APUNTE DE APOYO

PARA TRABAJOS PRACTICOS DE MICROBIOLOGIA

Verónica Madrid Valdebenito

Prof. Asistente
Depto. Microbiología –
Facultad de Ciencias Biológicas
Universidad de Concepción, Chile

2013
© Verónica Madrid Valdebenito
Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad de Concepción (Chile)
2013

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ÍNDICE

ANEXOS UNIDAD MICROBIOLOGÍA............................................................... 3

Normas de seguridad ..................................................................................... 3

Materiales y equipos de uso habitual .............................................................. 4
Medios de cultivo ............................................................................................ 6
Técnicas de siembra ....................................................................................... 9
Identificación de bacterias ............................................................................ 10
Métodos para el estudio de susceptibilidad antimicrobiana .......................... 13
Efecto de agentes fisicos, químicos y mecánicos sobre bacterias ............... 17
Microbiota normal ......................................................................................... 21
Microbiología de las IAAS ............................................................................. 24
Esquemas para la identificación de bacterias ............................................... 31

ANEXOS UNIDAD PARASITOLOGIA ............................................................ 33

Examen parasitologico seriado de deposición .............................................. 33

Test de Graham ............................................................................................ 34

BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................... 35

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 Anexos Unidad de Microbiología

I.- Normas de seguridad

1.- Usar delantal blanco destinado exclusivamente para el Laboratorio de
Microbiología.
2.- Está prohibido comer, beber o llevar cualquier tipo de objeto a la boca
3.- Se debe trabajar con calma y cuidado para minimizar la creación de
salpicaduras y aerosoles, pues pueden ser infecciosos para el operador.
4.- Se deben evitar los desplazamientos innecesarios por el Laboratorio. Las
muestras deben manipularse a 30 cm de la llama del mechero.
5.- Las asas se esterilizarán en el mechero de Bunsen antes y después de su uso.
Se debe esperar unos segundos para que se enfríen después de flamearlas. Se
deben dejar en un soporte NO SOBRE EL MESON.
6.- Las placas de Petri deben ser abiertas solamente en el momento de la siembra
y a una distancia no superior a 30 cm del mechero
7.- Los tubos deben ser flameados en el mechero antes y después de abrirlos
8.- No está permitido pipetear con la boca. USE PROPIPETAS
9.- Cuando se manipulen microorganismos evite hablar innecesariamente o
llevarse las manos a la nariz, boca, ojos etc.
10.- Para eliminar el material de desecho contaminado, (pipetas Pasteur,
portaobjetos, etc) usted encontrará receptáculos rotulados.
11.- El lavado de manos debe efectuarse siempre después de la manipulación de
muestras y antes de abandonar el laboratorio.
12.- Los alumnos que tengan el pelo largo deben mantenerlo recogido para evitar
accidentes, sobre todo al trabajar con mecheros.
13.- Frente a derrame o cualquier tipo de accidente, avise al personal encargado
14.- Cuide el microscopio. Enciéndalo sólo en el momento de la observación.
Limpie los objetivos una vez terminado el trabajo.
15.- Los alumnos deben abstenerse de colocar en las mesas de trabajo cualquier
material que no sea el requerido para la realización de la práctica (por ejemplo: ropa,
bolsas de mano, libros, etc).
16- Los alumnos deben presentarse al laboratorio adecuadamente preparados,
habiendo consultado previamente en su manual la práctica correspondiente. Debe
leer con detenimiento la técnica a seguir, en caso de existir dudas consultar al
profesor ANTES de iniciar la práctica.

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II.- Materiales y equipos de uso habitual

Mechero de Bunsen
Este sirve para esterilizar la boca de tubos de ensayo, pipetas, portaobjetos,
etc. (flameando suavemente), asas (calentando al rojo).

Placas de Petri
Recipientes de vidrio en los cuales se coloca una determinada cantidad de
medio de cultivo sólido (con agar-agar) hasta completar una altura aproximada de
4 mm. Consta de una base y una tapa. Debe mantenerse cerrada, excepto en los
breves momentos en que debe sembrarse el medio de cultivo.

Pipetas Pasteur
Están formadas por un tubo angosto (5-6 mm) de vidrio esterilizado y
estirado hasta sellar la punta. Sirve para trasladar material líquido (gotas), o bien
para diseminar siembras (acodando el extremo, o formando un “rastrillo” con
éste). Se debe romper la punta y luego flamearla, antes de ser utilizada.

Pipetas graduadas
Son las pipetas corrientes utilizadas en química que se envuelven en papel
y se esterilizan en el horno Pasteur. Al desenvolverse, deben flamearse al
mechero antes de su uso.

Tubos de ensayo
Se encuentran taponados con algodón no hidrófilo o con tapas especiales
(metálicas o de plástico). Debe flamearse la boca del tubo después de sacar la
tapa y antes de volverla a poner en posición.

Matraces
Son los matraces habituales que se encuentran taponados con algodón no
hidrófilo y esterilizados en el Horno Pasteur. Se debe flamear la boca del matraz
después de sacar la tapa y antes de volverla a poner en posición.

Asas
Instrumentos que tienen alambre (nicrom) en la punta, en forma de aguja
(asa recta) o con un pequeño círculo en el extremo (asa circular). Sirven para
efectuar siembras bacterianas desde muestras sólidas o líquidas.

Microscopio
En bacteriología se emplea el objetivo 40x para observaciones sin tinción (a
fresco) y el objetivo 100x para observaciones por inmersión (colocando una gota
de aceite de cedro sobre la preparación teñida.

El microscopio debe quedar perfectamente limpio después de finalizada la

observación correspondiente. Para ello utilice un paño impregnado con alcohol.

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Estufa de cultivo
Las siembras efectuadas con bacterias o productos biológicos en medios de
cultivo deben cultivarse en estufas que se encuentran a la temperatura apropiada
(ej. 25, 35, 37ºC). Esta temperatura depende del tipo de microorganismo
investigado.

Baño María
Consiste en un receptáculo con agua de la llave y que tiene una fuente de
calor para mantener una determinada temperatura. Generalmente se hace hervir
el agua, por ejemplo, para fundir el agar en los tubos con medios de cultivo sólido.

Sistema para cultivo en anaerobiosis

Jarra de plástico transparente con tapa hermética. Dentro de la jarra se
colocan las placas sembradas, un sobre que contenga mezcla de reactivos que
fijan el oxígeno presente en la jarra en forma permanente, es decir, generan una
atmósfera carente de oxígeno (por ejemplo AnaerocultRA) y una tira indicadora de
anaerobiosis, es decir un material impregnado con una solución química que
cambiará de color al momento que se alcance las condiciones de oxido-reducción
adecuadas para el crecimiento de bacterias anaerobias dentro de la jarra.

Eliminación de material contaminado.

El material usado y contaminado (placas, tubos, matraces, etc.) debe
colocarse en el receptáculo rotulado para tal efecto.

