el material genético de los
organismos y es el componente químico principal presente en las células
tanto animales como vegetales controlando todos los procesos vitales que en
ella acontecen.

Por otra parte, la separación de éste es un proceso de métodos que

intervienen en procesos naturales provocando lisis o separación del mismo
de la estructura celular y de moléculas presentes en el sistema, liberando,
por último dicha estructura. Estas disgregaciones se inducen a partir de
diferentes sustancias a las cuales nombraremos lisis. Todo esto por medio de
procesos de centrifugado que mezclaran las sustancia de tal forma que
pueda reaccionar.

Palabras Clave: Separación, ADN, macromolécula, estructura, biológica,

código genético.

ABSTRACT.

DNA is a chemical macromolecule, it belongs to the group of nucleic acids.

Shaped nucleus chromosomes in cells and carries genetic information of the
individual. The

1
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Genetic code (consisting of DNA) is based on combinations that can be

formed from guanine, thymine, cytosine and adenine language (uracil instead
of thymine in RNA).

Any biological characteristic is determined by their order and form a triplet;

each triplet is an encrypted word or signal that leads to an amino acid. This is
the genetic material of organisms and is the main chemical component
present in both animal and plant cells controlling all life processes that occur
in it.

Moreover, separation thereof is a process methods natural processes

involved in causing lysis or separation of the same cell structure and
molecules present in the system, releasing finally the structure. These
divestitures are induced from different substances which will name lysis. All
this by means of centrifugation processes to mingle the substance so that it
can react.

Key Words: Separation, DNA macromolecule, structure, biological, genetic

code.

minuciosamente pasos adecuados

INTRODUCCIÓN:
El presente informe contempla una
serie de pasos que describiremos
detalladamente a continuación y la
explicación conceptual de cada uno
de los avances que se realicen en
el proceso de extracción.
Tras la substracción de sangre a
partir de un tejido humano, se
obtiene la extracción del ADN, ésta
requiere un orden de etapas
elementales de separación en
donde se retira material que se
encuentra alrededor del ADN para
lograr su liberación en forma de
mota para su posterior
observación. En el siguiente
laboratorio, seguiremos
para su extracción e indagación.
El ácido desoxirribonucleico es una
biomolécula que permite la
continuidad y evolución de las
especies, el ADN almacena la
información genética codificada,
éste, está presente en todas las
células de los seres vivos y siempre
tiene la misma composición (bases
nitrogenadas, ácidos fosfóricos y
pentosas). La extracción de las
células donde se halla confinado,
es una serie de pasos previos
analíticos y diagnósticos los cuales
llevaremos a cabo, junto con
ciertas precauciones de contacto
que evitaran la contaminación por
material biológica humana, la
contaminación microbiológica, e
incluso química.

2

Marco teórico:
El ADN es el código genético
universal; presenta una estructura
general de doble hélice en donde
se encuentran las bases
nitrogenadas las cuales brindan
características genéticas a cada
individuo, estas bases se unen a
través de enlaces químicos
generando tripletes formando cerca
de 20 aminoácidos esenciales para
la vida. Dichos tripletes se hayan
dispuestos de una manera lineal y
continua, de manera que en ellos
no exista algún espacio para
alguna otra estructura diferente a
la que conforma este ácido
nucleico.
Figura 1. Triplete de ADN.
Darwin y su evolución: ADN, eslabón ignorado.
https://jolimu.wordpress.com/2008/09/29/darwin-y-
su-evolucion-adn-eslabon-ignorado/
La imagen de las dos hélices, es
una imagen paradigmática del gran
avance logrado por la genética a
partir de mediados del siglo XX.
El ADN fue identificado inicialmente
en 1868 por Friedrich Miescher,
biólogo suizo, en los núcleos
celulares del pus obtenido de los
vendajes quirúrgicos desechados y
en el esperma del salmón. Él llamo
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a ésta sustancia nucleína. Aunque
no fue reconocida hasta 1943
gracias al experimento realizado
por Oswald Avery.
Oswald Avery, uno de los primeros
biólogos moleculares, dedicó gran
parte de su vida a la biología
molecular y a la inmunoquímica, es
reconocido por su descubrimiento
en 1944 en donde, trabajando con
cepas de neumococo1, reveló la
existencia de material genético en
los seres vivos. Éste experimento
consistía en homogeneizar y filtrar
la capa virulenta (es decir, con
neumococo) y filtrarlo en un
Erlenmeyer. Posteriormente se
realizaba un tratamiento de filtrado
con enzimas que destruían el ARN,
las proteínas y el ADN, terminado
este paso se procedía a añadir un
cultivo de X cepas las cuales no
contenían virus alguno. Los
resultados obtenidos eran cepas
transformadas, cada cultivo de
cepas no virulentas se trataban con
un Erlenmeyer diferente, (con ADN,
ARN y proteínas), los cultivos
tratados con ARN o proteínas
contenían unas cepas
completamente transformadas y
los que eran tratados con ADN
aparecían las mismas cepas X
añadidas al principio del
experimento. Esto llevo a la
conclusión de que el principio
transformante era el ADN y en él se
encontraba la herencia genética
principal de cada individuo
1 Neumococo, microbiología.
Bacteria Streptococcus pneumoniae,
agente bacteriano de la pulmonía, es gram
positiva, inmóvil y generalmente aeróbica.
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que el ADN de bacterias muertas
podía influir en el material genético
de las bacterias vivas (explicado en
el anterior experimento).

