UNIVERSIDAD PERUANA UNIÓN

FACULTAD DE INGENIERÍA Y ARQUITECTURA

EAP Ingeniería Ambiental

PRACTICA N° 3

TINCION DIFERENCIAL GRAM Y TINCION DIFERENCIAL ACIDO

RESISTENTE

Trabajo presentado en cumplimiento parcial de

Microbiología Ambiental.

Autores:

Soledad Torres Calderón

María Carla Román Santa Cruz
Deysi Érica Laura Pezo

Grupo: 2

Profesora:

Ing. Álvarez Loli Jenny Ebenith

Lima, 07 de Abril del 2015

I. FUNDAMENTACION TEORICA

1.1 Tinción Gram

Para (Garcia, 2010) La tinción diferencial de Gram consiste, básicamente en teñir el

frontis, fijado al calor, con un colorante llamado cristal violeta, y después de lavado con

agua, tratarlo sucesivamente con una solución de lugol (yodo más yoduro de potasio), un

agente decolorante como el alcohol o una mezcla de alcohol y acetona y, por último, con

un colorante de contraste como la safranina.

La reacción a la tinción de Gram está basada en la diferencia en la composición

química de la pared celular bacteriana, las bacterias Gram-positivas tienen una gruesa

capa de peptidoglicano o mureína, mientras que esta capa es más fina en las Gram-

negativas y está rodeada por una bicapa lipídica externa.

El peptidoglicano es un polisacárido formado por dos subdivisiones química, N-

acetilglucosamina y acido N- acetilmuramico.

Es fundamental tener claro la base teórica y química acerca de la tinción diferencial,

Según (Martos, Barrio, & Salido, 2012) la tinción diferencial requiere el uso de al menos

3 reactivos químicos que se aplican en secuencia a un frontis fijado por el calor, como

muestra la tabla 1.

Tabla 1
REACTIVOS Función

Primario Colorante Primario Imparte color a todas las

células.

Secundario Agente decolorante Decolora la célula completa o

solo parte de ella.
 Final Colorante de Contraste Le da a las células
decoloradas un color que
contrasta con el del colorante
primario, el colorante de
contraste no es absorbido por
células que no han perdido el
colorante primario.

Título: Reactivos que se emplean para la tinción Gram. Fuente: Creación propia.

1.1.1 Tinción Primaria: Se utiliza Cristal Violeta, que tiñe todas las células moradas.

1.1.2 Mordiente: Yodo o lugol. El yodo, aparte de matar bacterias, incrementa la afinidad

del colorante primario con la célula, formando complejos insolubles con este. El complejo

cristal violeta-yodo sirve para intensificar el color del tenido.

1.1.3Agente decolorante: Se utiliza el alcohol etílico al 95%.ya que el etanol tiene doble

función: Deshidratante de proteínas y solvente de lípidos. El alcohol disuelve los lípidos de

la parte externa de la pared celular Gram- negativa, haciendo la pared más porosa, de esa

forma el complejo Cristal violeta-yodo es removido en la capa de mureina más fina de las

bacterias Gram-negativas, mientras que la pared más gruesa de las Gram- positivas retiene el

tinte en su interior.

1.1.4 Tinción de Contraste: Safranina. Este tinte se utiliza para teñir de rojo las células

previamente decoloradas, o sea, las Gram –negativas.

1.2 Bacterias Gram - positivas

Posee una pared celular gruesa que consta de varias capas y está formada

principalmente por peptidoglucano (150 a 500 A) que rodea la membrana citoplasmática,

este es un exoesqueleto en forma de malla con una función semejante a la del exoesqueleto

de los insectos.

1.2 Bacterias Gram- Negativas

La pared celular de las bacterias Gram-negativas está compuesta por una capa delgada

o por muy capas que sean de peptidoglucano y solo posee una membrana externa. (Tortola,

Funke, & Case, 2007)

Figura1.

