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MTODOS DE TINCIN
Tincin de Gram-Nicole.. 5
Tincin negativa.. 6
Demostracin de cpsulas bacterianas 6
Tincin de esporas bacterianas 7
Tincin de bacterias en leche.. 7
Observacin de movilidad de bacterias.. 7
SOLUCIONES Y REACTIVOS
Solucin de cloruro de trifeniltetrazolio (TTC) al 1%............................................................ 8
Solucin de tetraciclina... 8
Solucin de telurito de potasio (3,5 %)... 8
Reactivo de Kovacs. 8
Reactivo de Voges-Proskauer. 8
Reactivo para la prueba de reduccin de nitrato 8
Reactivo para determinar diacetilo en jugo de fruta 9
Reactivo para oxidasa.. 9
Vaspar. 9
MEDIOS DE CULTIVO
Instrucciones generales para su preparacin... 10
Acetamida Agar................................... 11
Almidn Agar...................................... 11
Azul de toluidina DNA Agar.............. 11
Baird Parker Agar................................ 12
Base sangre Agar................................. 13
Bilis Esculina Agar............................. 13
Bilis Rojo Neutro Cristal Violeta Lactosa (ABRV-L) Agar............... 14
Bilis Rojo Neutro Cristal Violeta Glucosa (ABRV-G) Agar segn Mossel... 14
Bismuto Sulfito Agar (Wilson y Blair)................... 15
Buenos Aires Medio (BAM) .................................. 15
Casena Agar... 17
Carne Cocida Medio Comercial.............................. 18
Carne Cocida Medio................................................ 18
Cerebro Corazn Agar................................................ 18
Cerebro Corazn Caldo........................................... 19
Cetrimida Agar.................................... 19
Citrato de Koser Caldo........................................ 19
Citrato de Simmons Agar.................... 19
Clark y Lubs (RMVP) Medio.............. 20
Czapek Agar... 20
Desoxicolato Citrato Agar segn Leifson............... 20
Diclorn Glicerol 18 % (DG18) Agar..................... 21
Dicloran Rosa De Bengala Cloranfenicol (DRBC) Agar 21
Diferencial para Clostridios ( DRCM) Caldo 22
2
Duncan Strong Caldo.......................... 22
Endo Agar........................................... 23
Eosina Azul de Metileno (EMB) Agar segn Levine. 23
Escherichia coli Caldo........................ 24
Extracto de Malta Agar... 24
Fermentacin de Azcares Caldo (Aerobios)......... 24
Fermentacin de Azcares Caldo (Anaerobios)..... 25
Fluorocult Agar para Escherichia coli O157:H7.... 25
Fraser Caldo........................................ 26
Gelatina Medio (Aerobios).................. 27
Glucosa Caldo..................................... 27
Grasa de Manteca Agar....................... 27
Hgado + Hgado Caldo.......................................... 28
Hgado de Ternera (LVA) Agar.................................. 28
Infusin de Cerebro Corazn Caldo 29
KF Streptococcus Agar....................... 29
KG Agar.............................................. 30
Lactosa Caldo...................................... 30
Lauril Sulfato Caldo............................ 31
Lisina Hierro (LIA) Agar.............................. 31
Leche Agar.................................................................................. 32
Leche Tornasolada.................................................. 32
Mac Conkey Agar................................................... 33
Mac Conkey Caldo.................................................. 34
Mac Conkey Sorbitol Agar..................................... 34
Manitol Lisina Cristal Violeta (MLCB) Agar......... 35
Manitol Yema de Huevo Polimixina (MYP) Agar. 35
Medio 110 para Estafilococos (Agar Chapman) 36
Modified McBride (MMA) Agar........ 37
Movilidad Agar para........................... 37
Nitrato Caldo....................................... 37
Nitrato Movilidad Buffereado Agar.... 38
Nutritivo Agar..................................... 39
Oxford Modificado (MOX) Agar....... 39
Palcam Agar........................................ 39
