“EXISTENCIA DE NEMÁTODOS ENTOMOPATÓGENOS (STEINERNEMATIDAE Y

HETERORHABDITIDAE) EN AGROSISTEMAS DEL CAÑON DE JUCHIPILA

ZACATECAS, MÉXICO”

Miguel Ángel Salas-Luévano

Unidad de Agronomía de la UAZ.

Martín González R., Roberto Lezama., Oscar Rebolledo D. Jaime Molina O.
FCBA-Universidad de Colima.

Los plaguicidas han sido el método utilizado por algunas décadas, pero sus efectos sobre
organismos no objetivo, contaminaciones de agua, residuos en cosechas y alimentos, el desarrollo
de resistencia de los insectos a los químicos y el incremento a la degradación microbial (Georgis,
1992; Gaugler, 1988), han originado un clima político y social en contra de ellos (Georgis y
Hague, 1991). Por otro lado, asociaciones ambientalistas han forzado la atención en la industria,
para el desarrollo e incremento de investigaciones sobre otros métodos de control alternativo, y
menos tóxicos para el manejo de plagas (Georgis y Poinar, 1994). El papel del control
microbiano en la protección de cultivos y bosques, y la disminución de insectos de importancia
médica y veterinaria, se ha expandido con el descubrimiento y desarrollo de nuevos agentes de
control microbiano. Por su selectividad y mínimo impacto ambiental, los organismos
entomopatógenos pueden ser componentes ideales en programas de manejo integrado de plagas
en el principio y más allá del siglo XXI (Lacey y Goettel, 1995).

Como resultado de los progresos que durante los últimos 20 años se han hecho sobre la
taxonomía, biología, genética, ecología, rango de hospederos, aplicaciones tecnológicas, pruebas
de laboratorio, pruebas de campo y comercialización de los nematodos entomopatógenos y su
bacteria simbiótica (Bedding, 1998), los nematodos del género Steinernema y Heterorhabditis
han surgido como excelentes candidatos de biocontrol alternativo de insectos plaga, ya que
posiblemente ellos ocupan una gran mitad entre los predatores/parasitoides y patógenos (Gaugler,
1988; Grewal y Georgis, 1999), y han recibido considerable atención como bioinsecticidas, por la
impresionante y combinación única de los atributos que poseen (Gaugler y Kaya, 1990) como la
presencia de un amplio rango de hospederos, la habilidad para buscar e introducir sus bacterias
simbióticas dentro del cuerpo del insecto, matándolo por septicemia dentro de las 24-48 horas
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siguientes para su desarrollo y reproducción (Kaya et al., 1993). La existencia de un estadio

infeccioso durable capaz de cultivar y desarrollar fácilmente a gran escala en medios artificiales,
sólidos o líquidos, los cuales pueden ser almacenados por largos períodos y mantener su
viabilidad y patogenicidad hasta por 5 meses a temperaturas de cuarto o hasta 12 meses bajo
refrigeración, y ser aplicados por métodos convencionales persistiendo en el medio ambiente
natural, así como la excención de requerimientos de registro y regulaciones estatales y federales
en muchos países (Poinar, 1986; 1990; Gaugler, 1988; Kaya, 1990; Georgis y Hague, 1991); por
su seguridad en relación con mamíferos, plantas y entomófauna benéfica (Gaugler, 1981, 1987;
Timper, et al., 1988). Además reunen criterios para el control aumentativo de insectos a través de
liberaciones inundativas (Kaya et al., 1993).

Asimismo, el parasitismo de los insectos ocasionado por los steinernematidos y

heterorhabditidos y su asociación simbiótica natural con bacterias específica del género
Xenorhabdus y Photorhabdus respectivamente Boemare et al. (1993)., ha recibido un
extraordinario interés por parte de los científicos de todo el mundo, el cual es atribuido al éxito
como agentes de control biológico de insectos plaga. La relación existente es considerada
mutualista, porque la bacteria no puede penetrar dentro del hemocele de los insectos hospederos,
sin el nemátodo, y los nematodos no pueden crecer y reproducirse en ausencia de la bacteria
(Georgis y Poinar, 1994). Este doble carácter y único del complejo nematodo-bacteria, los
distingue de otros organismos usados para control biológico (Ehlers y Hokkanen, 1996).

