ESTANDARIZACION DE UN METODO DE ANALISIS PARA ANALGESICOS DERIVADOS DE LA ANILINA ‘Myriam Tello C., Quimica, Profesora Asistente, Departamento de Farmacia, Universidad Nacional. ‘Veronica Ferro y Paulina Avila, estudiantes de tesis. RESUMEN En este trabajo se presentan v discuten los resultados ‘obtenidos en los estudios de absorcién al ultravioleta de ‘tres analgésicos derivados de ta anilina. De otra parte se analizan los efectos de fos solventes en el espectro de ab- sorcin y en la respuesta de absorbancia de los analgesi- cos. Los métodos de andliss estandarizados serdn la base analitica de futuros estudios relacionados con ls perfiles 4e solubilidad. SUMMARY In this work it have been shown and discussed the re- sults obtained in the ultraviolet absorption studies with three analgesics derived from aniline. In other hand, it hhave been analized the absorption spectrum and the res- pponses of the analgesics indifferent solvents. ‘The standarized analytical methods wll be the analyti- cal bass of future works related to solubility profiles, INTRODUCCION Uno de los problemas més frecuentes que se en- frenta en el disefio de una forma farmacéutica en so- lucién es la ausencia de una informacién continua y completa que permita la selecci6n adecuada de los constituyentes para la obtencién de una forma macéutica liquida, homogénea y estable. Dentro de esta informacién sistematizada la rela- cin de la solubilidad de los férmacos en solventes de utilidad farmacéutica y su variaci6n con la com- posicin y la polaridad del sistema solvente en refe- rencia es de vital importancia. Para desarrollar coherente y sisteméticamente estos estudios se puede hacer uso de los denomin: dos perfiles de solubifidad. Entendiendo por estos a representacién gréfica del cambio de la solubil dad de ua soluto a temperatura y presiGn constantes cuando se modifica la polaridad y 1a composicién del medio de disoluci6n. Para su construccién se re- quiere de diferentes parejas de datos de solubilidad y polaridad del solvente. Es en la medida de la solu- bilidad donde se requiere un método de andlisis que no implique, la extraccién de soluto del sistema sol- vente cualquiera que sea, reacciones de compleja- ci6n, ete. ; en otras palabras que sea répido, sencillo y econémico; al mismo tiempo que nos permita ob- tener datos precisos, exactos y comparables. Como se busca la utilidad préctica de los resulta- dos en el disefio y formulacién de formas farmacéu- ticas Ifquidas homogéneas, los perfiles deben ser elaborados utilizando sistemas solventes permiti- dos para este propésito, por consiguiente en este trabajo se justifica la presencia de los solventes gli- cerina, propilenglicol, polietilengticol y alcohol e lico, empleando el dioxano como patrén de referen- cia. De ah la necesidad de cuantificar la cantidad de soluto disuelto independientemente del solvente o sistema solvente empleado. Para los analgésicos estudiados se encuentran di- ferentes métodos de andlisis, como el potenciomé- trico para el acetaminofén, materia prima (1) (2); en donde se hidroliza el acetaminofén en medio dci- do y se titula con sulfato cérico aménico, emplean- do ferroina como indicador. Esta hidrdlisis se pue- de emplear para valorar el acetaminofén, pero en cambio de titular se determina espectrofotometri- camente la formacién de complejo del hidrotizado con nitroprusiato s6dico (3). Wallace y colaboradores (4) determinan fenace- tina en material biolégico del cual es extraida con éter y oxidada con dxido de cobalto para obtener la quinona correspondiente