La estructura molecular del ADN es

una pareja de larga cadenas de
nucleótidos, una larga hebra de
ácido nucleico está enrollada
alrededor de la hebra formando un
par entrelazado. Dicha hélice mide
3.4 nm de paso de rosca y 2.37 nm
de diámetro, y en cada vuelta se
encuentra formada por 10.4 pares
de nucleótidos enfrentados entre sí
por sus bases nitrogenadas.

El hallazgo de dicha estructura de

doble hélice y el mecanismo por el
cual ésta se duplica y realiza una
trasmisión de información a células
hijas fue llevada a cabo por los
Figura 2. Esquema explícito, experimento de Oswald Avery biólogos Crick y Watson en un
realizado en 1944. laboratorio de investigación de
http://geneticaumbiomedicac1.blogspot.com.co/2012/11/exp Cambridge, basándose en
erimento-de-avery_23.html radiografías de ADN tomadas por
Otros precursores de su Wilkins, por lo que recibieron los
descubrimiento fueron Macleod2 y tres el premio Nobel de Medicina y
MacCarty3, quienes demostraron Fisiología en 1962.
2 Colin Munro MacLeod era un
genetista canadiense-
estadounidense. Nacido en Port
Hastings, Nueva Escocia, Canadá
MacLeod entró en la Universidad ¿QUÉ ES EL ADN?
McGill a la edad de 16 años, y
completó sus estudios de medicina a Composición y estructura:
los 23 años.
La molécula de ADN es una larga
doble hélice enrollada sobre sí
3 Maclyn McCarty fue un genetista
misma, en ella, dos ramales
estadounidense, quien dedicó su compuesto de moléculas de azúcar
vida como médico-científico al (desoxirribosa) y fosfatos, se
estudio de organismos que causan conectan gracias a la unión de
enfermedades infecciosas. cuatro moléculas denominadas
bases formando los eslabones de la

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cadena. Estas cadenas están ADN proveniente de dos
formadas por cuatro nucleótidos organismos distintos que
diferentes, compuestos además por normalmente no se
un azúcar, un ácido fosfórico y una encuentran juntos.
base nitrogenada.

Figura 4. ADN recombinante.

 ADN no codificante:
Figura 3. Composición del ADN. Secuencia de nucleótidos de
una molécula que no codifica
En dichos eslabones, la adenina se y cuya información es
une a la timina y la guanina a la desconocida. Este no
citosina. Un gen es un segmento de codifica para aminoácidos y
ADN que tiene una función se encuentra entre los genes
específica y está constituido por en el cromosoma sin alguna
una secuencia determinada de función conocida. Otros,
bases nitrogenadas. llamados intrones, se
encuentran dentro de los
El ácido desoxirribonucleico forma genes.
los cromosomas del núcleo de las
células y es portador de la Función principal:
información genética del individuo.
La función principal del ADN
Existen diferentes tipos de ADN, consiste en transmitir los genes, es
estos son: decir, los caracteres biológicos de
un individuo determinado, en dicho
 ADN recombinante: Es un genes está grabada la instrucción
fragmento de ADN necesaria para la construcción de
transferido artificialmente a cada individuo completo. Siguiendo
una célula. Esta es formada dichas instrucciones, cada célula es
de manera artificial o in-vitro capaz de sintetizar sus proteínas y
por la unión de secuencias de

