Artículo Original

Rev Peru Med Exp Salud Publica

EFECTOS EN RATAS DE LOS ALCOHOLES DE CERA DE ABEJAS

(D-002) SOBRE LA COLITIS ULCERATIVA INDUCIDA POR
SULFATO DE DEXTRANO Y ETANOL
Vivian Molina-Cuevas1,a, Yazmin Ravelo-Calzado1,b, Zullyt Zamora-Rodríguez1,c, Miriam Noa-Puig1,d, Maikel Valle-Clara1,c,
Yohani Pérez-Guerra1,b, Ámbar Oyarzabal-Yera1,b, Sonia Jiménez-Despaigne1,e, Rosa Mas-Ferreiro1,a

RESUMEN
Objetivos. Investigar los efectos del D-002, mezcla de seis alcoholes alifáticos primarios de alto peso molecular,
obtenida de la cera de abejas (Apis mellifera), sobre la colitis ulcerativa (CU) inflamatoria severa inducida por sulfato
de dextrano (DSS) y etanol en ratas (Ratus ratus). Materiales y métodos. Las ratas se distribuyeron aleatoriamente
en seis grupos: un control cero al que no se provocó daño, y cinco a los que se les indujo la CU: un control negativo
(vehículo), tres tratados con D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) y un control positivo con sulfazalacina (200 mg/kg) (sustancia
de referencia). Se cuantificaron las manifestaciones clínicas (variación del peso corporal, presencia de diarrea y de
sangrado rectal), el puntaje de daño macroscópico e histológico, y la actividad de mieoloperoxidasa (MPO). Resultados.
El tratamiento oral con D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) previno significativamente la disminución del peso corporal. La dosis
de 400 mg/kg redujo la presencia de diarreas y sangrado rectal, aunque su comparación con el control negativo solo
alcanzó significación estadística sobre las diarreas. El D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) redujo significativamente el puntaje
de las lesiones macroscópicas (40,0; 43,3 y 47,2% de inhibición, respectivamente), el puntaje de daño histológico (31,5;
53,7 y 67,1% de inhibición, respectivamente) y la actividad de MPO (73,2; 83,6 y 85,0% de inhibición, respectivamente),
comparado con el grupo control negativo. La sulfazalacina redujo significativamente todas las variables estudiadas.
Conclusiones. El D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) protegió significativamente la mucosa colónica en ratas con CU
inflamatoria severa inducida por DSS y etanol.
Palabras clave: Abejas; Colitis ulcerosa; Ratas (Fuente: DeCS BIREME).

EFFECTS IN RATS OF BEE-WAX ALCOHOLS (D-002) ON ULCERATIVE COLITIS

INDUCED BY DEXTRAN SULFATE AND ETHANOL

ABSTRACT
Objectives. To investigate the effects of D-002, a mixture of 6 high molecular weight primary aliphatic alcohols, obtained
from beeswax (Apis mellifera), on severe inflammatory ulcerative colitis (UC) induced by Dextran sulfate (DSS) and
ethanol in rats (Ratus ratus). Materials and methods. Rats were randomly distributed in six groups: a zero control to
which no damage was caused, and five to which the UC was induced: a negative control (vehicle), three treated with
D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) and a positive control with sulfasalazine (200 mg/kg) (reference substance). Clinical
manifestations (body weight variation, diarrhea and rectal bleeding), macroscopic and histological damage score,
and myeloperoxidase (MPO) activity were quantified. Results. The oral treatment with D-002 (25, 100 and 400 mg/
kg) significantly prevented the decrease in body weight. The dose of 400 mg/kg reduced the presence of diarrhea
and rectal bleeding, although its comparison with the negative control only reached statistical significance on diarrhea.
D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) significantly reduced the score of macroscopic lesions (40.0; 43.3 and 47.2% inhibition,
respectively), the histological damage score (31.5; 53.7 and 67.1% inhibition, respectively) and the activity of MPO (73.2;
83.6 and 85.0% inhibition, respectively), compared to the negative control group. Sulfasalazine significantly reduced all
variables studied. Conclusions. D-002 (25, 100 and 400 mg/kg) significantly protected the colonic mucosa in rats with
severe inflammatory UC induced by DSS and ethanol.
Key words: Bees; Ulcerative colitis; Rats (Source: MeSH NLM).

