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Bioremediation of petrochemicals sludges by native microflora in an oxisol at the Lagunillas Municipality, Zulia
State, Venezuela
Departamento de Ingeniera Suelos y Agua. Facultad de Agronoma. Universidad del Zulia. Maracaibo.
Venezuela. E-mails: ichirinos3@gmail.com y miguellarreal@cantv.net Autor para correspondencia
Recibido: 25/03/2009 Fin de arbitraje: 26/07/2009 Revisin recibida: 28/12/2010 Aceptado: 30/12/2010
RESUMEN
Con el fin de evaluar el proceso de degradacin de lodos petroqumicos ricos en hidrocarburos, se realiz un trabajo de
investigacin en un oxisol del municipio Lagunillas del estado Zulia. Se disearon parcelas de 1m x 2m, con una separacin
entre parcela de 50 cm, y una altura de borde de 40 cm. El lodo fue adicionado en dosis crecientes de 0, 5, 7,5 y 10 L*m-2
con cuatro repeticiones. En este experimento no se aplic ningn tipo de fertilizante mineral ni orgnico. La poblacin
bacteriana total, Pseudomonas y Alcaligenes fueron evaluadas mensualmente, hasta los 150 das. La degradacin de los
hidrocarburos, tanto aromticos como saturados o alifticos, se evalu a los 30, 120 y 300 das, determinando el % de
remocin de los mismos. Los resultados mostraron que las bacterias del gnero Alcaligenes se desempearon mejor y se
adaptaron de manera aceptable ante las condiciones de alta concentracin de hidrocarburos al contrario de las Pseudomonas.
La degradacin de hidrocarburos fue ms rpida en aromticos que en alifticos, debido a la volatilidad de los primeros.
ABSTRACT
In order to evaluate degradation process of hydrocarbons in petrochemicals sludge was made an investigation in an oxisol
soil at the Municipality Lagunillas at the Zulia state. Designed plots with 1m x 2m as dimensions, 50cm between plots and
40 cm of height. Sludge was aggregated in crescents doses (0.0, 5.0, 7.5 and 10.0 L*m-2) and 4 replications. No mineral and
organic fertilizer was used. The total bacterial population, Pseudomonas and Alcaligenes was evaluated every month, till
150 days. Hydrocarbons degradation, aromatic and aliphatic, was evaluated at 30, 120 and 300 days, determining their
degradation %. The results showed that the Alcaligenes bacterial was better to degrade hydrocarbons than the Pseudomonas
bacteria. Aromatic hydrocarbons degradation was more rapid than aliphatic hydrocarbons, due to the aromatic volatility.
C.I.C C.I.C
Profundidad Bases intercambiables (cmol*kg-1) H
NH4 AcO Suma
(cm) (cmol*kg-1)
Ca Mg Na K Total (cmol*kg-1) (1) (cmol*kg-1) (2)
0-24 0,53 0,07 0,19 0,31 1,10 2,0 7,50 4,54
24-45 0,50 0,10 0,15 0,11 0,86 2,0 5,62 4,66
45-75 0,25 0,23 0,17 0,11 0,76 1,8 5,62 4,18
75-124 0,28 0,12 0,15 0,18 0,73 2,0 5,00 4,53
Unidades Formadoras de Colonia en muestras de 50 g por debajo de las 50.000 UFC*g-1 para las dosis de
de mezcla suelo-lodo cada gramo de suelo (UFC*g-2), 7,5 y 10 L*m-2.
tomando 1 mL de cada fiola para realizar diluciones
seriadas en solucin salina al 0,85% hasta 106 Esto segn Siqueira, (1988), se explica por las
diluyendo 10 mL en 90 mL de agua y sembrando diferentes transformaciones debido a las reacciones
100 L de cada dilucin en placas de agar nutritivo. qumicas por las que pasan los compuestos orgnicos
Los cuales se incubaron por 24 h a 30 C, despus de en el suelo, entre las cuales se conocen: Conjugacin:
lo cual se cuantificaron las colonias bacterianas en las cuando el sustrato se torna ms complejo por la
placas que contenan entre 30 y 300 colonias. adicin o acomplejamiento con metabolitos
microbianos, pudindose tornar ms recalcitrante y
El muestreo de suelo para la determinacin de ms txico. Activacin: es la conversin, por accin
los hidrocarburos aromticos y saturados se realiz a enzimtica, del sustrato no txico a una molcula
los 30 das de iniciado el ensayo, luego a los 120 das txica.