Papa Dextrosa Agar. 40
PE-2 Medio......................................... 40
Pseudomonas: F Agar y P Agar.......... 40
Rappaport Vassiliades Caldo.............. 41
Recuento en placa Agar... 42
Sabouraud Caldo............. 42
Salmonella-Shigella Agar... 42
Selenito Cistina Caldo..... 43
SIM Agar............................................ 43
Suero de Naranja Agar........................ 44
Suero de Naranja (OSR) Caldo........... 44
Sulfito Hierro Agar...................................................... 44
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Sulfito Polimixina Sulfadiazina (SPS) Agar... 45
Termoacidurans (TAA) Agar.............. 45
Tetrationato Caldo segn Mueller-Kauffmann... 45
Tioglicolato Caldo............................... 46
Tributirina Agar.................................. 46
Triple Azcar Hierro (TSI) Agar............ 47
Triptona Glucosa (GTA) Agar............ 48
Triptona Glucosa (GTB) Caldo........... 49
Triptona Caldo... 49
Triptona Peptona de Soja Caldo..................................................... 49
Triptona Sulfito Clicloserina (TSC) Agar... 50
Triptona Sulfito Neomicina (TSN) Agar 50
Urea Caldo.......................................... 50
UVM Caldo........................................ 51
Verde Brillante 2% Sales Biliares (BRILA) Caldo 51
Verde Brillante Rojo Fenol Lactosa Sacarosa (BPLS) Agar...... 52
Verde Brillante Rojo Fenol Lactosa Sacarosa (BPLS) Agar modificado... 52
Verde de Malaquita Caldo... 53
Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD) Agar 53
YGC Agar.............................................. 54
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METODOS DE TINCIN
TINCIN DE GRAM-NICOLE
Solucin A:
Violeta de Genciana .................................... 1,0 g
Alcohol etlico ........................................... 10,0 ml
Solucin B:
Fenol ............................................................ 1,0 g
Agua destilada ......................................... 100,0 ml
Mtodo:
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TINCION NEGATIVA
Es un mtodo muy sencillo y eficaz para poner de manifiesto la forma externa de las
bacterias en una extensin. Las bacterias quedan rodeadas de una fina capa de colorante
negro y aparecen como objetos blancos sobre fondo gris.
Mtodo:
Mtodo de la Nigrosina
La tcnica de tincin negativa puede usarse en conjuncin con una tcnica de tincin
simple con el fin de poner de manifiesto la presencia de cpsulas. En este caso, la extensin
debe cubrirse con fucsina fenicada diluida, lavarse y secarse, antes de hacer el tratamiento
con nigrosina.
Nota: Siempre debe prepararse y examinarse una pelcula de tinta china como testigo.
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TINCION DE ESPORAS BACTERIANAS
Mtodo:
Reactivos:
- Solucin colorante: se prepara una solucin al 2% de azul de metileno en alcohol absoluto
a 96. Se toman 30 ml de esta solucin madre y se diluyen con 100 ml de agua destilada.
- Desengrasante: xileno.
- Fijador: alcohol absoluto.
Mtodo:
A partir de los extendidos bacterianos de Breed-Newman se procede a la tincin de la
siguiente forma:
A partir de un cultivo reciente (de 18 a 24 horas) se toma un ansa de material que se coloca
sobre un cubreobjetos; se invierte ste sobre la excavacin de un portaobjetos excavado y
se lo adhiere con vaselina. Se observa de inmediato en seco con objetivo de gran aumento.
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SOLUCIONES Y REACTIVOS
REACTIVO DE KOVACS
REACTIVO DE VOGES-PROSKAUER
a) Solucin de KOH al 40 %
Se disuelven 40 g de KOH en 100 ml de agua destilada.
b) Solucin de -naftol al 5 %
Se disuelven 5 g de -naftol en 100 ml de alcohol etlico.
Solucin A:
Se disuelven 8 g de cido sulfanlico en 1000 ml de cido actico 5 N.
Solucin B:
Se disuelven 5 g de -naftol en 1000 ml de cido actico 5 N.
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e incubado.