Título: La morfología de las bacterias según la tinción Gram Fuente: (Murray, Rosenthal, &
Pfaller, 2009)

La fig.1 muestra que las bacterias Gram-positivas, el cristal violeta de la tinción de

Gram es fijado por la solución yodada y atrapado en la gruesa capa de peptidoglucano. El

decolorante se disemina por la membrana externa Gram- negativa y elimina el cristal violeta

de la capa delgada del peptidoglucano, por ello las bacterias Gram-negativos se visualizan

mediante el colorante de contraste rojo.

Las bacterias Gram positivas retienen el Cristal violeta, y por lo tanto, se ven de un

color violeta intenso; las Gram negativas, que pierden el color violeta con el agente

decolorante, toman un color rojo al teñirse con la safranina.

II. ANEXOS
2.1 procedimiento

Fig. 1. Dispersión de los Fig. 2. Agregado de Cristal Violeta Fig. 3. Agregado de Lugol
microorganismos

Se le agrega Cristal de Violeta En esta fase se le cubre la

Los microorganismos de la leche
dejando que actué por 1 minuto película teñida con Lugol, dejar
que han sido cultivadas son
luego se le enjuaga con agua que actué por 1 min y luego
dispersados en la lámina
destilada. enjuagar con agua.
portaobjeto.

Fig. 4. Agregado de Alcohol Fig. 5. Agregado de Safranina

Decolorar la película con alcohol

Cubrir el colorante de contraste
dejando que actué durante 15 seg.
con Safranina dejando por 1min.
Pasado el tiempo indicado
Al pasar el tiempo indicado
enjuagar con agua.
higienizar con agua.
2.2. Resultados
Fig. 6. Resultados de proceso de preparación

Finalmente obtenemos el cubreobjetos con

los microorganismos listas para ver en el
microscopio los Gram Positivos y los Gram
Negativos.

Figura 10. Bacterias del agua de la Mansión

Estreptobacilo
s os s
En la Figura 10. Es posible observar
bacterias con forma de bacilo (en forma de
Bacilos barra o vara) y de color rosadas, esto indica
que son bacterias Gram negativas. Esta
coloración recibe debido a que en sus paredes
celular delgada de peptidoglicano.
Coco La menor parte se encuentan los cocos.

Figura 9. Bacterias del yogurt

III. DISCUSION

Según (Forbes, Sahm, & Weissfeld, 2007) La diferencia entre las bacterias Gram-

Positivas y las negativas es en la composición de las paredes de las células, la primera

contienen una capa gruesa de peptidoglucano con numerosos enlaces cruzados de ácido

teicoico, y las paredes de las células Gram-negativas, en las que la capa de

peptidoglucano es más delgada ello explica las diferencias de tinción de Gram entre estos

dos grupos principales de bacterias; Sin embargo no solo esas son las únicas diferencias,

(Ingrahan, Wheelis, Painter, & Stanier., 1992) Menciona que las Gram - negativas son

flagelos polares y las Gram - positivas son más sensibles a los antibióticos que las Gram

negativas.
IV. CONCLUSIÓN
Las bacterias Gram positivas son de color violeta y las de color rojizo las Gram
negativas, las primeras poseen una capa peptidoglucano gruesa y de la segunda es
delgada.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Forbes, Sahm, & Weissfeld. (2007). Diagnostico Microbiologico. España: Panamericana.

Garcia, V. (2010). Introduccion a la Microbiologia. Mexico: Reverte.
Ingrahan, J. L., Wheelis, M. L., Painter, P. R., & Stanier., R. Y. (1992). Microbiologia.
Barcelona: Reverte.
Martos, P. G., Barrio, M. T., & Salido, F. P. (2012). Microbiologia Clinica Practica.
Mexico: Copyright.
Murray, P. R., Rosenthal, K. S., & Pfaller, M. A. (2009). Microbiologia Medica. España:
Barcelona.
Tortola, Funke, & Case. (2007). Introduccion a la Microbiologia Ambiental. Argentina:
Panamericana.