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GUIA DE PRACTICAS DE LABORATORIO


BIOQUIMICA

SEMESTRE ACADEMICO 2017-II

JAIME ALBERTO MORI CASTRO

Nombre: ……………………………………………Programa de: ………………………

2017
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INDICE

Normas Generales de Bioseguridad en Laboratorio………………………………..3

Introducción………………………………………………………………………………4

Practica No 1.Bioseguridad y Reconocimiento de Materiales y Equipos de

Laboratorio……………………………………………………...................5-12

Practica No 2.Determinacion pH y Preparación de Soluciones

Amortiguadoras………………….………………………………… 13-16

Practica No 3. Reconocimiento de Carbohidratos……………………………......17-18

Practica No 4. Reconocimiento de Proteínas…………………………………….. 19-21

Practica No 5. Determinación de colesterol en Sangre…………………………..………. 22-24

Practica No 6. Digestión Enzimática del Almidón…………………………..….….25-26

Anexos…………………………………………………………………………….…….27

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REGLAMENTO GENERAL DE BIOSEGURIDAD EN LABORATORIO

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INTRODUCCION

La siguiente guia de practicas de laboratorio en bioquimica se inparte a los


estudiantes con el objetivo de conocer los procedimientos experimentales más
ampliamente usados en bioquímica. Incluye análisis de macromoléculas como
carbohidratos, lípidos, proteínas y enzimás.

En esta guia de laboratorio, pretende que los estudiantes tomen contacto con el
laboratorio de bioquímica y para cada procedimiento se aplique el reglamento y las
normas generales de bioseguridad. Se le describirá el material de laboratorio y se hará
especial hincapié en la importancia del correcto uso de las unidades de masa, volumen y
concentración, así como del cuidado, correcta utilización y limpieza del material utilizado

El estudiante también se familiarizara con algunos de los reactivos y equipos más


frecuentemente usados en las prácticas de bioquímica.

Antes de cada practica de laboratorio, el estudiante debera venir leyendo la guia de


prácticas, esta lectura proveerá información y entendimiento sobre los procedimientos a
ser desarrollados.

Finalmente cada practica contiene cuestionarios que deben desarrollar y responder


las preguntas de la práctica que deben ser entregadas al inicio de cada practica, con la
apropiada citación de las fuentes de información que usted debe siempre referenciar
apropiadamente los autores de artículos y libros que usted consulta.

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PRACTICA 1
BIOSEGURIDAD Y RECONOCIMIENTO DE MATERIALES Y EQUIPOS

1-INTRODUCCIÓN:
El Laboratorio de Química es un lugar donde se desarrollan las prácticas elegidas por el docente
para confirmar y reafirmar los conocimientos teóricos impartidos en el aula.
Por lo tanto el estudiante deberá acatar el reglamento del Laboratorio y estar atento a las
explicaciones del docente.
Cada una de las reacciones efectuadas debe dominarse no sólo en la parte práctica, sino en el
conocimiento de sus productos finales, ya que con esto se pueden tomar decisiones para
conservar la limpieza del aire, el agua y el suelo, tratando de utilizar hasta donde sea posible,
procesos tecnológicos no contaminantes y en caso contrario dominar las técnicas adecuadas
para el manejo de residuos tóxicos peligrosos.

PARA PREVENIR LOS ACCIDENTES O MINIMIZAR SITUACIONES PELIGROSAS ES


PRECISO SEGUIR LAS REGLAS MÍNIMAS DE CONDUCTA EN EL LABORATORIO MISMAS
QUE SE MENCIONAN A CONTINUACIÓN:

2-OBJETIVOS
Genera y registra datos e información a partir de la experiencia de cada instrumento utilizado en
las prácticas de Laboratorio.
Trabaja con cautela y normar el comportamiento en el Laboratorio por las exigencias de la
Seguridad personal y del grupo

NORMAS Y REGLAS DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL LABORATORIO

Para reducir riesgos a la salud o a la integridad corporal, deben acatarse reglas de seguridad, por
lo general sencillas, cuando se realiza trabajo práctico de laboratorio. A menudo se dice que los
accidentes no ocurren por sí solos, ¡son provocados!. Las causas son generalmente por
ignorancia, por cansancio, por descuido, por uso de equipo y materiales defectuosos o
deteriorados, más aún por voluntad propia de tomar riesgos o por realizar bromas sin evaluar las
consecuencias de las mismas.

Para minimizar riesgos y prevenir accidentes es preciso conocer sus causas y estar alerta de
reconocer situaciones de riesgo susceptibles de desencadenar accidentes que no solo pueden
afectar al alumno, sino a todos los que trabajan en el laboratorio.

Un laboratorio es un lugar convenientemente habilitado donde se puede habilitar, manejar y


examinar microorganismos y experimentar. Este tipo de trabajo debe ser llevado a cabo con una
buena técnica aséptica y por tanto se requiere un ambiente limpio y ordenado.

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EXPERIENCIA:

NORMAS DE BIOSEGURIDAD PRINCIPIOS GENERALES DE SEGURIDAD:


El laboratorio es un área de trabajo. No se desempeñan otras actividades que no estén
relacionadas con éste. Así mismo, no deben efectuarse experimentos no autorizados, a menos
que estén autorizados por el profesor.
Debe tenerse conocimiento de la ubicación de las llaves maestras de gas, electricidad y agua
del laboratorio. También de los extinguidores y demás equipos de seguridad así como de su
correcta utilización.
Mantener siempre el área de trabajo limpia y ordenada, ubicar los frascos y recipientes
alejados de los bordes de la mesa de trabajo. Evitar los movimientos bruscos durante el
manejo de los materiales y equipos. Mantener los pasillos entre las mesas despejados y
trasladarse de un punto a otro sin correr.
Cualquier incidente o accidente, por menor que parezca debe informarse inmediatamente al
profesor encargado del grupo. Es responsabilidad del profesor controlar la observancia de las
reglas de seguridad.
Antes de retirarse del laboratorio, debe dejarse el área de trabajo limpia y lavarse las manos
con jabón y agua.

