Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Tipos de PCR3 PDF
Tipos de PCR3 PDF
reaction)
Reacción en cadena de la polimerasa
Componentes del sistema
oligonucleótidos (cebadores)
Tampón
Polimerasa termoestable
dNTP
DNA molde
Protocolo general
Aplicaciones
PCR inverso
PCR en tiempo real (PCR cuantitativo)
PCR
amplificación de la secuencia
comprendida entre los dos
cebadores
ciclos de amplificación
desnaturalización
reasociación
polimerización
1. Oligonucleótidos
secuencia que flanquean el fragmento a amplificar
actúan como cebadores
tamaño de 20-24 nucleótidos
diseño: 3’-OH bien apareado
posibilidad de mutagénesis dirigida
Componentes del sistema
2. Tampón
Tris pH 8,4, importancia de la concentración de MgCl2. Afecta a:
incorporación de dNTP, actividad polimerasa y Tm cebador-molde
Efecto de la
concentración de MgCl2
en la PCR
A 0,5 mM
B 0,8 mM
C 1,5 mM
D 2 mM
E 2,5 mM
F 3 mM
Componentes del sistema
3. Polimerasas
Dirección de polimerización 5’-3’. Necesita 3’-OH. Copian molde. Usan dNTP
DNA polimerasa a) b) c) d) e)
4. dNTPs
dATP, dGTP, dGTP, dTTP a 100-200mM
Pueden utilizarse marcados con 32P, quimiolumisiscentes o fluorescentes
para que el producto del PCR se use como sonda.
5. Molde
DNA cualquier secuencia
RNA usando polimerasas con actividad de trascriptasa inversa (RT-PCR)
Procesamiento
Aplicaciones de la PCR
Diagnosis de enfermedades
Establecimiento de la huella genética
Aislamiento de genes
Secuenciación
Mutagénesis
Amplificación de RNA: RT-PCR (trascriptasa inversa)
Amplificación de secuencias adyacentes: PCR inversa
PCR en tiempo real
PCR inversa secuencia conocida
secuencias desconocidas
para conocer las
secuencias adyacentes digerir DNA
a otra secuenencia
conocida
ligar extremos
ER
+ER
PCR
30 ciclos de PCR