TCNICAS CROMATOGRAFICAS EN EL ANLISIS DE LOS

ALIMENTOS

Examen Final: Tcnicas Cromatogrficas en el Anlisis de Alimentos

Alumna: Mnica Serrano Abad

Problema 1.
Una muestra de un colorante natural obtenido de un extracto de vegetales posee un 70% de
transmitancia cuando se mide en una cubeta de 1 cm.
a) Calcular el % de Transmitancia para una disolucin de concentracin doble usando la
misma cubeta.

T0 = 70%
L=b= 1 cm
C0=C
Ca=2C

A=xbxC
A = Log 1/T

log 1/T = x b x C
-log T= x b x C

-log T0= x b x C0
-log Ta= x b x Ca

=> logTa / Log T0 = x b x Ca / x b x C0 = x b x 2C / x b x C =2

log Ta= 2 log T0

log Ta= 2 log 0,7 = log 0,72 = log 0,49 = -0,30980

=> T a=0,49 = 49%

b) Cul debe ser el tamao de cubeta necesaria para obtener tambin un 70% de
Transmitancia de la disolucin de concentracin doble?

Cb= Ca= 2C
Tb =T0 = 0,7

log 1/T = x b x C

log 1/Tb = x bb x 2C =>log 1/0,7 = x bb x 2C

log 1/T0 = x b0 x C =>log 1/0,7 = x bb x C

=> x bb x 2C = x b0 x C => b b = b0= x1= 0,5cm

c) Calcular la Absorbancia de la disolucin original media en una cubeta de 0.5 cm de

tamao.
A0 = Log 1/T
A0 = x b x C

=>A0 = x b0 x C0 = Log 1/T = Log 1/0,7 = 0,1549

Ac = x bc x C0

=> Ac / 0,1549 = x bc x Cc / x b0 x C0 = 0,5/1

=> A c = 0,5 x 0,1549 = 0,07745

Problema 2.
A 284 nm la vitamina K en etanol tiene un coeficiente de extincin molar de 1,6x10 4, mientras que el
de la vitamina E es de 6,3x102.

k = 1,6 x 104
E = 6,3 x 102

a) Calcular la Absorbancia de una disolucin 5x10-5M de vitamina K cuando se usa una cubeta de 1
cm.

A a = k x ba x Ca = 1,6 x 104 x 1 x 5 x 10-5 = 1,6 x 5 x 0,1 = 0,8

b) Qu concentracin de vitamina E tendremos si la Transmitancia es de 0,16 usando la misma

cubeta?

log 1/Tb = E x ba x Cb

=> C b= (1 / E x ba) log 1/Tb = (1 / 6300 x 1) log 1/0,16 = 1,263 x 10 -4 M

c)Calcular la Absorbancia correspondiente a una disolucin que contiene 1x10 -5 M de vitamina K y

4x10-4 M de vitamina E usando una cubeta de 2 cm.

A Tot = k x b x Ck + E x ba x CE = b(k x Ck+ E x CE) = 2 (1,6x104 x 1x10-5 + 6,3x102 x 4x10-4) =

= 2 ( 0,16 + 6,3 x 0,04) = 0,824

Problema 3.
Se realiz un anlisis de azcares por cromatografa de HPLC obteniendo el siguiente
cromatograma:
Pico tR (min) W (min)
No retenido 4,45
1 7.58 0,02
2 9.06 0,02
3 13,45 0,87
4 16.12 1,25

Calcular:
a) El nmero de platos tericos (N) de cada pico, el valor medio, as como la altura del plato
terico (H).

N= 16 [tR/w]2 =>

N1= 16 [tR1/w1]2 => N1 = 2.298.256

N2= 16 [tR2/w2]2 => N2 = 3.283.344
N3= 16 [tR3/w3]2 => N3 = 3824
N4= 16 [tR4/w4]2 => N4 = 2661

N medio = (N1 + N2 + N3 + N4)/4 = 1.397.021,2

H= L/N => L = 20cms

H 1= L/N = 4x10-7L = 8,7 x10 -6 cm

H 2= L/N = 3,10x10-7L = 6 x10 -6 cm
H 3= L/N = 2.6x10-4 L = 0,0052 cm
H 4= L/N = 3.8x10-4L = 0,075 cm

b) El Factor de capacidad o de retencin (K) de los 4 azcares. Justificar el significado de K

para cada uno de los azcares.

k' = (tR - tM) / tM

k'1 = (tR1 - tM) / tM = 0,7

k'2 = (tR2 - tM) / tM = 1,04
k'3 = (tR3 - tM) / tM = 2,02
k'4 = (tR4 - tM) / tM = 2,62

Los valores de k' obtenidos para estos azucares no son ni excesivamente pequeos (es decir
mucho menor que 1) ni tampoco excesivamente grandes (>10)

c) Teniendo en cuenta los datos de Sacarosa (3) y Maltosa (4), calcular la Resolucin (RS) y el
Factor de Selectividad ().

d) Qu tipo de detector se habr usado para este anlisis?

Problema 4.
En un laboratorio de control de calidad se quiere poner a punto un mtodo de anlisis por
HPLC en fase inversa de una mezcla de dos compuestos A y B. Se sabe que, en columna de
octadecil slice de 25 cm de longitud y utilizando una fase mvil de metanol-agua, los tiempos
de retencin son 6.25 y 7.10 min respectivamente, el tiempo muerto es 1.4 min y la resolucin
es 1.05.
a) Cul debe ser la longitud de la columna para conseguir una resolucin de 1.5?
b) Calcular los factores de retencin de A y B. Sern diferentes en la nueva columna?

Problema 5.
En la fabricacin de un producto comercial (lquido acuoso) adems del compuesto de inters,
A, se obtiene una impureza en una concentracin que es el 30% de la de A. En el proceso de
fabricacin se introduce una etapa de extraccin con un disolvente orgnico, con el fin de
extraer la impureza en ste.
En una experiencia piloto se fabrican 10 L del producto y se someten a la extraccin liquido-
liquido.
Al final de la misma se toman 2 mL de la fase acuosa y se diluyen hasta l L. De la disolucin
resultante se hace una anlisis por HPLC. El calibrado se realiz mediante el mtodo del
patrn externo, obtenindose los siguientes datos:

A (g/l) 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00

Area pico 1000035 2000096 3000125 4000200 5000175 6000210
Impureza g/l 0,010 0,020 0,030 0,040 0,050 0,060
Area pico 100325 200701 301009 401300 501705 601950

Datos obtenidos en el anlisis de la muestra:

Area de pico del compuesto A: 3524367
Area de pico de la impureza: 321096

Para que el producto pueda comercializarse, el compuesto A tiene que tener una
concentracin mayor de 700,00 g/l y la impureza menor de 5,00 g/L. A la vista de los
resultados obtenidos en el anlisis por HPLC, decir si el producto puede comercializarse.
(Suponer que al final de la etapa de extraccin el volumen de la fase acuosa no ha variado, y
que s1o se extrae en la fase orgnica la impureza)