Escuela de salud

Guía practico laboratorio:

RECONOCIMIENTO Y USOS DE
EQUIPOS DE LABORATORIO/
TINCIONES

DIRIGIDO A:
Alumnos primer año Técnico de Laboratorio Clínico Banco de Sangre en Imagenología.

DOCENTE ENCARGADO:

Jennifer Cumming

INACAP

Escuela de salud
 Introducción.

El trabajo de laboratorio, sea éste clínico, de investigación, de biología molecular, de

patología, u otro tipo requiere del uso de una gran cantidad de materiales de diversos
tipos: material volumétrico, instrumentos de análisis, equipos para centrifugación,
equipos de calor y frío, etc. El conocimiento de estos materiales es fundamental al
momento de desempeñar funciones al interior del laboratorio, tanto para los
profesionales como para el personal auxiliar que colabora. En este paso practico nos
enfocaremos a conocer y comprender el funcionamiento de algunos equipos de
laboratorio, dando énfasis al microscopio óptico, autoclave, centrifuga, baño
termorregulador y estufa.

Además conoceremos como se realiza la tinción diferencial de Gram, sus componentes y

observación macroscópica y microscópica.

Objetivos:

Al finalizar el taller el alumno será capaz de:

1. Conocer el funcionamiento y uso de los distintos equipos de laboratorio
2. Realizar paso a paso tinción de Gram
3. Diferenciar las características generales de los microorganismos según su tinción.
4. Trabajar en forma ordenada y limpia
5. Trabajar con un lenguaje científico, de uso muy habitual.

Equipos de laboratorio

Microscopio: El microscopio óptico es un instrumento de precisión que permite ampliar la

imagen de los objetos que no son visibles para el ojo humano. En el microscopio, la luz
atraviesa de abajo a arriba el objeto a estudiar. Para ver con el microscopio un objeto,
éste debe ser lo más fino posible. Si no lo atraviesa la luz se verá sólo un grumo deforme y
opaco. Tiene un límite resolución de cerca de 200 nm (0.2 μm), es decir la distancia
mínima a la que se pueden ver dos objetos separados. Este microscopio utiliza luz visible.
Las células observadas bajo el microscopio óptico pueden estar vivas o fijadas y teñidas.
Las muestras son depositadas en una lámina de vidrio denominada PORTAOBJETO, de
unos 5 cm de largo por 2 cm de ancho. En el lugar del portaobjetos donde se puso la
muestra puede, además, ponerse una laminilla muy fina de vidrio llamada CUBREOBJETO.
Los oculares proporcionan diez aumentos de la imagen, y viene expresado x10 en la
carcasa del ocular. También los hay x20. Los objetivos (generalmente cuatro), suelen tener
aumentos de x4, x10, x40 y x100. La ampliación de la imagen resultante al multiplicar los
aumentos que proporciona el ocular y el objetivo serán de 40, 100, 400 y 1000 aumentos.

a) Sistema óptico:

Ocular: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
Objetivo: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta. Sus aumentos
de menor a mayor son 4x, 10x, 40x, 100x. Si se utiliza el aumento 100x es necesario
agregar a la preparación aceite de inmersión, cuya función es evitar la dispersión de los
rayos luminosos.

Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.

Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

b) Sistema mecánico:

Soporte: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.

Platina: Lugar donde se deposita la preparación.

Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular.

Revólver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.