Centro de Productos Naturales, Centro Nacional de Investigaciones Científicas, La Habana, Cuba

1

Licenciada en Bioquímica; b licenciada en Ciencias Farmacéuticas; c doctora en Medicina Veterinaria; d doctora en Ciencias Médicas; e tecnólogo en Química
a

Recibido: 30/08/2016 Aprobado: 22/02/2017 En línea: 28/06/2017

Citar como: Molina-Cuevas V, Ravelo-Calzado Y, Zamora-Rodríguez Z, Noa-Puig M, Valle-Clara M, Pérez-Guerra Y, et al. Efectos en ratas de los alcoholes de
cera de abejas (D-002) sobre la colitis ulcerativa inducida por sulfato de dextrano y etanol. Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2017;34(2):176-82. doi: 10.17843/
rpmesp.2017.342.2369

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INTRODUCCIÓN
La colitis ulcerativa (CU), que es una enfermedad
inflamatoria crónica del intestino grueso (colon y recto),
presenta una incidencia anual relativamente frecuente
(8-12/100 000 personas), fundamentalmente en sujetos
en edades comprendidas entre 15 y 40 años y entre 50
y 80 años (1,2). Las principales manifestaciones clínicas
de la CU, los cuales afectan la calidad de vida de los
pacientes, incluyen la presencia de diarrea, sangrado en
heces (melena), inflamación y dolor rectal (3).
La etiología de la CU no ha sido del todo dilucidada, pero
se conoce que se caracteriza por una notable infiltración
de neutrófilos en las lesiones colónicas que se presentan
con hiperemia, hemorragias y ulceraciones (4,5). Los
neutrófilos activados producen y liberan radicales
hidroxilo (OH-) y aniones superóxido (O2-), los cuales
causan daño tisular (6). Otros mediadores inflamatorios
(citoquinas y quimoquinas) también desempeñan un
importante papel en el desarrollo y progresión de esta
entidad patológica (7).
La estrategia terapéutica para tratar la CU comprende el
uso de medicamentos antiinflamatorios específicos como
aminosalicilatos, corticosteroides y los anticuerpos que
actúan sobre el factor de necrosis tumoral alfa (TNFα),
capaces de controlar la expresión y/o neutralizar las funciones
de los mediadores referidos anteriormente. Sin embargo,
estos medicamentos pueden causar serios efectos adversos
como agranulocitosis, infecciones severas, osteoporosis y
tumores linfoides malignos (4,5). Aunque es una enfermedad
de etiología inflamatoria su terapéutica no incluye el uso
de los antiinflamatorios no esteroideos (AINE) clásicos,
debido a que la enfermedad se caracteriza por la presencia
de ulceraciones colónicas (4) y estos agentes provocan
lesiones en la mucosa gastrointestinal (8). Por tales razones,
se encuentra justificada la búsqueda de otras estrategias
terapéuticas seguras y eficaces para el manejo de la CU.
El D-002 es una mezcla de seis alcoholes alifáticos
primarios de alto peso molecular obtenida de la cera
de abeja (Apis mellifera), cuyo componente principal es
el triacontanol, seguido de hexacosanol, octacosanol,
tetracosanol, dotriacontanol, y tetratriacontanol (9).
Estudios experimentales y clínicos han demostrado
que el D-002 presenta efectos antiinflamatorios,
antioxidantes y gastroprotectores (10-17).
Estudios experimentales previos, demostraron que el
D-002, administrado profiláctica o terapéuticamente,
redujo los cambios patológicos que caracterizan la CU
inducida por ácido acético, en ratas, tan efectivamente
como la sulfazalasina (18,19) y resultó efectivo en el
modelo de CU inducida por carragenina en cobayos (20).
Cera de abeja en colitis ulcerativa
MENSAJES CLAVE
Motivación para realizar el estudio. La colitis ulcerativa (CU)
es una enfermedad inflamatoria crónica que presenta una elevada
incidencia en la población mundial, los medicamentos existentes
no alcanzan la eficacia requerida y causan serios efectos adversos.
Principales hallazgos. La administración oral de D-002
(mezcla de alcoholes obtenida de la cera de abejas) protegió
significativamente de la CU inducida por sulfato de dextrano y
etanol en ratas, al reducir indicadores de sintomatología clínica.