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 III.- MEDIOS DE CULTIVO

Mezcla de elementos nutrientes que se usan para permitir el crecimiento de los

microorganismos. Se clasifican en base a los siguientes criterios:
a) Estado físico:
Sólidos: contiene agar y se puede observar el crecimiento de colonias
Líquidos: no contienen agar, el crecimiento se evidencia por turbidez
Semisólidos: contienen agar diluido, el crecimiento se evidencia por turbidez
b) Presentación:
En placas
En tubos
c) Contenido de nutrientes:
Medios de enriquecimiento: son aquellos que contienen nutrientes específicos
para favorecer el desarrollo de un microorganismo en particular. Se usan cuando
se sospecha que el microorganismo buscado está en baja cantidad o mezclado
con otras especies.
Medios de apoyo: contienen nutrientes que permiten el crecimiento de la mayoría
de los microorganismos, (siempre que no tengan exigencias especiales). Ej: agar
tripticasa.
Medios selectivos: permiten el crecimiento de los microorganismos buscados
porque contienen compuestos que inhiben el crecimiento de los demás. Por
ejemplo la adición de cristal violeta impide el crecimiento de la mayoría de las
bacterias Gram positivas
Medios diferenciales: contienen componentes que ponen en evidencia
características metabólicas del microorganismo que se está cultivando,
permitiendo así diferenciarlo. Por ejemplo medios adicionados de sangre para
evidenciar la producción de hemolisinas, o adicionados de azúcares.
Medios selectivos /diferenciales: mezcla de los dos anteriores. Estos medios
contienen un compuesto que inhibe el crecimiento de un determinado grupo de
microorganismos y además un componente que pondrá en evidencia alguna
característica metabólica. Ej. Agar Mac Conkey favorece el crecimiento de
bacterias Gram negativas y además diferencia entre aquellas Gram negativas que
fermentan lactosa, (cuyas colonias se observarán fucsia) y las que no lo hacen
(colonias blancas), porque contiene lactosa y un indicador de pH.
Medios especiales: son medios que contienen compuestos y nutrientes
especiales para cubrir las necesidades de cultivo de bacterias bien determinadas.
Estos medios facilitan el aislamiento de dichas bacterias
- Para el aislamiento de Staphylococcus: Medio agar manitol - cloruro de sodio
(Chapman).
- Para el aislamiento de Bordetella pertussis: Medio de Bordet-Gengou.
- Para el aislamiento de Mycobacterias; medio de Lowenstein-Jensen.
- Medio para bacterias anaeróbicas: en general se pueden usar los medios para
microorganismos aeróbicos, pero adicionándolos con algún compuesto químico
reductor para mantener el ambiente de anaerobiosis, como por ejemplo el
tioglicolato de sodio.

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Entre los medios diferenciales de uso más corriente se encuentran:

Agar-fierro-triple-azúcar: (Agar TSI). Se siembra en picada y superficie. Indica

fermentación de glucosa (en profundidad) y utilización de lactosa y sacarosa (en
superficie) con formación de ácido y gas (ruptura del agar). Además detecta la
producción de H2S (coloración negra del medio). Agar inclinado, sólido de color
rojo.
Indicador de pH: rojo fenol
Interpretación:
Anotación: agar tendido/columna, gas, H2S
A=acidez (color amarillo)
K= alcalinidad (color rojo)

Prueba LIA (Agar Lisina Hierro). Se siembra en picada y superficie. Indica

decarboxilación de lisina (todo el tubo azul) o deaminación de la lisina (tendido
rojo). Además es más sensible para la detección de H2S que el TSI. Agar
inclinado, sólido de color violeta.
Indicador de pH: púrpura de bromocresol
Interpretación:
Anotación: agar tendido/columna, gas, H2S
Tendido: A=acidez (color amarillo)
K= alcalinidad (color azul)
R= deaminación de lisina (color rojo)
Columna: A=acidez (color amarillo), ausencia de decarboxilación
K= alcalinidad (color azul), decarboxilación

Prueba MIO (Motilidad-Indol-Ornitina). Se inocula en el centro de la columna hasta

el fondo. Se emplea para detectar motilidad, liberación de Indol y decarboxilación
de la ornitina. Agar plano, semisólido de color púrpura.

Indicador de pH: púrpura de bromocresol

Interpretación:
Movilidad (+) enturbiamiento del medio
(-) enturbiamiento del medio sólo en la picada de siembra
Indol (+) formación de anillo rojo al agregar reactivo Kovacs
(-) al agregar reactivo Kovacs, éste permanece amarillo
Ornitina (+) alcalinidad (color azul), hay decarboxilación
(-) acidez (color amarillo), ausencia de decarboxilación

Medio agar-citrato de sodio (Medio de Simmons): Se siembra en superficie. Para

el estudio de la utilización del citrato de sodio, como única fuente de carbono. Agar
inclinado, sólido de color verde.

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Indicador de pH: azul de bromotimol
Interpretación: (+) se torna azul oscuro
(-) se mantiene el color verde

Medio agar-Urea (Medio de Christensen). Se siembra en superficie. Se usa para la

detección de hodrólisis de urea. Agar inclinado, sólido de color amarillo.

Indicador de pH: rojo fenol

Interpretación: (+) se torna rosado
(-) se mantiene amarillo

TSI LIA MIO CIT UREA

Batería Bioquímica básica para la identificación de Enterobacterias

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IV.- TÉCNICAS DE SIEMBRA
Siembra en placa por diseminación (agotamiento): se usa para obtener
colonias aisladas. Se puede diseminar por cuadrantes: En el primer cuadrante se
siembra la muestra clínica directamente, con la tórula; luego con un asa se
disemina desde el primero hacia el segundo cuadrante. Se esteriliza el asa. Se
procede a diseminar desde el segundo hacia el tercer cuadrante. Se esteriliza el
asa. Por último en el cuarto cuadrante se disemina en estría (Fig 1). También se
puede diseminar en superficie colocándo el inoculo en el borde de la placa y
procediendo a recorrer el agar describiendo un zigzag lo más amplio y numeroso
posible con el fin de agotar las bacterias presentes en el asa y así obtener
colonias separadas (Fig 2)

1 2

4 3

Fig 1 Fig 2

Siembra homogénea en superficie: se coloca un inóculo líquido sobre la

superficie del agar y luego se procede a diseminarlo por toda la superficie con
ayuda de un asa de Drigalski previamente esterilizada.
Siembra por inclusión: se vierte un volumen del inóculo líquido en una placa de
Petri y luego se agrega el agar a 45º -50ºC (en estado líquido), se mezcla con
movimientos circulares y se deja enfriar.
Siembra cuantitativa: el objetivo es cuantificar el número de bacterias presentes.
Para ello se puede usar la técnica de siembra homogénea en superficie o siembra
por inclusión, lo importante es que se debe sembrar una cantidad conocida de la
muestra.

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V.- Identificación de bacterias

Los métodos microbiológicos tradicionales, se basan en:

Obtención de un cultivo puro, es decir, observación y estudio de una colonia
bacteriana aislada, que ha crecido en un medio sólido.
a) Observación del aspecto macroscópico de la colonia (tamaño,
pigmentación, forma, producción de cambios en el agar como resultado de
su crecimiento, olor, apariencia de la superficie, apariencia de los bordes).
b) Observación microscópica de las bacterias presentes en dicha colonia,
mediante tinciones diferenciales como es la Tinción de Gram.
c) Observación del comportamiento de las bacterias sometidas a diferentes
pruebas bioquímicas y serológicas que nos permitan identificar el género y
la especie

Confección del frotis:

1a.- A partir de un medio sólido: Coloque una gota de agua o solución fisiológica
sobre un portaobjetos. Con ayuda del asa recta toque una de las colonias (cuyas
características hayan sido descritas) y emulsione con la gota de agua. Extienda
aproximadamente 1 cm2

1b.- A partir de un medio líquido: Coloque una gota del cultivo en caldo. Extienda
aproximadamente 1 cm2. Agite el tubo antes de sacar su muestra

2.- Deje secar al ambiente y fije con calor

Tinciones:
Se denominan tinciones simples aquellas que usan un solo colorante, ejemplo:
azul de metileno, permitiendo observar forma u agrupación. Las tinciones
diferenciales en cambio, usan varios colorantes en forma secuencial y permiten
una primera clasificación en base al comportamiento de la bacteria frente a esa
tinción.

