LABORATORIO DE

INMUNOLOGIA

M.C. Juana Ramírez Aguilera

 ANTIGENO

 Se denomina antígeno a cualquier

sustancia extraña que, introducida en el
interior de un organismo, provoque una
respuesta inmunitaria, estimulando la
producción de anticuerpos.
 ANTICUERPO

 Los anticuerpos son proteínas

pertenecientes al grupo de las
gamma-globulinas o
inmunoglobulinas, constituidas
por la asociación de cuatro
cadenas polipeptídicas unidas
entre si mediante puentes
disulfuro, dos cadenas se
denominan pesadas y las otras
dos ligeras.
A su vez, cada una de las
cadenas ligeras y pesadas,
incluye una región variable,
cuya secuencia de aminoácidos
es peculiar de cada anticuerpo,
y una región constante, con la
misma secuencia en todos los
anticuerpos.
 AGLUTINACION

 Es una reacción serológica

clásica, que comprende la
aglomeración de una
suspensión celular mediante
un anticuerpo específico.

 Durante la aglutinación , el
antígeno forma parte de una
partícula insoluble grande,
como un glóbulo rojo o un
bacteria y se requiere
relativamente pocas
moléculas para una
agregación visible.

 las reacciones de
aglutinación pueden
clasificarse en directas e
indirectas o pasivas.
 NEUTRALIZACION
(ANTIESTREPTOLISINAS)

 Si el antígeno es
una sustancia
tóxica, la unión con
el anticuerpo
provoca su
neutralización, de
modo que no puede
ejercer su efecto
tóxico.
 Determinación de grupos
sanguineos del sistema ABO
 Los grupos y tipos sanguíneos se
caracterizan por la presencia sobre los
eritrocitos de antígenos conocidos como
aloantígenos ( antígenos encontrados
en ciertos individuos pero no en otros);
cuando estos antígenos encuentran
anticuerpos homólogos, ya sea in vivo o
in vitro, las células de las cuales forman
parte pueden ser aglutinadas
 Determinación grupo inverso

AGLUTINACION CON:
Eritrocitos A Eritrocitos B GRUPO
- + A
+ - B
+ + 0
- - AB
 Determinación del factor Rh

 La composición antigénica de los

eritrocitos de un individuo es
determinada por pruebas de
aglutinación con antisueros apropiados.
Las pruebas para el Rh, consisten en
determinar si los eritrocitos de un
individuo contienen el factor clásico y
clínicamente más importante el Rh
 Los factores Rh se determinan
genéticamente.

 Siuna persona tiene los genes + +, el

factor Rh en la sangre será positivo.

 Siuna persona tiene los genes + -, el

factor Rh en la sangre será positivo.

 Siuna persona tiene los genes - -, el

factor Rh en la sangre será negativo.
 Los factores Rh se determinan
genéticamente.

 Si los genes del factor Rh del

padre son + + y los de la
madre son + +, el bebé tendrá
un gen + del padre y un gen +
de la madre. El bebé será Rh
positivo + +.

 Si los genes del factor Rh del

padre son + + y los de la
madre son - -, el bebé tendrá
un gen + del padre y un gen -
de la madre. El bebé será Rh
 Los factores Rh se determinan
genéticamente.

 Si los genes del padre son Rh

positivo + - y los de la madre
también, el bebé puede ser:
 Rh positivo + +
 Rh positivo + -
 Rh negativo - -

 Si los genes del padre son - - y los

de la madre son + -, el bebé puede
ser:
 Los factores Rh se determinan
genéticamente.

 Si los genes del padre son

- - y los de la madre son - -,
el bebé puede ser:
 Rh negativo - -
 Incompatibilidad RH

Definición:
 La incompatibilidad
Rh es una condición
que se desarrolla
cuando existe una
diferencia en el tipo
de sangre Rh de la
mujer embarazada
(Rh negativo) y el
del feto (Rh
positivo).
 Incompatibilidad RH
Eritroblastosis fetal
 Anemia hemolítica del feto, o
del recién nacido, que es el
resultado de la acción de
hemolisinas maternas que han
atravesado la placenta

 Los anticuerpos provenientes

de una madre Rh negativa
pueden ingresar al torrente
sanguíneo del feto Rh positivo
y dañar sus glóbulos rojos
(GR).
 Incompatibilidad RH

Bebé ictérico
 La ictericia del recién nacido
(coloración amarilla de la piel) puede
originarse por muchas causas, pero la
mayoría de los bebés que la sufren
tienen una condición llamada ictericia
fisiológica, un fenómeno común en el
neonato que se presenta como
consecuencia de la inmadurez del
hígado. Este tipo de ictericia es de
corta duración, pues dura sólo pocos
días. La ictericia que persiste por más
de tres o cuatro días, o que empeora
con rapidez, debe ser evaluada por un
médico hasta que los niveles de
bilirrubina en sangre disminuyan o se
normalicen.
 Incompatibilidad RH