LAS CAUSAS MÁS COMUNES DE ACCIDENTES SON:

Desconocimiento de las formas de manejar las sustancias químicas (reactivos), los materiales
y el equipo con el que se trabaja.
Imprudencia en el manejo de equipo, reactivos y materiales.
Descuido o falta de precaución al efectuar las prácticas.

EQUIPO DE PROTECCION OBLIGATORIO

Portar bata de algodón (blanca) de talla apropiada con mangas largas y abotonadas durante
todo el tiempo que se trabaje en el laboratorio.
Portar lentes de seguridad para proporcionar protección en los ojos.
Mascarilla y guantes para evitar contaminarse con sustancias tóxicas.
Zapato de piso normal o tenis

MATERIAL DE VIDRIO

No debe recibirse material de trabajo defectuoso o deteriorado.


El material de vidrio en general y sobre todo el sometido a frecuentes calentamientos como
vasos de precipitado y matraces Erlenmeyer, pueden romperse con facilidad cuando se
someten a presión.
El material de vidrio rayado o que presente despostilladuras debe descartarse antes de que se
quiebre.

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Los pedazos de vidrio roto, particularmente los de pequeño tamaño nunca deben recogerse con
la mano. Debe usarse cepillo o recogedor y una aspiradora.

NORMAS GENERALES EN EL MANEJO DE REACTIVOS QUIMICOS

Conocer las propiedades físicas, químicas y toxicológicas de los reactivos químicos con los que
se va a trabajar.
Nunca deben tomarse alimentos ni tampoco se debe fumar en el laboratorio esto reduce el
riesgo de ingestión o inhalación accidental de las sustancias químicas.
No deben probarse sustancias químicas o disoluciones ni tampoco inhalar vapores sobre todo
si no se tiene información sobre las sustancias.
Es necesario limpiar inmediatamente cualquier sustancia tirada o líquido derramado. Los
ácidos y bases derramados deben neutralizarse con bicarbonato de sodio antes de limpiar el
área afectada. Para efectuar la limpieza deben usarse guantes de plástico.
La transferencia de líquidos que emiten vapores tóxicos o corrosivos como el HCl y HNO3 o
NH4OH deben efectuarse bajo la campana.
Las reacciones químicas que desprenden vapores o que involucran disolventes volátiles,
inflamables o tóxicas también deben realizarse bajo la campana.
La transferencia de volúmenes precisos de soluciones debe efectuarse con pipetas
volumétricas previstas de una perilla de succión o de una propipeta. Nunca debe pipetearse por
aspiración directa con la boca.
Las diluciones de ácidos concentrados siempre deben efectuarse añadiendo el ácido
concentrado al agua y nunca a la inversa.
Las soluciones que se preparan, siempre deben etiquetarse correctamente en el momento de
su preparación.
Antes de utilizar solventes inflamables (alcohol, éter, acetona, etc.) es preciso verificar que no
se encuentren mecheros encendidos en la cercanía.
En caso de que alguna sustancia química entre en contacto con la piel (manos, cara y sobre
todo con los ojos), debe lavarse la zona afectada con abundante agua durante 15 minutos por
lo menos.

RECOMENDACIONES ESPECÍFICAS PARA EL MANEJO DE ALGUNOS REACTIVOS


QUÍMICOS

ÁCIDOS PELIGROS Y CUIDADOS

Ácido fluorhídrico HF Causa quemaduras de acción retardada en la piel, en


contacto con las uñas causa fuertes dolores y solo si se
atiende a tiempo se puede evitar la destrucción de
Ác. Sulfúrico H2SO4, ác.Las soluciones concentradas de estos ácidos lesionan
tejidos.
Fosfórico H3PO4 y ác. rápidamente la piel y los tejidos internos. Sus quemaduras
Clorhídrico HCl. tardan en sanar y pueden dejar cicatrices. Los accidentes
más frecuentes son salpicaduras y quemaduras al
pipetearlos directamente con la boca.
Ác. perclórico HClO4 En estado anhidro es un explosivo poderoso. Dicho estado
se puede formar al poner en contacto el HClO4 con
agentes deshidratantes como el H2SO4, P2O5.
En contacto con materiales orgánicos (madera, algodón,
grasa, etc) puede hacerlos explotar por calentamiento o
Ác. Nítrico HNO3 por
Daña impacto.
permanentemente los ojos en unos cuantos
segundos y es sumamente corrosivo en contacto con la
piel, produciendo

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quemaduras dolorosas; mancha las manos de amarillo por su


acción sobre las proteínas.

HIDRÓXIDOS PELIGROS Y CUIDADOS

NaOH, KOH, NH4OH Los hidróxidos de Sodio y Potasio sólidos y las soluciones
concentradas de NH4OH pueden lesionar la piel y las
mucosas.

PERÓXIDOS PELIGROS Y CUIDADOS

Na2O2, BaO2, H2O2 Los peróxidos de Sodio y Bario pueden causar incendio o
explosión al humedecerse en contacto con papel y materiales
orgánicos. El peróxido de Hidrógeno se descompone con
violencia en agua y oxígeno. En contacto con la piel puede
causar ampollas.
El peróxido de Hidrógeno o agua oxigenada que se emplea
como antiséptico es una solución muy diluida que no es
peligrosa si se manipula en forma adecuada.

CLORATOS Y PERCLORATOS PELIGROS Y CUIDADOS

Cuando se ponen en contacto o se mezclan con material


combustible pueden ocasionar incendio. Debe evitarse su
contacto con azufre, sulfuros, metales pulverizados, sales de
amonio y compuestos orgánicos.

