¿Plásticos Bacterianos?

Dr. Jorge Martínez Silva

Profesor Investigador
Facultad de Ciencias Químicas, UANL
 Algunos usos de los Plásticos

¾ Bolsas para compras y empaques de

alimentos
¾ Estructuras mecánicas y de soporte de
todo tipo
¾ Pinturas
¾ Materiales impresos de todo tipo
¾ Piezas de motores de autos
¾ Armas
Énfasis Packaging› N°3 › mayo/junio 2007
 Requerimientos para el Envasado
Efectivo de Alimentos

¾ No Tóxico
¾ Proteger de contaminación microbiológica
¾ Proteger del ingreso de olores ambientales
¾ Barrera a la humedad y O2
¾ Transparente
¾ Compatible con el alimento
¾ Fácil de abrir
¾ Bajo costo
¾ Deposición luego del uso: Fácil
 Polímeros: Clasificación

Basada en
Fuentes Fuentes Petro-Bio
Renovables (Mixed)
Síntesis Sintéticas
Microbiana Petro-basadas

¾ PLA obtenido de
¾ Poliésteres ¾ Sorona
maíz o almidón Polihidroxialcano- Alifáticos
¾ ¾ Poliuretano
¾ Plásticos Celulósicos atos (PHAs) Biobasado
¾ Poliésteres
¾ Plásticos obtenidos Polihidoxibutirato- Alifático-
¾ ¾ Epóxidos
de Soya co-valerato (PHBV) aromáticos Biobasados
¾ Plásticos de almidón ¾ Poliesteramidas ¾ Blendas, etc
¾ Alcoholes
polivinílicos
 Síntesis bacteriana de poli-HAs

Gránulos en el microorganismo

PHB
Luz solar

Cosecha

Direct route

Biodegradación
Carbohidrato

Proceso Producto
fermentativo plástico
Polímero
Courtesy: Metabolix & Biomer
 Síntesis bacteriana de poli-HAs

R
O
Estructura del PHA H
O
x OH
n

PHA R
R = Hidrocarburo
PHB - CH3
(hasta C13)
PHV - CH2CH3
x = 1 a 3 o más
PHBV (Biopol®) - CH3 & CH2CH3
PHBHx - CH3 & - (CH2)2CH3
PHBO - CH3 & - (CH2)4CH3
Courtesy: Metabolix & Biomer
 Bioplásticos Bacterianos
Ventajas
▲ Biodegradable
▲ Síntesis amigable al ambiente
▲ Excelente procesabilidad
▲ De fuentes renovables
▲ Excelentes propiedades mecánicas
▲ Termoplástico
▲ Variedad de estructuras Desventajas
▲ Alto costo de producción
▲ Estrecha ventana de procesamiento
▲ Ausencia de grupos reactivos

▲ Fragilidad
 Propiedades de los polihidroxialcanoatos

Protección:
¾ Barrera a la luz
¾ Barrera a gases (O2, CO2, C2H4)
¾ Barrera al vapor de agua
¾ Barrera a la pérdida de aromas y sabores
Énfasis Packaging› N°3 › mayo/junio 2007
 Aplicaciones

Empaquetamiento de Matrices liberadoras de

alimentos: recipientes, sustancias: fármacos,
filmes, bolsas, insecticidas, herbicidas o
recubrimientos de papel fertilizantes
 Aplicaciones

Otros dispositivos como: cuchillas, utensilios,

pañales, productos de higiene femenina,
recipientes para cosméticos, shampoo y otros.
 Aplicaciones

Otras aplicaciones médicas: hilos quirúrgicos, vendas para heridas,

uso en ortopedia donde se conjuga también con propiedades
piezo-eléctricas que estimulan el crecimiento del hueso.
 Costo de Producción

Nuevas bacterias

Organismos
recombinantes
Procesos de
fermentación y
extracción de PHAs
AMBIENTES DE LAS BACTERIAS
PRODUCTORAS DE PHAs
Aislamiento y Purificación de Microorganismos

MEDIO BASE
Glucosa-Manitol 5,0 g
48 aislados
bacterianos Peptona 2,5 g
Extracto de levadura 2,5 g
Nilo rojo 0,01%
Agar 1,2 g
Esquema de Producción de PHAs por Bacterias Silvestres

120 r.min-1, 30 OC, 8000 r.min-1 x 5 min Lisis: Hipoclorito de Na,

24 h. 37 OC, 2 h.