Además, en el futuro una oportunidad final de desarrollo notable es la incorporación de

los nematodos entomopatógenos en los programas de manejo integrado de plagas (Georgis,
1992), debido a que generalmente son compatibles con la mayoría de los pesticidas químicos
comerciales (Hara y Kaya, 1993; Rovesti et al., 1988; Zimmerman y Cranshaw, 1990), así como
con hongos entomógenos (Kamionek et al., 1974), bacterias (Poinar et al., 1990) y virus (Kaya y
Brayton, 1987). De esta manera, los organismos entomopatógenos presentarán una participación
predominante en el mercado de control de ciertas plagas, y su participación continuará
incrementándose (Smart, 1995).
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Los nematodos entomopatógenos presentan un amplio rango de hospederos. En pruebas

de laboratorio, Steinernema carpocapsae por ejemplo, infecta a más de 250 especies de insectos
(Poinar, 1979; 1990), pertenecientes aproximadamente a 75 familias que se extiende a casi 11
órdenes de insectos (Poinar, 1979; Peters, 1996); y pueden atacar a los estadios biológicos de
larva, pupa e insectos adultos (Kaya, 1981). Principalmente contra estadios de ciertos insectos del
suelo y de hábitat cripticos, así como de diversas plagas en cultivos anuales y perenes, hortícolas,
bosques, ornamentales, pastos, incluso para especies urbanas de importancia medica y veterinaria
(Kaya y Gaugler, 1993; Gaugler, et al., 2000). De igual forma, un rango de especies y cepas de
Steinernema y Heterorhabditis son utilizadas como agentes de control biológico de plagas, en
cultivos industriales protegidos y de invernaderos (Richardson, 1992; LeBeck et al., 1993) y en
unidades intensivas de animales (Belton et al. 1987; Renn, 1998),.

En la actualidad especies particulares son ampliamente reconocidas por su potencial como

agentes de control biológico clásico, tal es el caso de Steinernema scapterisci contra grillo topos
Scapteriscus vicinus (Smart y Nguyen, 1990), y aquellas que parasitan totalmente termitas y otros
orthopteros específicos (Nguyen y Smart, 1992; 1994); así como aplicaciones de Steinernema
riobravis como un control biológico inundativo para la supresión de Helicoverpa zea (Feaster y
Steinkraus, 1996). Incluso se han reportado importantes epizootias naturales ocasionadas por
Heterorhabditis spp. (Sexton y Williams, 1981; Akhurst et al., 1992; Mracek, 2000).

Las especies y cepas nativas de heterorhabditidos y steinernematidos, han sido aisladas de

insectos del suelo y de insectos infestados en muchas partes del mundo (Poinar, 1990). Bedding y
Akhurst (1975) desarrollaron el método para recuperar nematodos parásitos de insectos de
muestras de suelo, cebadas con larvas de la polilla mayor de la cera Galleria mellonella (L)
(Lepidoptera: Pyralidae). Los resultados de extensas inspecciones utilizando éste método, han
demostrado que están ampliamente distribuidos y son comunes en todos los continentes (Poinar,
1990), incluso en el desierto (Glazer, 1993). Aunque, parecen estar extremadamente agrupados
dentro de algunos sitios (Stuart y Gaugler, 1994; Cambell et al., 1996). Unicamente en la
Antártida no existe evidencia de su coexistencia (Griffin et al., 1990). Muchas especies
adicionales esperan ser descubiertas, debido a la facilidad de encontrar especies de nematodos
adaptadas localmente, ya que usualmente tienen una base geográfica (Hominick et al., 1997).
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Por esta razón, numerosas inspecciones para la recuperación de especies y cepas de