SOLVENTES ORGÁNICOS PELIGROS Y CUIDADOS

Éter El éter es oxidado por el O2 atmosférico. Si sus gases se


concentran en el laboratorio forman peróxidos y éstos son
explosivos.

Éter etílico Es de los más peligrosos por su bajo punto de ebullición y


baja temperatura de ignición. Se deberá trabajar siempre con
pequeñas cantidades.

Alcoholes, Acetona, Todos los solventes orgánicos presentan un riesgo potencial


Benceno, Tolueno de INCENDIO O EXPLOSIÓN. Los vapores de estos
solventes forman mezclas explosivas con el aire. El incendio
provocado por solventes no se debe apagar con agua ya que
se expandería; se debe utilizar una manta, arena o
extinguidor.

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RECONOCIMIENTO DE ALGUNOS MATERIALES DE LABORATORIO

Observa y grafica los materiales que el profesor te mostrará, y escucha atentamente su


explicación sobre el uso de cada uno de ellos.

3-MATERIALES DE LABORATORIO
PIPETA: …………………………………….
TUBO DE ENSAYO: …………………………………….
VASO DE PRECIPITADOS: …………………………………….
ESPÁTULA: …………………………………….
MATRAZ ERLENMEYER: …………………………………….
PROBETA: …………………………………….
CAJA DE PETRI. …………………………………….
PIPETA. …………………………………….

4-PROCEDIMIENTO

Discuta y analice en equipos las reglas y normas de seguridad e higiene en el laboratorio


asignadas por el profesor; por ejemplo:

Principios generales de seguridad


Causas más comunes de accidentes, equipo de protección y manejo de material de vidrio.
Normas generales en el manejo de reactivos químicos
Recomendaciones específicas en el manejo de algunos reactivos químicos.
Realice una exposición por equipos acerca de las reglas y normas de seguridad e higiene en
el laboratorio, que les asigno el profesor.

Llegue a conclusiones generales en base a lo expuesto por cada uno de los equipos.

5-RESULATDOS

6-CUESTIONARIO
1.- Explica las medidas de bioseguridad en el laboratorio.

2.- Explica las medidas de cuidado de los equipos de laboratorio

3.- Grafica o dibuja cada uno de los procedimientos utilizados en la práctica de laboratorio.

7- EVALUACIÓN
¿Mencione cuales son las reglas de Seguridad dentro de un laboratorio?

¿Cómo recomendarías que estas reglas fueran reconocidas y recordadas por las personas
que realizan trabajos incluyéndote a ti?

¿En caso de no contar en el laboratorio con alguna de las instalaciones de seguridad


mencionadas ¿Qué precauciones adicionales debes tener en cuenta?

¿Cuál es tu opinión acerca del uso de ropa adecuada y protección a los ojos dentro del
laboratorio?

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CLASIFICACIÓN DE MATERIALES DE LABORATORIO A.- MATERIALES DE VIDRIO

VASO DE PRECIPITACION: TUBO DE ENSAYO: SE REFRIGERANTES: SIRVE


SE USA COMO USA PARA REALIZAR PARA CONDENSAR
RECIPIENTE PARA REACCIONES QUIMICAS VAPORES USANDO AGUA
OBTENER PRECIPITADOS FRIA.

LUNA DE RELOJ. SE USA AGITADOR O VARILLA: PIPETA: SIRVE PARA


PARA DESHIDRATAR SIRVE PARA MEZCLAR EXTRAER LIQUIDOS DE
MEZCLAR SOLIDOS, Y LIQUIDOS. SUS ENVASES EN
COMO TAPA DE VASOS. VOLUMENES
DETERMINADOS.

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BALON DE FONDO PLANO: BALON DE DESTILACION: FIOLA: SIRVE PARA


SE USA PARA SIRVE PARA HERVIR PREPARAR SOLUCIONES
REACCIONES Y PARA SUSTANCIAS VALORADAS.
HERVIR. SEPARABLES.

EMBUDO: SE USA PARA PROBETA GRADUADA: SE MATRAZ DE ERLENMEYER:


TRASVASAR LIQUIDOS Y EMPLEA PARA MEDIR EL SIRVE PARA MEZCLAR,
PARA FILTRACIONES. VOLUMEN DE LOS HACER CULTIVOS DE
LIQUIDOS. MICROORGANISMOS Y
COMO RECIPIENTE PARA
REACCIONES.

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B.- MATERIALES DE METAL.

SOPORTE UNIVERSAL: SE REJILLA CON ASBESTO: PINZAS: SE USA PARA


USA COMO BASE PARA EL SE USA PARA SUJETAR CRISOLES U
MONTAJE DE DIVERSOS PROTEGER DEL FUEGO OTROS MATERIALES
APARATOS DIRECTO EL MATERIAL SOMETIDOS A CALOR
(DESTILACION) DE VIDRIO.

MECHERO DE BUNSEN: BALANZA DE TRIPLE BARRA: SIRVE PARA PESAR


PROPORCIONA SUSTANCIAS EN GRANOS.
CALOR, FUNCIONA
CON GAS PROPANO.

C.- MATERIALES DE PORCELANA

CAPSULA: SE USA PARA LA MORTERO CON PILON: SIRVE PARA


SEPARACION DE MEZCLAS POR MOLER SOLIDOS.
EVAPORACION.

GRADILLA: SE USA COMO SOPORTE DE LOS TUBOS DE ENSAYO

D.- MATERIAL DE MADERA

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PRACTICA 2
DETERMINACION DEL PH Y PREPARACION DE SOLUCIONES
AMORTIGUADORAS

1-INTRODUCCION
El pH: Los bioquímicos usan el pH para indicar de forma precisa la acidez o basicidad de una
sustancia. Normalmente oscila entre los valores de 0 (más ácido) y 14 (más básico).
INDICADOR DE pH: Los indicadores son colorantes orgánicos, que cambian de color según estén
en presencia de una sustancia ácida, o básica.