que es determinada es- pectrofotométricamente entre 270 y 280 nm. La fe- Racetina se puede valorar también por dxido reduc- aa ‘con nitrito de sodio luego de su hidrolisis 4cida La cuantificaci6n mas comiin de estos analgésicos 8 por espectroscopia al ultravioleta; es asf como la Farmacopea Americana (3) reporta para las table- tas de acetaminofén una separaci6n por cromato- graffa en columna y posterior cuantificacién espec- trofotométrica en el solvente HCl-metanol (1 en 100) a 249 nm. Para este mismo producto en la BP 39(©) se analiza el acetaminofén disolviendo directa- mente en NaOH 0.1M y determinacién espectrofo- tométrica a 257 nm. La diferencia de los métodos espectrofotométri- cos radica en la longitud de onda a que se valoran y esto depende directamente del solvente, debido a cambios estructurales sobre las moléculas de solu- to, en este caso los analgésicos. Por ejemplo en el acetaminofén en medio Acido el grupo fendlico se encuentran como tal, mientras que en medio alca- ngoom{ Von of Nyancoers = lino esté en forma de fenolato lo que hace que halla desplazamiento en la longitud de onda de maxima absorcién. Debido a esto es necesario comprobar que los solventes o sistemas solventes en los cuales se van a solubilizar los analgésicos no ejerzan nin- giin tipo de desplazamiento ni en la longitud de ‘onda de maxima absorcién ni en la absorbancia res- pecto del sistema cuando se emplea agua como sol- vente. PARTE EXPERIMENTAL 1. Determinacion del espectro de absorcién mole- cular y comprobacién del cumplimiento de la ley de Lambert-Beer Se prepararon soluciones acuosas de cada uno de los solutos a las siguientes concentraciones: fén: 2.5 -5.0- 6.0 12 mep/ml 2-4.4-5.5y 1] megiml Fenacetina: 2.5 -6.5 - 10y 13 meg/ml Con la solucién més diluida se determiné el es- pectro de absorcién molecular entre 200 y 300 nm. A todas las soluciones se les determiné la absorban- cia presentada a la longitud de onda de méxima ab- sorcién. 2, Desplazamientos en Ia longitud de onda de mé- xima absorcién y en la absorbancia ‘Como se hacfa necesario comprobar que los dife- rentes solventes no ejercian ningtin tipo de despla- zamiento bato e hipsocrémico, hiper e hipocromi- co, se prepararon soluciones iniciales de cada sofu- to en un solvente dado y a partir de ellas se efectui ron diluciones unas en el mismo solvente y otras en agua, hasta obtener fas mismas concentraciones (Tablas 2-3-4). A cada dilucin se le determiné el espectro de absorcién molecular y la absorbancia a Ia longitud de onda del maximo de absorci6n. 3. Curvas de calibracion Se elaboraron las curvas de calibracién de la si- guiente manera: se prepararon tres soluciones ini- ciales de 200 meg/ml de cada uno de los analgésicos estudiados, usando en cada caso un solvente dife- rente entre los estudiados en este trabajo. A partir 40 TABLA No. 1 RESPUESTA DE ABSORBANCIA PARA LOS ANALGESICOS ESTUDIADOS, A DIFERENTES CONCENTRACIONES. EN SOLUCION ACUOSA ACE TAMINOFEN | ACETANILIDA | FENACETINA Dus: 20s] Quar 230m Qua : 2430 Coom| A | Cree) A | Com) A 25 [ois | 22 | ois | 25 | 0183 so |osz4| 44 | 0345] 65 | oa so | oss | 55 | o43z| 100 | o67s 12.0 | 0758 | no | o8so| 13.0 | 870 TABLA No. 2 VALORES DE ABSORBANCIA DE SOLUCIONES DE ACETAMINOFEN EN LOS DIFERENTES SOLVENTES Y MEZCLAS, DE ESTOS CON AGUA ToWvente—y_PUCERRA] FEE] Fo [Doan] AONE concentsacion|S00."4q 550.9650 p94, }300 00 P94, Siceana® 2%) O30 | laoun ose Pee 55°F on [ne* 657% oar lncua tiseto0" Fy cae acua ee. "%u aoa TABLA No. 3 VALORES DE ABSORBANCIA DE SOLUCIONES DE ACETANILIDA EN LOS DIFERENTES