1.- Tinción de Gram, (tinción diferencial):

• Colocar el portaobjetos sobre un soporte y cubrir el extendido con cristal
violeta. Dejar
• 1 minuto. Lavar
• Cubrir con lugol (forma un complejo con el cristal violeta). Dejar 1 minuto
Lavar
• Decolorar con alcohol acetona durante 30 segundos. Lavar
• Cubrir con el colorante de contraste (fucsina o safranina). Dejar 30
segundos. Lavar
• Secar con papel absorbente. Enfoque su preparación con aumento 10x,
coloque una gota de aceite de inmersión y cambie a objetivo 100x, ajuste el
enfoque y observe.

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 La tinción de Gram es muy importante, pues es la base para clasificar las
bacterias. Con esta tinción se diferencian:
a) Bacterias Gram positivas, que retiene el primer colorante usado que es el
cristal violeta y aparecen azules. Esto se debe a que su gruesa capa de
peptidoglicán no permite la salida del cristal violeta.
b) Bacterias Gram negativas que no retienen el cristal violeta, porque el alcohol
acetona forma poros en su pared que tiene alto contenido lipídico, de este modo,
se tiñen con el segundo colorante que es la fucsina o safranina y por lo tanto se
ven de color rosado.
c) La tinción de Gram permite además apreciar la forma y agrupación de las
bacterias.

2.- Tinción de Ziehl-Neelsen, (tinción diferencial):

• Cubrir el frotis con fucsina fenicada de Ziehl Aplicar calor bajo el

portaobjetos hasta la emisión de vapores dejar teñir durante 5 minutos.
• Decolorar con alcohol ácido alternando con lavados con agua de la llave
• Cubrir el frotis con azul de metileno durante 30 segundos, como tinción de
contraste.
• Lavar con agua.
• Dejar secar a temperatura ambiente (no se aconseja hacerlo con papel
filtro).
• Enfoque su preparación con aumento 10x, coloque una gota de aceite de
inmersión y cambie a objetivo 100x, ajuste el enfoque y observe.

La tinción de Tinción de Ziehl-Neelsen., por tanto, también es una tinción

diferencial, porque permite la observación de un grupo especial de
bacterias, denominadas “bacterias alcohol-ácido resistentes”, pues no
pierden la coloración inicial con la fucsina por acción del alcohol ácido y se
observan de color rojo. El resto de la preparación se observa de color azul.

Por tanto, para encontrar el agente etiológico de una determinada enfermedad que
afecta a un paciente o para conocer el estado sanitario de alguna muestra, es
necesario aislar el agente y a veces, además de aislarlo se necesita cuantificar su
presencia en la muestra. Cuando el aislamiento no es posible se recurre a
indicadores indirectos de su presencia. Por ejemplo: detección de componentes
estructurales como: cápsula, fimbrias, flagelos, toxinas, glicoproteínas o productos
del agente infecciosos como: enzimas, toxinas o metabolitos). Por ejemplo:
detección en alimentos de nucleasa termoestable (DNasa) de Staphylococcus
aureus. Las técnicas más usadas son los inmunoensayos: ELISA,
Inmunofluorescencia, aglutinación con látex

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Los avances tecnológicos han permitido incorporar al laboratorio de rutina, las
herramientas de la biología molecular, es así, como cada día se incrementa la
disponibilidad de técnicas para detección de segmentos de ácidos nucléicos que
son específicos de cada agente. Entre ellas podemos citar: Hibridización mediante
sondas, Reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

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VI.- Métodos para el estudio de la susceptibilidad antimicrobiana

Bases bioquímicas de la acción antimicrobiana:

Una vez que la célula bacteriana ha logrado entrar y adherirse a su tejido diana,
inicia su crecimiento, es decir, se multiplica. Para ello requiere sintetizar
macromoléculas y capturar elementos que le son esenciales. Los agentes
antimicrobianos interfieren con procesos específicos que son esenciales para el
crecimiento y/o división de la bacteria.

Principios y definiciones:
Es deseable que un agente antimicrobiano ideal sea selectivamente tóxico, es
decir actúe sobre el patógeno más que sobre el hospedador. En base a su sitio de
acción, los antimicrobianos se pueden agrupar en:
- Inhibidores de la síntesis de la pared bacteriana
- Inhibidores de la síntesis proteica
- Inhibición de la síntesis de ácidos nucléicos
- Antimetabolitos

Actividad del antimicrobiano:

Bactericidas: compuestos que matan las bacterias. Ej. Penicilina
Bacteriostaticos compuestos que inhiben procesos metabólicos en forma
reversible. Ej sulfonamidas, tetraciclina. De este modo cuando los niveles de estos
compuestos se hacen subinhibitorios, el metabolismo de la bacteria puede
reanudarse.

CMI, es la mínima concentración que inhibe el crecimiento de una bacteria.

Corresponde a una medición in vitro de la actividad inhibitoria de un agente
antimicrobiano.
CMB, es la minina concentración de antibiótico capaz de matar a la bacteria
Las características farmacológicas del agente antimicrobiano son críticas para su
elección, dosis, rutas y frecuencia de administración.

Existen tres orígenes de compuestos antibacterianos:

- Derivados de otros microorganismos Por ejemplo: del género Penicillium,
Streptomyces (estreptomicina, tetraciclina, cloranfenicol, eritromicina).
- Sintetizados químicamente. Por ejemplo: sulfonamidas, trimetoprim.

- Derivados de manipulación molecular de antibióticos. Por ejemplo:

cefalosporinas, aminoglicosidos.

Espectro antibacteriano:
Es el rango de actividad de cada antimicrobiano

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- Reducido espectro: son restringidos en su acción. Ej Penicilina es muy efectiva
contra cocos Gram positivos y negativos, pero tiene poca actividad contra bacilos
Gram negativos entéricos.

Amplio espectro: actúan contra múltiples microorganismos no relacionados. Ej.

Cloranfenicol, Tetraciclina. Inhiben un amplio rango de bacterias Gram positivas y
negativas.

La combinación de diferentes clases de antimicrobianos puede tener distintos

efectos: sinergia, adición, antagonismo.

Métodos para el estudio de la susceptibilidad antimicrobiana

Para determinar cuál es el antimicrobiano adecuado para realizar o continuar un

tratamiento, se hace necesario averiguar qué compuestos antimicrobianos son
capaces de inhibir in vitro, el crecimiento de la cepa en estudio.

1.- Antibiograma: método de estudio de susceptibilidad por difusión (Kirby-Bauer,

Fig. 3), es un método estandarizado (el inóculo, cantidad de agar Muller Hinton, la
concentración de antimicrobiano en los discos y la forma de sembrar la placa). De
este modo los resultados son reproducibles.
- A partir de un cultivo puro, preparar un inoculo suspendiendo 2 a 3 colonias en
caldo Muller-Hinton
- Ajustar la densidad del inóculo a Mac Farland 0,5 (1,5x108 ufc/ml)
- Con una tórula, sembrar en cuadrantes la placa con agar Muller Hinton,,
rotándola en 60º cada vez, cuidando de formar un tapiz homogéneo
- Con ayuda de una pinza, colocar en forma ordenada, discos impregnados de
antibiótico, presionar suavemente sobre el agar (ver Fig. 3). Los discos a usar
son seleccionados dependiendo de la cepa en estudio.
- Incubar a 37º C durante 18 a 24 horas.

Lectura e interpretación del antibiograma

- Con una regla, se mide (en mm), los halos de inhibición alrededor de cada
sensidisco.
- El CLS (Clinical and Laboratories Standards), publica tablas donde aparecen
los diámetros de los halos, los que han sido obtenidos correlacionándolos con
las CMI. Los resultados se catalogan como: susceptible, intermedio y
resistente.

15
 Halo de
inhibicion
Disco con
Fig 3 antibacteriano

SUSCEPTIBLE (S): significa que la infección causada por ese microorganismo

puede ser apropiadamente tratada con dosis habituales del antibiótico estudiado
INTERMEDIO (I): esta categoría incluye organismos que son inhibidos por
concentraciones del antibiótico que están cercanas a las alcanzadas por ese
antibiótico en el plasma y por lo tanto pueden responder pobremente a la terapia
RESISTENTE (R): significa que el microorganismo no seria inhibido por el
antibiótico en dosis habituales o que tiene mecanismos de resistencia contra el.