Implicancias. El D-002 redujo los síntomas clínicos y las lesiones
en tejido colónico en este modelo experimental. Esto podría
representar un beneficio potencial para el mejoramiento de la
calidad de vida y para el manejo de esta patología en seres humanos.
Vale destacar que tanto el modelo de CU inducida por
ácido acético como por carragenina, son modelos de CU
aguda (21) y la eficacia del D-002 demostrada en ambos
podría relacionarse con sus efectos antiinflamatorios y
antioxidantes tras su administración aguda.
Por ello, era conveniente investigar los efectos del D-002
en un modelo de CU, en el cual la inflamación intestinal
se desarrolla como un proceso crónico, como el de la
CU inducida por sulfato de dextrano (DSS, abreviaturas
del nombre en inglés), el cual remeda en mayor medida
la etiología de esta patología en el humano respecto a
los modelos de CU aguda previamente estudiados. Sin
embargo, su ejecución es muy costosa (22).
Un modelo que reproduce las características de la CU
humana, y resulta más económico, es el de la CU inducida
por la combinación de bajas concentraciones de DSS y
etanol. A pesar de estar clasificado como un modelo
agudo, su ejecución reproduce una CU con inflamación
severa que transcurre durante cinco días, lo que permite
evaluar los tratamientos con esquemas de dosis repetidas.
Además, este modelo garantiza un rápido desarrollo de
ulceración e inflamación severa en la parte distal del colon
de las ratas, reproduciendo características muy similares
a las que se presentan en el humano como pérdida de
peso, diarrea y hematoquecia (23). Por tanto, el objetivo
del presente trabajo consistió en investigar los efectos del
D-002 sobre la CU inducida por DSS y etanol en ratas.
MATERIALES Y MÉTODOS
ANIMALES
Se utilizaron ratas (Ratus ratus) Sprague Dawley machos
(200-250 g de peso corporal) provenientes del Centro
Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio, La
Habana, Cuba, las cuales fueron adaptadas durante siete
días a las condiciones de laboratorio (temperatura de 20 a
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25 °C, humedad relativa de 60 ± 5%, ciclos de luz/oscuridad
de 12 horas) con libre acceso al agua y la comida.
ADMINISTRACIÓN Y DOSIFICACIÓN
El D-002, (lote 030151211) obtenido en la Planta de
Producción de Productos Naturales (CNIC, La Habana,
Cuba) y la sulfazalacina (lote L 36H0333, Sigma-Aldrich,
St. Louis, USA) se prepararon en forma de suspensión
en vehículo Tween 20/H2O (2%) y goma acacia/H2O
(1%), respectivamente.
Las ratas se distribuyeron aleatoriamente en seis grupos
(10 ratas/grupo): un control cero que recibió vehículo
por vía oral y agua intracolónica, y cinco a los que se les
indujo la CU: un control negativo (vehículo), tres tratados
con D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) y un control positivo
con sulfazalacina (200 mg/kg) (sustancia de referencia).
Todos los tratamientos (vehículo, D-002 y sulfazalacina)
se administraron por vía oral mediante intubación
intragástrica (5 mL/kg) diariamente por cinco días.
Las dosis de D-002 se seleccionaron teniendo en cuenta
que dosis entre 25 y 100 mg/kg han sido efectivas en los
modelos de CU inducida por ácido acético o carragenina (18,20),
si bien decidimos ampliar el rango hasta 400 mg/kg dada
la severidad inflamatoria del modelo empleado en este
estudio. La dosis de sulfazalacina referida como eficaz en
este modelo es 200 mg/kg (24).
DISEÑO EXPERIMENTAL
Para la inducción de la CU, las ratas recibieron DSS (2%) en
el agua de tomar durante 3 días. Al cuarto día, se anestesió
a las ratas con atmósfera de halotano y se les insertó un
catéter por el recto mediante el cual se les instiló por el colon
0,5 mL de etanol al 30%. Veinticuatro horas después (quinto
día) las ratas se sacrificaron en atmósfera de halotano y se
les extrajo el colon distal (8 cm de longitud) (23).
VARIABLES ANALIZADAS
Determinación de indicadores de sintomatología clínica
En una balanza Sartorius se determinó la variación
del peso corporal ( PC) calculando la diferencia entre