SOLVENTES Y MEZCLAS DE ESTOS CON AGUA a eC lconcentracion [650% | 800% [470 [6004580 "6, lacus 0.540 oo, jrceren 6%) 0 o3e lacua 0398 res SMG 0.372 uA 0357 Po amy a lacus 0.450 jpioxano sa”, 0.48) lncua oats (pecans 82% 0467 de estas soluciones se prepararon 10) diluciones en agua, de concentraciones entre 3 y 13 meg/ml. A cada dilucién se le determiné el valor de absorban- cia por duplicado, obteniendo asi seis valores para cada concentracién, los cuales se promediaron. Con estos promedios se construyeron las curvas de calibraci6n de absorbancia vs. concentracién.TABLA No. 4 VALORES DE ABSORBANCIA DE. SOLUCIONES DE FENACETINA EN LOS DIFERENTES SOLVENTES Y MEZCLAS DE ESTOS CON AGUA wavente—y — [RICERRG] FES | FS BORG | ST [concentrocon 89." q [00% s00 "71200 2%, 900 > excenna 60%] 0433, | Pes 7% oa AGUA soya, oe pc SOK | oa7 | (ooxano er ones lacuna | conor 90" RESULTADOS Y DISCUSION 1, Méximos de absorcién-linealidad En la Tabla No. 1 se presentan las longitudes de onda de maxima absorcién para cada uno de los analgésicos estudiados, encontrandose en todos los casos una absorcién maxima definida. Los valores de absorbancia de las diferentes solu- ciones acuosas de acetaminofén, acetanilida y fena- cetina son directamente relacionables con ia con- centraci6n; es decir se observ6 una respuesta lineal de concentracién vs. absorbancia entre los rangos de concentraci6n especificados en el numeral | dela parte experimental, 2, Efectos de los solventes estudiados sobre Ia lor gitud de onda de méxima absorcion y sobre absorbancia 2.1 Acetaminofén En la figura No. 1 se muestran los espectros de absorcién del acetaminofén en soluci6n acuosa, gli- cerina, polietilenglicol, propilenglicol, dioxanb y alcohol etilico; en ellos podemos observar que no se presenta ningtin tipo de desplazamiento hipsocré- mico 0 batocrémico, o sea que la longitud de onda de maxima absorcién de dicho analgésico se man- tiene en 243 nm. En la Tabla No. 2 se muestran comparativamente los valores de absorbancia obte- nidos para soluciones de una misma concentraciéa preparados en agua yen los diferentes solventes. Se puede observar que la desviacin en términos de absorbancia es maximo un 5% menor para las solu- ciones en glicerina, propilenglicol, polietilenglicol comparadas con las soluciones acuosas respectivas. Por el contrario [as soluciones en alcohol y dioxano presentaron valores de absorbancia superiores en un 3% respecto de los obtenidos en la solucién acuosa. Estos valores bajos en los primeros solventes pueden ser atribuibles a la mayor viscosidad de és- ACETAMINOFEN ne a ais om Figura tos con relacién al agua, lo que dificulta la medicién volumétrica; al contrario del alcohol y el dioxano que poseen un bajo punto de ebullicién y por tanto se volatilizan facilmente tornandose las soluciones més concentradas. 2.2. Acetanilida En la figura No. 2 observamos que el maximo de absorciGn se mantiene en 238 nm para todas las so- luciones de acetanilida en los diferentes solventes: agua, glicerina, propilenglicol, polietilenglicol. dioxano y alcohol. También se puede ver en Ja Ta- bla No. 3 que para las mismas concentraciones de acetanilida en agua y otros solventes (cualquiera de los estudiados), el valor de la absorbancia es com- parable aunque se mantiene el comportamiento presentado por ¢! acetaminofén, o sea valores altos de absorbancia para los solventes volatiles y bajos para los altamente viscosos. 