Disolver 1 g del reactivo en menos de 100 ml de agua destilada. Calentar suavemente hasta
su disolucin. Pasar a un frasco volumtrico y agregar agua destilada c.s.p. 100 ml.
Dejar descansar 15 minutos antes de su empleo. Si se guarda en frasco de vidrio de color
caramelo, tapado, la solucin acuosa se mantiene estable por lo menos 6 meses.
VASPAR
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MEDIOS DE CULTIVO
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ACETAMIDA AGAR
Este medio contiene adems de algunas sales inorgnicas, acetamida como nica fuente de
carbono y nitrgeno. En l solo pueden crecer microorganismos que puedan aprovechar la
acetamida. Muchos de ellos, lo hacen formando amoniaco, lo que puede utilizarse como
caracterstica taxonmica, por ejemplo, para la diferenciacin de las especies de
Pseudomonas.
ALMIDON AGAR
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Solucin de azul de toluidina 0,1M ........... 30,0 ml
Este medio se utiliza para evidenciar DNAsa microbiana. Sirve para la identificacin de
microorganismos DNAsa positivos, sobre todo de estafilococos coagulasa positivos.
El cido desoxirribonucleico forma un complejo color azul con el azul de toluidina, ausente
en las zonas donde hubo hidrlisis. Las colonias DNAsa positivas hidrolizan a su alrededor
al cido desoxirribonucleico contenido en el medio de cultivo. Dichas colonias aparecen
rodeadas por halos rosados luminosos en contraste con el resto del medio de cultivo, que
permanece azul. Los microorganismos DNAsa negativos no forman halo. Se incuba 18 a 24
horas a 37C.
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caractersticas diagnsticas: estn rodeadas por una zona opaca de precipitacin formada
por sales de calcio y magnesio de los cidos grasos liberados por liplisis. Est seguida de
un halo claro debido a la actividad proteoltica. Ambas caractersticas constituyen la
reaccin yema de huevo. Las colonias presentan generalmente centro negro debido a la
reduccin de telurito a teluro. La reaccin yema de huevo y la reduccin de telurito se
correlacionan bien con la presencia de coagulasa y, por lo tanto, pueden utilizarse como
ndices de la misma.
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Aadiendo suero de caballo al medio puede optimizarse el crecimiento de los enterococos.
Incubacin: hasta tres das a 37C.
En presencia de enterococos, se produce, por lo regular ya al cabo de 24 horas, una
coloracin oscura del medio de cultivo alrededor de las colonias. Cuando las colonias son
numerosas y llegan a confluir, puede llegar a oscurecerse todo el medio.
Si al cabo de tres das no se ha producido oscurecimiento, se acepta que el material sembrado
no contena enterococos.
Este medio se utiliza para el aislamiento y enumeracin del grupo coliformes, inclusive E.
coli, a partir de alimentos, agua y otros. El cristal violeta junto con las sales biliares inhiben
el crecimiento de la flora acompaante Gram positiva. La degradacin de lactosa a cido se
pone de manifiesto por el viraje al rojo del indicador de pH rojo neutro, y por un halo de
precipitacin de sales biliares alrededor de las colonias. Las colonias de coliformes en este
medio son rojas oscuras, no menores de 0,5 mm de dimetro, con un halo de precipitacin
rojizo. Aparecen entre las 242 horas de incubacin a 32C. Para la expresin de resultados
es conveniente contar las placas conteniendo entre 15 y 150 colonias. En placas con
excesivo crecimiento, las colonias de coliformes pueden presentar caractersticas atpicas o
medir menos de 0,5 mm de dimetro. Adems, en estas placas, algunas colonias de
levaduras y bacterias no coliformes son comparables en color y tamao a las de los
coliformes. En tales casos, es necesario realizar una prueba confirmatoria. Esta consiste en
inocular la colonia en un tubo de fermentacin que contiene caldo Verde Brillante 2 %
sales biliares. La formacin de gas entre las 482 horas de incubacin a 32C confirma la
presencia de coliformes.
