CINÉTICA ENZIMÁTICA EN LA ACTUALIDAD

Universidad de Carabobo – Facultad Experimental de Ciencias y Tecnología

Departamento de Química - Bioquímica
Francisco Nicola Tovar Cecere

Resumen

Los estudios cinéticos se clasifican principalmente en tres categorías: la cinética del estado transitorio, cinética
de estado estable, y rápida cinética de equilibrio, la cual modifican la velocidad del mecanismo por las
especies relacionadas. La constante catalítica para la conversión del sustrato, así como la constante de
Michaelis, ha sido ampliamente utilizada como una medida del rendimiento de las enzimas. El método de
linealización usado es el de Hanes-Woolf, el cual describe mejor el comportamiento en condiciones normales
y pH ligeramente acido. Se demostró que a medida que aumenta la concentración de sustrato, manteniendo la
dosificación de enzima constante, aumenta la velocidad de formación de productos.

Palabras Claves: Enzima-Sustrato, Cinética Enzimática, Michaelis-Menten, Hanes-Woolf,

Mecanismo Enzimático.

 Introducción: estado estable y una rápida cinética de

equilibrio [2].
Se entiende por cinética química a la
teoría de las velocidades de reacción. La  La cinética en estado transitorio son
velocidad de reacción se define como la reacciones rápidas cuya reacción
cantidad de materia transformada por unidad está directamente relacionada con la
de tiempo, en la cinética enzimática casi estructura de las enzimas.
siempre este valor viene reportado en  La cinética en estado de equilibrio
micromol por minuto. todas las variables de estado
permanecen constante, a pesar de
La definición de velocidad de reacción los cambios continuos.
viene dada por la siguiente expresión.  La cinética rápida de equilibrio, antes
de la reacción determinante de la
velocidad, se encuentra en equilibrio
todos los componentes como
enzima, sustrato, y enzima-sustrato.
donde C es la concentración, k la constante
de velocidad, t el tiempo. Adicionalmente existen condiciones para que
se dé la actividad enzimática, entre ellos se
Como puede verse, la velocidad es siempre
encuentra [1].
proporcional a la concentración. Cuando se
incorpora un catalizador la reacción inicia a
 pH Optimo, dada que las enzimas
temperatura ambiente y se completa
son proteínas, sus propiedades están
rápidamente con el desprendimiento de calor,
condicionadas en medio iónico. En la
es decir, que el catalizador cumple la
mayor parte de las enzimas, el pH
finalidad de disminuir la energía de activación
óptimo se encuentra en la zona
obligando a las moléculas en condiciones
neutra o débilmente acida.
para reaccionar.
 Activadores: Otras enzimas
Los catalizadores enzimáticos son altamente requieren presencia determinados
específicos, a pesar de que pueden existir iones; los iones mas comunes son el
- 2+ 2+ 2+ 2+
diversas reacciones, ella solo catalizará Cl , Mg , Mn , Zn y Co .sin
aquel sustrato que permita alcanzar el embargo el mecanismo de influencia
equilibrio [1]. de iones se encuentra sin aclarar, ya
que se supone que forman complejos
Los estudios cinéticos en enzimología que “debilitan” al sustrato.
pueden clasificarse en tres categorías: la
cinética de estado transitorio, cinética de
  Envenenamiento de las enzimas:
Muchas enzimas pueden ser
envenenados por una determinada
sustancia, es decir, inhibirse si
acción completamente.
 Marco Teórico:
En los sistemas biológicos, los flujos, la
cinética de sustrato, metabolismo y productos
de la red biomolecular son cuantificados.
Esta red se encuentra descrita por un
conjunto de ecuaciones diferenciales las
cuales dependen de condiciones como
temperatura, pH y fuerza iónica.
Uno de los parámetros más importante en
catálisis enzimática se encuentra descrita por
la cinetica de Michaelis-Menten [3].
Las enzimas pasan la barrera del estado de
transición a diferencia de las disoluciones no
catalizadas. El primer paso en la catálisis
enzimática afecta k1 y por lo tanto KM [3].
Uno de los grandes avances para la cinética
enzimática es el uso de la mecánica
cuántica, ya que los algoritmos y hardware
han desarrollado modelos para el estudio del
complejo de transición como indica Stein [3];
el complejo enzima-sustrato es el principal
responsable para dicha modulación de la
actividad enzimática [3].
A través de este modelo computacional lo
que se busca predecir es:
 Comparación entre diferentes
moléculas.
 Grupo de entrenamiento para la
parametrización
 Predicción de la constante y