el inicial (PCi), determinado antes de la DSS y el final
(PCf), determinado antes del sacrificio. Se registró
la presencia, o no, de diarrea y sangrado rectal de
cada animal a las 24 h posteriores a la administración
intracolónica de etanol.
Determinación del puntaje de daño macroscópico en la
mucosa colónica
El colon distal previamente extraído se abrió
longitudinalmente y se examinó bajo una lupa con
178
Molina Cuevas V et al.
aumento 3X. El daño visible se cuantificó mediante
un puntaje de 0 a 5, como sigue: 0. Ningún daño; 1.
hiperemia localizada, sin ulceras ni erosiones; 2. Úlceras
o erosiones, sin inflamación; 3. Úlceras o erosiones con
inflamación en un sitio; 4. Dos o más sitios de ulceración
y/o inflamación, y 5. Dos o más sitios mayores de
inflamación y ulceración, o un sitio mayor de inflamación
y ulceración con extensión de más de 1 cm (25).
Determinación del puntaje de daño histológico en la
mucosa colónica
Para el análisis microscópico, las muestras de colon se
fijaron en formaldehido tamponado al 10%, se deshidrataron
e incluyeron en parafina. Las secciones se colorearon
con hematoxilina y eosina, y se examinaron utilizando un
microscopio Carl Zeiss Primo Star. La evaluación del daño se
realizó con el puntaje histológico descrito por Gaudio et al. (21)
y modificado por Chen Yan et al. (25), como sigue:
(1) Destrucción del epitelio y glándulas: 0= morfología
normal; 1= destrucción focal de la superficie epitelial y
/o de las criptas; 2= destrucción zonal de la superficie
epitelial y/o pérdida de criptas, y 3=ulceración difusa de
la mucosa y /o submucosa y /o pérdida de criptas;
(2) Dilatación de criptas glandulares: 0= aspecto normal;
1= dilatación focal; 2=dilatación zonal, y 3=dilatación
difusa de criptas;
(3) Depleción y pérdida de células caliciformes:
0= aspecto normal; 1=ligera depleción de células
caliciformes; 2= depleción moderada o zonal de células
caliciformes, y 3=depleción difusa o completa de células
caliciformes;
(4) Infiltración de células inflamatorias: 0= ausencia
de infiltración; 1=infiltrado en lámina propia o base de
las criptas; 2=infiltración que alcanza la muscular de la
mucosa, y 3=infiltración severa y extensa que alcanza
submucosa y/o la capa muscular;
(5) Edema: 0=ausente; 1=focal; 2=zonal y/o
moderadamente difuso, y 3=extenso y severo;
(6) Mucosa hemorrágica: 0=ausente; 1=focal; 2=zonal,
y 3=difusa;
(7) Absceso en criptas: 0=ausente; 1=focal; 2=zonal, y
3=difusa;
(8) Displasia: 0=ausente, 1=focal, 2=zonal, 3=difusa.
El puntaje de daño histológico en la mucosa colónica
de cada animal se calculó como la sumatoria de los
diferentes parámetros histológicos.
Determinación de la actividad enzimática de la MPO
Se tomaron alícuotas del tejido colónico que se
homogenizaron en baño de hielo con homogenizador
de cuchilla (Ultra-Turrax), en Buffer Tris-HCl (150
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mmol/L y pH 7,4) y buffer fosfato (50 mmol/L y pH 6;
conteniendo bromuro de hexadecil trimetilamonio al 0,5
%) para cuantificar la enzima MPO. Las muestras se
almacenaron a -20 ºC hasta su uso.
La actividad de la mieloperoxidasa (MPO) se determinó
según la técnica del manual Worthington (26). Para ello,
los homogenatos de tejido colónico se sonicaron por 10
segundos, y se congelaron (-20 °C) y descongelaron (30 °C)
tres veces sucesivas. Al culminar la última descongelación,
las muestras se centrifugaron a 12 000 rpm por 25 min a 4
°C y se cuantificó la MPO en el sobrenadante. Para ello, se
mezclaron 625 mL de buffer fosfato (50 mmol/L, pH 6) (que
contenía 0,167 mg/mL de dihidrocloruro de O-dianisidina),
con 250 mL de la muestra y 125 mL de peróxido de hidrógeno
(H2O2) (0,0005%). Finalmente, en un espectrofotómetro
se determinaron los cambios de absorbancia a 460 nm
durante los 2 min siguientes a la reacción. La actividad de
la MPO se refirió como unidad (U)/g de tejido.
Una U de MPO se definió como la degradación de un
mmol de peróxido/min a 25 °C, la cual se determinó