Steinernematidae y Heterorhabditidae, se han conducido en una variedad de hábitats, donde las
condiciones bióticas y abióticas han demostrado una amplia distribución y gran diversidad. En
América Latina y el Caribe diversos estudios han contribuido significativamente en la taxonomía
y descubrimiento de nematodos entomopatógenos, incluyendo nuevas especies de Steinernema y
Heterorhabditis, que han sido recuperados de insectos plagas y de muestras de suelos (Georgis y
Hom, 1992). En México solamente se ha reportado la cepa Mexicana de Steinernema
carpocapsae, que originalmente fue recuperada de larvas infectadas de la palomilla de la
manzana (Cydia pomonella) en Allende, Chihuahua por Caltagirone (Poinar, 1970). Sin embargo,
es poca la información con respecto al potencial, identificación y distribución de otros nematodos
nativos, que puedan permitir la selección de aislamientos o especies eficaces (Stock, 1995).

Por otro lado, en el estado de Zacatecas el control de insectos plaga que afectan cultivos
de importancia económica, se realiza mediante la aplicación de insecticidas convencionales, lo
que ha originado contaminación ambiental y desarrollo de resistencia a los insecticidas. Por
consiguiente, es necesario el establecimiento de otros métodos de control alternativo, y
aprovechar los ecosistemas que ofrecen un gran potencial no explorado en el estado, para aislar
nematodos entomopatógenos nativos adaptados localmente. El presente estudio fue conducido
para determinar la existencia natural de nematodos entomopatógenos (Steinernematidae y
Heterorhabditidae) en agrosistemas de la región del Cañon de Juchipila, Zacatecas, México.

MATERIALES Y METODOS

Lugar del experimento

El presente trabajo se realizó en la región que comprende el área del Cañon de Juchipila y
parte del municipio de Zacatecas. El aislamiento e identificación de los nematodos detectados, se
efectuó en el Laboratorio de Nematodos Entomopatógenos de la Unidad de Agronomía de la
Universidad Autónoma de Zacatecas.

Cría de Galleria mellonella

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Con el propósito de establecer la cría y mantenimiento de la colonia de Galleria

mellonella este procedimiento se efectuó de acuerdo a las especificaciones de Woodrig y Kaya
(1988). Para ello se colectaron larvas de apiarios provenientes del CEBTG de Villa Hidalgo y
Ojocaliente, Zac., utilizando larvas del último estadio de la polilla mayor de la cera como trampa
cebo, para la detección y multiplicación in vivo de los steinernematidos y heterorhabditidos.

Muestreo de sue los

Para verificar la existencia de nematodos entomopatógenos, la recolección de las muestras
en suelo se realizó por el método opinático o intencional de Poch (1972). Cubriendo diversos
agrosistemas, durante Mayo y Julio del 2000. Dentro de cada cultivo se seleccionaron 1-3 sitios,
y en cada uno de ellos se recolectaron tres muestras de suelo de aproximadamente 1 kg, en donde
cinco submuestras al azar se obtuvieron con una pala de mano, a una profundidad de 10-20 cm,
cubriendo un área de aproximadamente 20 m2 , de donde se colectaron al menos 100 m de
separado en cada sitio (Stock et al. 1999). En los cultivos perennes las muestras se tomaron a 30-
90 cm de la base del tronco del frutal, abarcando un área de 100 m2 (Rueda et al., 1993). En
ambos casos, entre cada muestreo la pala jardínera se limpió y lavó con agua, secándola al aire
(Choo et al., 1995).

Las muestras que se obtuvieron en cada sitio, se mezclaron uniformemente y se colocaron

en una bolsa de polietileno (3 kg 41x71 cm), para prevenir pérdida de agua, la cual se etiquetó, y
colocó en una hielera (ca. 15o C) para mantenerlas en condiciones de frío durante su traslado al
laboratorio, donde se almacenaron a 5o C hasta su procesamiento y análisis por separado, al
siguiente día. Del mismo modo, se recolectaron cadáveres de insectos e introdujeron en
recipientes de plástico de 100 cc, adicionando suelo de los sitios inspeccionados, mismos que se
trasladarán al laboratorio donde se colocarán en cámara húmeda, para observar las causas de su
muerte y la posibilidad de una infección natural por nematodos entomopatógenos, después de 3-4
días se inspeccionaron para observar la emergencia de los mismos (Choo, 1996; Nguyen, 1999).