Figura 1. Escala de colores que toma el extracto de la col morada: en presencia de ácidos (1-6) y bases (8-14).

Los ácidos y bases son los dos tipos de sustancias más comunes en el laboratorio y en el mundo
Cotidiano. A finales del siglo XIX, Arrhenius formuló la primera definición:
ÁCIDO: Toda sustancia capaz de ceder protones (H+). BASE: Toda sustancia capaz de ceder oxhidrilos
(OH-).
En 1923 Brönsted-Lowry, propusieron una definición más amplia:
ÁCIDO: Toda sustancia capaz de ceder protones (H+).BASE: Toda sustancia capaz de aceptar protones
(H+).
Considerando que el agua, H2O es el solvente por excelencia y puede actuar como aceptor o dador de
H+. La reacción de autoionización correspondiente es: H2O + H2O H3O+ + OH –
Una manera de evaluar la acidez de una sustancia es por el conocimiento de la [H+], pero suelen ser
cantidades muy pequeñas y poco cómodas de manejar, una medida más práctica, es la basada en la
definición de pH del químico Danés Soren Sorensen en 1909, cuando realizaba un trabajo para el control
de calidad de la elaboración de la cerveza y es usada actualmente en todos los ámbitos de la Ciencia,
+
medicina e ingeniería. pH = -log [H ]
Se establece una escala de acidez o escala de pH, en base al producto iónico del H2O a 25 °C, (Kw= 1x
10-14 ), que varía en el intervalo 0 y 14. Soluciones ácidas tienen más H +, por ello pH< 7. Las
soluciones básicas tienen más OH-, el pH >7 y en las soluciones neutras [H+] = [OH-], pH = 7

Ecuación de Henderson-Hasselbach: La ecuación de Henderson-Hasselbach, ha sido derivada de la


Ley de acción de masas de Gulberg y Waage, del concepto de constante de equilibrio y de la ionización
de ácidos y bases débiles. Se utiliza para calcular el pH teórico de una mezcla de ácidos débiles y sus
sales.
Para el siguiente sistema en equilibrio:

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2-OBJETIVOS

1. Determina el pH y realiza las reacciones de soluciones amortiguadoras


2. Explica y describe químicamente las reacciones

3- MATERIALES Y EQUIPOS

Materiales:

1. Tubos de ensayo
2. Gradilla de metal
3. Pipeta serológica 2mL y 5mL
4. Bagueta
5. Espátula
6. Beacker 250mL
7. Balanza analítica
8. Trípode
9. Rejilla de asbesto
10. Pinza de madera

Reactivos:
1. Sol. de NaOH 0,01M
2. Sol. de HCl 0,01M
3. Sol. de CH3COOH 0,01M
4. Sol. de NH4OH 0,1 M
5. Sol. de NH4Cl 0,1 M

Muestras biológicas y químicas


Limón, Vinagre, Refresco-frutiño preparado, Leche, Crema dental, Jugo de naranja, jugo de
toronja, leche de magnesia, limpiador doméstico, clorox, champú, jabón líquido, agua
oxigenada, alcohol, crema de manos, perfume, gaseosa

4- PROCEDIMENTO
EXPERIMENTO 1: Determinación de pH de diferentes sustancias usando Papel
indicador:

a-Tomar una muestra de cada sustancia (Limón, Vinagre, Refresco-frutiño preparado, Leche,
Crema dental, Jugo de naranja, jugo de toronja, Agua expuesta al aire con 3 días de
anticipación, leche de magnesia, limpiador doméstico, clorox, champú, jabón líquido, agua
oxigenada, alcohol, crema de manos, perfume, desodorante, jabón de loza, jabón de tocador),
si es líquida con un gotero, si es sólida, humedecerla un poco con agua en un plato
desechable, usando la microespátula.

b-Tomar pedacitos de papel indicador (recortar con tijeras limpias y no tocar con los dedos ni
los guantes sucios ni húmedos) con las pinzas ó el depilador, y colocar sobre la muestra por
uno de los extremos el papel y registrar la coloración que arroja cada muestra, registrar datos
en una tabla. Compararlos con las tablas de pH llevadas a clase (laminadas)

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EXPERIMENTO 2.- Determinar el pH teorico y practico en las SIGUIENTES


SO LUCIO NES :

NaOH 0,01 M
HCl 0,01 M
CH3COOH 0,1 M
NH4OH 0,1 M
NH4Cl 0,1 M

Determinar el valor del pH teórico según la ecuación de Henderson-Hasselbach. Tomar 10


mL de cada solución y determinar el valor del pH práctico utilizando el pH-metro.

EXPERIMENTO 3.- INFLUENCIA DEL pH EN LA SOLUBILIDAD DE SUSTANCIAS


ORGÁNICAS – SOLUBILIDAD DEL BENZOATO DE SODIO

En un vaso de precipitados de 100 mL de capacidad disolver 10 mg de benzoato de sodio


con 10 mL de agua destilada, inmediatamente medir su pH, luego adicionar 5 gotas de HCl
concentrado agitar y observar. Medir nuevamente el pH de la solución final.

EXPERIMENTO 4.- NATURALEZA AMORTIGUADORA de la ALBÚMINA

Preparar 4 tubos de prueba con los siguientes reactivos:

Tubo 1.- 1 gota de HCl 0,1 M + 1 gota de anaranjado de metilo + 2 mL de H 20


Tubo 2.- 1 gota de HCl 0,1 M + 1 gota de anaranjado de metilo + 2 mL de H 20
Tubo 3.- 1 gota de NaOH 0,1 M + 1 gota de fenolftaleína + 2 mL de H 20
Tubo 4.- 1 gota de NaOH 0,1 M + 1 gota de fenolftaleína + 2 mL de H 20

A los tubos 1 y 3 agregar 3 mL de solución de albúmina, agitar y observar.