Existen otros métodos en que la bacteria en estudio es sembrada en:

a) Series de placas de agar que contienen concentraciones crecientes de
antibióticos, es el método de dilución en agar
b) Series de tubos, con caldo de cultivo, que contienen concentraciones
crecientes de antibióticos, es el método de dilución en caldo
Con ambos métodos es posible conocer la Concentración Mínima Inhibitoria CIM y
la Concentración Mínima Bactericida CMB, de un antibiótico.
CMI, es la mínima concentración que inhibe el crecimiento de una bacteria
CMB, es la minina concentración de antibiótico capaz de matar a la bacteria
Entre los métodos más modernos, se puede citar el E-Test y los métodos de
microdilución con lectura turbidimétrica

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 TABLA DE INTERPRETACION DE LOS HALOS DE INHIBICION

ANTIBIOTICO POTENCIA (ug) DIAMETRO DE HALO (mm)

RESISTENTE SUSCEPTIBLE
ACIDO NALIDIXICO 30 13 19
AMIKACINA 30 14 17
AMPICILINA (Bac.Gram-) 10 11 14
AMPICILINA (Haemophilus) 10 19 20
AMPICILINA (Enterococo) 10 16 30
AZTREONAM 30 15 22
BACITRACINA 10U 8 13
CARBENICILINA 100 13 17
(Pseudomonas)
CEFALOTIN 30 14 18
CEFAZOLINA 30 14 18
CEFOPERAZONA 75 15 21
CEFOTAXIMA 30 14 23
CEFTAZIDIMA 30 14 18
CEFTIZOXIMA (P. aeruginosa) 30 10 11
CEFTIZOXIMA (otros 30 14 20
microorg.)
CEFTRIAXONA 30 13 21
CEFUROXIMA 30 14 18
CIPROFLOXACINA 5 12 19
COLISTIN 10 8 11
COTRIMOXAZOL 1.25/23.75 10 16
CLINDAMICINA 2 14 17
CLORANFENICOL 30 12 18
ENOXACINA 10 12 17
ERITROMICINA 15 13 18
GENTAMICINA 10 12 15
NEOMICINA 30 12 17
NETILMICINA 30 12 15
NITROFURANTOINA 300 14 17
NORFLOXACINA 10 12 17
OXACILINA (Staphylococcus) 1 10 13
OXACILINA 1 19 20
(S. pneumoniae)
PENICILINA G 10U 28 29
(Staphylococcus)
PENICILINA G 10U 19 20
(N. gonorrhoeae)
PENICILINA G (Enterococo) 10U 14 15
PENICILINA G (Streptococcus) 10U 19 28
PENICILINA G 10U 19 28
(L.monocytogenes)
TETRACICLINA 30 14 19

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VII.- Efecto de los agentes físicos, químicos y mecánicos sobre
bacterias
DEFINICIONES:

Esterilización: procedimientos físicos o uso de agentes químicos para eliminar

todas las formas viables de las bacterias, incluidas las esporas, virus y hongos.

Desinfección: procedimiento que elimina la mayor parte de formas vegetativas

bacterianas, pero no necesariamente esporas y virus.
Desinfectantes: compuestos usados para desinfectar superficies inanimadas. Se
clasifican en grados de potencia:
- Alto: elimina Mycobacterium tuberculosis, virus y en condiciones especiales
puede esterilizar. Se aplica a instrumental semicrítico, es decir, aparatos que
toman contacto con mucosas o piel no intacta.
- Medio: elimina bacterias vegetativas, hongos y algunos virus. Podría eliminar
Mycobacterium tuberculosis
- Bajo: elimina bacterias patógenas vegetativas, algunos hongos y algunos virus.
No elimina Mycobacterium tuberculosis ni virus desnudos pequeños. Se aplica
a instrumentos no críticos, es decir aquellos que toman contacto con piel
intacta, como fonendoscopios o también para pisos, utensilios, muebles, etc.

Antiséptico: compuestos químicos usados sobre tejidos vivos, para destruir o

inhibir el crecimiento de microorganismos.

Sanitización: procedimiento cuyo objetivo es disminuir la carga bacteriana a

niveles seguros. Se aplican sobre artefactos y utensilios de uso diario.

Compuestos bacteriostáticos: aquellos que inhiben el desarrollo de bacterias.

Compuestos bactericidas o germicidas: aquellos que matan a bacterias, pero no

necesariamente las esporas.

La esterilización y desinfección conllevan generalmente a la destrucción,

eliminación o inhibición de los microorganismos. Generalmente se realiza esto
mediante tres tipos de agentes:

1) Agentes Físicos
2) Agentes Químicos
3) Agentes Mecánicos

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1.- Agentes físicos

Calor húmedo

Ebullición: por 2 a 10 minutos eventualmente eliminará las formas patógenas de

hongos y bacterias. Sin embargo, no matará esporas de hongos (conidios), ni
tampoco destruirá el virus de la hepatitis.

Vapor a presión, Autoclave: para destruir esporas la temperatura debiera ser

elevada a 121ºC. El uso del autoclave permite elevar la temperatura a 121ºC (15
libras de presión) y debe mantenerse en esta por un período no inferior a 15
minutos, contados desde a temperatura.
Pasteurización: algunos alimentos líquidos (leche, jugos, cervezas) se someten a
este proceso. Por ejemplo la pasteurización de la leche consiste en calentarla a
62ºC por 30 minutos, o bien elevar la temperatura a 71º C por 15 segundos para
matar todas las formas vegetativas de las bacterias patógenas presentes en ella;
elimina el 100% del Bacilo de Koch, Salmonellas, Streptococos y Brucellas. La
muerte por altas temperaturas se debe a desnaturalización de las proteínas
(coagulación o hidrólisis) y destrucción de la membrana celular.

2.- Calor seco

Horno: esteriliza cuando los materiales sometidos a este procedimiento, están a

una temperatura de 160ºC a 170ºC por un período mínimo de 120 min. La
muerte se debe a coagulación de las proteínas. Con este procedimiento se
eliminan esporas y el virus de la hepatitis.

Incineración: es una forma de esterilización terminal. Los materiales son

destruidos completamente por la acción del calor. También suele utilizarse para
esterilizar el asa de platino destinada a la transferencia de bacterias.

3.- Congelación

Ciclos de congelación y descongelación reducirán considerablemente el número

de bacterias viables. Método que es inoperante contra las esporas. La muerte es
debida a rotura de la membrana celular.

4.- Liofilización

Consiste en coagular y deshidratar violentamente una muestra. Hay reducción del

número de bacterias viables. Sin embargo, este procedimiento más bien es
utilizado para conservar bacterias y otras formas vivas. La reducción inicial del
número de bacterias no afecta considerablemente la recuperación cuando se
trabaja con números tan inmensamente grandes.

19
Radiaciones
Radiaciones ultravioleta (UV): es una radiación electromagnética. Su longitud
de onda varía entre 15 y 400nm. Los rayos UV inciden en los ácidos nucleicos,
produciendo modificaciones químicas (dímeros de timina). Hay desprendimiento
de peróxido que también pueden jugar algún rol en su efecto bactericida. Una de
sus aplicaciones es la esterilización de ambientes y superficies, la radiación UV,
no tiene poder de penetración.

Radiaciones gamma : este tipo de radiación es letal a toda célula viva, debido a
su alta energía es capaz de penetrar la materia e interaccionar con los átomos de
las moléculas liberando electrones, es decir es una radiación ionizante. Entre
otros, es utilizada para esterilizar alimentos, material de usos médico (plástico
desechable).