Anticuerpos
 Los antígenos son moléculas
grandes, generalmente
proteínas, localizadas en la
superficie de las células, virus,
hongos, bacterias y algunas
sustancias muertas como
toxinas, sustancias químicas,
medicamentos y partículas
extrañas. El sistema
inmunológico detecta los
antígenos y produce
anticuerpos que destruyen las
 Incompatibilidad RH

Exanguinotransfusión
 La ictericia neonatal es un problema
común que afecta a los niños al nacer.
Se produce porque el hígado del
neonato no puede eliminar la
bilirrubina, un producto de la
degradación de las células
sanguíneas. La ictericia neonatal por lo
general es un trastorno leve y auto-
limitante. El tratamiento más común es
la exposición a la luz ultravioleta,
colocando al niño bajo una lámpara
ultravioleta durante unas horas cada
día. La luz ultravioleta descompone la
bilirrubina de manera que el hígado del
bebé la pueda procesar y excretar.
 Pruebas cruzadas

•Las pruebas cruzadas y la búsqueda de

anticuerpos son de suma importancia, ya que
permiten que los antígenos y anticuerpos puedan
ser detectados y estudiados en el laboratorio;

•Nos ayudan a prevenir la transfusión de sangre

incompatible, y proveen al paciente de máxima
seguridad y beneficio.
 Pruebas cruzadas
P.C. MAYOR P.C. MENOR CONTROLES

Tubo No. 1 2 3 4 5 6
Suero del 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas
receptor
Suero del 2 gotas 2 gotas
donador
Susp. I gota I gota
Eritrocitos
del donador
Susp. I gota I gota I gota I gota
Eritrocitos
del receptor
Albúmina al 2 gotas 2 gotas 2 gotas
22%
 1. Prueba mayor (D) o del
DONADOR:
a) Sirve para confirmar si existe compatibilidad
ABO entre el receptor y el donador.

b) Detecta anticuerpos en el suero del paciente

que no se hayan demostrado en la prueba
de tamizaje (porque el antígeno
correspondiente no estaba presente en las
células detectoras o eritrocitos de fenotipo
conocido, PANEL).
Se utilizan 2 gotas de suero del receptor más
1 gota de eritrocitos lavados del donador.
 2. Prueba menor (R) o del
RECEPTOR:

a) Detecta anticuerpos irregulares en el suero

del donador y ratifica algún error de
clasificación
ABO/Rh.

Se realiza con 2 gotas de suero o plasma

del donador más 1 gota de eritrocitos del
receptor.
 3. Prueba autotestigo (AT):

a) Permite detectar una prueba de

antiglobulina directa positiva, así
como la presencia de rouleaux y
otras anormalidades autoinmunes
(AHAI).

Se realiza con 1 gota de eritrocitos del

receptor más 2 gotas de suero del
receptor.
 Detección de anticuerpos libres
en suero:

 Se realiza  La investigación de anticuerpos

enfrentando el irregulares libres en suero se
debe realizar por lo menos
suero del
con dos técnicas: la primera
paciente o siempre será la salina llevada
receptor con hasta la fase de Coombs, ya
eritrocitos de que en la mayoría de los casos
fenotipo conocido permite diferenciar la IgM en
(PANEL). su fase rápida a 22 y 37 °C de
la IgG en la fase de Coombs; y
la segunda puede ser un medio
hiperproteico como albúmina,
 COMPATIBILIDADES SANGUÍNEAS
Esquematización de los grupos sanguíneos y
posibilidades de transfusiones entre ellos.
POSIBLE NO POSIBLE

0 0, A, B, AB AB A, B, 0

A A, AB A B, 0

B B, AB B A, 0

AB AB
 COMPATIBILIDADES
SANGUÍNEAS

POSIBLE NO POSIBLE

Rh (-) Rh (+) Rh (+) Rh (-)

Rh (-) Rh (-)

Rh (+) Rh (+)
 PUEDE RECIBIR
<> PUEDE DAR A
DE
0 (+) / 0 (-) / A (+) / A
A (+) A (+) / AB (+)
(-)
A (+) / A (-) / AB (+) / AB
A (-) 0 (-) / A (-)
(-)
B (+) B (+) / AB (+) 0 (+) / 0 (-) / B (+) / B (-)
B (+) / B (-) / AB (+) / AB
B (-) 0 (-) / B (-)
(-)
AB (+) AB (+) Todos
AB (-) / 0 (-) / A (-) / B (-
AB (-) AB (+) / AB (-)
)
A (+) / B (+) / 0 (+) / AB
0 (+) 0 (+) / 0 (-)
(+)
0 (-) Todos 0 (-)
 PRUEBA DE COOMBS DIRECTA

 Se usa para demostrar

la presencia de los
anticuerpos que han
fijado en las células del
paciente in vivo, por
ejemplo en la
enfermedad hemolítica
del recién nacido, en la
anemia hemolítica
adquirida.
 PRUEBA DE COOMBS DIRECTA

 OBJETIVO
 Detectar inmunoglobulinas unidas a la
superficie de los glóbulos rojos mediante
la prueba de Coombs directa.

