UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN, TACNA

FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA QUMICA

PRCTICA DE LABORATORIO N 07: SEPARACIN Y PURIFICACIN DE

SUSTANCIAS

ASIGNATURA: INGENIERA BIOQUMICA

Integrantes: Cdigo:
1. Dina Mamani Nina 2013-39315
2. Lourdes Yeny Ventura Condori 2013-39328
3. Mary Luz Lima Flores 2013-39314

Docente: Dr. Ral Paredes M.

Fecha de presentacin: 16 de noviembre del 2017

TACNA- PER
2017
 PRCTICA N 07: SEPARACIN Y PURIFICACIN DE SUSTANCIAS

I. OBJETIVOS.

- Separacin de un compuesto de una mezcla de productos.

- Purificacin del compuesto obtenido por cristalizacin.
- Determinacin el punto de fusin del compuesto obtenido como criterio de pureza.

II. PRINCIPIOS TEORICOS.

La separacin y la purificacin de un producto biotecnolgico es una parte crtica del

proceso de produccin. Las operaciones de separacin constituyen una parte importante
del costo de producto y, en algunos casos son el costo principal.
Los caldos de fermentacin son mezclas acuosas complejas de clulas (insolubles)
productos extracelulares solubles, productos intracelulares y sustratos no convertidos.
. Cristalizacin. Es la tcnica ms simple y eficaz para purificar compuestos orgnicos
slidos. Consiste en la disolucin de un slido impuro en la menor cantidad posible del
disolvente adecuado en caliente. En estas condiciones se genera una disolucin saturada
que al enfriar se sobresatura producindose la crisitalizacin. El proceso de cristalizacin
es un proceso dinmico, de manera que las molculas que estn en la disolucin estn en
equilibrio con las que forman parte de la red cristalina. El elevado grado de ordenacin
de una red cristalina excluye la participacin de impurezas en la misma. Para ello, es
conveniente que el proceso de enfriamiento se produzca lentamente de forma que los
cristales se formen poco a poco y el lento crecimiento de la red cristalina excluya las
impurezas. Si el enfriamiento de la disolucin es muy rpido las impurezas pueden
quedar atrapadas en la red cristalina. Para la eleccin de un disolvente de cristalizacin
la regla lo semejante disuelve a lo semejante suele ser muy til. Los disolventes ms
usados, en orden de polaridad creciente son el ter de petrleo, cloroformo, acetona,
acetato de etilo, etanol y agua. Es mejor utilizar un disolvente con un punto de ebullicin
que sobrepase los 60C, pero que a su vez sea por lo menos 10C ms bajo que el punto
de fusin del slido que se desea cristalizar. En muchos casos se necesita usar una mezcla
de disolventes y conviene probar diferentes mezclas para encontrar aquella que
proporciona la cristalizacin ms efectiva. En la siguiente tabla aparecen los disolventes
ms empleados en la cristalizacin de las clases ms comunes de compuestos orgnicos:
III. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS.

Materiales y equipos
- Tubos de ensayo - Embudo
- Vasos de precipitado - mechero
- Pipetas - Matraz Erlenmeyer
- Probetas - Bao maria
- Varilla - Papel filtro
- Esptula - Bomba de vaco
- Soporte universal - Balanza
- Matraz kitasato

Reactivos
- Agua destilada
- Metanol
- Etanol
- cido actico

IV. PARTE EXPERIMENTAL.

1. Seleccin de solvente de cristalizacin.

Poner aproximadamente 0.1 g de muestra problema en 4 tubos de ensayo

pequeos limpios y secos y enumerarlos como: A, B, C, D.
Agregar unas 20 gotas de agua destilada al tubo A y agitar. Si la muestra no
se disuelve caliente el tubo suavemente hasta ebullicin del agua; si todava
no se disuelve agregue unas gotas de agua caliente. Repetir dos veces mas
esta ltima operacin si no hay disolucin. Si el slido se disuelve en
caliente, deje enfriar lentamente y observe si se cristaliza. Si no cristaliza,
enfri el tubo con hielo y raspe las paredes internas con una varilla de vidrio.
Anote sus observaciones.
Repita las operaciones anteriores usando metanol en el tubo B, etanol en el
C, cido actico en el D.
Deduzca cual es el solvente ms adecuado para la purificacin del solvente.

2. Purificacin por cristalizacin.

En un matraz Erlenmeyer de 125 ml ponga aproximadamente 1 g la muestra

problema, vierta aproximadamente 20 ml del solvente seleccionado, caliente
 hasta que se disuelva toda la muestra, agregando pequeas porciones de
solvente, si es necesario.

Filtre rpidamente la solucin caliente para separar las

impurezas solubles en caliente, para ello coloque el
embudo de vidrio con un papel de filtro doblado en
pliegues en el soporte con anillo, y en la parte inferior
ponga un vaso de 100 ml para recoger el filtrado.

Deje enfriar lentamente la solucin filtrada en el vaso, si tardan en aparecer

los cristales, enfriar en bao de hielo y raspar las paredes internas del vaso
con una varilla.

Cuando no aparezcan ms cristales, filtre de la siguiente

manera: en un matraz kitasato de 50 ml coloque un
embudo de filtracin Buchyner provisto de un tapn de
jebe, poner un papel filtro y conectar el matraz a la bomba
de vaco.