8000 r.min-1 /5 min

Cultivo por estrías de las cepas en
medio NR (placa), 36 h.
Observación bajo luz ultravioleta
de las cepas NR positivas.
A. Identificación de los Aislados Seleccionados

Características del cultivo

Características microscópicas
Perfil de oxidación de azúcares (Api 50 CHB)

B. Caracterización del Polímero

FTIR CG-MASAS

43
2000e3

1750e3

1500e3

1250e3

1000e3

750e3
74
42
500e3
57 85
250e3 103

0e3 117
30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120
Selección e Identificación de un
Aislado Productor de Copolímero

48 Morfotipos RN +
3 Morfotipos CG –
13 Morfotipos Copolímero
Selección de Aislados Bacterianos
Productores de PHA

MORFOTIPOS
Copolímero
NR positivos
Bacillus mycoides FLB2
Homopolímero
Rhizobium tropici 3A
Cromatograma de Gases de Ésteres de Metilo
y Espectro FTIR del PHA de la cepa FLB2
 Optimización de los Medios de Cultivo
(Agitadora)

SUSTRATOS
CONDICIONES
¾Melaza ¾Inóculo 18 horas
¾Extracto de carne
¾Concentración 10%
¾Extracto de levadura
¾Agitación 120 rpm
¾Sacarosa
¾Temperatura 30 OC
¾Manitol

METODO (Box y col., 1988)

¾Exploratorio Diseño Factorial 23
¾Máxima pendiente Bloques al azar
¾Optimización Diseño factorial 23 con
puntas de estrella

¾Variable de respuesta PHA en mg.L-1

 Perfil típico de una fermentación
5 10000

4.5 9000

4 8000

3.5 7000
Abs (600 nm)

3 6000

PHB mg/L
2.5 5000

2 4000

1.5 3000

1 2000

0.5 1000

0 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t (h)

Abs PHB

Perfil de fermentación típica de Rhizobium tropici-3, en

fermentador Inforst HT con vaso de 7,5 L y volumen efectivo
de 5 L de medio optimizado (Lasala, 2000), 500 rpm y 1
v.v.m., 30 ± 2,5°C y pH inicial de 6,6 ± 0,3, µ=0.031 h-1.
 Perfil de Fermentación de
Bacillus mycoides Cepa FLB2

20 12
18
10
16
14

PHA-Biomasa g/L
8
Azucar g/L

12

10 6
8
4
6
4
2
2
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Tiempo horas
Azucar Biomasa PHA
 Estudio de aplicación de la tecnología Fed-Batch.
Estudios de algunos parámetros cinéticos de la cepa
Rhizobium tropici-3.

µ (h-1) 1/µ (h)

0.2 9

0.16 8

0.12 7

0.08 6

0.04 5
0
4 1/S (g-1/L)
0 3 6 9 12 15 18 21 S (g/L)
0 0.1 0.2 0.3 0.4

Relación entre µ y la concentración inicial de sacarosa en el medio

de fermentación y relación de los inversos de estas mismas
variables.Cultivo en agitadora, 10 h a 70 r.min-1 con regulación de
la temperatura 32±2 ºC, pH inicial= 6.73.
dC/dt(g.h-1) dC/dt (g/h)
8 8
7 7
6 6
5 5
4 4
3 3
2 2
1 1
0 C (g.L-1)
0 t(h)
0 2 4 6 8 10 12
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Comportamiento de la velocidad de consumo de sacarosa en función

de la concentración de la misma en el medio optimizado y en función
del tiempo. Cultivo en zaranda de 10 horas a 70 rpm con regulación
de la temperatura 32 ± 2 ºC, pH inicial= 6.73.
 PHB(g/L)
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
t(horas)
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30