mediante la siguiente fórmula:
∆ A min.x Vol.cubeta x10
U/g de tejido=
8,3 x Vol.muestra
donde ∆ A min. es el cambio de la absorbancia, Vol.
cubeta es el volumen final de la cubeta y Vol. muestra
es el volumen de muestra añadido (mL).
Determinación del porcentaje de inhibición
El porcentaje de inhibición del efecto alcanzado por
todos los tratamientos (D-002 y sulfazalacina) respecto
al grupo control negativo se calculó como sigue:
I(%)=100- [(T – Cc) x 100]
(Cn – Cc )
Donde I(%) es el porcentaje de inhibición, T es el valor
medio del tratamiento; Cc es el valor medio del control
cero y Cn es el valor medio del control negativo.
ANÁLISIS ESTADÍSTICO
La comparación de las variables continuas entre
grupos se realizó con las pruebas no paramétricas de
Kruskal Wallis y el de la U de Mann Whitney para las
comparaciones pares entre cada grupo y el control. Se
utilizó el método de la probabilidad exacta de Fisher para
la comparación entre grupos de variables categóricas
(frecuencia de diarrea y sangrado rectal). A priori se
estableció un nivel de a= 0,05 para la significación
Cera de abeja en colitis ulcerativa
estadística. Los datos fueron procesados con el paquete
de programas Statistic para Windows. (Release 4.2,
Stat Soft, Inc USA). El estudio de relación dosis/efecto
se realizó mediante el método de regresión lineal y
correlación utilizando el programa Primer of Biostatistics
(Stanton A, Glantz; copyright (c) 1992, McGraw-Hill, Inc
Versión 3.01).
RESULTADOS
Los resultados de los efectos del D-002 sobre la variación
de peso corporal y los síntomas clínicos en ratas con CU
inducida por DSS y etanol se muestran en la Tabla 1.
Como se aprecia, la inducción de la CU en los animales del
grupo control negativo produjo una reducción significativa
del PC con respecto al control cero, la cual fue atenuada
de modo significativo y marcado por el tratamiento oral
con D-002 (25 – 400 mg/kg) (61,8 -100% de inhibición). El
tratamiento oral con sulfazalacina (200 mg/kg) (sustancia
de referencia) previno la reducción del PC de modo
significativo y marcado (72,7% de inhibición).
Como se observa, ningún animal del grupo control cero
tuvo diarrea o sangrado rectal, síntomas manifiestos
en un 77,8 y 33,3%, respectivamente, en los animales
del grupo control negativo. Las administraciones con
D-002 (400 mg/kg) y sulfazalacina (200 mg/kg) redujeron
significativamente el porcentaje de animales con diarrea
(61,4 y 100% de inhibición, respectivamente) comparado
al control negativo, al mismo tiempo que ningún animal
tratado con D-002 (400 mg/kg) o sulfazalacina (200 mg/kg)
presentó sangrado rectal (100% de inhibición).
La Tabla 2 muestra los resultados de los efectos del D-002
sobre el puntaje de daño macroscópico e histológico en
la mucosa colónica de ratas con CU inducida por DSS
y etanol. El grupo control cero mostró puntajes cero,
lo cual indica que no presentó daño macroscópico o
histológico, mientras que esta variable se incrementó
significativamente en el grupo control negativo. El
tratamiento oral con D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) redujo
significativamente, y dependiente de la dosis, el puntaje
de las lesiones macroscópicas (p < 0,05; r = 0,036)
alcanzando porcentajes de inhibición de 40; 43,3 y
47,2%, respectivamente, muy similar al efecto producido
por la sulfazalacina (200 mg/kg) (43,3%).
Resultados coherentes se apreciaron con relación al daño
histológico de la mucosa colónica, apreciándose que el
D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) redujo significativamente
el puntaje de daño histológico, alcanzando inhibiciones
de 31,5; 53,7 y 67,1%, respectivamente, un efecto no
dependiente de la dosis. La administración oral con
sulfazalacina (200 mg/kg) redujo de modo significativo
(65,1% de inhibición) el puntaje de daño histológico en
mucosa colónica.
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Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2017;34(2):176-82. Molina Cuevas V et al.