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Rojo neutro ................................................ 30,0 mg
Cristal Violeta .............................................. 2,0 mg
Agar-agar ................................................... 13,0 g
Agua destilada ............................................. 1,0 l
pH 7,30,2
Peptona ............................................................ 10 g
Extracto de carne ............................................... 5 g
Dextrosa ............................................................. 5 g
Na2HPO4 (anh.) ................................................. 4 g
FeSO4 (anh.) ................................................... 0,3 g
Bismuto sulfito .................................................. 8 g
Verde Brillante ........................................... 0,025 g
Agar ................................................................. 20 g
Agua destilada .................................................... 1 l
(A)
Peptona ........................................................ 2,0 g
Agar-agar ..................................................... 0,3 g
Agua destilada ........................................... 93,2 g
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(B)
Solucin acuosa de urea 50 % ..................... 2,0 ml
Indicador de Andrade .................................. 1,5 ml
Solucin de Azul de Timol .......................... 0,3 ml
Solucin acuosa de urea 10 % ..................... 3,0 ml
Indicador de Andrade
Este medio se utiliza para diferenciar entre otras bacterias, E. coli, Enterobacter, Proteus,
Salmonella, Shigella, Klebsiella y Citrobacter.
El medio de cultivo se coloca en tubos pequeos de 3 a 4 ml por tubo. Es semislido y de
color pajizo.
La siembra se realiza por puncin con ansa recta, a partir de cultivos puros.
a) La hidrlisis de urea con produccin de lcali, que se evidencia por el viraje al azul del
indicador bsico Azul de Timol.
b) La fermentacin de lactosa con formacin de cido, con o sin formacin de gas. El cido
producido se evidencia por el viraje al rojo del indicador cido de Andrade.
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en acetato de plomo.
Luego de la incubacin, un ennegrecimiento indica un cultivo productor de sulfhdrico.
CASENA AGAR
Suspender los ingredientes, calentar a bao mara hasta disolucin y mantener 10 minutos.
Esterilizar en autoclave, fraccionar en placas.
pH = 7,2
Se pueden agregar 5-10 g de leche descremada para reforzar turbidez.
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CARNE COCIDA MEDIO COMERCIAL
Picar la carne, agregar el agua y hervir durante 45 minutos. Incorporar los otros
ingredientes y hervir 10 minutos ms. Filtrar por gasa y llevar a volumen inicial. Dejar en la
heladera 24 horas y separar la grasa solidificada.
Filtrar por papel de filtro, fraccionar en tubos con tapa de rosca (2/3 de carne y 1/3 de
caldo). Esterilizar en autoclave.
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CEREBRO CORAZON CALDO
CETRIMIDA AGAR
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Este medio se utiliza para la identificacin de microorganismos, especialmente
enterobactericeas, y ciertos hongos, basado en el empleo de citrato como nica fuente de
carbono.
El empleo de citrato por ciertos microorganismos da lugar a una alcalinizacin del medio
de cultivo, lo que se manifiesta por un viraje al azul oscuro del indicador de pH Azul del
bromotimol.
Se incuba 24-48 h a 37C.
CZAPEK AGAR
Es un medio definido, es utilizado para hongos que pueden utilizar nitrato de sodio como
nica fuente de carbono.
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Agar-agar ................................................... 12,0 g
Agua destilada ............................................. 1,0 l
Agregar los componentes minoritarios y el agar hasta ca. 800 ml de agua destilada. Calentar
a bao mara hasta disolucin del agar y completar hasta 1,0 l de agua destilada. Agregar el
glicerol (notar que la concentracin final es 18% w/w, no w/v). Esterilizar en autoclave a
121C durante 15 minutos. La actividad acuosa final del medio es 0,955. Este medio se
utiliza especialmente para el aislamiento de hongos xerfilos.
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Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Almacenar en oscuridad, ya que los
productos de fotodescomposicin del Rosa de Bengala son altamente inhibitorios para
algunos hongos. En oscuridad el medio es estable por al menos 1 mes a 1-4C. Las
soluciones stock de Rosa de Bengala y Diclorn no requieren esterilizacin y son estables
por perodos prolongados. El cloranfenicol es un antibitico muy efectivo que no se afecta
por la esterilizacin en autoclave.