 Detectan el Ac (prueba de antiglobulina) y

el complemento ( prueba de la anti-no
globulina g ) sobre los hematies
respectivamente.

 + = adherencia a la membrana de los

G.R. de gammaglobulina, componentes
del C, transferrina, un complejo de ciertos
medicam., y gammaglobulina u otras
globulinas.
Eritroblastosis fetal.

 + debil : (sin hemólisis clinica)

Artritis reumatoide, colitis ulcerativa y
leucemia.
La aglutinación de los eritrocitos
del paciente, por el anti-humano,
indica que estos se encontraban
sensibilizados por anticuerpos.
 PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA

 La prueba indirecta de
Coombs es utilizada para
demostrar la presencia
de los anticuerpos
circulantes que cubren,
pero que no aglutinan, a
las células suspendidas
en salina. Se efectúa
esta prueba combinando
“invitro” a un anticuerpo
con antígeno específico.
Ejemplo, cuando se hace
una prueba anti-D en un
suero materno, las
células de la prueba
deberán contener el
antígeno D.
Esquema de la Reacción indirecta de
antiglobulina (Coombs)
 PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA

 Objetivo: detectar
los ACS circulantes
contra los antígenos
de los hematíes,
mediante la prueba
de Coombs indirecta
(C.I.)

 La prueba de C.I. es
una reacción en 2
etapas, el suero en
el que se buscan los Incuban
acs se incuban
primero con los G.R.
de prueba y luego
los G.R. recubiertos
por el supuesto Ac Esquema de la Reacción indirecta de
son aglutinados por antiglobulina (Coombs)
un suero
antiglobulínico de
Coombs.
 Prueba para el diagnostico serológico de la
sífilis (Reacción de V.D.R.L)

 Objetivo: Conocer un método para

diagnosticar sífilis, mediante la presencia
de la reacción de aglutinación.

 .Microscopía de campo oscuro, donde se

observa el movimiento característico de
los treponemas

 Inmunofluorescencia directa, ahora es

más específica debido a que se utiliza
anticuerpos monoclonales

 Las pruebas no treponémicas son

aquellas pruebas en las cuales el
individuo incita anticuerpos no
treponémicos sino anticuerpos contra la
cardiolipina. Eso lo tienen pero también
tienen reacción sobre ciertos
componentes de nuestros tejidos,
sobretodo con las mitocondrias. Estos,
como no son anticuerpos especificos, se
les conoce como reaginas. Las
principales pruebas no treponemicas son:
VDRL ("Venereal Disease Research
Laboratories test") y el RPR ("Rapid
Plasma Reagin test"); la utilidad puede
ser diagnosticar curación y nos sirve
como registro de casos
 Prueba para el diagnostico serológico de la
sífilis (Reacción de V.D.R.L)

 La prueba de V.D.R.L. para

el diagnóstico de la sífilis , se
basa en la reacción que se
produce entre los
anticuerpos presentes en el +
suero de los enfermos
sifilíticos denominados
reaginas y el antígeno +
específico, el cual consiste
en cardiolipina , lecitina
purificada, colesterol y
alcohol en un adecuado
equilibrio, donde el colesterol
proporciona los centros de
absorción, de forma que las
partículas aglutinadas
puedan visualizarse

-
 Prueba de inhibición de la hemaglutinación
para la investigación de la HCG humana

 Objetivo: Determinar la Antisueros + Orina

presencia de HCG humana en
la orina del paciente, mediante (Anti-GCH ) (Antigeno-GCH:
la prueba de inhibición de la
hemaglutinación ausente en A;
presente en B)
 El diagnostico del embarazo o
de alguna alteración con Hematies
producción de GCH, se
determina mezclando la orina Cubiertos
del paciente con Acs anti-GCH; con GCH
se agrega luego a la mezcla
eritrocitos de oveja tratados con
acido tánico, formalizados,
sensibilizados con GCH.
 Si la orina contiene GCH
neutraliza los ACS anti-GCH,
por lo que no ocurre la A
aglutinación de los eritrocitos. B
 INTERPRETACION

 (+), Cuando los G.R.

presentes en el tubo de
reacción no aglutinen,
sedimentan en tubos de
ensayo, formando un anillo
de precipitación, que se
observa en el fondo del tubo.

 (-), cuando la hormona que

recubre los G.R. contenidos
en el tubo, reacciona con el
suero anti-GCH, formando
una malla difusa de color
rojizo en el fondo del tubo.