Tabla 1. Efectos del D-002 sobre la variación del peso corporal y manifestaciones clínicas en ratas con colitis ulcerativa
inducida por sulfato de dextrano y etanol

Grupos Dosis(mg/kg) ∆PC(g) I(%) Diarreas (%) || I(%) Sangrado rectal (%) || I(%)
Control cero − 20,5 ± 3,7 * − 0§ − 0 −
Control negativo − 31,5 ± 2,2 − 77,8 − 33,3 −
D-002 25 24,7 ± 2,1 * 61,8 55,5 28,6 22,2 33,3
D-002 100 20,5 ± 3,77 * 100,0 55,5 28,6 22,2 33,3
D-002 400 16,8 ± 2,5 † 100,0 30‡ 61,4 0 100,0
Control positivo Sulfazalacina 200 23,5 ± 3,1 * 72,7 0§ 100,0 0 100,0

* p < 0,05; † p < 0,01 comparado con el control negativo (prueba de la U de Mann Whitney)
‡
p < 0,05; § p < 0,01 comparado con el control negativo (prueba de Fisher)
D-002: Mezcla de triacontanol, hexacosanol, octacosanol, tetracosanol, dotriacontanol, y tetratriacontanol (alcoholes alifáticos)
∆PC: Variación del peso corporal
||
número de animales con el síntoma / total x 100
I
(%): porcentaje de inhibición

Los resultados referidos a la actividad de MPO en
mucosa colónica de las ratas con CU se muestran en la
Tabla 3. El grupo control negativo presentó un aumento
significativo de la actividad de MPO con respecto al
control cero. El D-002 (25, 100 y 400 mg/kg) redujo este
aumento de modo significativo y marcado (73,2; 83,6
y 85,0%, respectivamente), pero no dependiente de
la dosis. A su vez, la sulfazalacina (200 mg/kg) redujo
significativamente (84,3%) la actividad de la MPO.
DISCUSIÓN
La administración oral de DSS e intracolónica de
etanol, indujo CU en las ratas del grupo control
negativo provocando síntomas clínicos (variación
del peso corporal, presencia de diarrea y sangrado
rectal), daño macroscópico y microscópico de la
mucosa colónica así como incremento de la infiltración
de neutrófilos (medido como actividad de MPO e
histológicamente como un aspecto comprendido
dentro del puntaje global de daño histológico), mientras
que los animales del grupo control cero no presentaron
síntomas clínicos, ni daño macroscópico o histológico
y la actividad de MPO fue significativamente menor a la
del grupo control negativo. Esto, unido a la eficacia de
la sulfazalacina (200 mg/kg), sustancia de referencia,
demuestra la validez de los presentes resultados en
nuestras condiciones experimentales.
Aunque puede llamar la atención el hecho de que los
animales del grupo control cero también presentaron
una ligera reducción del peso corporal, vale señalar
que esto responde al ayuno previo de 24 horas al que
se sometieron todos los animales antes del sacrificio.
En el caso de los animales del grupo control negativo,
esta variación es mayor dado no solo el ayuno sino el
desarrollo previo de la CU.
Los indicadores de CU medidos en el presente estudio
se comportaron acorde a lo descrito por otros autores
para el modelo aquí empleado y para el modelo
tradicionalmente utilizado de CU inducida por DSS (25,27)
lo cual refuerza la validez de los presentes resultados.
La administración oral con D-002 (25, 100 y 400 mg/kg)
a ratas protegió significativamente de la CU inducida
por DSS y etanol, a todas las dosis ensayadas. Así, el
D-002 redujo los indicadores de sintomatología clínica,
el puntaje de lesiones macroscópicas e histológicas, así
como el incremento de la actividad de MPO en colon.

