DESINFECCIÓN DE TEJIDOS

Materiales:

200 ml hipoclorito de sódio al 1%

100 ml alcohol 95%

1 L agua estéril

Toallas de papel estéril

3 beakers de 100 ml

Pinzas y bisturí

Realizar todo el procedimiento con material estéril y en condiciones de asepsia, utilizar cabina de
flujo laminar.

Procedimiento:

1 Cortar el tejido a esterilizar, utilizar pinzas y bisturí en todos los pasos

2 Limpiar el tejido con agua para quitar el exceso de polvo

3 Secar con una toalla de papel

4 Colocar el tejido a esterilizar en un beaker de 100 ml

5 Adicionar alcohol al 95% por 10 segundos, parar el proceso descartando directamente el alcohol,
ayudarse con las pinzas para no perder los tejidos

5 Adicionar hipoclorito de sódio al 1% por 1 min., parar el proceso descartando directamente el

hipoclorito, ayudarse con las pinzas para no perder los tejidos.

6 Adicionar agua estéril para lavar los tejidos por 30 segundos. Parar el proceso descartando
directamente el agua, ayudarse con las pinzas para no perder los tejidos.

7 Repetir el lavado dos veces más

8 Colocar los trozos de tejidos en toallas de papel estéril para remover el exceso de agua

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DIRECTAMENTE DEL TEJIDO

Esta metodología es conveniente cuando el microorganismo de interés crece de forma rápida. Para
aislar microorganismos de crecimiento lento usar el método de diluciones seriadas.

Materiales:

Pinzas y bisturí

Placas con agar zanahoria (sin antibiotico para aislar bacterias o con antibiotico para aislar hongos)

Procedimiento:

Realizar todo el procedimiento con material estéril y en condiciones de asepsia, utilizar cabina de
flujo laminar.

1 Sobre la toalla de papel estéril cortar los bordes del tejido estéril para remover el tejido dañado
por el hipoclorito.

2 Colocar los trozos de tejido sobre agar zanahoria, cuatro trozos de tejido por cada caja de petrí.
Colocar los trozos en agar sin antibiótico para aislar bacterias y sobre agar suplementado con
0,1mg/ml de carbenicilina y ampicilina para aislar hongos.

3 almacenar las placas con la tapa hacia arriba para que no se caiga el tejido del agar, asegurarse de
que las cajas no se abran (meter en una bolsa, o colocar teipe de electricidad)

4 Incubar a 27°C, monitorear diariamente en la mañana

5 Cuando se observe crecimiento del hongo sobre el agar, transferir una pequeña porción de micelio
a un agar nuevo en tubo. Transferir los micelios que morfológicamente se vean diferentes. Incubar
a 27°C por tres semanas.

6 hacer cultivos monosporicos

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS POR DILUCIONES SERIADAS

Con esta metodología se pueden aislar microorganismos que se encuentran en abundancia en el

tejido vegetal pero que tienen un crecimiento lento, por lo que es difícil de aislar usando la
metodología de tejido sobre agar. En la última metodología los microorganismos de crecimiento
rápido no permiten el crecimiento de los de crecimiento lento, aunque haya mayoría de estos en
comparación con los microorganismos de crecimiento rápido.

Materiales:
200 ml tween 20 0,05%

Microtubos de 1,5 ml

Micro mango

Pipeta de 20 – 200 microlitros

Pipeta de 200 – 1000 microlitros

Puntas para pipetas de 2 a 200 y de 200 a 1000 microlitros

Cucharilla de metal

Pinzas y bisturí

Procedimiento:

Realizar todo el procedimiento con material estéril y en condiciones de asepsia, utilizar cabina de
flujo laminar.

1 colocar cada tejido estéril de aproximadamente 5 mm2 en micro tubos de 1,5ml

2 Adicionar 500 microlitros de tween 20 0,05%

3 macerar el tejido con un micro mango

4 Del macerado hacer diluciones seriadas de 1/10, 1/100, 1/1.000, 1/10.000 y 1/100.000 con un
volumen final de 0,5 ml en tween 20 0,5%

5 Adicionar 50 microlitros de cada dilución a placas con agar zanahoria y esparcir de forma
homogénea. Hacer dos placas para la última dilución. Usar placas sin antibiótico para aislar bacterias
y con 0,1mg/ml de carbenicilina y ampicilina para aislar hongos

6 almacenar las placas con la tapa hacia arriba por las primeras 24 horas, después colocar las placas
boja abajo, asegurarse de que las cajas no se abran (meter en una bolsa, o colocar teipe de
electricidad)

4 Incubar a 27°C, monitorear diariamente en la mañana

5 Cuando se observe crecimiento del hongo sobre el agar, transferir una pequeña porción de micelio
a un agar nuevo en tubo. Transferir los micelios que morfológicamente se vean diferentes. Incubar
a 27°C por tres semanas.

6 hacer cultivos monosporicos a los micelios provenientes de mezclas de micelios, especialmente

los crecidos en las diluciones 1/10, 1/100 y 1/1.000
El dicromato de potasio es un compuesto inorgánico de formula K2Cr2O7.
Se caracteriza por ser un poderoso agente oxidante.

El dicromato de potasio (K2Cr2O7) es una sal del hipotético ácido dicrómico, H2Cr2O7 (este
ácido como tal sustancia no es estable). Se trata de una sustancia de color intenso anaranjado.
Es un oxidante fuerte. En contacto con sustancias orgánicas puede provocar incendios.

El compuesto tiene un peso molecular de 294,185 g/mol, una densidad de

2,676 g/ml, un punto de fusión de 398 °C y punto de ebullición de 500 °C,
donde se descompone (Royal Society of Chemistry, 2015).

El dicromato de potasio es muy soluble en agua, pudiéndose disolver 45 mg/l

a 25 °C. En solución acuosa se ioniza fácilmente en agua para producir los
iones cromato (CrO42-) y dicromato (Cr2O72-) en equilibrio. Es un agente
oxidante moderado ampliamente utilizado en química orgánica.