Agentes mecánicos

Ondas ultrasónicas: destruyen a las bacterias por un proceso de cavitación.

Se realiza sólo en suspensión de líquidos. Utilizados para limpieza, no para
esterilización.
Filtración: es la remoción de bacterias u otras partículas de la suspensión en
líquidos mediante membranas que presentan poros de 0,45 y 0.2 micrómetros de
diámetro
Nota: los virus pasan a través de los filtros que ordinariamente retienen bacterias.
Lo mismo ocurre con las formas bacterianas privadas de pared celular.

2.- Agentes químicos

Antisépticos

Povidona yodada (8,5 y 10%):

Actúa oxidando e inactivando componentes celulares. Su acción es rápida y al
ser soluble en agua permite una liberación gradual del yodo a los tejidos
prolongando su efecto pero con menor riesgo de irritación. Espectro de acción
amplio.

Alcohol etílico 70%:

Su acción es rápida y actúa desnaturalizando las proteínas. Espectro de acción
amplio.
Es volátil e inflamable.

Clorhexidina 2%:
Actúa dañando la membrana celular. Este detergente posee una afinidad alta por
la piel, por lo que su acción se puede prolongar hasta 6 horas después de su uso

20
y además el efecto es acumulativo si se usa periódicamente. Su espectro de
acción incluye bacterias Gram positivas y negativas, virus con envoltura, pero su
acción es débil frente a hongos y nula frente a Mycobacterium tubeculosis

Triclosan 0,5 y 1%
Produce daño a nivel de la pared de microorganismos. Actúa sobre formas
vegetativas de bacterias. Su actividad es poco afectada por la presencia de
materia orgánica. Uso para el lavado de manos de tipo clínico.

Peróxido de hidrógenos 10 volúmenes al 3%:

Actúa oxidando e inactivando componentes celulares

Desinfectantes

Glutaraldehído 2%: se usa como desinfectante de alto nivel, para instrumental

semicrítico. Espectro de acción incluye esporas

Alcohol 70%: se usa como desinfectante de nivel intermedio, bajo. Espectro: no

incluye esporas

Cloro 10% solución madre (0,5% sol de uso): desinfección de pisos y baños.
Espectro de acción amplio

Detergentes amonio cuaternario: actúan destruyendo las membranas

celulares. Dejan un film de depósito sobre las superficies, lo que prolonga su
acción, Desinfección de bajo nivel y sanitización.. Espectro reducido

Esterilización

Oxido de etileno (EtO): usado para esterilizar material sensible al calor,

dispositivos médicos, productos farmacéuticos. Requiere de instalaciones
especiales, pues es tóxico y explosivo

21
VIII.- Microbiota Normal

No sólo en el aire, aguas y tierra se encuentra una gran diversidad de

microorganismos sino que hay además un conjunto de microorganismos,
principalmente bacterias que se normalmente se localizan en diferentes órganos
del cuerpo humano. Estos microorganismos se denominan “microbiota normal” y
generalmente establecen una relación de comensalismo con su hospedador.
La colonización microbiana del individuo, comienza con el nacimiento. Los
primeros microorganismos en establecerse son aquellos transferidos al momento
del nacimiento, a través del canal del parto, con la primera respiración del recién
nacido y al recibir las primeras atenciones de quienes le rodean.
Microbiota normal está compuesta mayoritariamente por bacterias y un número
menor de virus, hongos y parásitos. Éstos se encuentran con frecuencia en
personas sanas y no les causan enfermedad.
La microbiota presente en la superficie y en los órganos conectados al exterior
sufre un flujo continuo durante la vida del individuo y esto estaría influenciado por
diversos factores como la edad, nutrición, estado de salud, higiene y estado
hormonal, por ejemplo.
En el ámbito de la clínica, se sabe que sólo una pequeña fracción de las
enfermedades infecciosas son ocasionadas por agentes externos, dicho de otro
modo, la mayoría de los casos son causado por bacteria que son miembros de la
microbiota y que por circunstancias especiales cambian de hábitat.
La microbiota tiene una composición numerosa y diversa. Para abordar su estudio
se ha recurrido a clasificar los ambientes biológicos del hombre, pues la microbiota
basal es característica de cada ambiente. Es necesario mencionar que existe una
“microbiota transitoria” que es variable de un ser humano a otro, compuesta por
bacterias que están presentes en forma intermitente e incluso a veces
corresponden a bacterias patógenas.
Entre estos ambientes biológicos del cuerpo humano se describen zonas con alta
presencia y zonas con escaza presencia de microbiota y también zonas estériles.
Otro detalle que debemos agregar es que el número de anaerobios estrictos
tiende a exceder en número a las formas facultativas y aerobias por un factor de
10 a 100 o más.

22
Microbiota Normal
1.- Piel 6.- Intestino delgado
Staphylococcus epidermidis Lactobacilos
Difteroides Enterococcus
Propionibacterium acnes Bacteroides
Staphylococcus aureus E. coli
Streptococcus (incluye grupo A)
Peptococcus (micrococos anaeróbicos)
Candida spp.
Bacilos Gram negativos
2.- Boca y faringe 7.- Intestino grueso (90-95% son
anaerobios obligados existen > 300
Streptococcus
Pneumococcus (20-40%) especies).
Peptostreptococcus
Enterococcus Bacteroides spp.
E. coli
Abiotrophia
Enterococcus
Stomacoccus
Staphylococcus Lactobacilos
Klebsiella spp.
Moraxella catarrhalis
Neisseria Actinomycetes
Fusobacterium spp.
Veillonella
Difteroides
Actinomyces spp Clostridium perfringens
Candida albicans
Bifidobacterium
Pseudomonas aeruginosa
Corynebacterium
Proteus mirabilis
Eubacterium
Alcaligenes faecalis
Lactobacilo spp
Staphylococcus epidermidis y S. aureus
Propionibacterium
Rothia

Haemophilus influenzae (40-80%)

Difteroides
Actinobacillus
Campylobacter
Capnocytophaga
Eikenella
Fusobacterium
Klebsiella spp
E. coli
Candida albicans
3.- Dientes y crevice gingival 8.- Hígado, vesícula y peritoneo:
Lactobacilo spp. Normalmente no hay microorganismos
Bacteroides spp.
Streptococcus mutans
Actinomyces spp.
Porphyromonas spp.
Prevotella spp.

23
Espiroquetas
4.- Senos nasales, laringe, tráquea,
bronquios y pulmones:
Generalmente estériles
5.- Fosas nasales 9.- Tracto genitourinario
Staphylococcus epidermidis Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus aureus (20-50%) Enterococcus faecalis
Moraxella catarrhalis E. coli
Streptococcus pneumoniae Lactobacilos
(neumococos) Candida albicans
Haemophilus spp. Bacteroides
Micrococcus spp. Clostridium spp.
NOTA: Este listado no incluye todos los microorganismos presentes o que pueden formar parte de
la microbiota del cuerpo humano.

24
IX MICROBIOLOGIA DE LAS IAAS

Definición de caso de IAAS:

Procesos infecciosos locales o generalizados causados por agentes
biológicos de origen endógeno o exógeno, que se asocian a hospitalización o
consulta de un paciente. Son procesos que no correspondes al motivo de consulta
ni estaban en periodo de incubación al momento de ésta. Incluye procesos
infecciosos que se presentan 48 a 72 h post hospitalización y también post alta, 30
días hasta un año, dependiendo del caso”
* Se acepta la aparición a las 24 h cuando está asociada a un procedimiento
invasivo.

