Escuela de Ciencias Químicas Química

Manual de Laboratorio de Bioquímica Dra. M. Sc. Mayra J. Espinoza M.

PRÁCTICA No 2
TEMA: REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

OBJETIVOS.-

Objetivo General.-
 Caracterizar cualitativamente los carbohidratos empleando diferentes reacciones

Objetivos Específicos.-
1. Identificar carbohidratos a través de la reacción general.
2. Verificar la presencia de azúcares reductores.
3. Establecer las diferencias entre monosacáridos y disacáridos a través de reacciones
redox.
4. Caracterizar cualitativamente a los polisacáridos.

TEORÍA.-

REACCIONES DE COLORACIÓN

REACCIÓN DE MOLISCH

La reacción de Molisch sirve para la detección de los glúcidos en general. Su

principio básico estriba en la formación de derivados del furfural en medio ácido a
temperatura ambiente o en caliente, derivados que reaccionan con ciertos fenoles (α –
naftol) para dar reacciones coloreadas.

REACCIÓN DE SELIWANOFF

La reacción de Seliwanoff, se basa, al igual que la de Molisch, en la formación

de furfural o sus derivados en caliente; pero el fenol en este caso es el resorcinol.
La reacción es positiva – indicando la presencia de cetohexosas- al aparecer un
intenso color rojo. Añadiendo carbonato sódico en polvo al tubo hasta neutralizar el
ácido – hasta que ya no se desprenda burbujas de anhídrido carbónico – la coloración se
vuelve anaranjada.

REACCIONES DE ÓXIDO – REDUCCIÓN

PRUEBAS PARA AZÚCARES REDUCTORES

El principal grupo de pruebas de azúcares reductores (Fehling y Benedict, entre

otras) se basan en la capacidad de reducir las sales cúpricas a óxido cuproso,
generalmente en medio alcalino, en el que éstas se encuentran disueltas, o acomplejadas
con tartratos, citratos etc. En todos los casos citados la reacción tiene lugar en caliente
al descomponerse el hidróxido cuproso por el calor, dando un precipitado de color
ladrillo sobre el fondo azul del reactivo – a bajas concentraciones el color es sólo
amarillento-.

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Resultados de la prueba de Benedict

Color ladrillo: Positivo (concentración alta de azúcar)
Color verde: Positivo (concentración baja de azúcar)
Color azul: Negativo.

PRUEBA DE BARFOED.

La prueba de Barfoed, aunque utiliza básicamente el mismo procedimiento, sirve

para fines distintos; aquí el cobre está en una disolución débilmente ácida; por efecto de
los materiales reductores en caliente da lugar a iones cuprosos que precipitan en caliente
en forma de óxido cuproso. El fundamento radica en la reducción del acetato cúprico a
óxido cuproso. La particularidad de esta reacción de Barfoed es la de que la velocidad
de la reacción es mucho más lenta para los disacáridos reductores, que para los
monosacáridos, lo que permite diferenciarlos con una cierta comodidad.
La reacción es positiva – indicando la presencia de materiales reductores – al
observarse un precipitado amarillo – rojizo.

PRUEBA DE POLISACÁRIDOS

PRUEBA DE YODO

Esta prueba permite identificar polisacáridos.

El almidón esta formado por amilosa y amilopectina, la primera se colorea de
azul en presencia de yodo debido no a una reacción química sino a la adsorción o
fijación de yodo en la superficie de la molécula de amilosa, lo cual sólo ocurre en frío.
Como reactivo se usa una solución denominada lugol que contiene yodo y yoduro
potásico.

MATERIALES.- REACTIVOS.-

- Gradilla para tubos - Solución de glucosa

- Tubos de ensayo (10) - Acido sulfúrico concentrado
- Espátula - Agua destilada
- Pipetas de 10 mL (3) - Solución de fructosa
- Pera de succión - Solución de sacarosa
- Vaso de precipitación de 250 mL - Reactivo de Molisch
- Reverbero - Reactivo de Fehling
- Pinza para tubos - Reactivo de Benedict
- Reactivo de Barfoed
- Reactivo de Seliwanoff
- Lugol
- Solución de lactosa
- Solución de almidón