Lavar los cristales con pequeas porciones del solvente

seleccionado en frio, y dejar conectado a la bomba de vaco por un par de
minutos para eliminar el solvente de los cristales.
Con una esptula tomar una pequea porcin de los cristales y triturarlos
finamente sobre un vidrio de reloj para acelerar evaporacin la del solvente
de cristalizacin que pudiera estar presente.

3. Determinacin del punto de fusin como criterio de pureza.

Determinar el punto de fusin del compuesto cristalizado. Anote sus

resultados.

V. RESULTADOS Y ANALISIS.

1. Seleccin de solvente de cristalizacin.

Al realizar el experimento se obtuvo la reaccin que tiene cada solvente, como en

frio y tambin en el momento de calentarlo, se muestra en la tabla 1.
El solvente que se selecciono fue el etanol por ser menos toxico, aunque el metanol
es un buen disolvente no se trabaj con este solvente por ser toxico, si se trabaja con
este solvente se debe tener mucho cuidado.
 Tabla 01. Solubilidad

SOLUBILIDAD
solvente frio caliente
agua no disuelve no disuelve
si disuelve, con
metanol algunos grumos si disuelve
etanol no disuelve disuelve rpido
cido actico no disuelve si disuelve

2. Purificacin por cristalizacin.

En la filtracin en caliente, como observamos en la

imagen vemos que la muestra al momento de estar
enfrindose se va cristalizando tanto como en las
paredes del embudo como en el papel filtro, lo cual
estos cristales contienen impurezas.

Para que los cristales se cristalicen ms rpido lo

ponemos en un bao de hielo.

Al final despus de filtrarlo utilizando la bomba de vaco, obtenemos los cristales.

VI. CONCLUSIONES.

- La etapa de separacin o concentracin tiene como objetivo principal el aumento de

concentracin del producto de inters respecto del resto de componentes
- Se realiz la purificacin del compuesto por cristalizacin.
- Se determin el punto de fusin del compuesto obtenido que fue 114 C.
 - La separacin y purificacin de un producto biotecnolgico es una parte crtica del
proceso de produccin.
- Las operaciones de separacin (downstream processing), constituyen una parte
importante del costo del producto y, en algunos casos, son el costo principal.
- El proceso de cristalizacin es un proceso dinmico, de manera que las molculas
que estn en la disolucin estn en equilibrio con las que forman parte de la red
cristalina.

VII. CUESTIONARIO.

1. Cules son las caractersticas especficas de los procesos de separacin en la

secuencia de purificacin en biotecnologa?

Agente de separacin. La separacin es causada por un agente de separacin,

que toma la forma de otra corriente de materia o energa.
Factor de separacin. Nos indica el grado de separacin que podemos
obtener en cualquier proceso de separacin en particular.

2. Cules son los requisitos que debe reunir un buen solvente?

Disolver el slido a purificar en caliente (a la temperatura del punto de ebullicin

del disolvente) pero no en fro (a temperatura ambiente). ste es el requisito
fundamental. Un disolvente que disuelva el slido en fro o no lo disuelva en
caliente, no es vlido para cristalizar.
Disolver muy mal o muy bien las impurezas, para que puedan eliminarse al
filtrar en caliente o quedar disueltas en las aguas madres, respectivamente.
No reaccionar con el compuesto a cristalizar.
Presentar un punto de ebullicin inferior al punto de fusin del slido.
Ser relativamente voltil con el fin de que los cristales obtenidos puedan secarse
con facilidad.
No ser txico ni inflamable.

3. Mencione los disolventes ms empleados para llevar a cabo la cristalizacin de

compuestos orgnicos slidos en orden creciente de su uso.

Hidrocarburos: ciclohexano, hexano, tolueno

teres: ter, diclorometano
Haluros: cloroformo, diclorometano
Compuestos carboxlicos: acetato de etilo, acetona
Alcoholes y cidos: etanol, metanol
Sales: agua
 4. Presente la tabla completa de solubilidad.
Aqu tenemos los resultados que se observ en el laboratorio

Tabla 1.
SOLUBILIDAD
solvente frio caliente
agua no disuelve no disuelve
si disuelve, con
metanol algunos grumos si disuelve
etanol no disuelve disuelve rpido
cido actico no disuelve si disuelve

5. Describa otros mtodos de purificacin de sustancias de los productos de

fermentacin.
1. Pretratamiento-acondicionamiento.
Adsorcin
Precipitacin
Cromatografa de afinidad
2. Alta resolucin.
Cromatografa de intercambio
Cromatografa de afinidad
Cromatografa de ligando
Cristalizacin
3. Terminacin.
Filtracin por geles
HPLC

VIII. BIBLIOGRAFIA.

- http://www.sinorg.uji.es/Docencia/FUNDQO/TEMA11FQO.pdf
- http://ocwus.us.es/quimicaorganica/quimicaorganicai/temas/cuadernillo_practicas/p
agina_09.htm
- https://www.academia.edu/8975164/PROCESOS_DE_SEPARACI%C3%93N_Y_
PURIFICACI%C3%93N_EN_PROCESOS_BIOTECNOL%C3%93GICOS_CON
TENIDO