Tabla 2. Efectos del D-002 sobre el puntaje de daño macroscópico e histológico en mucosa colónica de ratas con
colitis ulcerativa inducida por sulfato de dextrano y etanol

Dosis Puntaje daño Puntaje daño

Grupos I(%) I(%)
(mg/kg) macroscópico histológico
Control cero − 0±0‡ − 0±0‡ −
Control negativo 4,62 ± 0,18 − 18,62 ± 0,73 −
D-002 25 2,77 ± 0,52 * 40 12,75 ± 0,55 ‡ 31,5
D-002 100 2,62 ± 0,70 * 43,3 8,62 ± 0,46 ‡ 53,7
D-002 400 2,44 ± 0,52 † 47,2 6,12 ± 0,35 ‡ 67,1
Control positivo Sulfazalacina 200 2,62 ± 0,26 ‡ 43,3 6,50 ± 0,7 ‡ 65,1

* p < 0,05; † p < 0,01; ‡ p < 0,001 comparado con el control negativo (prueba de la U de Mann Whitney)
D-002: Mezcla de triacontanol, hexacosanol, octacosanol, tetracosanol, dotriacontanol, y tetratriacontanol (alcoholes alifáticos)
I(%): porcentaje de inhibición

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Tabla 3. Efectos del D-002 sobre la actividad de MPO en
mucosa colónica de ratas con colitis ulcerativa inducida
por sulfato de dextrano y etanol
Dosis MPO
Grupos
(mg/kg) (U/g tejido)
Control cero − 0,19 ± 0,02*
Control negativo − 1,72 ± 0,1
D-00225 25 0,60 ± 0,06 *
D-002100 100 0,44 ± 0,04 *
D-002200 400 0,42 ± 0,04 *
Control positivo
Sulfazalacina
200 0,43 ± 0,04 *
* p < 0,001 Comparado con el control negativo (prueba de la U de
Mann Whitney)
D-002: Mezcla de triacontanol, hexacosanol, octacosanol, tetracosanol,
dotriacontanol, y tetratriacontanol (alcoholes alifáticos)
MPO: Mieloperoxidasa
I (%): porcentaje de inhibición
Por tanto, este estudio constituye el primer reporte de
los efectos beneficiosos del D-002 en este modelo de
CU, lo cual concuerda con los resultados obtenidos en
los modelos de CU aguda reportados previamente (18,19).
Teniendo en cuenta que la CU es una enfermedad que
afecta la calidad de vida de los pacientes, dado sus
molestos síntomas (presencia de diarrea, sangrado en
las heces, inflamación, dolor rectal y pérdida de peso
corporal entre otros), (3,28) el hecho de que el D-002
redujera los síntomas clínicos relacionados con el
desarrollo de la CU en este modelo de gran similitud con
la etiología de la enfermedad en el humano, representa
un beneficio potencial para el alivio de los síntomas
en pacientes con CU, si bien tal resultado deberá ser
corroborado por ulteriores estudios clínicos.
Los efectos protectores del D-002 (25, 100 y 400 mg/kg)
sobre el daño en mucosa colónica, evaluado macroscópica
e histológicamente, sustentan los resultados obtenidos
sobre la sintomatología clínica. Así, se observó una
correspondencia entre los porcentajes de inhibición
marcados alcanzados por el D-002 sobre el daño
histológico en mucosa colónica (67,1%) y las diarreas
(61,4%), importante síntoma clínico de la CU, si bien la
reducción del puntaje de daño macroscópico fue moderada
(47,2% de inhibición).
Además, la mayor eficacia del D-002 (25, 100 y 400 mg/kg)
sobre la sintomatología clínica, los daños macroscópico
e histológico y la actividad de MPO se logró con la mayor
dosis ensayada de 400 mg/kg, y resultó efectivo a partir
de la menor dosis ensayada de 25 mg/kg. Dado que no
se evaluaron dosis superiores a 400 mg/kg no se alcanzó
el efecto máximo, por lo que no podemos descartar que
con dosis superiores se alcancen mayores eficacias,
como tampoco evaluamos dosis inferiores a 25 mg/kg por
lo que no pudimos caracterizar la dosis mínima efectiva.