Variante 1 Variante 2 Variante 3 Variante 4

Perfiles de la producción de PHB de las cuatro variantes de cultivo por

lote incrementado realizada en frascos de 2L, con 1L de medio
optimizado, agitación neumática de 0.5vvm, temperatura 30 ± 2,5 °C y
pH inicial de 6,58.
Productividad: Agitadora P= 0.084 g.L-1.h-1
Fermentador de 5L P= 0.90 g.L-1.h-1
 Cultivo en Escalado:
Banco de Fermentador Cultivo en 50 L, 500
cepa Preinóculo r.min-1, 1vvm, 30°C
de 5L

1 L con 250 mL de Cultivo de 20 h,

medio de cultivo 500 rpm, 1 wm,
optimizado, 12 h de 30 0C. Centrifugación (Recuperación
cultivo, 100 rpm, 30 0C
de la biomasa)

Extracción del polímero (lejía de

cloro + EDTA , 37 °C, 1.5 h)

Purificación
(Cloroformo, Centrifugación
Filtración y destilación
2h, 45°C,
agitación)

Esquema del proceso de escalado de la producción de

PHB en 50 L.
 Conclusiones Generales

¾Fue elaborado un método de selección en

placa de cepas productoras de
polihidroxialcanoatos .
¾ Colección de cepas productoras de niveles
hasta de 8 g.L-1 de polihidroxialcanoatos
empleando sacarosa como fuente de C.
¾ Elaboración de un esquema de obtención
del polímero con la reducción de solventes.
 Conclusiones (cont.)

¾ La homogeneidad del sistema es más

importante que la aireación.
¾ Los microorganismos empleados son
resistentes a altos esfuerzos cortantes.
¾ El mejor criterio de escalado es el de la
velocidad tangencial.
¾ El pH óptimo inicial es de 6,58 ± 0,32 sin
ajuste posterior.
 Conclusiones (cont.)

¾ Las condiciones de fermentación son:

22–24h; inóculo de 10 % en fase
exponencial media.
¾ Es posible sustituir el Hipoclorito de sodio
en la primera fase de extracción por
hidróxido de amonio.
 RECOMENDACIONES

¾ Realizar estudios que permitan confirmar la

ruta metabólica propuesta que conduce a la
síntesis del copolímero P(3-HB-co-HV)
producido por la cepa de B. mycoides FLB2.

¾ Optimizar las condiciones de agitación y

aireación en fermentador de 5 L para
desarrollar una estrategia de producción del
copolímero sintetizado por la cepa B.
mycoides FLB2
 Estudios Fundamentales para la
Aplicación

¾ Materiales compuestos con hidroxiapatita, de

uso en ortopedia.
¾ Mezclas de PHA con otros polímeros
biodegradables, con el objetivo de disminuir
su costo y también variar sus propiedades.
¾ Estudio de los procesos de difusión y
permeación en membranas densas de PHA,
de vapores de agua, alcohol, etc.
 Participantes
Dr. Jorge Martínez, Profesor Titular, Responsable del Laboratorio
de Fisiología Microbiana, Facultad de Biología, Universidad de La
Habana, Cuba.
MC Maria Elena Carballo, Profesor Asistente
MC Rubén Solano, Técnico
Estudiantes de Licenciatura:
Ileana Paneque, Zhenia Banchicova, Maylen López
Estudiantes de Maestría:
Fátima Lasala, Gretel Gómez, Julyet Marrero,
Otros Colaboradores (Instituto de Oceanología):
MC Roberto Núñez
MC Eudalys Ortiz
Ing. Osmar Barbán