y el ltimo muestreo se efectu a los 300 das,
colocando la muestra en envases refrigerados para Dado que el ensayo fue realizado en un suelo
evitar la prdida de estos compuestos por de reaccin cida (Cuadro 1), esto demuestra que
volatilizacin y/o desnaturalizacin. El anlisis de las adems de los compuestos txicos derivados de las
muestras se realiz mediante el mtodo de extraccin reacciones de degradacin inicial, se suma el efecto
con cloroformo y determinacin gravimtrica del limitante del factor pH, ya que la mayora de los
hidrocarburo extrado. La fraccin saturada y la microorganismos, especialmente las bacterias se ven
aromtica fueron diluidas con hexano y benceno, limitadas y afectadas por la acidez del suelo (Atlas y
respectivamente, la determinacin se obtuvo por Bartha, 2002).
colorimetra para aromticos y cromatografa de gases
para saturados, segn metodologa establecida por la Por otro lado, es importante resaltar el hecho
Agencia Americana de Proteccin Ambiental de que la poblacin bacteriana total, disminuye
(Rudolph, et al., 2002). No se muestran las drsticamente para la dosis 0 (cero) a pesar de no
concentraciones obtenidas por cromatografa debido a estar afectada por el lodo, lo cual tiene su explicacin
la prohibicin expresa de la empresa PEQUIVEN, por en la falta de nutrimentos debido a que el ensayo se
lo que slo se expresan en porcentajes de remocin. dise para realizarse sin fertilizacin, y al disturbar
el suelo dejndolo sin cubierta vegetal, se afecta la
RESULTADOS Y DISCUSIN condicin original del mismo desmejorando su
calidad como sustrato, mermando la poblacin
Poblacin bacteriana bacteriana, acentuada a partir de los 60 das de
iniciado el experimento.
Los resultados obtenidos en cuanto a
poblacin bacteriana, parmetro importante en la Entre los gneros de bacterias especficas
evaluacin de la biorremediacin, muestran segn la para degradar hidrocarburos se encuentra las
figura 1, el comportamiento como se describe a Pseudomonas, cuya poblacin tuvo un
continuacin: comportamiento similar a la poblacin total (Figura
2), disminuyendo su nmero a partir de los 30 das a hace candidatos para el tratamiento de terrenos
niveles de menos de 400 UFC*g-1 para la dosis de 5 contaminados con estos productos. Sin embrago, su
L*m-2 y menos de 200 UFC*g-1 para las dosis de 7,5 poca abundancia se convierte en una desventaja para
y 10 L*m-2. su aplicacin (Nannipieri et al., 2001). Este es un
factor limitante y explica su baja poblacin en
El gnero Pseudomonas, ha sido identificado condiciones naturales del suelo (< 50 UFC*g-1 ).
histricamente como degradador de gran cantidad de
sustratos como el n-hexadecano, mineralizacin de Al analizar los resultados de poblaciones
compuestos alifticos en condiciones anaerbicas y bacterianas, totales, Pseudomonas y Alcaligenes, la
degradador de hidrocarburos aromticos y poli sumatoria de estos ltimos gneros debera ser
aromticos, as como del pireno en estudios in vitro bastante aproximada a la poblacin total, en este caso,
(Fan et al., 2000, Braker et al., 1998). De acuerdo la poblacin total es cientos de veces mayor que dicha
con los resultados de la Figura 2, las Pseudomonas sumatoria. La explicacin a este fenmeno radica en
representan un gnero susceptible a la acidez del que cuando se determina la poblacin total de
sustrato y a la toxicidad debida a la presencia de bacterias se incluyen gneros menos importantes en la
compuestos recalcitrantes como hidrocarburos degradacin de hidrocarburos que no son
aromticos y saturados contenidos en el lodo. identificados o tomados en cuenta tales como:
Corynebacterium, Bacillus, Acinetobacter,
Comportamiento opuesto mostr el gnero Rhodococcus, Agrobacterium, Flavobacterium,
Alcaligenes cuya poblacin, aunque no muy Micobacterium, etc.
