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TEMA 1

CINETICA DE MICHAELIS-MENTEN

Para explicar la relación entre la velocidad inicial (v0 ) y la concentración inicial de sustrato ([S0]),
Michaelis y Menten propusieron que las reacciones enzimáticas ocurrían en 2
etapas:

Unión del sustrato Etapa catalítica

v1 = k1 [E] [S]
v2 = k2 [ES]
v3 = k3 [ES]

Si partimos de que la concentración total de enzima es igual a la concentración de enzima

libre más la concentración de complejo enzima-sustrato:
[ET] = [E] + [ES]
despejando, obtenemos que la concentración de enzima libre es igual a la concentración
total de enzima menos la concentración de complejo enzima-sustrato:
[E] = [ET] - [ES]
Si sustituimos
[E] = [ET] - [ES]
en la fórmula original:
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v1 = k1 [E] [S]
obtenemos:
v1 = k1 ([ET] - [ES]) [S]
v1 = k1 [S] [ET] - k1[S] [ES]

El modelo cinético de la
HIPOTESIS DEL
ESTADO
ESTACIONARIO, donde
[ES] es pequeña y constante
a lo largo de la reacción; por
lo tanto, la velocidad de
formación del complejo
enzima-sustrato (v1) es igual
a su velocidad de su
disociación (v 2 + v3):
v1 = v 2 +

Además, como [ES] es constante, también lo es la velocidad de formación del producto:

v = v3 = k3 [ES] = constante
y como v1 = v 2 + v3
podemos decir que: k1 [S] [ET ] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]

Despejando [ES] nos queda:

donde:

siendo kM la CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN la cual se define como la

concentración de sustrato a la que la velocidad de reacción enzimática es
igual a la mitad de Vmax

De todo lo anteriormente expuesto podemos concluir que, en el

estado estacionario, la velocidad de formación de producto es:
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como los términos entre paréntesis son constantes, pueden

englobarse en una nueva constante: kobs, de forma que la expreción
se reduce a:

(para cualquier reacción enzimática, [ET], k3 y kM son constantes)

La concentración de sustrato que le da una velocidad que está a la mitad de la Vmax se

llama Km y es una medida útil sobre la rapidez con que aumenta la velocidad de reacción
respecto a la concentración del sustrato. La Km es una medida de la afinidad de una enzima
(tendencia a unirse) a su substrato. Una Km más baja corresponde a una mayor afinidad por
el sustrato, mientras que una Km más alta corresponde a una menor afinidad por el sustrato.
A diferencia de la Vmax que depende de la concentración de enzima, Km siempre es la
misma para una enzima particular en una reacción determinada (aunque la Km "aparente",
medida experimentalmente, puede modificarse por inhibidores, como se explica a
continuación).

Gráficas de cinética enzimática e inhibidores

 Los inhibidores competitivos afectan el progreso de la reacción al unirse a una enzima, por
lo general en el sitio activo, y evitan que el sustrato real se una. En un momento dado, solo
el inhibidor competitivo o el sustrato pueden unirse a la enzima (no ambos). Es decir, el
inhibidor y el sustrato compiten por la enzima. La inhibición competitiva actúa
disminuyendo el número de moléculas de enzima disponibles para unirse el substrato.

 Los inhibidores no competitivos no impiden que el sustrato se una a la enzima. De hecho,

el inhibidor y el substrato no afectan la unión del otro con la enzima en lo absoluto. Sin
embargo, cuando el inhibidor se une, la enzima no puede catalizar su reacción para producir
un producto. De esta forma, la inhibición no competitiva actúa reduciendo el número de
moléculas funcionales de enzima que pueden realizar la reacción.
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Si quisiéramos mostrar los efectos de estos inhibidores en una gráfica Obtendríamos los
siguientes resultados:

Gráfica de cinética enzimática que muestra la velocidad de reacción como

una función de la concentración del sustrato para una enzima normal, una
enzima con un inhibidor competitivo y un inhibidor no competitivo. Para
el inhibidor competitivo, la Vmax es la misma que para la enzima normal,
pero la Km es mayor. Para el inhibidor no competitivo, la Vmax es menor
que para la enzima normal, pero la Km es la misma.

 Con un inhibidor competitivo, la reacción puede alcanzar en algún

momento su Vmaˊx normal, pero se necesita de una mayor concentración
de sustrato para alcanzarla. En otras palabras, Vmaˊx no cambia, pero la Km
es mayor. ¿Por qué se debe agregar más sustrato para alcanzarVmaˊx? El
sustrato extra hace que las moléculas de sustrato tengan la abundancia
suficiente para “ganarle” consistentemente a las moléculas de inhibidor su
lugar en la enzima.

 Con un inhibidor no competitivo, la reacción nunca puede alcanzar su

Vmaˊx, sin importar cuánto sustrato añadamos. Un subconjunto de las
moléculas de enzima siempre estará "envenenado" por el inhibidor, por lo
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que se reduce la concentración efectiva de la enzima (que determina la

Vmax. Sin embargo, la reacción alcanza de la mitad de su nueva Vmaˊx en la
misma concentración de sustrato, por lo que Km no cambia. El hecho de
que Km no cambie refleja que el inhibidor no afecta la unión de la enzima
con el sustrato, solo disminuye la concentración de enzima utilizable.