A los tubos 2 y 4 agregar 3 mL de H2O, agitar y o b s e r v a r .
Explicar sus resultados.

5- RESULTADOS
Registrar los resultados en una tabla siguiente:

sustancia observaciones pH (papel Acido o Base Que crees que


indicador) sucede?
Limón

Vinagre

Refresco

Leche

Sailiva

Crema Dental

Se determinó la ecuación de Henderson-Hassel Bach en las muestras problemas

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6-CONCLUSIONES

7-CUESTIONARIO
1-Explique por qué es importante conocer el pH de las sustancias que utilizamos en
nuestro hogar.
2-Consulte otros tipos de indicadores y su rango de coloración en medio ácido y
básico y dibuje la escala para cada uno.
3-Realice las ecuaciones químicas para cada una de las experiencias realizadas
4-cuál es la importancia del sistema buffer en el organismo

8- REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

1. Lehninger, A. (1989).Bioquímica: 2da Edición Omega Barcelona- Espafia


2. Eric Conn, Paul Stumpf, George Bruening, Roy Doi . Bioquímica Fundamental.
Editorial Limusa, Cuarta Edición México 736 paginas

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PRÁCTICA N° 3

RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS

1-INTRODUCCION
Los carbohidratos, glúcidos o azúcares constituyen una de las más importantes clases de
moléculas constituyentes de los organismos. Los carbohidratos son los compuestos orgánicos
más abundantes de la biosfera y a su vez los más diversos. Normalmente se los encuentra en
las partes estructurales de los vegetales y también en los tejidos animales, como glucosa o
glucógeno. Estos sirven como fuente de energía para todas las actividades celulares vitales.
Son complejos terciarios en los cuales el hidrógeno y el oxígeno están en igual proporción que
el agua. Los más comunes son los sacáridos, los cuales se dividen también en monosacáridos
o azúcares simples, disacáridos y polisacáridos. Los carbohidratos son derivados aldehídicos o
cetónicos de alcoholes polioxidrilados y por lo tanto tienen las propiedades características de
esos grupos como son la formación de oxina e hidrazonas. Existen diferentes tipos de
reacciones químicas que sirven para determinar cualitativamente la presencia de carbohidratos
(monosacáridos, disacáridos y polisacáridos)
La glucosa se usa mucho como alimento y como agente edulcorante, industrialmente se fabrica
en grandes cantidades por hidrólisis de almidón. La fórmula estructural de la sacarosa no tiene
grupos hidroxilos glucósidos libres, ni contiene grupo aldehídico libre ni potencial, ya que las
dos unidades de monosacáridos están unidos por los hidroxilos glucósidicos, ello trae como
consecuencia que la sacarosa no presente mutarrotación, no sea reductora y no forme
osazona.

2-OBJETIVOS
1. Realiza las reacciones de caracterización de azucares
2. Explica y describe químicamente las reacciones

3- MATERIALES Y EQUIPOS

MATERIALES
Tubos de ensayo (18) • Gradilla • Pinza para tubo de ensayo • Pipetas (3 de 1mL, 2 de 5mL)
• Vaso de precipitado (2 de 50mL) • Vidrio de reloj • Trípode • Mechero Bunsen o de alcohol
• Espátula • Agitador de vidrio • Rejilla con asbesto • Agua destilada

REACTIVOS
Reactivo de Fehling A y B • Reactivo De Lugol • Reactivo de Seliwanoff • Reactivo de
Molish • Reactivo de Bial • HCl concentrado y diluído • Bicarbonato. • Sacarosa (azúcar
común) • Fructosa (refresco) • Lactosa (leche) • Almidón (harina). • Galactosa, xilosa,
ribosa, maltosa.

4- PROCEDIMEINTO
.4.1. Experiencia: REACCIÓN DE FEHLING
Tomar la muestra que se quiera analizar (aproximadamente 3 mL) • Añadir 1 mL de
Fehling A y 1 mL de Fehling B. El líquido del tubo de ensayo adquirirá un fuerte

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color azul. •Calentar el tubo al baño María o directamente en un mechero de


laboratorio. • La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo ladrillo. •
La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-
verdoso.
3.4.2. Experiencia: REACCIÓN LUGOL
Este método se usa para identificar polisacáridos. El almidón en contacto con unas
gotas del reactivo de Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico) toma un color
azul-violeta característico. •Agregar en un tubo de ensayo unos 3 mL del glúcido a
investigar. •Añadir unas gotas de Lugol, si la disolución del tubo de ensayo se torna
de color azul-violeta, la reacción es positiva.
3.4.3. Experiencia: REACCIÓN MOLISH
• En un tubo de ensayo, colocar 2 mL de cada una de las muestras indicadas,
adicionar 3 gotas de reactivo de Molish y mezclar. Añadir en zona (dejar resbalar
por las paredes del tubo, lentamente), 2 mL de ácido sulfúrico concentrado. • La
formación de un anillo de color púrpura en la interfase indicará que la reacción es
positiva.
3.4.4. Experiencia: REACCIÓN BIAL
• En tubos de pruebas, colocar 2 mL de cada una de las muestras indicadas,
adicionar 4 mL de reactivos de Bial, calentar en baño maría durante 10 a 15 minutos
hasta ebullición. • La coloración verde indica la presencia de pentosas.

3.4.5. Experiencia: REACCIÓN DE SELIWANOFF


• Colocar en tubos de pruebas 5 mL de reactivo de Seliwanoff y 3 mL de las
muestras indicadas, llevar a baño maría durante 4 a 5 minutos. La coloración
salmón 8 rojo cereza evidencia la presencia de cetohexosas.

3.4.6. Experiencia: AZÚCARES NO REDUCTORES


Tomar una muestra de sacarosa y añadir unas 10 gotas de ácido clorhídrico al 10%.
• Calentar a la llama del mechero durante un par de minutos. Dejar enfriar y realizar
la prueba de Fehling. • Observa el resultado. La reacción positiva nos dice que
hemos conseguido romper el enlace O-glucosídico de la sacarosa. (Se recomienda
antes de aplicar la reacción de Fehling, neutralizar con bicarbonato, Fehling sale
mejor en un medio que no sea ácido.)