2.3 Fenacetina La figura No. 3 muestra que los espectros de ab- sorcién de la fenacetina en los diferentes solventes no presentan desplazamientos hipsocrémicos 0 ba- tocrémicos y por tanto el maximo de absorcion de este analgésico se mantiene en 243 nm. Asf como para los analgésicos anteriores, solu- ciones de la misma concentracién en agua y otro sol- vente presentan respuestas de absorci6n compara- bles (Tabla No. 4), con el mismo comportamiento para los solventes viscosos y los volatiles. 41ACETANILIOA wo ome FENACETINA ACETAMINOFEN ABSORBANCIA gvrscseves HRD CONCENTRACION: 1gjmi Figura4 ACETANILIO‘ ABSORBANCIA ors sey aswnnaw CONCENTRACION: 49 /mi Figura S3. Curvas de calibracion Reuniendo los datos obtenidos se puede asegurar que para cada uno de los analgésicos estudiados, las soluciones en los solventes agua, glicerina, propi- lenglicol, polietilenglicol, dioxano y alcohol pre- sentan el maximo de absorcién a la misma longitud de onda y una misma respuesta de absorbancia con una variabilidad maxima del 5% También se observ6 que la linealidad de la absor- vancia vs. concentracién se cumple mejor en las s0- luciones acuosas. Por este motivo y por razones de economia en los solventes, se escogié el agua como el solvente més adecuado, para la valoracién. FENACETINA ABSORBANCIA Trptsevavbonnaw CONCENTRACION: y6/mi Figura 6 En las curvas de calibracién los seis valores obte- niidos se promediaron debido a que la variabitidad maxima presentada fue de +0.005 unidades de ab- sorbancia. Si se tiene en cuenta que el error instru- mental en el espectrofotémetro empleado (Perkin Elmer 552) es de 0.003 unidades de absorbancia, se pueden considerar promediables estos valores. Estos valores promediados aparecen graficados en las figuras No. 4, 5 y 6, correspondientes a las curvas de calibracién para cada analgésico. CONCLUSIONES 1. Las soluciones de acetaminofén, acetanilida y fenacetina en glicerina, propilenglicol, polieti- lenglicol, alcohol etflico, dioxano o mezclas de éstos con agua, presentan el mismo maximo de absorcién que en agua, o sea que no hay despla- zamiento en la longitud de onda de maxima ab- sorcién por efecto del solvente. 2. Laabsorbancia que presentan las soluciones de la misma concentracisn en mezclas de los sol- ventes con agua son comparables con las obte- nidas en agua, ya que la variabilidad est4 den- tro del rango esperado teniendo en cuenta el error instrumental y los errores aleatorios. 3. Las soluciones en los solventes puros muy vis- cosos o volatiles dan valores de absorbancia respectivamente més bajos y més altos de los esperados 0 sea alos de las correspondiente di- luciones en agua. 4. Las soluciones de acetaminotén, acetanilida y fenacetina presentan lincalidad en la respuesta en un intervalo de concentracign de 2.5 a 13, meg/ml. 5. La técnica disefiada fue eficaz para la cuantifi- cacién de acetaminofén, acetanilida y fenaceti- a en todos los sistemas solventes empleados para la determinacién de los perfiles de solubi- lidad BIBLIOGRAFIA 1. PHARMACOPEE FRANCAISE. IX Edition. Premiere Partie. Tomo II. Maisonneuve S.A. Editeur. Paris. 1976, 2. BRITISH PHARMACOPOEIA. Her Majes- ty's Stationery Office. Londres 1980. Pag. 326, 3. THE UNITED STATES PHARMACOPEIA. XXI. United States Pharmacopeial Convention Inc. Mack Printing Company, 1985, Pég. 12. 4. WALLACE J., et al. “UV. Spectrophotome- tric Methods Determination of Phenacetin in Biological Specimens”. J. Pharm. Sci., Vol. 62, No. 4, 1973. Pag. 599. 5. PHARMACOPOEIA. HELVETICA. Editio Sexta. Edition Francaise, Office Central Fede. ral Des Imprimés et du Mater 1. Pag. 6. BRITISH PHARMACOPOEIA. Her Majes- ty's Stationery Office. Londres, 1980. Pag. 799. 43