numerosa, registr un incremento a partir de los 60
das de iniciado el ensayo, en los tratamientos de 5, La disminucin drstica de la poblacin
7,5 y 10 L*m-2, no siendo as para el testigo o bacteriana a partir de los 60 das de iniciado el ensayo
tratamiento 0 (Figura 3). se debe, adems de los aspectos mencionados
anteriormente a la baja fertilidad del suelo y al
Segn la Figura 3 a partir de los 120 das la agotamiento de los pocos nutrimentos existentes en el
poblacin de Alcaligenes registra un comportamiento mismo.
exponencial, lo que hace pensar que manteniendo los
niveles de sustrato rico en carbono en el suelo, se Segn la figura 3 a partir de los 120 das la
alcanzara en cualquier momento una poblacin poblacin de Alcaligenes registra un comportamiento
elevada lo cual garantizara la degradacin de los exponencial, lo que hace pensar que manteniendo los
componentes orgnicos dispuestos en el suelo. niveles de sustrato rico en carbono en el suelo, se
Resultados similares obtuvieron Daz Borrego et al., alcanzara en cualquier momento una poblacin
(2005) quienes trabajaron con Pseudomonas y elevada lo cual garantizara la degradacin de los
Alcaligenes en sustratos formados por Antraceno y componentes orgnicos dispuestos en el suelo.
Naftaleno, sin suelo. Resultados similares obtuvieron Daz Borrego et al.,
(2005) quienes trabajaron con Pseudomonas y
Alcaligenes han mostrado capacidad para Alcaligenes en sustratos formados por Antraceno y
degradar hidrocarburos de petrleo (TPH), lo que los Naftaleno, sin suelo.
Figura 2. Poblacin de Pseudomonas vs. Dosis de lodo y Figura 3. Poblacin de Alcaligenes vs. Dosis de lodo y
tiempo. tiempo.
Revista Cientfica UDO Agrcola 10 (1): 133-140. 2010 137
Chirinos et al. Biorremediacin de lodos petroqumicos mediante el uso de la biota microbiana autctona en un Oxisol
Esto pudo deberse a mltiples factores, entre Estos compuestos por ser de cadenas abiertas
ellos: efecto de una baja actividad microbiana durante no cclicas son generalmente ms fciles de degradas
ese perodo para dicho tratamiento, efecto bordura, que los aromticos (cclicas). Sin embargo, el cuadro
etc. 4 muestra que al final del experimento se alcanz una
degradacin que vari entre 70 y 78 %.
Orientados en el mismo objetivo, Bracho et
al., (2004), aislaron 37 cepas bacterianas capaces de A diferencia de los aromticos, los
degradar hidrocarburos aromticos, entre ellas hidrocarburos saturados, en este caso no fueron
bacterias del gnero Pseudomonas y Alcaligenes, y degradados totalmente debido a que ellos no tienen la
lograron la degradacin total de hidrocarburos propiedad de ser voltiles, caracterstica de los
aromticos policclicos como el naftaleno y el aromticos que se ve acentuada y elevada en
antraceno y en un 78,57% se degrad el fenantreno. condiciones de altas temperaturas, siendo este aspecto
lo que explica el hecho de que los aromticos fueron
Por otro lado, Xiaojun et al., (2008), degradados totalmente y los saturados no.
trabajaron sobre degradacin de hidrocarburos
policclicos aromticos en un suelo limoso (63% de Daz Borrego et al., (2005), estudiaron en
limo), empleando combinaciones de hongos y condiciones de laboratorio, usando bacterias del
bacterias y poblaciones aisladas de bacterias, gnero Pseudomonas, Bacillus, etc, la degradacin de
obteniendo mayor degradacin con el uso de hidrocarburos saturados del petrleo, en medios y
bacterias, registrando un mayor % de degradacin el sustratos minerales y obtuvieron que los
benceno y el antraceno (64,5% y 84,5% hidrocarburos alifticos o saturados fueron
degradados totalmente y los aromticos apenas la zona donde se realiz el experimento, a pesar de
alcanz un 12,5% de degradacin y los hidrocarburos ser ms fciles de degradar los hidrocarburos
totales un 40,5% de degradacin. saturados o alifticos que los aromticos, con los
alifticos no se logr la degradacin total, debido a
En cuanto a la presencia de hidrocarburos la caracterstica de volatilidad de los aromticos.