5- RESULTADOS
Se determinó la presencia de azucares en las muestras problemas

6- CONCLUSIONES:
Escribe tus conclusions sobre la práctica.
…………………………………………………………………………………………………

7- CUESTIONARIO
1-Por qué razón LOS CARBOHIDRATOS tienen diferentes resultados con los reactivos?
Explique.
2-¿Los polisacáridos y monosacáridos utilizan un mismo reactivo? ¿Qué cambios se observa
con cada una de éstas moléculas? Explique.
3-Explique las propiedades de cada uno de los reactivos utilizados en la práctica de
laboratorio.
4- Realice las ecuaciones químicas para cada una de las experiencias realizadas
5-Indique otros métodos cualitativos para identificación de glucosa y sacarosa

8-REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

1. Lock de Ugaz O. Investigación Fitoquímica: Métodos en el estudio de productos naturales


2. Dominínguez, X. A. Métodos de Investigación Fitoquímica. Editorial Limusa, México
D.F.1973
3. Gibaja O. S. Guía para el análisis de los compuestos del carbono Lima – Perú 1977

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PRÁCTICA Nª 4

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS

1-INTRODUCION
Aminoácidos: En la estructura general de los aminoácidos se observa que tienen en
común un átomo de carbono central (alfa) al que están unidos covalentemente un
ácido carboxílico, un grupo amino y un átomo de hidrógeno. Además de ello, al átomo
de carbono alfa se une una cadena lateral, designada R, que es diferente para cada
uno de los 20 aminoácidos comunes.

Las proteínas son compuestos biológicos conformados principalmente por la unión de


alfa aminoácidos unidos unos a otros en forma lineal mediante enlaces peptídico.
La conformación estructural de una proteína que se da en forma natural (proteína
nativa) es una característica extremadamente importante de las proteínas. A través de
estudios con rayos X de ciertas proteínas nativas y polipéptidos sintéticos, Pauling y
Corey propusieron que toda o ciertas partes de algunas proteínas contenían
aminoácidos dispuestos en forma helicoidal específicamente como una alfa hélice. En
otras proteínas, tales como las del músculo o el pelo, se observan otras estructuras.
La desnaturalización de las proteínas puede ser definido como algún cambio en la
estructura de la proteína nativa que no produce la ruptura de los enlaces peptídicos.
Los agentes desnaturalizantes, tales como el calor, ácidos, bases, agitación, rayos X,
oxidación o reducción y urea, actúan rompiendo los enlaces de hidrógeno, afectando
los tales como el calor, ácidos, bases, agitación, rayos X, oxidación o reducción y urea,
actúan rompiendo los enlaces de hidrógeno, afectando los puentes salinos, oxidando o
reduciendo los enlaces disulfuro, etc. dando por resultado un compuesto que posee
una diferente conformación, así como diferentes propiedades que la proteína nativa.
La solubilidad de las proteínas depende no sólo de la variedad de los grupos
individuales de los aminoácidos y de la menera de plegarse la cadena peptidicasino
también de las propiedadres del sistema solvente en elcual se encuentra la proteína.
La solubilidad de las proteínas es muy variable. Muchas de ellas se hallan en
soluciones coloidales en agua, o en soluciones salinas; pero diferentes reactivos
afectan su solubilidad. Las cadenas de aminoácidos que conforman las moléculas
proteicas contribuyen con grupos cargados positiva y negativamente pueden
reaccionar con otros iones de carga opuesta y con el agua. En consecuencia, existen
interacciones moleculares: proteína - proteína, proteína-pequeños iones y proteína-
agua. Alguna condición por la cual se incremente la interacción proteína - proteína, o
de crezca la interacción proteína-agua, decrecerá su solubilidad y viceversa.
La fuerza iónica del medio, el pH, la temperatura y el efecto del solvente son los cuatro
factores principales que afectan la solubilidad de las proteínas, relacionados todos con
las estructuras secundaria y terciaria.

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2- OBJETIVOS:

1. Conoce los métodos de obtención de la albúmina


2. Realiza las reacciones de caracterización de los aminoácidos y proteínas
3. Explica y describe químicamente las reacciones.

3- MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales:
1. Tubos de ensayo
2. Gradilla de metal
3. Pipeta 2mL y 5mL
4. Becker 250mL y 500mL
5. Espátula
6. Bagueta

Reactivos:
1. HCl Q.P
2. Hidróxido de sodio 40%, 10%
3. Sol. Sulfato de amonio 75%
4. Acetona
5. Sol. Albumina 1%
6. Sol. De ferrocinaruro de potasio
7. Fenilalanina Q.P
8. Tiroxina Q.P
9. Triptofano Q.P
10. Ácido sulfúrico Q.P
11. Rvo. De Biuret
12. Rvo. De ninhidrina

4- PROCEDIMIENTO

Preparar una solución de albúmina con la clara de un huevo diluido en agua

A. Determinación de las propiedades de las proteínas

Reacción de Desnaturalización: Disponer de 5 tubos de ensayo

Tubo N°1: 2mL de solución de albúmina y luego calentar.


Tubo N°2: 2mL de sol. de albúmina y X gotas de HCl concentrado

de precipitación mediante aniones:

Tubo N01: 1mL de solución de albúmina.


Tubo N02: 1mL de sol. de albúmina y II gotas de HCl 10%
Tubo N03: 2mL de sol. de albúmina y II gotas de NaOH 10%

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B. Reacciones de coloración: Determinación de aminoácidos

Método de la ninhidrina: Grupo amino libre


En un tubo de ensayo añadir 1mL de la Solución de albúmina 1%, llevar a baño maría
por 5 minutos. Observar y anotar los resultados

Reacción con acetato de plomo alcalino: Aminoácidos azufrados

En un tubo de ensayo añadir 1mL de la Solución de cisteína, metionina y 1mL de


acetato de plomo alcalino a cada uno de los tubos de ensayo.
Observar y anotar los resultados.

