INFORME DE MICROBIOLOGIA

METODOS DE ASEPSIA Y PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOS

CORPORACIÓN UNIVERSITARIA AUTÓNOMA DEL CAUCA
PROGRAMA DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y SANITARIA
Pajoy Dayanna (dayanna.pajoy.d@uniautonoma,edu.co)

Rivera Michell (michell.rivera.r@uniautonoma.edu.co)

Ortiz Martin (martin.ortiz.u@uniautonoma.edu.co)

RESUMEN

Los cultivos de microorganismos son muy importantes en la multiplicación de baterías en el

que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado; en la práctica hecha
es necesario que el ambiente y los objetos estén esterilizados para permitir un ambiente
libre de bacterias o microorganismos, puesto que, en el desarrollo de las actividades se
basan en inocular organismos específicos, en medios de cultivos ricos en sustancias
nutricionales como fue el caso del agar nutritivo. Se desarrolló la interiorización conceptual
sobre términos del entorno del laboratorio microbiológico, como parte de los objetivos a
alcanzar en la práctica, como lo fue, los principios generales de la preparación y técnicas
de esterilización de los materiales y los medios de cultivo. La orientación fue a partir del
conocimiento del instructor, que ilustró acerca del uso de materiales.

Su proceso de calor húmedo, en el que se ve afectada la estabilidad de estructuras

celulares y de sus proteínas, es pertinente para la esterilización de medios de cultivo,
materiales de vidrio y cultivos bacterianos. También se comprendió el concepto de medio
de cultivo. Este, constituye al aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de
los microorganismos. Ya que permite que la especie que se quiera cultivar, crezca
dependiendo de su grupo microbiano, su estado físico, su complejidad química y su
aplicación.

PALABRAS CLAVES: medios de cultivos, esterilización, nutrientes, bacterias, colonias,

agar nutritivo.
ABSTRACT

Cultures of microorganisms are very important in the multiplication of batteries in which

prepares an optimal means to encourage the desired process; in the practice made is
necessary that the environment and them objects are sterilized for allow an environment
free of bacteria or microorganisms, since, in the development of the activities is based in
inoculate agencies specific, in media of crops rich in substances nutritional as was the case
of the agar nutritious. Developed the conceptual assimilation over terms of the
microbiological laboratory environment, as part of the objectives to be achieved in practice,
as it was, the General principles of preparation and sterilization of materials and culture
media techniques. The guidance was based on the knowledge of the instructor, who
illustrated about the use of materials.
Its moist heat process, in which affected is the stability of cellular structures and their
proteins, it is pertinent for sterilizing culture media and glass materials, bacterial cultures. It
also understood the concept of culture medium. This, is to the contribution of nutrients
essential for the growth of the microorganisms. Since it allows that the species you want to
cultivate, grow depending on its microbial group, their fitness, their chemical complexity and
its application.

KEYWORKS: media of crops, sterilization, nutrients, bacterium, colonies, nutrient agar

INTRODUCCIÓN sustancias nutritivas que permiten el

El trabajo de laboratorio y muy
especialmente el que se realiza en un
laboratorio de microbiología requiere
cuidado, concentración y manejo de
técnicas especiales que permitan obtener
resultados confiables sin afectar al
estudiante, ni el material que se esté
manipulando, en muchos de los casos los
resultados dependen del bueno manejo
que se hace de estas técnicas
Por su tamaño, el estudio de las bacterias
debe realizarse promoviendo su
crecimiento masivo. La reproducción de
una bacteria o grupo de bacterias da lugar
a estructuras macroscópicas que se
denominan colonias o unidades
formadoras de colonias. Para obtenerlas,
se utilizan medios de cultivos, materiales
que constan de varias y diferentes
desarrollo de los microorganismos.
Existen numerosos medios de cultivo que
el bacteriólogo emplea según el objetivo
buscado. De acuerdo con su función y
aplicación los medios se pueden clasificar
en:
1) Medios para contar bacterias,
2) Medios enriquecidos,
3) Medios selectivos,
4) Medios diferenciales y muchos son
combinaciones de estas cuatro
categorías. En relación con su estado
físico los hay sólidos, semisólidos y
líquidos; de importancia vital para los
medios sólidos es la presencia de agar-
agar que es un extracto seco de
polisacáridos de algas rojas.
Generalmente la siembra de material  pH casi neutro (6,8) a 25 °C.
clínico conlleva la obtención de cultivos
mixtos, es decir, que contienen más de
El caldo nutritivo se hace exactamente
una clase de bacterias; para el estudio de
igual, excepto por la omisión del agar.
una clase de ellas deben obtenerse
cultivos puros que solo contengan la Los microorganismos se encuentran en
los más diversos ambientes y materiales
bacteria a estudiar.
cumpliendo funciones beneficiosas o
perjudiciales. Esa ubicuidad de los
microorganismos es algo que debemos
OBJETIVO tener en mente para tomar las
precauciones pertinentes e impedir que
 Observar las múltiples éstos vayan a interferir en el trabajo que
morfologías de las colonias estemos realizando en el laboratorio.
bacterianas La ubicuidad de los microorganismos se
basa en tres características principales:

OBJETIVOS ESPECIFICOS  su tamaño pequeño, que les

permite una gran capacidad de
 Preparación de medios de cultivos dispersión,
 su variabilidad y flexibilidad
 Diferenciar las distintas formas de metabólica, que les permite tolerar
las colonias. y adaptarse rápidamente a
condiciones ambientales
desfavorables,
MARCO TEÓRICO  su plasticidad genética (o gran
capacidad de transferencia
El agar nutritivo es un medio de horizontal de genes), que les
cultivo usado normalmente como rutina permite recombinar y recolectar
para todo tipo de bacteria. Es muy útil los caracteres positivos y persistir
porque permanece sólido incluso a durante largo tiempo adaptándose
relativamente altas temperaturas. a condiciones ambientales
Además, el crecimiento bacteriano en cambiantes.
este agar lo hace en la superficie, por lo
que se distinguen mejor
Un Medio de cultivo es un sustrato o una
las colonias pequeñas.
solución de nutrientes que permite el
En un caldo de nutrientes, la bacteria desarrollo de microorganismos. En las
crece en el líquido, y aparece como una condiciones de laboratorio para realizar
sustancia espesa, con colonias un cultivo, se debe sembrar sobre el
difícilmente observables. medio de cultivo elegido las muestras en
El agar nutritivo contiene normalmente las que los organismos van a crecer y
multiplicarse para dar colonias.
 0,5% de peptona;
Los microorganismos son los seres más
 0,3% de extracto de carne/extracto de abundantes de la tierra, pueden vivir en
levadura;
condiciones extremas de pH, temperatura
 1,5% de agar;
y tensión de oxígeno, colonizando una
 0,5% de cloruro de sodio;
amplia diversidad de nichos ecológicos.
 agua destilada;
Entre los requerimientos más importantes
para su desarrollo están el carbono, el
oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e
hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo
necesitan del aporte extra de factores de
crecimiento específicos en forma de
suero, sangre y extracto de levadura entre
otros. (LÓPEZ, 2006).
Clasificación de los medios de cultivo
según su origen:
NATURALES:
Son los preparados a partir de sustancias
naturales de origen animal o vegetal como
ser extractos de tejidos o infusiones y
cuya composición química no se conoce
exactamente.
SÓLIDOS:
Se preparan añadiendo un agar a un
medio líquido (caldo) a razón de15g/litro.
El agar es una sustancia inerte
polisacárido (hidrato de carbono) que se
extrae de las algas. Como esta sustancia
no es digerida por las bacterias no
constituye ningún elemento nutritivo. Este
conjunto convenientemente esterilizado
puede ser vertido en placas de Petri o en
tubos de ensayo y presentan la
posibilidad de aislar y diferenciar
bacterias, "procesos que antes no
eran posibles en medio líquido".

SEMISÓLIDOS:
SINTÉTICOS:
Contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se
Son los medios que contienen una
utilizan para determinar la motilidad de las
composición química definida cualitativa y
especies en estudio. Actualmente se
cuantitativamente. Se utilizan para
encuentran disponibles comercialmente
obtener resultados reproducibles.
con el agregado de agar.

SEMISINTÉTICOS:
SEGÚN SU COMPOSICIÓN:
Son los sintéticos a los que se les añaden
factores de crecimiento bajo una forma de
un extracto orgánico complejo, como por COMUNES O UNIVERSALES:
ejemplo extracto de levadura
Su finalidad es el crecimiento de la mayor
parte de los microorganismos poco
existentes. Es el medio más
O SEGÚN SU CONSISTENCIA:
frecuentemente utilizado para mantener
colonias microbianas. Por ejemplo:
agar común.
LÍQUIDOS:
Se denominan caldos y contienen los
nutrientes en solución acuosa.