Impacto de las IAAS en Chile

Complicación frecuente y severa de la atención hospitalaria. 80% secundarias a
procesos invasivos
Prevalencia 8 a 10%
Letalidad 6 a 10% (3.000 a 6.000 muertes/año)
Aumento del costo de hospitalización por: Aumento en 5 a 20 días ó más de
hospitalización, según tipo de IAAS. Mayor uso de medicamentos. Mayor número
de exámenes. Necesidad de aislamiento. Desvío de recursos en salud
Costo indirecto por: Días laborales perdidos, discapacidad, subsidios, carga
psicológica, muerte temprana
Aumento de las tasas de morbilidad y mortalidad
1/3 de los casos serían prevenibles

Las IAAS son causadas principalmente por bacterias y en menor frecuencia,

aunque en aumento, por virus, levaduras y hongos filamentosos.

Ecología de las IAAS

Comprende una cadena de eventos:
Características de los agentes biológicos: patogenicidad, virulencia, dosis
infectante, tropismo
Reservorio de agentes, que son los pacientes mismos, sus visitas, el personal de
salud y el ambiente
Puertas de entrada y salida de los agentes: cuando el reservorio es humano, las
“puertas” corresponden sistemas comunicados con el ambiente, por ejemplo tracto
digestivo y respiratorio.
Mecanismos de transmisión: circunstancia que permite que el agente biológico
presente pueda “tomar contacto” con un hospedador.
Paciente susceptible: persona que tiene algún factor predisponente que lo hace
vulnerable a adquirir una IAAS. Por ejemplo: edades extremas, co-morbilidad,
estado nutricional, estado inmunitario (tratamiento inmunosupresores),
hospitalización prolongada, tratamientos con antimicrobianos de amplio espectro,
haber sido sometido a procedimientos invasivos.

25
Factores del ambiente: Aire, agua, superficies, objetos, desechos hospitalarios.
Protocolos de procedimientos del establecimiento de atención.

Los agentes exógenos: provienen desde fuera del paciente, es decir, provienen
del ambiente o de de otras personas.
Agentes endógenos: provienen de la microbiota del paciente que ha perdido el
equilibrio con su hospedador y por tanto pueden comportarse como “agentes
oportunistas” y causar enfermedad. Es importante recordar que un paciente
hospitalizado puede incorporar a su microbiota agentes que estén presentes
dentro del ambiente hospitalario (agentes ”exo-endógenos”).

Algunas definiciones
AGENTE PATOGENO: Aquellos que causan las enfermedades infecciosas
PATOGENESIS: Cómo puede causar daño
PATOGENICIDAD: Capacidad para causar daño
VIRULENCIA: Expresión cuantitativa de la patogenicidad (expresión cuantitativa
de la capacidad para ocasionar daño). Es una propiedad característica de cada
cepa bacteriana
DOSIS INFECTANTE: número de microorganismos necesarios para causar una
infección
TROPISMO: (del griego trope=giro), ilustra como el agente es “atraído” por el
tejido donde encontrará los receptores para adherirse e iniciar su proceso de
colonización.
COLONIZACIÓN: Presencia de microorganismos en la piel o en mucosas, sin
evidencias de respuesta específica clínica o inmunológica.
INFECCIÓN: Respuesta específica del organismo frente a la presencia de agentes
biológicos, hay desarrollo de respuesta inmune. Una infección puede ser
localizada o generalizada y puede cursar en forma subclínica o asintomática ó
como Enfermedad Infecciosa, es decir con presencia de signos y síntomas
atribuibles a la presencia de un agente infeccioso.

Pasos obligados que deben cumplir los agentes patógenos (Patogénesis)

1.- Exposición del paciente
2.-Contacto del agente con el hospedero susceptible
3.- Entrada del agente
4.-Contacto del agente con el tejido blanco
5.-Adaptación del agente, logrando así establecerse (colonización)
6.- Diseminación e Invasión (enfermedad infecciosa)
7.- Transmisión (el agente completa su ciclo y va hacia otro hospedador)

La introducción de los antimicrobianos al arsenal terapéutico, en la década de los

cuarenta, dio una solución al problema de las infecciones, pero sólo por corto
tiempo, pues con rapidez se constató la aparición de microorganismos resistentes,
principalmente en los hospitales, lo que obligó a crear un programa de control de
IIH en USA en los años cincuenta. Ya en los años 70-80 aparecen cepas
multirresistentes. En Chile el programa para el control de infecciones
intrahospitalarias se inicia en 1982.

26
Principales IIAS
La frecuencia varía según el centro hospitalario y la complejidad del servicio

Neumonías: entre los factores de riesgo detectados: Generales del hospedador.

Condiciones que favorecen aspiración o reflujo. Factores que impiden una
adecuada ventilación pulmonar. Uso prolongado de ventilación mecánica. Agentes
etiológicos: S. aureus, E. coli, Klebsiella, Staphylococcus coagulasa (-),
Pseudomonas, A. baumannii , Virus Sincicial Respiratorio, Adenovirus.

Infección de Herida Operatoria (IHO): entre los factores de riesgo detectados se

puede citar: Estada preoperatoria prolongada. Rasurado preoperatorio. Presencia
de focos distales. Duración de cirugía. Drenajes abdominales. Técnica quirúrgica
Factores de resistencia del hospedador. Agentes causales implicados.
Staphylococcus aureus. Escherichia coli, Staphylococcus coagulasa (-), Klebsiella
pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii.

Infección del Torrente Sanguíneo (ITS) (relacionada a CVC): entre los factores
de riesgo detectados se puede citar: los concernientes al paciente: ingreso en UCI,
ingreso en Neonatología, Recién nacido de bajo peso, Inmunodeprimidos, Enf de
base y a la atención hospitalaria: Cateterización (CVC). Agentes causales
implicados: Staphylococcus aureus, Stafilococcus coagulasa (-), Klebsiella,
Acinetobacter, E. coli, Pseudomonas, Cándida sp.

Infección del tracto urinario (ITU): entre los factores de riesgo detectados se
puede citar: los concernientes al paciente y a la atención hospitalaria. Agentes
etiológicos: E. coli, K. pneumoniae, Proteus, P. aeruginosa, A. baumannii, Cándida
albicans, Enterobacter sp.

Endometritis puerperal: entre los factores de riesgo que se postula pueden jugar
un rol se puede citar: De la paciente: Obesidad. Pobreza. Tiempo de membranas
rotas. Tiempo de trabajo de parto. De la atención hospitalaria: Parto por cesárea,
número de tactos vaginales, profilaxis antibiótica. Agentes etiológicos: el
diagnóstico etiológico sólo se logra en 25 % de los casos, en general son
infecciones endógenas (microbiota anaerobia y aerobia de la vagina), E. coli,
S. aureus, Estafilococos coagulasa (-), Enterococcus, S. pyogenes.

CARACTERÍSTICAS MICROBIOLOGICAS DE LOS AGENTES NOMBRADOS

Características de Staphylococcus aureus

Es una bacteria ubícua y cosmopolita.
Resistente a condiciones ambientales, agentes químicos y físico
Forma parte de la microbiota normal de individuos (nariz, piel, cuero cabelludo,
orofarínge y tracto urogenital),, es decir es posible la transmisión exógena
Grupos de riesgo: pacientes hospitalizados con traumatismos o sometidos a
cirugía o instrumentalizados,presencia de cuerpo extraño. Pacientes tratados con

27
antimicrobianos que suprimen la microbiota normal. Lactantes y niños menores
(SPEE).