B. Determinación de proteínas:

Reacción de Biuret:

En un tubo de ensayo añadir 1mL de solución de albúmina, adicionar 1 mL. de una


solución de NaOH 10% y luego añadir 1 gota de sulfato de cobre 1%.

5- RESULTADOS
Se determinó el análisis cualitativo de aminoácidos de la albúmina

6-CONCLUSIONES

7- CUESTIONARIO
1. Realice las ecuaciones químicas de cada una de las experiencias
2. Indique otras técnicas por las cuales se pueda identificar aminoácidos o proteínas

8-REFERENCIA BIBLIOGRAFICA
1. Lock de Ugaz O. Investigación Fitoquímica: Métodos en el estudio de productos
Naturales
2. Dominínguez, X. A. Métodos de Investigación Fitoquímica. Editorial Limusa, México
D.F. 1973
3. Gibaja O. S. Guía para el análisis de los compuestos del carbono Lima – Perú 1977

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PRACTICA Nº 5

DETERMINACION DE COLESTEROL EN SANGRE

5.1. Marco teórico.


El colesterol es el esteroide más abundante en el organismo humano.
Es un componente habitual de la dieta (carne, leche, huevos), pero
fundamentalmente el, organismo lo sintetiza en el hígado. Es importante
mencionar que una de sus principales funciones biológicas es la de
regular la fluidez de las membranas celulares y la de constituirse como
uno de los precursores de hormonas esteroideas, gestágenos y
corticoides, andrógenos, estrógenos, vitaminas y otros compuestos
biológicos

Se desplaza por la sangre en partículas denominadas lipoproteínas, que


contienen tanto lípidos como proteínas. El organismo cuenta con tres
tipos de lipoproteínas:

Lipoproteínas de baja densidad (LDL): Contienen cerca del 70 por


ciento del colesterol del suero y favorecen los trastornos cardiovasculares

Lipoproteínas de baja densidad (HDL): Acumulan el 20 por ciento del


colesterol total y tienen un efecto protector

Lipoproteínas de muy baja intensidad (VLDL): Contienen en torno al


10 por ciento del colesterol total del suero y la mayor parte de los
triglicéridos.La principal consecuencia del exceso de colesterol en sangre
es el desarrollo de enfermedades coronarias (EC). Que son frecuentes en
las poblaciones cuya alimentación es rica en grasas saturadas

La hipercolesterolemia está estrechamente ligada a la arterosclerosis,


una alteración degenerativa que ataca a las arterias en las que se forman
placas de ateroma.
que obstruyen total o parcialmente los vasos de las arterias ocasionando
una falta de riego. Si la falta de riego se localiza en las arterias coronarias
que irrigan el corazón se puede originar una angina de pecho o un infarto
de miocardio. Si se produce en las arterias cerebrales son frecuentes las
hemorragias y trombosis cerebrales. Cuando la obstrucción se localiza en
las extremidades puede favorecer la gangrena de un miembro y, en el
peor de los casos, su amputación.

5.2. Competencia.
Determina colesterol en el suero sanguíneo. Concientiza el riesgo
que genera concentraciones elevadas de colesterol (ateroma) o bajas
(afección hepática o tiroidea).

5.3. Materiales y equipos.

5.3.1. Equipos y materiales.


- Espectrofotómetro.
- Centrifuga.

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- Baño María regulado a 37ºC.


-Jeringas descartables x 5ml. con aguja hipodérmica estéril,
o tubos vacutainers tapa roja, adaptador y aguja vacutainer
-Algodón, ligadura.
-Tubos de prueba de 13 x 100mm.
-Pipetas de 10 mL.
- Micropipetas de 0 a 50 uL.
-Punteras amarillas, gradillas y baguetas.

5.3.2. Reactivos.

Set de reactivos para colesterol (enzimático).


Muestra biológica.
Alcohol medicinal.

5.3.3. Procedimiento.
a. En una gradilla disponer tres tubos de prueba de 13 x 100mm,
rotularlos
con P (problema), S (Standard) y B (blanco) luego proceder como
sigue
b. Reposo x 20 minutos.

REACTIVOS P S B

Suero del paciente 10 ul - -

Standard de colesterol 200mg/dl - 10ul -

Agua destilada - - 10 ul

Reactivo enzimático 1mL 1mL 1mL

a. Leer a 650 nn, llevando el espectrofotómetro a cero en


absorbancia con el blanco de reactivos.
b. Para obtener la concentración de colesterol de la muestra
problema, se aplica la siguiente fórmula.

mg de colesterol/ dL = absorbancia del problema X 200


absorbancia del standard
5.4. Resultados.
Concentraciones de colesterol, en mg/dL, obtenidos por los alumnos en las
muestras analizadas.

5.5. Cuestionario.
a. Describa como se realiza la biosíntesis del colesterol.
b. ¿Qué ocurre cuando el LDL-colesterol no es fagocitado?
c. Mencione cuatro métodos para la determinación de colesterol en
sangre, indicando ¿cuál? de ellos es el más exacto y por qué. y
¿Porqué?
d. Mencione lo requisitos indispensables que debe observar una
persona, para que su determinación de colesterol sea real.
e. Explicite la biosíntesis de colesterol a partir de la ingesta de
carbohidratos.

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5.6. Fuentes de Información.


a. Stryer l , Berg JM. Bioquímica. 5ta ed. Barcelona. Reverte. 2003.
b. Devlin TM. Bioquímica. 4ª ed. Barcelona. Reverte. 2004.
c. Lehninger. Principios de Bioquímica.4ª ed. Barcelona. Omega. 2006.
d. Mathews CK, Van Holde KE Bioquímica. 3a ed. Madrid. Addison
Wesley. 2002.