Cera de abeja en colitis ulcerativa
Por tanto, estudios ulteriores deberán evaluar un rango
de dosis aun más amplio en aras de profundizar en el
estudio de la relación dosis-efecto en este modelo de
CU, de modo que permita obtener la dosis mínima
I(%) efectiva y la dosis efectiva máxima.
−
− Por otra parte, el hecho de que la actividad de la MPO
73,2 en tejido colónico del grupo control negativo resultara
83,6
significativamente superior a la del control cero,
constituye una evidencia más del papel que desempeña
85,0
la inflamación, específicamente la infiltración de
84,3 neutrófilos, en el desarrollo de la CU como enfermedad
inflamatoria. Aquí, la inhibición marcada del D-002
sobre la actividad de la enzima (85%) sugiere que la
protección del D-002 sobre la CU está asociada a una
inhibición o modulación de la infiltración de neutrófilos al
tejido dañado, lo cual se pudo constatar en la evaluación
de la infiltración de células inflamatorias comprendida
en la evaluación histológica.
Estudios previos han demostrado que el mecanismo
antiinflamatorio del D-002 involucra la inhibición dual de
las enzimas 5-lipooxigenasa y ciclooxigenasa tipo II (29).
La inhibición de la primera conduce a una inhibición en
la formación del leucotrieno B4 (LT B4), potente agente
quimiotáctico de neutrófilos, por lo que la eficacia del D-002
para reducir la actividad de MPO aquí observada pudiera
estar asociada a la inhibición de la 5-LOX. Por tanto, estos
resultados concuerdan con la eficacia del D-002 para reducir
la generación del LT B4 demostrada por estudios previos (10)
y con la eficacia del D-002 para reducir la actividad de la
MPO demostrada en otros modelos de inflamación (30).
Los resultados del presente estudio sugieren que la
protección que ejerce el D-002 sobre el colon en el modelo
de CU inducida por DSS y etanol en ratas, pudiera estar
asociada a su marcada eficacia antiinflamatoria, dada
por la reducción de la actividad de MPO como marcador
de infiltración de neutrófilos.
Por otra parte, dado el relevante papel de los radicales
libres en la etiología de la CU (6) y que diferentes
sustancias con propiedades antioxidantes han resultado
efectivas en modelos experimentales de CU (27,31,32), es
lógico suponer que los efectos antioxidantes del D-002
estén involucrados en su eficacia en este modelo, lo
cual deberá ser dilucidado por ulteriores estudios.
En conclusión, el tratamiento oral con D-002 (25, 100 y
400 mg/kg) redujo significativamente la sintomatología
clínica y el puntaje de daño macroscópico e histológico
en mucosa colónica de ratas con CU inducida por DSS
y etanol, efecto que estuvo asociado a su actividad
antiinflamatoria al reducir la actividad de la MPO en
colon.
Contribución de autoría: VMC participó en la concepción del
trabajo, ejecución experimental, recolección de datos, redacción
del artículo, y aprobación final. YRC y ZZR participaron en
181
Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2017;34(2):176-82.
la ejecución experimental, obtención y análisis de datos,
y aprobación final. MNP y MVC participaron en el análisis
histológico y aprobación final. YPG, AOY y SJD participaron
en las determinaciones bioquímicas y aprobación final. RMF
participó en la concepción del trabajo y lo asesoró.
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