Este medio se utiliza para el aislamiento y enumeracin de mohos y levaduras en alimentos.
Fraccionar en tubos con tapa de rosca, dejando poco espacio libre. Esterilizar en autoclave.
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Este caldo se utiliza para inducir la esporulacin de Clostridium perfringens. La
esporulacin se produce debido a la ausencia de azcares fermentables, ya que el medio
slo contiene almidn (poco fermentable). El tioglicolato genera el ambiente reductor
necesario para el crecimiento de microorganismos anaerobios.
Si el medio ha sido preparado en el momento, utilizar inmediatamente; si no, eliminar el O2
disuelto por ebullicin en bao de agua hirviente durante 15 minutos. Enfriar rpidamente.
Sembrar 0,1 - 0,2 ml del cultivo o dilucin en el fondo del tubo con pipeta sin burbujear.
ENDO AGAR
Este es un medio selectivo que se utiliza para el aislamiento de E. coli fecal y coliformes en
diversos materiales. El sulfito sdico y la fucsina inhiben las bacterias Gram positivas. E.
coli y coliformes consumen lactosa formando aldehdo y cido. Por otra parte, el aldehdo
libera fucsina a partir de la combinacin fucsina-sulfito, lo cual da lugar a la coloracin roja
de las colonias. En el caso de E. coli, esta reaccin es tan intensa que la fucsina llega a
cristalizar dando a las colonias un brillo metlico estable, de reflejo verde tpico.
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ESCHERICHIA COLI CALDO
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b) Preparar el medio basal y agregar el carbohidrato (todos al 1% excepto salicina, 0,5%).
Fraccionar en tubos de hemlisis. Colocar campanitas de Durham slo a los tubos con
glucosa. Esterilizar en autoclave a 118C durante 10 minutos.
pH = 7,40,2.
La degradacin de distintos azcares por distintas vas metablicas produce cido o gas. El
cido se detecta por el viraje al amarillo del indicador rojo fenol, y el gas por la formacin
de burbujas que quedan atrapadas en la campanita.
Prueba positiva: color amarillo con o sin gas.
Prueba negativa: color rojo con ausencia de gas.
Preparar el medio base. Fraccionar en tantas porciones como azcares se prueben. Pesar los
azcares y agregarlos a cada una de ellas. Fraccionar en tubos con tapa de rosca. Esterilizar
en autoclave 10 minutos a 118C.
La degradacin de los azcares produce cido y/o gas. El cido produce un descenso del
pH del medio, que se detecta agregando unas gotas del indicador prpura de
bromocresol al 0,04%.
Prueba positiva: color amarillo-cido.
Prueba negativa: color prpura-alcalino.
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Agar-agar ................................................... 13,0 g
Agua destilada ............................................. 1,0 l
pH: 7,40,1
El desoxicolato sdico inhibe en gran medida la flora Gram positiva. La sorbita, junto
con el indicador sirven para demostrar la fermentacin del azcar. Las colonias sorbita
positivas son amarillas, y las negativas resultan de color verdoso, sin cambio en el color
del medio de cultivo. El tiosulfato y el hierro III evidencian las colonias de grmenes
productores de sulfuro de hidrgeno, las colonias tienen precipitado negro-parduzco de
sulfuro de hierro. Esta caracterstica es muy importante para diferenciar Proteus mirabilis
de Escherichia coli O157:H7. El MUG sirve para evidenciar las cepas beta glucuronidasa
positivas ya que son fluorescentes a la radiacin con luz UV de larga longitud de onda.
La mayora de las cepas de Escherichia coli dan positivo, mientras que Escherichia coli
O157:H7 da negativa.
FRASER CALDO
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GELATINA MEDIO (AEROBIOS)
Mezclar la gelatina con el agua y dejar reposar durante 15 minutos. Calentar a ebullicin,
agregar los otros ingredientes y seguir calentando hasta que se disuelvan, sin
sobrecalentar. Ajustar el pH a 6,8-7,0.
