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SENA REGIONAL MAGDALENA MANUAL DE PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTANDAR Fecha: Abril de 2018

AREA: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Edición 1


TITULO: TINCIÓN DE GRAM Nº LMA 01
TECNOLOGO EN CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOS Página 1de 2

1. Objetivo
Realizar la técnica de Tinción de Gram para determinar según la pared celular de bacteria, cual es Gram (+) y cual era Gram (-)

2. Alcance
Laboratorio de microbiología de alimentos de la Planta de Procesamientos de Alimentos de Gaira.

3. Responsabilidad
Será responsabilidad de los aprendices e instructor encargados del Laboratorio de Microbiología de Alimentos.

4. Frecuencia
Se realizará cada vez que se aplique una técnica para análisis microbiológico.

5. Contenido

5.1 Fundamento
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias
, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en 1884 1.
Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la
diferenciación bacteriana, considerándose bacterias Gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gramnegativos a
las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.

222 Procedimiento para la preparación (Metodología)

 Extensión:
En un porta bien limpio (con alcohol, papel de filtro y flameado) se coloca una gota de agua destilada a la que con el asa de
siembra, previamente esterilizada a la llama, se lleva una pequeña cantidad de suspensión de bacterias o, en su caso, de una
colonia.
 Con el asa se extiende la gota y las bacterias sobre el porta y se fija la extensión por el calor, calentando suavemente a la llama
del mechero hasta que se seque.

2. COLORACIÓN

1. Aplicar Cristal Violeta – Este colorante tiene la función de colorear inicialmente la pared celular (Dejar actuar
por 1 minuto y enjuagar con agua normal).
2. Aplicar Lugol – Este colorante fija el cristal violeta o colorante Inicial ( Dejar actuar por 1 minuto y enjuagar con
agua normal).

3. Aplicar Alcohol Acetona – Retira el exceso de colorante (Dejar actuar por 30 segundos y enjuagar con agua normal).
ELABORADO POR: REVISADO POR: APROBADO POR:
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Lilia María Corrales Lopesierra Elisa Ribón Rinaldi Tatiana Linero Roa
SENA REGIONAL MAGDALENA MANUAL DE PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTANDAR Fecha: Abril de 2018
AREA: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Edición 1
TITULO: TINCIÓN DE GRAM Nº LMA 01
TECNOLOGO EN CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOS Página 1de 2

4. Aplicar por último Fucsina o Safranina – Colorante de contraste (Dejar actuar por 1 minuto y enjuagar con agua
normal).

Nota: se seca suavemente y sin frotar con papel de filtro, una vez que la preparación está totalmente seca, poner una
gota muy pequeña de aceite de inmersión y observar al microscopio con el objetivo de inmersión. Debe utilizarse el
objetivo de inmersión (Lente de 100x). Se coloca una gota de aceite de cedro sobre la preparación. Se enfoca,
preferentemente, con el micrométrico.

Después de utilizar el objetivo de inmersión debe limpiarse con papel de arroz para evitar que se acumule
residuos de aceite

Observaciones realizadas: anótalas en tu cuaderno ¿Qué forma tienen las bacterias observadas? ¿Las bacterias aparecen
aisladas o agrupadas? En caso de que aparezcan agrupadas indicar el tipo de asociación. Indica tipo de Gram.

22 Seguridad del operario:


Bata, gorro, tapabocas, polainas y guantes estériles

22 Materiales:

 Cultivo Microbiano
 Asa Bacteriológica
 Portaobjeto
 Mechero
 Cristal Violeta de Gram
 Lugol de Gram
 Alcohol Acetona
 Fucsina o Safranina
 Aceite de Inmersión
 Microscopio

ELABORADO POR: REVISADO POR: APROBADO POR:


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Lilia María Corrales Lopesierra Elisa Ribón Rinaldi Tatiana Linero Roa

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