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PRACTICA Nº 6

DIGESTION ENZIMATICA DEL ALMIDON

5.1. Marco teórico.

El almidón constituye un importante componente de la dieta de los seres humanos.


El proceso de digestión de este nutriente se inicia en la cavidad oral, lugar en que
actúa la alfa-amilasa salivar, enzima que tiene la propiedad de hidrolizar los enlaces
alfa 1,4 del almidón y formar polisacáridos de menor peso molecular.

5.2. Competencia.
Determina colesterol en el suero sanguíneo. Concientiza el riesgo que
genera concentraciones elevadas de colesterol (ateroma) o bajas (afección
hepática o tiroidea).

5.3. Materiales y equipos.

5.3.1. Equipos y materiales.

Tubos de prueba de 13 x 100mm.


Pipetas de 10 mL.
Micro pipetas de 0 a 50 uL.
Punteras amarillas, gradillas y baguetas.
Baño maria
reloj
lugol
Gradillas
Muestra: saliva

5.3.2. Reactivos.
Tampon fodfsto 0.1 M pH 6.5
Almidon 1%
HCl 0.5N
Agua destilada

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5.3.3. Procedimiento.

HIDROLISIS DEL ALMIDON POR LA AMILASA SALIVAR

Para realizar el experimento se prepararán los siguientes medios de reacción:

1 2 3

mL. tampón fosfato 0.1 M pH 6.5 1 1.0 1.0


mL. de almidón al 1% 2. 2.0 2.0
mL. ácido clorhídrico 0.5 N 0.
-- --- 1.
mL. de agua destilada 0- 1. 5
2 5 ---
.
0
Colocar los tubos de ensayo en el baño maría a 37° C durante 2 min, luego
adicionar:

Colocar nuevamente los tubos en baño maría y sacar alícuotas de 0.5 mL. de cada
uno de los tubos
a los 5, 10, 15 y 20 minutos, y adicionarlos a los tubos previamente preparados que
contienen 2.0 mL
de ácido clorhídrico 0.05 N, de acuerdo al siguiente esquema:

Tubo N° 1 2 3

Luego adicionar a cada tubo:

Gotas de solución de Lugol 1 gota 1gota 1gota


Dejar en reposo durante 1 minuto y observar el color formado.
Durante el desarrollo del experimento se observarán modificaciones del color inicial de
los
tubos como consecuencia de la acción de la alfa-amilasa salivar.
El experimento concluye cuando uno de los tubos muestre un color pardo claro.

5.4. Resultados.
Se determinó la acción enzimática sobre el almidon

5.5. Cuestionario.
Describa como se realiza la hidrolisis del almidón mediante la enzima.
¿Qué ocurre cuando hay deficiencia de esta enzima?

5.6. Fuentes de Información.


a. Stryer l , Berg JM. Bioquímica. 5ta ed. Barcelona. Reverte. 2003.
b. Devlin TM. Bioquímica. 4ª ed. Barcelona. Reverte. 2004.
c. Lehninger. Principios de Bioquímica.4ª ed. Barcelona. Omega. 2006.
d. Mathews CK, Van Holde KE Bioquímica. 3a ed. Madrid. Addison Wesley. 2002

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PROGRAMACION DE PRACTICAS SEGUN SILABO 2017- I

CONTENIDOS EVALUACIÓN DEL APRENDIZAJE ÁREA DE PRACTICA


Semana Fechas TEMATICOS A ESTRATEGIAS
DESARROLLLAR METODOLÓGICAS AULA
INDICADORES INSTRUMENTOS LABORATORIO
SEMINARIO
Introducción.
Formación de Experiencias
1 X
grupos de vivenciales
trabajo.
Bioseguridad y
Responsabilidad
Reconocimiento Practicas Rubrica
Trabajo en equipo
2 de materiales y dirigidas Lista de X
Aprendizaje
Equipos de cotejos
independiente
Laboratorio
Responsabilidad
Importancia del Practicas Rubrica
Trabajo en equipo
3 agua en nuestro dirigidas Lista de X
Aprendizaje
organismo cotejos
independiente
Responsabilidad
Identificación de Practicas Rubrica
Trabajo en equipo
4 Elementos dirigidas Lista de X
Aprendizaje
Biogenésicos cotejos
independiente
Responsabilidad
Practicas Rubrica
Trabajo en equipo
5 Ciclo de Krebs dirigidas Lista de X
Aprendizaje
cotejos
independiente
Determinación Responsabilidad
Practicas Rubrica
del pH y Acción Trabajo en equipo
6 dirigidas Lista de X
de los Aprendizaje
cotejos
Amortiguadores independiente
Patologias
Responsabilidad
relacionadas con Practicas Rubrica
Trabajo en equipo
7 los trastornos del dirigidas Lista de X
Aprendizaje
metabolismo de cotejos
independiente
carbohidratos
8 Primera evaluación de prácticas
Responsabilidad
Practicas Trabajo en Rubrica
Identificación de
9 dirigidas equipo Lista de X
Carbohidratos
Aprendizaje cotejos
independiente
Patologias Responsabilidad
relacionadas con Practicas Trabajo en Rubrica
10 los trastornos del dirigidas equipo Lista de X
metabolismo de Aprendizaje cotejos
lípidos independiente
Responsabilidad
Practicas Trabajo en Rubrica
Identificación de
11 dirigidas equipo Lista de X
Lípidos
Aprendizaje cotejos
independiente
Responsabilidad
Reconocimiento
Practicas Trabajo en Rubrica
de las
12 dirigidas equipo Lista de X
propiedades de
Aprendizaje cotejos
las enzimas
independiente
Segunda evaluación de prácticas
13 X

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ANEXOS

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