Enfermedades causadas por S. aureus

I.- Procesos piógenos
Impétigo, Orzuelo, Foliculitis, Forúnculo, Antrax estafilocócico
Infecciones de herida operatoria
Bacteremia y endocarditis
Neumonía y empiema
Osteomielitis y artritis séptica

II.- Procesos tóxicos

Síndrome de la piel escaldada
Síndrome de shock tóxico (SST)
Intoxicación alimentaria estafilocócica

Se puede agrupar las cepas de S. aureus, según los patrones de resistencia que
presentan:
8Cepas β- lactamasa (+): es frecuente y está asociada a la presencia de un
plásmido. Confiere resistencia a muchos betalactámicos, por ejemplo: penicilina G,
ampicilina, piperaciclina.
8 Cepas MRSA: resistentes a meticilina. La resistencia a meticilina se debe a la
síntesis de una PBP distinta que está codificada por una serie de genes que se
encuentran en el cromosoma en los denominados “casette cromosómico
estafilocócico mec” (SCCmec). Se describen cuatro, siendo los SCCmec I, II yIII,
los que están asociados a infecciones intrahospitalarias.
8 Cepas VISA : han sido aisladas en Japón y USA, en pacientes sometidos a
tratamiento antimicrobianos muy prolongados. Para estas cepas el tratamiento con
vancomicina no ha sido eficaz. Se ha detectado en estas cepas un aumento en la
síntesis pared y alteraciones de ella.
8 Cepas VRSA: aisladas en el 2002, estas cepas poseian el gen vanA de los
Enterococos y eran resistentes a meticilina, pero presentaban susceptibilidad a
otros antimicrobianos.
Además las cepas de S. aureus pueden poseer otros plásmidos que les confieren
resistencia a tetraciclina, eritriomicina, aminoglicósidos y otros.

Profilaxis
Lavado de manos minucioso y cobertura de las superficies cutáneas expuestas
Aseo prolijo de habitaciones y fomites dentro del hospital
Desinfección y limpieza de heridas
Control de manipuladores de alimentos
Tratamiento o cambio de lugar de trabajo de personal hospitalario portador

Características de Staphylococcus coagulasa negativos

Ubícuos. Cosmopolitas
Pueden sobrevivir en superficies secas largo tiempo

28
Forma parte de la microbiota normal de individuos (nariz, piel, cuero cabelludo,
orofarínge y tracto urogenital)
Transmisión de persona a persona por contacto directo ó exposición a fomites
contaminados.
Infecciones de origen endógeno.
Grupo de riesgo: pacientes hospitalizados portadores de catéteres o prótesis.
Relativamente avirulentos. Gran capacidad de formar biopelícula
Causan: Endocarditis, Sepsis, ITU, Infecciones de catéteres, cortocircuitos y
prótesis, IHO

Características del Genero Enterococcus

Dos especies de importancia: Enterococcus faecium y Enterococcus faecalis
Ubícuos. Capacidad de sobrevivir en medio ambiente por largo tiempo.
Factores de patogenicidad: capacidad de adherencia mediante proteínas y
adhesinas hidrocarbonadas. Secreción de citolisinas, proteasas y enzimas para la
resistencia a antimicrobianos
Forma parte de microbiota intestinal del hombre y animales
Causa infecciones nosocomiales, la mayoría de origen endógeno
Pacientes con riesgo: hospitalizaciones prolongadas, tratamientos con
antimicrobianos de amplio espectro.
Causan: Endocarditis, ITU, IHO

Características de la Familia Enterobacteriaceae

Asociadas a IAAS: E. coli, lebsiella pneumoniae, Serratia marcesens, Proteus
mirabilis
Forman parte de la microbiota intestinal
Causan infecciones en su mayoría de tipo endógenas
Factores de patogenicidad: Endotoxina, cápsula, sideróforos, variación de fase
antigénica, sistema de secreción tipo III,resistencia a efecto bactericida del suero,
resistencia a antimicrobianos
Causan: ITU, IHO, ITS

Características de Bacilos Gram negativos No Fermentadores:

(Burkholderia, Moraxella, Stenotrophomonas, Pseudomonas, Acinetobacter)
Principales asociadas a IAAS: Pseudomonas aeruginosas, Acinetobacter
baumannii
Oportunistas, ubícuos en ambientes húmedos: flores, artefactos sanitarios,
equipos de diálisis, de ventilación.
Pueden colonizar transitoriamente tracto respiratorio, digestivo de pacientes
hospitalizados
Factores de riesgo: hospitalización prolongada, tratamientos con antimicrobianos
de amplio espectro, ventilación mecánica, quemaduras
Factores de patogenicidad: adhesinas, enzimas, toxinas, resistencia a
antimicrobianos
Causan: Infecciones respiratorias, urinarias, de piel y tejidos blandos, ITS,
endocarditis

29
Características de Rotavirus
Virus ARN, desnudos
Cosmopolitas
Se transmiten por vía fecal-oral y posiblemente respiratorios
Causan diarrea y deshidratación en lactantes
Durante la fase diarreica se elimina gran cantidad de virus

Características de Adenovirus
Virus ADN, desnudos
Se transmiten por contacto (gotitas, deposición, piscinas), fomites
Pacientes en riesgo: niños menores de 14años. Residentes de lugares cerrados
Causan: laringotraqueobronquitis, fiebre faringoconjuntival. Algunos biotipos
causan gastroenteritis

Características de Virus Sincicial Respiratorio (VRS)

Pertenece a los Paramixovirus
Virus ARN con envoltura
Dos tipos antigénicos
Causa: bronquiolitis, neumonía, resfrío, faringitis
Transmisión a través de gotitas de secreciones respiratorias, de persona a
persona
Diagnóstico: detección de antígenos virales (IF, ELISA)
Tratamiento: RIBAVIRINA (aerosol)
Profilaxis: Ig específica. No hay vacuna

Infecciones fúngicas invasoras

Levaduras
Candidas spp
Algunas especies forman parte de la microbiota de la piel y tracto gastrointestinal
La candidiosis es la micosis sistémica más común y las especies implicadas con
mayor frecuencia son: C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. glabrata, C.
guilliermondii y C. dubliniensis
Factores de riesgo: co-morbilidad, tratamientos con antimicrobianos de amplio
espectro, tratamientos inmunodepresores, alimentación parenteral.

Cryptococcus neoformans
Ampliamente distribuido a nivel mundial. Frecuentemente se aisla de heces secas
de palomas.
Se adquieren por inhalación. Es una levadura neurotrópica, por lo que desde el
plumón migra al sistema nervioso central causando meningoencefalitis
Factores de riesgo: cuadros inmunodepresores como cánceres hematógenos,
VIH/SIDA.

30
Hongos filamentosos
Aspergillus spp.
Las infecciones se adquieren de fuentes exógenas, por inhalación
Las infecciones localizadas no invasoras (colonización) pueden afectar los senos
paranasales, el conducto auditivo. Se puede presentar colonización fúngica de
una cavidad preexistente (ej: absceso pulmonar) sin invasión a tejidos contiguos.
La enfermedad sistémica en que afecta tracto gastrointestinal, riñón, hígado, etc.,
es rara
Factores de riesgo: pacientes que sufren tuberculosis, sarcoidosis o enfisemas
(patologías cavitarias), inmunodepresión.

Fusarium sp.
Son hongos saprofitos, abundantes en la naturaleza.
Las infecciones por este tipo de agentes son poco frecuentes y afectan a personan
con inmunodepresión profunda.

Funciones del Laboratorio de Microbiología en el control de las IAAS

Diagnóstico de los microorganismos patógenos
Caracterización de los agentes desde el punto de vista de los marcadores
epidemiológicos
(biotipo, serotipo, genotipo)
Orienta a los clínicos sobre los patrones de Resistencia/Sensibilidad (antibiotipo)
Contribuye en la selección y evaluación de desinfectantes y antisépticos

31
 X.- ESQUEMAS PARA LA IDENTIFICACION DE BACTERIAS, EN
LABORATORIO

BACTERIAS GRAM POSITIVAS COCACEAS

Catalasa Positiva
Staphylococcus, Micrococcus, Stomatococcus, Alloiococcus
Test Bacitracina
Resistente Susceptible
Staphylococcus Micrococcus
Test coagulasa
Positiva Negativa
S. aureus
Test Novobiocina
S R
S. coagulasa (-) Staphylococcus
No saprophyticus saprophyticus

BACTERIAS GRAM POSITIVAS COCACEAS

Catalasa Negativa
Streptococcus, Enterococcus
Streptococcus
Alfa Beta Gamma
Bacitracina Test látex:
S
S. grupo A Streptococcus
Grupos
A,B,C,D,F,G
Optoquin Bilis esculina
Resistente: NaCl 6,5%:
Grupo
viridans Enterococcus
Optoquin susceptible:
S. pneumoniae
Bilis(+)
NaCl (+):
Enterococcus

BACTERIAS GRAM POSITIVAS BACILOS

Catalasa Positiva/Aspecto al Gram

Bacilos grandes, esporulados con Bacilos en empalizada Bacilos finos
bordes netos
Bacillus sp. Corynebacterium sp. Listeria sp.

