Copyright

Reproduccin animal. Temas selectos sobre biotecnologa de la reproduccin animal

Copyright 2015 Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia UNACH
Tuxtla Gutirrez, Chiapas. Mxico.
ISBN: 9781310643187

Editores y compiladores:
Leonardo Yamasaki Maza
Alberto Yamasaki Maza
Gilberto Yong Angel

Autores:
Jos Fernando De La Torre Snchez
ngel Fernndez Mndez
Dario Marcelino Giris Andrade
Alfredo Lau Snchez
Horacio Len Velasco
Carlos Enrique Ibarra Martinez
Paola Ocampo Gonzalez
Guadalupe Patricia Macias Farrera
Marisela Peralta Lailson
Maria Erndira Reyes Garca
Horacio Ruiz Hernandez
Edy Alfonzo Ruiz Moreno
Hctor Snchez Pineda
Fernando Santiago Melgar
Arturo A. Trejo Gonzlez
Alberto Yamasaki Maza
Leonardo Yamasaki Maza
Gilberto Yong Angel

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Tabla de contenidos

Capitulo 1. Produccin in vitro de embriones de vacas sacrificadas.

Capitulo 2. Kappa casena y su influencia en produccin de leche en ganado suizo

americano de Chiapas

Capitulo 3. Enfermedades del sistema reproductor: Bacterias que afectan rganos genitales
en fauna (domstica, silvestre/cautiva, extica)

Capitulo 4. Reproduccin en perros

Capitulo 5. Sistemas de Cruzamientos en Ganado Bovino

Capitulo 6. Tecnicas de reproduccion asistida en pequeos rumiantes

Capitulo 7. ADN. Pruebas de paternidad en sementales bovinos

Capitulo 8. El papel de las biotecnologas reproductivas en la conservacin de recursos

zoogenticos de especies domsticas

Capitulo 9. Evaluacin de la capacidad reproductiva de los sementales bovinos

Capitulo 10. Inseminacion artificial en ganado porcino en condiciones tropicales

Capitulo 1
Produccin in vitro de embriones de vacas sacrificadas

Ruiz M. A. de J. (1), Len V. H. (1), Ruiz H. H. (1), Yamasaki M. A. (1), Lau S. A. (1)

(1) Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autnoma de

Chiapas.

Introduccin

La biotecnologa ha tenido un gran incremento en las ltimas dcadas y ha otorgado a la

ciencia de nuevas herramientas capaces de manipular y modificar el genoma de los seres
vivos ms evolucionados como a los mamferos. El desarrollo de nuevas biotecnologas
para producir animales transgnicos o para la multiplicacin in vitro de lneas de animales
genticamente superiores, se basa en el avance de las tcnicas de fertilizacin in vitro (FIV)
y en el cultivo de embriones; Un objetivo valioso del desarrollo de la biotecnologa es la
produccin in vitro de embriones bovinos, los cuales aseguran una alta tasa de preez
cuando son transferidos a hembras receptoras.

La fecundacin in vitro de ovocitos obtenidos de bovinos hembras sacrificadas representan

una alternativa viable para produccin de embriones, los cuales en su desarrollo pueden ser
destinados a investigaciones bsicas o estudios fisiolgicos, al igual que en la prctica de
otras tcnicas reproductivas. A lo largo del tiempo estas tcnicas han tenido mayor
relevancia en la reproduccin bovina que en cualquier otra especie domstica y esto se debe
al alto contenido gentico que esta especie representa.

La fecundacin in vitro en el rea pecuaria se aplica para la obtencin de embriones a gran

escala y as aprovechar el potencial gentico de los animales ms aptos teniendo en cuenta
sus caractersticas genticas y econmicas, esta tcnica se realiza principalmente en
animales sacrificados los cuales han tenido un proceso de superovulacin previa al
sacrificio, en las cuales los ovocitos contienen un alto contenido de testosterona y bajo
nivel de progesterona y estradiol, lo cual ayudara a la maduracin y fecundacin in vitro,
para su posterior transferencia y as culminar un proceso de biotecnologa reproductiva.

Anatoma y fisiologa del ovario

El ovario es el rgano principal en la reproduccin de la hembra, el cual cumple funciones

de produccin y liberacin del vulo y liberacin del estrgeno y la progesterona,
hormonas encargadas de la regulacin del ciclo estral y la gestacin. Los dos ovarios de la
vaca tienen forma ovalada y estn ubicados en la cavidad abdominal.