especies formadas.
En la catálisis enzimática Michaeliana se
describen Kcat para la conversión de sustrato
en producto, y KM como la constante de
Michaelis, que proporciona la estimación de
la afinidad de la enzima por el sustrato y se
define operacionalmente como la
concentración de sustrato en el que las tasas
iniciales son la mitad de la velocidad máxima.
La relación de ambas constante se conoce
como la constante de especificad, que es un
indicador útil cuando actúan dos sustratos
competitivos [4]. Ambas constantes predicen
el comportamiento de la enzima en las
condiciones reales de fabricación industrial,
proponiendo así información para tomar
decisiones a nivel de proceso para
transformaciones biológicas.
Al trabajar con enzimas es importante
calcular los parámetros cinéticos como es la
constante de Michaelis y la velocidad
máxima. Para determinación de estos
parámetros se realiza un conjunto de
operaciones matemáticas ya que el modelo
de Michaelis-Menten no es una función lineal.
Al realizar una lineanización es más eficiente
el análisis con el grafico obtenido. Existes
diversas funciones lineales como lo es:
 Lineweaver-Burk
 Eadie-Hofstee
 Agustinson
Sin embargo, la constante cinética en la
actualidad es calculada por método de
linealización (Figura N°1) de Hanes-Woolf la
cual viene expresada de la siguiente forma.
dicha expresión describe mejor
comportamiento concentrado de enzimas en
condiciones normales y pH ligeramente acido
4,5 [5].
Figura N°1: Hanes-Woolf
 [3] Stein, M., Gabdoulline, R. R., & Wade, R.
C. (2008). Calculating enzyme kinetic
 Conclusiones parameters from protein
structures. Biochemical Society
Transactions, 36(1), 51–54.
Los catalizadores enzimáticos son https://doi.org/10.1042/BST0360051
altamente específicos, y su principal función
es alcanzar el equilibrio con la energía de [4] Carrillo, N., Ceccarelli, E. A., & Roveri, O.
activación más baja [1], a su vez dicha A. (2010). Usefulness of kinetic enzyme
actividad es afectada por el pH, cantidad de parameters in biotechnological
especies, concentración de sustrato, practice. Biotechnology and Genetic
activadores iónicos, envenenamiento de la Engineering Reviews, 27(1), 367–382.
enzima. Los estudios cinéticos de las https://doi.org/10.1080/02648725.2010.10648
enzimas se ha clasificado en tres principales 157
categorías, estas son: la cinética de estado
transitorio, cinética de estado estable y una [5] Morales-Álvarez, E. D., Rivera-Hoyos, C.
rápida cinética de equilibrio [2]. Las M., Cardozo-Bernal, Á. M., Poutou-Piñales,
simulaciones computacionales juegan un R. A., Pedroza-Rodríguez, A. M., Díaz-
papel importante para descripción de Rincón, D. J., … Cuervo-Patiño, C. L. (2017).
mecanismos de reacción enzimática y dichos Plackett-burman design for rGILCC1 laccase
datos obtenidos cada vez se acercan a los activity enhancement in pichia pastoris:
datos experimentales facilitando el estudio de Concentrated enzyme kinetic
fenómeno biológicos complejos [3]. Carrillo characterization. Enzyme Research, 2017.
[4] no solo propone un modelo matemático https://doi.org/10.1155/2017/5947581
para la relación de Km y Kcat, sino múltiples
con su respectivo análisis con el fin de [6] Acevedo, D., Granados, C., & Guerrero,
predecir información para la toma de E. M. (2014). Cinética enzimática del bagazo
decisiones a nivel industrial en la producción de caña para la producción de glucosa
de un material. A través de la expresión de utilizando la enzima Trichoderma
Michaelis-Menten se puede tener la forma longibrachiatum. Informacion
lineal de Hanes-Woolf donde se aplica la Tecnologica, 25(5), 65–72.
inversa de dicha expresión, se multiplica por
la concentración de sustrato y finalmente se https://doi.org/10.4067/S0718-
reordena. Es importante destacar que al 07642014000500010
aumentar la concentración de sustrato
manteniendo una dosificación de enzima
constante, la velocidad de formación de
producto aumenta como indica la teoría, y
otras formas de comparación de resultados
con respecto al cálculo de Km y Vmax es con
la curva hiperbólica de Michaelis-Menten [6]

 Referencia:

[1] Karlson P. (1966). Manual de Bioquimica

para médicos, naturalistas y farmacéuticos.
Segunda edición. Efitorial Marin S.A. pag: 66,
69, 74,76-80.

[2] Ulusu, N. N. (2015, June 20). Evolution of

Enzyme Kinetic Mechanisms. Journal of
Molecular Evolution. Springer New York LLC.
https://doi.org/10.1007/s00239-015-9681-0