Informe 2 Microbiologa aplicada (2016)

Cultivos puros y Observaciones microscpicas (Tinciones)

Hernn Crdenas1., Camilo Seplveda2.

Carrera de Ingeniera Civil Ambiental, Universidad de La Frontera

1. Resumen (20%)

El suelo es el ambiente en donde existe la mayor cantidad y diversidad de microorganismos.

Los microorganismos le dan al suelo la caractersticas de ser vivo (nace, crece, se
reproduce y muere) (Toro, D., 2005). Inicialmente, se trat de obtener un cultivo bacteriano
puro, para ser aislado, estudiado y clasificado. Posteriormente se utiliz el mtodo de Tincin
de Gram con el objetivo de diferenciar Gram-positivas y Gram-negativas de algunas
bacterias y clulas (epiteliales). Para el cultivo bacteriano se utiliz como medio de cultivo
el Agar Plate Count (A.P.C.) mediante la tcnica de agotamiento por estras mientras que
para el examen microscpico de las bacterias se utiliz la tcnica de preparaciones
extendidas, fijadas y teidas donde se utilizaron compuesto qumicos (colorantes) como
violeta genciana, lugol, acetona, safranina, etctera. Como resultado del cultivo bacteriano
se obtuvo una placa con crecimiento de colonias idnticas mientras que otra con colonias
irregulares (resultado inesperado). En el estudio microscpico se pudo observar bacterias
Gram-negativas del tipo Estreptobacilos.

2. Resultados y discusin (50%):

a) Cultivos puros:
Para la obtencin de cultivos puros, a partir de una sola clula se utiliz el mtodo de siembra
por estras donde se utiliz como medio de cultivo Agar Plate Count utilizando el asa de
siembra, las cuales se depositaron en un Horno Pasteur por 48 horas para ser incubadas. Lo
que se esperaba era obtener colonias idnticas para su aislamiento, estudio e identificacin
como se muestra en la siguiente figura:

Figura 1: Cultivo puro

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Despus de las 48 horas de incubacin, el resultado fue dispar ya que de las 2 placas
incubadas, solamente 1 arroj resultados positivos, como se puede apreciar en las siguientes
figuras.

Figura 2: Cultivo bacteriano. Colonias Figura 3: Cultivo bacteriano. Colonias medianamente

ramificadas no uniformemente aisladas para su extraccin

Respecto a la figura 2, la siembra por estras no fue buena debido a que no se consigui
colonias perfectamente aisladas para su extraccin y cultivo. Esto posiblemente por:

1. Puede que la porcin de colonia tomada haya sido mucha cantidad y que al flamear
entre estras no haya sido el tiempo suficiente.
2. El crecimiento de la bacteria sobre la placa puede deberse a que diversas bacterias de
suelo son flageladas y esto produce que sean mviles, lo que viene asociado a un
crecimiento ramificado no uniforme.

Respecto a la figura 3, la siembra por estra fue regularmente buena, ya que se puede apreciar
colonias aisladas, las cuales pueden ser extradas para su posterior estudio y clasificacin.

b) Observaciones microscpicas (Tinciones):

Por otra parte, para identificar los tipos de bacterias de la muestra de suelo puro se utiliz la
tcnica de Tincin de Gram, la cual permite de acuerdo con la estructura y grosor de la pared
bacteriana, agrupar las bacterias en Gram positivas y Gram negativas. Las Gram positivas
poseen una capa gruesa de peptidoglicano y carecen de membrana externas, mientras que las
Gram negativas tienen una capa ms delgada de peptidoglicano (E. Rodrguez et al., 2005).
Las bacterias Gram positivas retienen el cristal violeta, y por lo tanto, se ven de un color
violeta intenso; las Gram negativas, que pierden el color violeta con el agente decolorante,
toman un color rojo al teirse con la safranina (V.Garca,2005).

A continuacin y como se aprecia en la figura 4, podemos observar bacterias del tipo

Estreptobacilos, las cuales son una variedad de bacilos en forma de cadenas de bastoncillos.
Son comnmente bacterias Gram-negativas ya que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.
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Tambin se pudo observar en las zonas perifricas bacterias Gram- positivas pero de color
violeta intenso. Esto pudo deberse a la antigedad de la muestra.

Figura 4: Bacterias Gram-Negativas del tipo Estreptobacilos.

3. Conclusin (25%)

En la etapa de cultivos puros podemos sealar que si bien en algunos casos el cultivo no logr
el xito deseado, ya que no se pudieron obtener cepas aisladas de la masa, se puede concluir
que si fueron xito, ya que se obtuvieron colonias de igual forma y tamao, capaces de ser
extradas para ser aisladas, estudiadas y clasificadas.
Mientras que en la etapa de tincin de Gram, si bien las bacterias observadas que pertenecen
a la variedad de Estreptobacilos que se caracterizan por ser Gram negativas, si bien algunas
presentan tonalidades violetas, estas se pueden explicar por la antigedad de la muestra.

4. Referencias (5%).

Toro, D., (2005). Manual para la introduccin al laboratorio de microbiologa. (1th

ed.). Universidad de Caldas. (Colombia)
Rodrguez, E; Gamboa, M; Hernndez, F; Garca, J. 2005. Bacteriologa general:
Principios y Prcticas de Laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica. P.
Rodrguez, E; Gamboa, M; Hernndez, F; Garca, J. 2005. Bacteriologa general:
Principios y Prcticas de Laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica. p
Vera Garca Corts (2004).Introduccin a la Microbiologa (2 Ed.).Costa Rica.

tems Nota:
Resumen (20%)
Resultados y discusin (50%)
Conclusin (25%)
Referencias (5%)
Nota Final:
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