Aislamiento de los nematodos entomopatógenos

Con la finalidad de detectar la presencia de los nematodos entomopatógenos, el
aislamiento de estos se realizó mediante la técnica de Beeding y Akhurst (1975). Las muestras de
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suelo se tamizaron, y una cantidad de 300 g se colocó en un recipiente de plástico de 500 ml,
humedeciendo la muestra obtenida. Enseguida a cada contenedor se agregaron cinco larvas del
último estadio de G. mellonella, los cuales se taparon, invirtieron y etiquetaron permaneciendo a
temperatura ambiente (25±3o C) durante siete días (Stock et al., 1999).

Después del período de incubación las larvas se recuperaron para su examinación. Los
cadáveres se recolectaron, los cuales se lavaron con agua destilada estéril, y se desinfectaron
superficialmente por inmersión en hipoclorito de sodio al 0.1% durante 30 segundos, después se
pasaron tres veces en recipientes con agua destilada estéril (Woodring y Kaya, 1988). Enseguida,
se colocaron dentro de una caja de petri (60 x 15 mm) sobre un papel filtro Wartman No. 2.
Después de 2 a 3 días en la caja de Petri los cadáveres que mostraron signos y síntomas
característicos de infecciones por nematodos entomopatógenos (Poinar, 1979), se examinaron
bajo un microscopio estereoscópico American Optical, para comprobar la presencia de
steinernematidos y heterorhabditidos (Poinar, 1979; Hominick y Briscoe, 1990). Posteriormente,
para recolectar los juveniles infectivos que emerjieron de los cadáveres, se transfirieron e
incubaron en trampas de White (1929) modificada, que consistió en una caja de petri (60 mm de
diámetro) invertida, colocada dentro de otra caja de Petri (100 x 15 mm), donde los cadáveres de
G. mellonella, se colocaron sobre un papel filtro Wartman del No. 2 situado sobre la caja de Petri
cubierta (60 mm), agregando 5 ml de agua destilada estéril a cada caja (100 x 15 mm). Los
cadáveres permanecieron en la trampa por una semana, para que los juveniles infectivos
emerjieran y migraran dentro del agua.

Patogenicidad de los nematodos

Para determinar la patogenicidad de los nematodos entomopatógenos aislados, ésta se
verificó por medio de los postulados de Koch (Pelczar et al., 1977). Los juveniles infecciosos
aislados de las trampas de White, se colectaron durante los tres primeros días (Nguyen y Smart,
1995), los cuales se expusieron en una caja de petri (100 x 15 mm) para reinfectar otro grupo de 5
larvas frescas de último estadio de G. mellonella, para asímismo, estabilizar cultivos en el
laboratorio (Rueda et al., 1993; García y Palomo, 1996), confirmar su patogenicidad y de éste
modo comprobar los postulados de Koch.
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Determinación de los nematodos entomopatógenos

Los nematodos aislados se identificaron al nivel de género con base a la patogenicidad,
por la sintomatología que manifestaron los cadáveres, de acuerdo a la coloración de los insectos
infectados, que a menudo son flácidos y de color anaranjado, amarillo o castaño (Steinernema),
rojo pardusco o rojo enladrillado con una débil luminiscencia en la obscuridad (Heterorhabditis)
(Poinar, 1979; Woodring y Kaya, 1988), y a través la diferenciación morfológica de algunas
características de los género (Nguyen, 1999). Posteriormente, los juveniles infecciosos que
emergieron durante los 2-4 días en la trampa de White, se conservaron en matraces de 250 ml en
agua destilada estéril, manteniendo los steinernematidos en refrigeración a 10o C mientras que los
heterorhabditidos a 15o C (Woodring y Kaya, 1988), para continuar con el análisis morfométrico,
con el fin de realizar su identificación al nivel de especie.

AVANCES DE INVESTIGACIÓN

Durante la inspección fueron aislados nematodos de las muestras de suelo, y de un

cadáver de insecto por infección natural. Los nematodos entomopatógenos fueron recuperados en
19 de las muestras de suelo y representan el 33% del total colectado y fueron encontrados en
diversos agrosistemas (Cuadro 1).