Distribuir en tubos, esterilizar en autoclave. Enfriar en posicin vertical.
GLUCOSA CALDO
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emulsionan en un homogenizador estril.
Emulsin de goma arbiga
Suspender la goma en agua fra, calentar hasta disolucin. Esterilizar en autoclave.
Preparacin de las placas: Fundir el medio y llevarlo a 50-55C. Agregar entonces 5 ml
de la emulsin de grasa de manteca a 100 ml del mismo. Mezclar y verter en placas de
Petri.
Cortar el hgado en trozos pequeos agregar el agua y dejar en la heladera 24 h. Hervir una
hora, enfriar y llevar a volumen. Filtrar y ajustar el pH a 7,6.
Distribuir en tubos de ensayo y colocar un trocito de hgado en cada uno. Esterilizar en
autoclave. Este medio rico en nutrientes es especial para la recuperacin de
microorganismos anaerobios. El crecimiento de los mismos se evidencia por el
enturbiamiento con o sin produccin de gas. Las cepas proteolticas degradan los pedacitos
de hgado.
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INFUSIN DE CEREBRO CORAZN CALDO
Mezclar los ingredientes, excepto el NaCl, hervir una hora y llevar a pH 7,4-7,6. Agregar el
NaCl y hervir durante 10 minutos, filtrar. El pH final debe ser 7,0-7,4. Si se requiere
agregar un trozo de corazn en cada tubo. Tambin se comercializa el medio deshidratado.
KF STREPTOCOCCUS AGAR
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alimentos.
La maltosa y la lactosa son utilizadas por los enterococos con produccin de cido.
Los grmenes acompaantes son reprimidos por la azida de sodio.
El agregado de TTC tiene como finalidad diferenciar S. faecalis del resto de los
enterococos, aprovechando la habilidad del primero de reducir el tetrazolio a formazano.
Estos derivados del tetrazolio son sustancias incoloras que al reaccionar con un azcar se
transforman en compuestos poco solubles de color rojo (formazanos).
Como indicador se utiliza el prpura de bromocresol. Azul: indica pH neutro o bsico.
Amarillo: indica pH cido.
Las colonias se presentan pequeas de color rojo, de 0,3-2 mm; el medio alrededor de las
mismas vira al amarillo.
Incubacin: 48 horas a 37C.
KG AGAR
LACTOSA CALDO
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coliformes. El crecimiento de Salmonellas no se ve afectado por el descenso de pH; esto
permite su recuperacin sin prdidas al cabo de hasta una semana.
Incubacin: 24 horas a 37C.
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ocasionar una alcalinizacin del medio. La produccin de sulfhdrico se pone de manifiesto
por la formacin de sulfuro de hierro negro. Las cepas del grupo Proteus providencia, con
excepcin de algunas cepas de Proteus morganii, desaminan la lisina a cido ceto-
carbnico; este ltimo, con la sal de hierro y en presencia de O2, forma sustancias pardo-
rojizas en la regin superficial del medio de cultivo.
Se siembra en profundidad y en superficie; se incuba durante 24 horas.
LECHE AGAR
LECHE TORNASOLADA
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Disolver la leche en el agua tibia, agregar los otros ingredientes y calentar a bao mara.
Fraccionar en tubos con tapa de rosca. Esterilizar por tindalizacin (30 minutos a 100C,
tres das consecutivos).
pH = 6,8
33
MAC CONKEY CALDO
Este es un medio selectivo, orientativo para coliformes o Escherichia coli en leche y agua.
El caldo contiene lactosa, cuya degradacin a cido con formacin de gases sealan, por
definicin, la presencia de coliformes.
El gas producido es recogido en campanitas de Durham y la formacin de cido se
comprueba mediante el viraje a amarillo del indicador Prpura de bromocresol.
La bilis de buey favorece el crecimiento de bacterias intestinales y es inhibitoria para
microorganismos extraentricos.