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GRÁFICOS.-

REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN
Prueba de Molisch

Prueba de Fehling

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Sacarosa.-

Reacción de Seliwanoff.-

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Prueba de yodo.-

PROCEDIMIENTO.-

1. REACCIÓN DEL  – NAFTOL (MOLISH).- A 2.5 mL de la solución de azúcar

en un tubo de ensayo se añade dos gotas del reactivo de MOLISH (sol. al 5% de
α – naftol en alcohol). Se mezcla bien. Se inclina el tubo y se deja caer por las
paredes del tubo 1 mL de ácido sulfúrico concentrado (no agitar), formando una
capa de ácido bajo la de azúcar, una zona rojo – violeta aparece en la unión de
los dos líquidos.
2. PRUEBAS DE REDUCCIÓN
a) Prueba de Fehling.- A un tubo con 2 mL. de solución de Fehling (1 mL del
reactivo de Fehling A y 1 mL del reactivo de Fehling B), se adiciona 4 mL
de agua destilada y se hierve. A la solución caliente se adiciona 10 gotas de
la solución de azúcar y se calienta la mezcla luego de cada adición. La
formación de un precipitado de color amarillo o anaranjado rojo, indica que
la reacción es positiva.
a) Prueba de Benedict.- Se agrega 5 gotas de la solución problema a 2 mL del
reactivo de Benedict, se mezcla bien, se coloca en un baño de agua hirviente
por 5 minutos. Se observa el precipitado. Se puede examinar la sensibilidad
de la prueba de Benedict usando disoluciones crecientes de glucosa.

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b) Prueba de Barfoed.- A 2 mL de la solución de Barfoed se añade 1 mL de la

solución de azúcar, se hierve por un minuto y se deja en reposo. La
reducción se indica por la formación de un precipitado rojo de óxido
cuproso. Si el precipitado no aparece luego de hervir por un minuto, hervir
de nuevo, dejar en reposo por 15 minutos y observar.
3. REACCIÓN RESORCINOL – ÁCIDO CLORHÍDRICO (SELIWANOFF) A 2
mL. de reactivo de Seliwanoff se agrega 4 gotas de la solución de azúcar y se
calienta por un minuto en un baño hirviente. Observe la aparición de un color
rojo intenso con o sin separación de un precipitado rojo – pardo. Este último
puede disolverse en alcohol, al cual trasmitirá una coloración roja.
4. PRUEBA DE YODO
A una muestra de almidón, se agrega 2 gotas de una solución de yodo –
yodurada (LUGOL). En otro tubo se prepara un blanco constituido de 2 mL de
agua destilada y 2 gotas de solución de yodo – yodurada. Se compara los
colores. Para almidón se producirá un color negro azulado.

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REACCIONES.-

Reacción de Molisch

OH OH OH OH

H2SO4

Conc.

H H C H
Naftol O C C H
C H O
C C H C C H
O CH2OH
C C H

CH2OH
OH O
HMF

SO3 SO2 + 1/2 O2 C C H

O
C C H

CH2OH

Complejo rojo - violeta

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Reacción de Fehling
++ Cu(OH)2
Cu + 2 OH-

H
OH-
R C + 2 Cu(OH)2 R COOH + Cu2O + H2O
Calor
O
Precipitado
Azúcar reductor Rojo - ladrillo

CH2OH

O
OH

OH OH
OH CH2OH

OH
Cu++
OH
Cu2O + COOH

Complejo Precipitado OH
cupro - tartrático rojo - ladrillo
OH
soluble
CH2OH

OH
OH CHO

OH
OH

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Reacción de Benedict.-
CH2OH
O
OH

OH OH
OH CH2OH
OH
Cu++
OH
Cu2O + COOH

Complejo Precipitado OH
cuprocítrico rojo - ladrillo
OH
soluble
CH2OH
OH
OH CHO

OH
OH

Reacción de Barfoed.-
+
++ H ++
Cu (CH3COO)2 Cu

H
H+
R C + Cu++ R COOH + Cu2O
Calor
O
Precipitado
Azúcar reductor Rojo - ladrillo

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Reacción de Seliwanoff.-
HO OH HO OH HO O OH
+
H

H H C H
Resorcina O C C H

C H O
C C H
C C H
O CH2OH

C C H

CH2OH

HMF
HO O O

C C H
O
C C H

CH2OH

Coloración roja
RESULTADOS.-
Sustancias Pruebas
Molisch Yodo Fehling Benedict Barfoed Seliwanoff

Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra 4
Muestra 5
Muestra 6
Muestra 7
+ = Reacción positiva
- = Reacción negativa

CUESTIONARIO.-

1. ¿Cuál es el fundamento de la reacción de identificación de azúcares con el

reactivo de Molisch?.
2. Indique cuales reacciones sirven para identificar azúcares reductores y explique
su fundamento.
3. Indique cuales reacciones sirven para diferenciar entre monosacáridos y
disacáridos y explique su fundamento.
4. ¿Cuál es la reacción que nos permite distinguir entre aldosas y cetosas y
explique su fundamento?
5. Explique con que prueba podemos distinguir polisacáridos.

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