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de adoptar la forma y función que En la siguiente lisis se utilizó la
le corresponde a cada organismo. sangre como medio de contención
del ADN.
Solo tenemos un 30% más de La sangre es un líquido que recorre
genes que un diminuto gusano, el el sistema circulatorio de los
cual tiene sólo un milímetro de animales, ésta aporta nutrientes,
longitud y posee alrededor de 959 oxígeno y otras sustancias a las
células, en tanto que nosotros células del organismo y recoge los
alrededor de 100 billones. Y elementos de desecho para
mientras que los seres humanos conducirlos a los órganos de
poseemos aproximadamente excreción, éste líquido de color rojo
100.000 millones de neuronas, el en los vertebrados, impulsado por
diminuto gusano cuenta con 302 el corazón, circula por los vasos
aproximadamente. sanguíneos del cuerpo, está
formada por el plasma que lleva el
¿En dónde encontramos el agua y sustancias de disolución, y
ADN? por las células sanguíneas; la
sangre es intermediaria entre los
El ADN se encuentra en todas las elementos anatómicos y el medio
células de los seres vivos. Si la exterior.
célula es eucariota se encuentra en
el núcleo, en cambio, si es ¿Qué es la sangre?
procariota, encontramos dicha
información genética dispersa en La sangre es un tejido líquido que
todo el citoplasma. En las células recorre el organismo a través de los
eucariotas encontramos el nucléolo vasos sanguíneos. La cantidad de
y la cromatina, el nucléolo está sangre se encuentra en un
formado por ARN y proteínas, éstos organismo en relación con la edad,
intervienen en la formación de el peso, sexo, y la altura. Esta es un
ribosomas, la cromatina está tejido renovable del cuerpo
formada por ADN y también humano, esto quiere decir que la
proteínas, estos, originan los médula ósea se encuentra
cromosomas. fabricándolo toda la vida. Ante una
hemorragia aumenta hasta siete
SANGRE: veces la producción de glóbulos
rojos y ante una infección ésta
aumenta la producción de glóbulos
blancos.

¿Qué funciones cumple?

Figura 5. Glóbulos rojos y blancos presentes en la sangre.
La sangre como todos los tejidos
del cuerpo cumple múltiples

6

funciones necesarias para la vida
como la defensa ante infecciones,
los intercambios gaseosos y la
distribución de nutrientes. Para
éstas funciones cuenta con
diferentes células que se
encuentran en el plasma, todas
éstas células se fabrican en la
médula ósea, ésta se encuentra en
el tejido esponjoso de los huesos
planos, es decir, cráneo, vertebras,
esternón, crestas ilíacas, y en los
canales medulares de los huesos
largos como el fémur y el húmero.
Composición sanguínea:
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que son de utilidad en la
terapia transfusional.
Existen diferentes grupos
sanguíneos A, B, AB y O y el
sistema Rhesus, conocido como el
factor Rh, (Positivo o negativo),
éstos se encuentran presentes
simultáneamente en los seres
vivos. Cuando se habla de grupo y
factor nos referimos al sistema ABO
y Rh.
La sangre no se puede fabricar
En Argentina, como en todo el mundo,
dependemos de la generosidad de los
ciudadanos para que los centros de
atención de la salud puedan realizar
trasplantes, operaciones y tratamientos
oncológicos, entre otros.
La sangre no se puede almacenar
indefinidamente ya que caduca: las
plaquetas se tienen que utilizar antes de
cinco días, los glóbulos rojos antes de 42
días y el plasma antes de un año.

Figura 6. Composición sanguínea.

 Glóbulos rojos: Transportan MATERIALES Y MÉTODOS:
el oxígeno de los pulmones
hacia los tejidos y captan el Extracción del ADN:
anhídrido carbónico
producido en los tejidos que La extracción de ADN consta de
es eliminado por las vías unos procedimientos adecuados de
respiratorias. lisis en donde se rompen
 Glóbulos blancos: estructuras que confinan el
Defienden al organismo citoplasma y liberar al medio su
contra las infecciones contenido y otra de purificación,
bacterianas y virales. que implica la retirada de la
 Plaquetas: Impiden solución final de la mayoría de
hemorragias, favoreciendo la residuos que se encuentran a su
coagulación en la sangre. alrededor.
 Plasma: Permite el
transporte de nutrientes, Los pasos necesarios para la
contiene diversas proteínas extracción correcta de ADN