Incubacin: 48 horas a 37C.
Este medio de cultivo se utiliza para el aislamiento de Escherichia coli O157:H7, a partir de
alimentos y de heces. Se emplea la caracterstica de dicho organismo de no fermentar este
azcar, a diferencia de la mayora de las cepas de Escherichia coli que son sorbitol +.
Las sales biliares y el Cristal Violeta inhiben la flora Gram positiva. El sorbitol, junto con
el indicador de pH Rojo neutro, sirven para comprobar la degradacin de dicho azcar.
Incubacin: 18-24 horas a 37C.
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Otras versiones de este medio incluyen el agregado de telurito y cefixime para aumentar la
selectividad.
Las colonias de Salmonella en este medio son grandes con centro negro.
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temperatura, mezclando bien, y la solucin de Polimixina B.
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MODIFIED MCBRIDE (MMA) AGAR
NITRATO CALDO
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Agua destilada ............................................. 1,0 l
Solucin A:
Se disuelven 8 g de cido sulfanlico en 1000 ml de cido actico 5 N.
Solucin B:
Se disuelven 5 g de -naftol en 1000 ml de cido actico 5 N.
Este medio se utiliza para la demostracin de bacterias que reducen nitrato a nitrito.
El nitrito formado durante la incubacin se detecta agregando 0,5 ml de la solucin A y 4
gotas de la solucin B en el tubo de fermentacin.
El fundamento y la interpretacin corresponden a los de los medios para nitrato y
movilidad respectivamente. Este medio se utiliza para la investigacin de la movilidad y
de la reduccin de nitrato por Clostridium perfringens.
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NUTRITIVO AGAR
PALCAM AGAR
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Suplemento (para 500 ml de medio)
Polimixina.................................................... 5,0 mg
Ceftazidin .................................................. 10,0 mg
Acriflavina ................................................... 2,5 mg
Hervir las papas en el agua durante una hora, filtrar por algodn o gasa. Agregar el agar y la
glucosa y calentar hasta disolucin. Esterilizar en autoclave.
En el momento de uso, se ajusta el pH a 4,5 con cido tartrico al 10 % estril. Una vez
ajustado el pH, no volver a calentar, pues se hidrolizara el agar. Tambin se comercializa
el medio deshidratado.
PE-2 MEDIO
Disolver los ingredientes, fraccionar en tubos con tapa de rosca, agregar 6 arvejas por tubo.
Este medio se utiliza para la recuperacin primaria de microorganismos anaerobios en el
anlisis de conservas alteradas.
F AGAR
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KH2PO4........................................................ 1,5 g
Agar-agar ................................................... 12,0 g
Agua destilada ............................................. 1,0 l
Aditivo: Glicerina 10,0 ml
P AGAR
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RECUENTO EN PLACA AGAR
SABOURAUD CALDO
SALMONELLA-SHIGELLA AGAR
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Disolver los ingredientes en agua a ebullicin. No esterilizar en autoclave.
Colonias Microorganismos
Incoloras transparentes translcidas Shigellas y la mayora de las Salmonellas
Transparentes con centro negro Algunas Salmonellas y Proteus
Rosadas rojas, medio rojo Escherichia coli y dems coliformes
Se utiliza para el crecimiento de Salmonella spp. a partir de agua, heces y alimentos. Posee
ms de un agente selectivo (selenito, cistina), lo cual aumenta la recuperacin de
Salmonella, Shigella y Proteus.
Incubacin: 24 hs a 37C.
SIM AGAR
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Disolver los ingredientes, distribuir en tubos (aproximadamente 4 cm de altura) y esterilizar
en autoclave 15 minutos a 121C. Dejar solidificar en posicin vertical.
Medio de cultivo de ensayo para comprobar la formacin de sulfuro, de indol y la motilidad
de Enterobactericeas.
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realizarse en condiciones de anaerobiosis, 48 horas a 37C.
Las colonias de clostridios presentan en este medio color pardo oscuro o negro.