Tornillos de enfoque: El Tornillo Macrométrico que aproxima el enfoque y el Tornillo

Micrométrico que consigue el enfoque correcto

Autoclave: El calor húmedo destruye los microorganismos por coagulación de sus

proteínas celulares. El principal método de esterilización que emplea calor húmedo es la
esterilización por vapor a presión. La esterilización por vapor a presión se lleva a cabo en
un autoclave. Estos equipos emplean vapor de agua saturado, a una presión de 15 libras lo
que permite que la cámara alcance una temperatura de 121ºC. El tiempo de esterilización
usualmente es de 15 minutos, sin embargo, en algunas oportunidades, dadas las
características del material, es necesario variar el tiempo de esterilización.
Cuando se utiliza este método es importante controlar en el autoclave la relación entre la
temperatura, la presión y el tiempo de exposición, ya que éstos son factores críticos en el
proceso. Sólo cuando el vapor se coloca bajo presión, es cuando su temperatura aumenta
por encima de los 100ºC y esto permite alcanzar las temperaturas de esterilización
(121ºC). Entre las ventajas de este método de esterilización tenemos que no deja
residuos, los autoclaves modernos son sencillos de manejar y es un método rápido de
esterilización. Éste es el método de elección para esterilizar materiales termoestables.
Entre sus desventajas están que no permite la esterilización de materiales sensibles al
calor y materiales no miscibles con el agua como es el caso de polvos, aceites y grasas.

Centrifuga: La centrifugación es un método de separación de partículas, que se basa

en la distinta velocidad de desplazamiento de éstas en un medio líquido al ser
sometidas a un campo centrífugo. Cuando se centrifuga una solución, ésta se separa
en sus componentes sólidos y líquidos, lo cual está directamente relacionado con la
masa de las sustancias. Las primeras partículas en sedimentar son las de m ayor masa.
La velocidad de una centrífuga se mide en rpm (revoluciones por minuto). La
velocidad está relacionada con el radio del rotor de la centrífuga. Para obtener los
resultados esperados de una centrifugación se debe considerar la velocidad y el
tiempo de centrifugación. En una muestra centrifugada se diferencian dos zonas:

Sobrenadante: es la parte líquida de la muestra que queda en la parte superior del

tubo.

Pellet o sedimento: es la porción, generalmente sólida, que se deposita en el fondo

del tubo.

En Clínica se utilizan como muestras la orina o la sangre de pacientes, donde se

realizan determinaciones físicas, biológicas, bioquímicas u hormonales. Dependien do
del estudio y de la muestra sangre u orina, el producto que se utilice después de la
centrifugación puede ser el sobrenadante (suero, plasma) o el sedimento o pellets,
formado por los elementos que se han ido al fondo del tubo (células, cristales).
Baño termorregulador: Se utiliza para calentar a una temperatura no mayor que el
punto de ebullición del agua. Es un baño de maría metálico.

Estufa: Permiten el calentamiento y desecación de sustancias. Otras se utilizan como

estufas de incubación para estudios microbiológicos.

Tinciones.

Materiales:

 Mechero de Bunsen
 Asa bacteriológica
 Kit de tinción de Gram
 Portaobjetos
 Varillas de vidrio (soporte)
 Pizeta
 Muestra: Proporcionada
 Aceite de inmersión
  Guantes
 Uniforme
 Cuaderno de croquis

Fundamento:

La tinción de Gram es una técnica diferencial comúnmente empleada en el diagnóstico

microbiológico, fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. La mayor parte de las
muestras sometidas a examen cuando se sospecha infección bacteriana deben ser
extendidas en frotis sobre portaobjetos, teñidas y examinadas en el microscopio. Los
reactivos empleados en la tinción de Gram son:

 Cristal violeta (colorante básico)

 Lugol (mordiente)
 Alcohol acetona (decolorante)
 Safranina o fucsina (colorante de contraste)

Técnica Tinción de Gram:

1.- Cubrir la preparación con cristal violeta o violeta durante 1 minuto.

2.- Decantar el colorante y lavar suavemente con agua

3.- Cubrir con Lugol por 1 minuto lavar suavemente con agua

4.- Decolorar con alcohol-acetona. Hasta que la preparación deje de perder color (30
segundos).

5.- Cubrir con fucsina o safranina por 30 segundos.

6.- Remover suavemente el exceso con agua corriente.

7.- Drenar el frotis y secarlo al aire en posición vertical o con papel filtro.

8.- Limpiar el reverso.

9.- Examinar al microscopio