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mediante un procedimiento se Las muestras se centrifugan
encuentran en el anexo 1 al final durante un tiempo estipulado,
del informe. permitiendo que ésta y las lisis
agregadas se mezclen de tal
La adecuada extracción del ADN se manera que se limpie de forma
lleva a cabo de la siguiente apropiada la muestra de sangre.
manera:

1. Realizando la lisis de las

células o virus. Las sales
caotrópicas ayudan a romper
la estructura tridimensional
de las macromoléculas como
las proteínas.
2. Degradación de la fracción
proteica asociada al ADN.
Se consigue mediante la
acción de una proteasa, ésta
fracción proteica puede
precipitarse mejor con la
ayuda de las sales como el
acetato de amonio, o el
acetato sódico.
Figura 8. Vortex. Utilizado para la mezcla de las muestras a

Materiales y métodos: continuación de la lisis 2

MATERIALES

Figura 9. Puntas para micropipetas de laboratorio. (Cada

color tiene una capacidad diferente).

Figura 7. Centrifuga, configurada para centrifugar a 14.000

rpm (revoluciones por minuto) a lo largo de 10 minutos.

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Figura 12. Lisis I para la disgregación de ADN.

Para la extracción del ADN se
Figura 10. Micropipeta, regulada para la extracción de 300
realizan los siguientes pasos a
microlitros de cada lisis.
través de una lisis (separación):

1. Lisis celular.
2. Lisis nucleica.
3. Precipitación nucleica (Por
medio de acetato de amonio).
4. Precipitación de ADN.

Figura 11. Tubos de eppendorf para verter sangre en él.

Figura 13. Se agregan 300 microlitros de sangre a un tubo

eppendorf.

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Figura 14. Se agregan 900 microlitros de lisis I.

Figura 16. Pellet y sobre donante obtenido después de

centrifugar la muestra.

Figura 14. Muestra de sangre encubada por 10 minutos.

Figura 17. Adición de lisis II tras la extracción del

sobredonante.

Figura 15. Centrifugación de tubos eppendorf por 10

minutos a 14.000 rpm.

Figura 18. Fusión de lisis y sangre en el vortex por 5

minutos.

10
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http://www.jpimentel.com/cienci
as_experimentales/pagwebcienci
as/pagweb/la_ciencia_a_tu_alcan
ce_II/quimica/Experiencias_quimi
ca_extraccion_de_adn.htm

http://es.slideshare.net/marcia_k
arina/extraccion-adn

http://limavirtual.unicordoba.edu
.co/naturales/informe-practica-
campo

http://jem.rupress.org/search?
Figura 18. Adición de lisis 3 a la muestra extraída del
submit=yes&pubdate_year=194
vortex.
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Discusiones:
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BIBLIOGRAFÍA.
LTFORMAT=1&hits=10&hitsbrief
=25&sortspec=relevance&sorts
http://highered.mheducation.co
pecbrief=relevance&sendit=Sea
m/olc/dl/120078/micro15.swf
rch
http://www.microbial-
http://www.msal.gob.ar/plan-
systems.com/web/docs/Newslett
nacional-sangre/index.php?
er_Microbial_03.pdf
option=com_content&id=315&It
emid=39

11
 Protocolo de extracción del ADN.
1) Agregar 300 microlitros de sangre en un tubo de eppendorf (Agitar por inmersión más de 5 veces).
2) Agregar 900 microlitros de lisis 1.
3) Incubar en las manos por 10 minutos.
4) Centrifugar por 15 minutos a 13.000rpm.
5) Evaluar la calidad del pellet, si no es buena desechar sobre el donante y aplicar 300 microlitros de lisis 1.
6) Eliminar el sobredonante sin eliminar el pellet.
7) Adicionar 300 microlitros de lisis 2 (Verificar que ésta no se encuentre precipitada).
8) Dar vortex por 5 minutos.
9) Adicionar 300 microlitros de lisis 3.
10) Dar vortex por 5 minutos.
11) Centrifugar por 15 minutos a 13.000 rpm.
12) Transferir el sobredonante a un nuevo tubo eppendorf.
13) Adicionar 300 microlitros de lisis 4.
14) Agitar por inversión 5 veces.

Anexo 1. Tabla del protocolo a seguir para la extracción de ADN.