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Na2S2O3 ..................................................... 40,7 g
Bilis de buey desecada............................... 4,75 g
Aditivos: KI, I2, Verde Brillante
TIOGLICOLATO CALDO
Fraccionar en tubos con tapa de rosca, dejando poco espacio libre. Esterilizar en autoclave.
Si el medio no es utilizado inmediatamente, calentar a ebullicin 15 minutos y enfriar
rpidamente en el momento de usar.
Se utiliza para el crecimiento de microorganismos anaerobios estrictos. La cistina y el
tioglicolato proporcionan una anaerobiosis suficiente, incluso para anaerobios exigentes.
Sembrar con pipeta en el fondo del tubo, sin burbujear.
TRIBUTIRINA AGAR
46
Agua destilada ............................................. 1,0 l
pH = 7,5
47
Interpretacin
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Se utiliza para la enumeracin y deteccin de agentes del flat sour en alimentos de acidez
baja y media, tanto mesfilos como termfilos.
Si se desea hacer un recuento total de aerobios, se cuentan todas las colonias. El recuento
de bacterias del flat sour se realiza considerando slo las colonias rodeadas de un halo
amarillo por viraje del indicador, debido a la acidez.
Las bacterias termfilas del flat sour (ej. B. stearothermophilus) presentan colonias
tpicamente circulares, de 2 a 5 mm de dimetro, con centro opaco rodeadas de una zona
amarilla debido a la produccin de cido.
Este medio se utiliza para la deteccin de bacterias que causan alteracin en conservas de
acidez baja y media, tanto mesfilas como termfilas del flat sour. Se observa turbidez y
viraje al amarillo debido a la acidificacin del medio y la presencia del indicador de pH
Prpura de bromocresol.
TRIPTONA CALDO
49
Agua destilada ............................................. 1,0 l
pH 7,3 0,1
Con este medio altamente selectivo, es posible realizar una investigacin cuantitativa,
relativamente rpida de Clostidium perfringens.
UREA CALDO
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Hidrogenofosfato disdico ............................. 9,5 g
Urea .............................................................. 20,0 g
Rojo fenol ..................................................... 0,01 g
En este medio de cultivo slo crecen aquellos microorganismos que pueden utilizar urea
como nica fuente de carbono. Los grmenes que utilizan urea producen un viraje del
indicador hacia el rojo y turbidez del medio de cultivo.
UVM CALDO
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VERDE BRILLANTE ROJO FENOL LACTOSA SACAROSA (BPLS) AGAR
Este medio se utiliza para el aislamiento de Salmonellas. Contiene Verde Brillante como
agente selectivo, que inhibe el crecimiento de bacterias Gram(+), permitiendo el desarrollo
sin restricciones de coliformes. El rojo fenol vira al rojo en medio alcalino y al amarillo en
medio cido, lo que lleva a distinguir las colonias fermentadoras de las no fermentadoras de
lactosa. Las colonias de Salmonellas son pequeas translcidas o incoloras y el medio a su
alrededor vira al rojo debido a que no fermentan lactosa. Las colonias de coliformes
aparecen grandes, cremosas y de color amarillo; el medio vira al amarillo verdoso.
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Se obtiene un rendimiento ptimo en Salmonellas realizando un enriquecimiento previo en
Caldo Tetrationato segn Mueller-Kauffmann durante 18 h a 43C. A continuacin se
siembra en superficie sobre agar BPLS y se incuba 18-24 h a 37C.
Colonias Microorganismos
Salmonella, Proteus (sin dispersin)
Rojas, con halo luminoso
Pseudomonas (colonias pequeas y dentadas)
Amarillas, con halo opaco Escherichia coli, Enterobacter, Citrobacter,
Klebsiella y otros
Esterilizar en autoclave.
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La degradacin de los azcares se pone de manifiesto por el viraje al amarillo del indicador
Rojo fenol. Las bacterias que descarboxilan la lisina con formacin de cadaverina se
reconocen por un color rojo purpreo alrededor de las colonias.
Incubacin: 48 horas a 37C.
YGC AGAR
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