tanto aromticos (Cuadro 3) y saturados o alifticos
(Cuadro 4) en el tratamiento 0 L lodo*m-2, esto se LITERATURA CITADA
debe al efecto de la volatilizacin y/o infiltracin en
el caso de los aromticos y a la infiltracin en el caso Atlas, R. M. 1981. Microbial degradation of
de los saturados. petroleum hydrocarbons: an environmental
perspective. Microbiol. Rev. 45: 180-209.
CONCLUSIONES
Atlas, R. M. y R. Bartha. 2002. Ecologa microbiana
La microflora autctona del suelo poseen la y microbiologa ambiental. Ed. Addison Wesley.
capacidad de biodegradacin de de los compuestos Madrid. 561 p.
hidrocarbonados contenidos en los desechos de
origen petroqumico. Benavides, L. J.; G. Quintero, V. A. Guevara, C. D.
Jaimes, R. S. Gutirrez y G. J. Miranda. 2006.
El efecto de los compuestos aromticos y Biorremediacin de suelos contaminados con
alifticos sobre la poblacin de bacterias, se hidrocarburos derivados de petrleo. Nova 4 (5): 82-
relaciona con el nivel de fertilidad y/o 90.
disponibilidad de nutrimentos en suelo, adems del
pH, factor que limita tanto la disponibilidad como Bracho, M.; D. Laugeny y S. Luz. 2004. Degradacin
la solubilidad de nutrimentos y la actividad sobre de hidrocarburos aromticos por bacterias aisladas
todo de las bacterias, cuyo rango de pH para su de suelos contaminados con petrleo en el estado
adaptacin es reducido. Zulia, Venezuela. Boletn del Centro de
Investigaciones Biolgicas 38 (3): 15-22.
La poblacin total de bacterias se ve afectada
drsticamente a partir de los 60 das de iniciado el Braker, G.; A. Fesefeldt and K. P. Witzel. 1998.
ensayo y es ms marcado cuanto mayor es la dosis Development of PCR primer systems for
de lodo petroqumico adicionado, el gnero amplification of nitrite reductase genes (nirK and
Pseudomonas se mostr muy sensible a la nirS) to detect denitrifying bacteria in
presencia de compuestos orgnicos de origen environmental samples. Applied and Environmental
petroqumico, siendo ms afectado cuanto mayor Microbiology 64 (10): 3769-3775.
fue la dosis de lodo adicionado, el gnero
Alcaligenes por el contrario tuvo un Bremner, J. M. 1996. Nitrogen-Total. p. 1085-1121.
comportamiento inverso a Pseudomonas y se In Sparks, D.L. (ed.). Methods of soil analysis. Part
adaptaron mejor ante la presencia de 3. Chemical methods. Soil Science Society of
contaminantes orgnicos y cuando disminuy la America Book Series 5. Amer. Soc. of Agron,
poblacin de Pseudomonas, la de Alcaligenes Madison, Wisconsin.
tendieron a incrementarse.
Chang, B.; L. Shiung and S. Yuan. 2002. Anaerobic
A partir de los 90 das, el aumento de la poblacin biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbon
de Alcaligenes fue directamente proporcional a la in soil. Chemosphere 48: 717-724.
dosis de lodo petroqumico, al contrario a lo
observado en la poblacin total de bacterias y en el Daniels, S. L. 1972. The adsorption of
gnero Pseudomonas. microorganisms on surfaces: a review. Dev. Ind.
Microbiol. 13: 211-253.
La degradacin de hidrocarburos aromticos se
logr totalmente a los 300 das de iniciado el Daz Borrego, L.; J. Dupontt, L. Atencio, X. Montiel
experimento, esta degradacin en parte se debi a y L. M. Soto Daz. 2005. Crecimiento de
las prdidas de los mismos en forma voltil, dadas Pseudomonas alcaligenes en antraceno y naftaleno
las condiciones de alta temperatura registradas en por recuento en placas y microscopa de