Cuadro 1. Existencia de nematodos entomopatógenos Steinernema (S) y Heterorhabditis (H)

asociados en cultivo de la región de estudio.

Municipio Alfalfa Maíz Manzano Frijol Vid Guayabo Caña de azúcar

Zacatecas S/H S S S
Villanueva S S/H
Apozol S/H H
Juchipila H H
Moyahua H H

Los nematodos entomopatógenos fueron encontrados en el suelo de la mayoría de los

agrosistemas de los municipios muestreados. El total de nematodos aislados del género
Steinernema fueron 18 mientras que de Heterorhabditis 12. Esta inspección demuestra la gran
distribución y diversidad existente, en donde la mayoría de los steinernematidos fueron más
comunes en las áreas templadas, y concuerda por lo reportado por Haukeland (1993), en tanto
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que los heterorhabditidos están más adaptados al medio ambiente cálido (Hara et al., 1991).
Además, como lo señalan Hominick y Briscoe (1990) la prevalencia de los heterorhabditidos
aislados sobre los steinernematidos en el clima cálido, los resultados de esta inspección apoyan su
hipótesis. Solamente se detectaron los dos géneros en ambos climas, en el cultivo de alfalfa y en
guayabo respectivamente, así como maíz en la zona de transición correspondiente al municipio
de Villanueva. Asimismo, no se recuperaron nematodos entomopatógenos de las muestras
colectadas en los cultivos de baja humedad del suelo o seco, hallazgo en concordania con Stock
et al. (1999). Debido a que estos nematodos entomopatógenos son altamente intolerantes a las
condiciones ambientales extremas, especialmente a la humedad y temperatura (Gaugler, 1981).
Esto sugiere que la temperatura es un factor importante para la supervivencia de los nematodos.

Por otro lado, Akhurst y Brooks (1984) indican que las diferencias en la distribución de
los nematodos entomopatógenos en varios países, pueden reflejar la disponibilidad de insectos
hospederos satisfactorios, aunque la influencia ambiental como el tipo del suelo, también puede
determinar su distribución. De igual forma, Mrácek y Webster (1993) señalan que la mayoría de
los nematodos, existen en los sitios donde el impacto humano sobre la naturaleza ha sido
substancial, en éste caso las tierras cultivadas, en las cuales una parte del ciclo de vida de los
insectos plaga transcurre en el suelo, y en donde también daños visibles en el follaje son comunes
en los cultivos y frutales establecidos en la región de estudio. La existencia de Steinernema y
Heterorhabditis en los cultivos muestreados, puede ser atribuida al hecho de que plagas tales
como moscas de la fruta (Anastrepha striata), picudo de la guayaba (Conotrachelus dimidiatus) y
el temolillo (Cyclocephala lunulata) consideradas las plagas de mayor importancia, y larvas de
otros coleópteros y lepidópteros de hábitat cripticos, son susceptibles a los nematodos
entomopatógenos, mismas que probablemente pueden ser las responsables de mantener las
poblaciones de los nematodos en estos hábitats.

Respecto al aislamiento encontrado en esta inspección en el cadáver de una ninfa de

chapulín (Brachystola magna) por infección natural, fue recuperado en cultivo de alfalfa, en el
municipio de Villanueva. Posiblemente, la especie corresponda a Steinernema scapterisci, dada
su patogenicidad a orthopteros, su hospedero natural, y por la comprobación de los postulados de
Koch con ejemplares de chapulines y grillos caseros mediante reinfección en laboratorio. Sin
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embargo, es necesario corroborar su análisis morfométrico para determinar que dicha especie
coincide por la descrita por Nguyen (1995).

Esta inspección provee información básica y los resultados servirán para futuros estudios,
con respecto a la identificación de especie de Steinernema y Heterorhabditis aislados mediante
caracterización morfométrica, y correlacionar la incidencia y distribución de nematodos aislados,
con los factores físico ambientales de los agrosistemas inspeccionados.

LITERATURA CITADA

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