ENRIQUECIDOS:
Están compuestos de una media base
como apoyo del crecimiento al cual se le
puede agregar un gran exceso de
nutrientes como suplementos nutritivos,
por ejemplo: sangre, suero, líquido
ascítico, etc. Se utiliza para
microorganismos que tienen grandes
exigencias nutricionales.
SELECTIVOS:
Son sólidos en los que la selectividad se
consigue alterando las condiciones físicas
del medio o añadiendo o suprimiendo
componentes químicos específicos con el
fin de inhibir el crecimiento de especies
químicas cuyo crecimiento no interesa.
Este tipo de medio sólo permite el
crecimiento de un grupo de
microorganismos e inhibiendo el de otros.
Se utiliza para seleccionar y aislar
microorganismos a partir de poblaciones
mixtas. Por ejemplo Agar salado-manitol
o Chapman (permite el crecimiento de
ciertos estafilococos).
DIFERENCIALES:
Son medios de cultivos que nos permiten
distinguir entre varios géneros y especies
de microorganismos. Por ejemplo si al
medio se le ha añadido un carbohidrato y
un indicador y la bacteria que se cultiva es
capaz de fermentar dicho carbohidrato, se
produce una acidificación del medio con
el consiguiente viraje de color del
indicador por el cambio de pH.
El citrato de Simmons es un medio
cuya única fuente de carbono es el citrato
sódico, entonces en él solo crecerán las
bacterias capaces de desarrollarse
utilizando como única fuente de carbono
ese componente.
DE ENRIQUECIMIENTO:
Son medios líquidos que contienen un
agente que inhibe las especies no
deseadas pero que favorece el
crecimiento irrestricto del agente
infeccioso. El medio de Muller- Kauffman,
permite el crecimiento de Salmonella
inhibiendo a su vez el de numerosos
coliformes. Esto es de gran importancia
ya que en ciertas muestras, por ejemplo
fecales, el agente infeccioso (Salmonella)
es frágil y puede ser superado en número
por agente bacterianos indígenas como E.
Coli; por lo tanto antes de realizar
las pruebas de laboratorio es necesario
aumentar su número con respecto a
ésta en un caldo de enriquecimiento.
Ejemplo de este tipo de caldos son: de
tetrationato y selenito. El agua de peptona
alcalina se utiliza para Vibrio cholerae.
METODOLOGIA Y PROCEDIMIENTO
1. ASEPSIA Y RECONOCIMIENTO DEL
MATERIAL DE TRABAJO.
Reconocimiento de equipos y materiales
usados en un laboratorio de microbiología
MATERIAL CANTIDAD
alcohol 6
Copos de algodón 3
Toalla o papel 1
Mechero 1
Equipos: Incubadora.
Vidriería: Cajas de Petri.
Materiales: Mecheros
TÉCNICAS ASÉPTICAS:
 a) Limpie la superficie de la mesa LOS MATERIALES REQUERIDOS POR
con alcohol al 70%, encienda el GRUPO SON:
mechero, queme el asa hasta que
se torne roja, al lado del mechero
destape cuidadosamente el tubo
MATERIAL CANTIDAD
de agua destilada estéril y con el
asa tome una gota, ahora raye Plancha de 1
suavemente la superficie del agar. calentamiento
Vuelva a quemar el asa.
Probeta 1
b) Repita el procedimiento anterior,
pero coloque la gota a partir del beacker 1
tubo que contiene el cultivo
bacteriano. Incubadora 1

c) Ahora apague el mechero, con el
asa sin esterilizar tome la gota de
agua destilada estéril y raye
suavemente la superficie del agar.
d) Rotule cada una de las cajas y
séllelas con papel parafilm o
similar. Colóquelas en forma
invertida en la incubadora a 35 +/-
2°C por un periodo de 24 horas.
Tome nota de las
observaciones, discútalas y
concluya.
Pinzas 1
Materiales para la preparación de los
medios de cultivos y la plantación de
la muestra
REACTIVOS CANTIDA
D
Agar nutritivo 1 gr
Agua destilada estéril 35mL
Se agregó 35 ml de agua estilada junto
con 1gr de agar nutritivo en el beacker,
luego se agregó la barra magnética y se
puso a hervir hasta que esté de los 3
hervores, luego fue retirado con las pinzas
cerca del mechero durante 10 min para
evitar cualquier tipo de contaminación por
bacterias en el ambiente.
Como envasar:

EN CAJAS DE PETRI:

 Destape el recipiente que contiene

PROCEDIMIENTO 2. el medio fundido y esterilizado y
pase la boca de este recipiente por
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO la llama de un mechero de alcohol.
  Levante la tapa de la caja de Petri
por un lado, lo suficiente para
insertar la boca del recipiente y
vierta de 10 a 20 cc del medio por
caja.
Bacteria a: Los microorganismos que se
pudieron hallar y observar en la caja de
Petri cuentan con un 10% de invasión, y
presentan las siguientes características
morfológicas:

 Tape la caja

 Tape el recipiente que contienen CARACTERISTICA DESCRIPCIO

el medio S N

Color Amarillo
 Distribuya el medio
uniformemente dentro de la caja Superficie Lisa
con un movimiento de rotación
Forma Circular
 Deje solidificar antes de usar o
Borde Entero
almacenar

RESULTADOS: A continuación se observara una

imagen de la muestra N° 1
Se obtuvieron los resultados de la practica
del cultivo de microorganismos. Dichos
resultados se lograron analizando cada
una de las cajas de Petri con ayuda de un
contador de colonias. No caracterizo por
microorganismos; si no que los siguietes
datos recolectados se dan por medio de
las características morfológicas de los
diferentes cultivos y/o colonias que se
reprodujeron en cada una de las cajas de
Petri.
Imagen 1. Muestra celular

Bacteria b: Estos microorganismos

tuvieron una mayor población en la caja.
Esta cuenta con un 60% de invasión, y
con 15 poblaciones al hacer la debida
observación, es decir, se cree y se analiza
que este segundo (2) tipo de bacteria o
microorganismos tienen más facilidad en
el momento de reproducirse.

RESULTADOS MUESTRA 1: CELULAR

CARACTERISTICAS DESCRIPCION
En esta primera prueba de cultivo de Color Blanco
microorganismos se encontraron 2 tipos Superficie Lisa
de bacterias a las cuales se las dará por Forma Irregular
nombre a y b Borde ondulado
 necesarios para no contaminar la
muestra.
MUESTRA 2: DEDOS SIN LAVAR

En esta muestra de de cultivo microbiano CARACTERISTICAS DESCRIPCION

se encontró solo una especie de bacteria, Color Blanco
la cual es una de las misma hallados en el Superficie Lisa
anterior, es decir, el celular. En este caso Forma redonda
encontramos microorganismos con Borde circular
manchas blancas de buen tamaño con
bordes ovalados y un tanto lisos, este se
encontró en una proporción de invasión A continuación se observara una
aludida al 18% de la superficie de la imagen de la muestra N° 3
muestra. Es por ello que se dice que en
este medio dicho tipo de bacterias o
microorganismos no se pueden
reproducir o multiplicas de una manera
tan fácil.

CARACTERISTICAS DESCRIPCION
Color Blanco
Superficie Liso
Forma Irregular
Borde Ondulado

Seguidamente se verá la imagen del

respectivo cultivo de los dedos sin
lavar.

ANÁLISIS

Ejecutamos el cultivo siguiendo

Imagen 2. Muestra de los dedos sin lavar
MUESTRA 3: BLANCO
adecuadamente el procedimiento,
aprendimos como realizar paso a paso
un medio de cultivo para conocer más
acerca de la estructura

Esta muestra se realizó sin cultivo de

microorganismos por lo tanto no se
encontró ninguna colonia de Física de distintos microrganismos y
bacterias, lo cual nos muestra que la su forma de reproducción.
limpieza y los cuidados son
CONCLUSIONES
 La asepsia es un conjunto de
procedimientos que tienen por
procedimientos que tienen por
objeto impedir la penetración de
agentes patógenos en un
determinado sitio( medio de
cultivo)
 En la elaboración de esta práctica
podemos comprender que los
medios de cultivo son muy
importantes para el
microorganismo, ya que éste le
dará los nutrientes necesarios para
su crecimiento. Obtener un medio
de cultivo limpio fue muy
importante para la realización
de la práctica.
 Los métodos de asepsia son
determinantes para la realización
de los cultivos y la pureza ya que
de ello se cultive solo el
microorganismo de interés y que
este no se vea contaminado por
otro.
 El reconocimiento de equipos de
laboratorio y el correcto uso de
estos permite al campo de
investigación obtener resultados
claros y precisos.
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