32
 BACTERIAS GRAM NEGATIVAS BACILOS
Fermentan Glucosa No Fermentan Glucosa Crecimiento lento
Test oxidasa (-) Test oxidasa (+) Requieren suplementos
Crecen en Mc Conkey Crecen en Mc Conkey No crecen en Mc Conkey
Enterobacteriaceae Bacilos no fermentadores Fastidiosos
Identificación Bioquímica Identificación Bioquímica Pruebas especiales
Ej: Pseudomonas, Acinetobacter, Ej: Brucella, Bordetella,
Lactosa (+) Lactosa (-) Legionella, Bartonella
E. coli Salmonella
Klebsiella Shigella
Enterobacter Proteus
Citrobacter

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS COCACEAS

Disposición “grano de café”

Oxidasa (+)
Neisseria sp.

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS COCOBACILOS

Crecimiento lento
Requieren suplementos
No crecen en McConkey
Fastidiosos
Requieren pruebas especiales para su identificación
Ej: Haemophilus, Klingella, Eikenella

33
 ANEXOS DEL MODULO PARASITOLOGIA

I.- Examen Parasitológico Seriado de Deposición

Requisitos para obtener una correcta muestra de deposiciones, para el

examen parasitológico.

Deberá insistirse ante el paciente, sobre la importancia que tiene el cumplimiento

exacto de las medidas que a continuación se indican:

1.- El paciente debe defecar en un recipiente limpio y seco.

2.- No debe mezclar la deposición con orina u otras materias extrañas.
3.- No debe haber ingerido purgantes oleosos, fármacos a base de bario, bismuto
o carbón, ni medicamentos contra la o las parasitosis que se desea estudiar. Si ya
el paciente estuviese recibiendo estos medicamentos, es necesario suspenderlos
y esperara cuatro días o más, antes de tomar la muestra.
4.- Para su envío al laboratorio, debe tomarse una muestra fresca de deposición,
con ayuda de la paleta de madera, en una cantidad equivalente a la mitad del
contenido líquido del frasco. Mezclar hasta obtener una solución homogénea. (El
laboratorio de Parasitología, proporciona envases plásticos especiales, que
contienen una solución fijadora adecuada para preservar la muestra).
5.- Si en la muestra se observa presencia de gusanos u otros elementos
parasitarios, estos se deben colocar en un frasco limpio aparte, con AGUA DE LA
LLAVE solamente y enviarlos al laboratorio antes de 48 horas.
6.- En los lactantes, lo adecuado es tomar la muestra recién emitida (mientras el
niño está defecando).
7.- Para el examen parasitológico de deposiciones sirven muestras obtenidas a
cualquier hora del día, por lo tanto no es necesario que el paciente esté en
ayunas.
8.- Si un paciente sufre disentería, lo más adecuado es recoger las muestras con
fijador PAF (Fenol-Alcohol-Formol) o PVA (Alcohol Polivinílico). Si no se dispone
de ellos, se colocará en frascos limpios y secos y deberá ser llevada de inmediato
al laboratorio.
9.- Es importante considerar que el resultado negativo de un solo examen aislado
no siempre descarta la presencia de una parasitosis intestinal, porque muchos
parásitos eliminan irregularmente los elementos que permiten identificarlos. Por
eso se usa el examen seriado de deposiciones, es decir, día por medio se va
obteniendo una muestra hasta completar la serie que brinda el máximo de
seguridad diagnóstica (mínimo tres muestras).

34
Las técnicas de uso más corriente para la realización de un PSD, son:

1.- Método de Telemann modificado (formol-sal): Permite la investigación de

quistes de protozoos y de huevos de helmintos de parásitos intestinales, a partir
del examen parasitológico seriado de las deposiciones.
2.- Método de Burrows o PAF (Fenol- alcohol- formol): Permite tanto la
visualización de quistes y trofozoitos de protozoos como huevos de helmintos.

II.- METODO O TEST DE GRAHAM

Este examen se utiliza para el diagnóstico de la infección de Enterobius

vermicularis. Se requiere un trozo de aproximadamente tres cm de largo de cinta
transparente adhesiva que se adhiere a un portaobjetos limpio. Se hace un doblez
en uno de los extremos del celofán, para poder desprenderlo fácilmente al
momento de tomar la muestra. El laboratorio entrega listas estos portaobjetos (6
en total).

1.- La noche anterior a la toma de muestra se debe realizar un buen aseo. No

aplicar cremas en la zona perineal. Dormir con calzón ó slip ajustado.

2.- Las muestras deben tomarse siempre en la mañana, al despertar, antes de

defecar o de efectuar el aseo matinal.

2.- Para obtener la muestra, usted debe indicar a la madre o al paciente que
despegue la cinta adhesiva desde el portaobjetos y aplique la cinta por su lado
engomado, varias veces en la zona que rodea el orificio anal. A continuación
vuelva a pegar la cinta en el portaobjeto de vidrio, presionando suavemente.
Después de haber tomado la muestra, la persona debe lavarse muy bien las
manos con abundante agua y jabón, escobillándose bien las uñas.
Esta operación debe repetirla por 6 mañanas consecutivas, utilizando un
portaobjeto diferente cada vez, luego de lo cual deberá envolverlos, para llevarlos
al laboratorio.

35
Bibliografía

1.- Forbes, Sahm, Weissfeld. Bayley & Scott Diagnóstico Microbiológico, 11ª Edición,
Buenos Aires, Médica Panamericana 2004

2.- Abarca K., García P., Vial P. Microbiología Clínica. Ediciones U. Católica de Chile.
2001

3.- Kenneth J.R., Ray C. G., Ahmand N., Drew W.L., Plorde J. Sherris Microbiología
Médica. 5º Ed. McGrawHill, 2010

4.- A. Atías M. Parasitología Médica. Ed. Publicaciones Técnicas Mediterráneo. Santiago,

Chile.1998.

5.- Patrick R. Murray, Ken S. Rosenthal, Michael A. Pfaller. Microbiología Médica 6º Ed.
Madrid: Elsevier Mosby, 2009

6.- Brooks G., Carroll K., Butel J., Morse S., Mietzner T. Jawetz, Melnick y Adelberg
Microbiología Médica. 25ª Ed. McGrawHill, 2010

7.- Martín Yagui Moscoso. Las infecciones intrahospitalarias en Perú. Disponible en:
http://www.epiredperu.net/epired/cursos/epidemiologia_res-mh-06II/epires_15.pdf

8.- Exceso y estructura de costos de las infecciones intrahospitalarias en un hospital de

nivel terciario de Valparaíso, Chile. 1999
Patricio Nercelles, Rosa Herrera, Luisa Peirano y María Lucrecia Villarroel
Disponible en:
http://www.bvcooperacion.pe/biblioteca/bitstream/123456789/3138/1/BVCI0003092.pdfP.

9.- Susan S. Huang, M.D., et al. Targeted versus Universal Decolonization to Prevent ICU
Infection
Disponible en: http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa1207290

36