Cada ovario consta de mdula y corteza envueltas por la tnica albugnea y el epitelio
superficial. La mdula es la porcin media del ovario y es la encargada de sostener el
sistema vascular y nervioso. Envolviendo la mdula esta la corteza, la cual es un denso
estroma de tejido conectivo donde se sitan los folculos, cuerpos lteos, cuerpos
hemorrgicos, cuerpos albicans y folculos atrsicos. En el epitelio superficial es donde se
forman las clulas germinales en la etapa embrional de la vaca y por esta razn tambin se
le conoce como epitelio germinal. La tnica albugnea es la encargada de soporte externo
del ovario.

Antes del nacimiento, durante el tercio medio de la gestacin el ovario del feto bovino se
encuentra saturado de ovogonias que luego se convierten en oocitos que son almacenados
en folculos primordiales preantrales. Gran parte de esos ovocitos se inactivan durante la
ltima mitad de la vida fetal naciendo as el animal con un nico nmero de ovocitos
encapsulado en su respectivo folculo. Existen cerca de 0.5 millones de folculos en los
ovarios bovinos que gradualmente abandonaran su estado de latencia e iniciaran su
desarrollo hacia folculos antrales.

Una vez se inicia este proceso el folculo ovular o sufrir atresia en un proceso conocido
como la foliculognesis.

La foliculognesis es un proceso continuo en el cual las clulas del folculo primordial se

van transformando y van proliferando dando origen al folculo primario y posteriormente al
folculo secundario que luego se convierte en folculo antral. Este proceso ocurre por la
presencia de hormonas gonadotrpicas y se produce en forma de ondas a lo largo de la vida
del animal.

Produccin de embriones in vitro

La produccin de embriones es de gran importancia, ya que es la forma ms segura de

exportar e importar germoplasma. Adems, los embriones son menos propensos que el
semen o los animales mismos a abrigar patgenos. De esta manera se pueden preservar
genotipos completos. Otra ventaja de la produccin de embriones es su incorporacin en
esquemas de evaluacin gentica y seleccin para el mejoramiento gentico, mediante el
MOET, en donde se puede disminuir el intervalo generacional y aumentar la intensidad de
seleccin, por lo que el cambio gentico se puede incrementar sustancialmente. Pero
tambin puede tener sus desventajas, principalmente en la evaluacin de efectos maternos,
ya que la donadora no cra a su propia descendencia, y por lo tanto el comportamiento de la
progenie no contribuye directamente a la prediccin de la habilidad materna. Tambin es
importante sealar que la habilidad materna de las hembras receptoras puede enmascarar
los efectos genticos de la progenie y de la donadora. Con la utilizacin de la PIV de
embriones se ha encontrado la aparicin de un sndrome, denominado el sndrome del
becerro pesado, el cual parece estar asociado a la inclusin de suero en el medio de cultivo,
aunque se desconoce el componente activo que lo causa.

Coleccin de Ovocitos

Los ovarios de bovino contienen miles de ovocitos, pero con la tecnologa actual solo una
pequea porcin de ellos se pueden utilizar. Para la obtencin de los ovocitos se han
empleado varias tcnicas, tanto en animales in vivo como posmortem.
Coleccin de Ovocitos de animales in vivo

En los ltimos aos se ha visto un incremento en el nmero de reportes de recuperacin de

ovocitos en los animales vivos. Dentro de las tcnicas que se realizan estn: endoscopa,
laparoscopa, aspiracin guiada por ultrasonido y/o ciruga.

Se han realizado trabajos para recolectar y madurar ovocitos secundarios in vitro, los cuales
son recuperados por endoscopa, a travs de la piel de la fosa paralumbar. El ultrasonido
por va intravaginal para aspirar folculos.

Los ovarios fueron retrados por manipulacin rectal y colocados bajo la piel de la regin
sacroisquitica donde estaba colocado el transductor; los folculos fueron localizados y
puncionados para recuperar los ovocitos. Los autores concluyen que permitiendo la
visualizacin y la manipulacin del tracto genital, la laparoscopa puede ser un mtodo
exitoso, rpido y mnimamente daino para el tratamiento de varias formas de infertilidad
en el ganado.

Coleccin de ovocitos de animales posmortem

La obtencin de ovocitos en gran escala de vacas sacrificadas en el frigorfico en forma

masiva ha significado grandes ventajas para la produccin in vitro de embriones. Las
tcnicas que se han empleado son la aspiracin de ovocitos y la diseccin del ovario. La
aspiracin es ms prctica por la velocidad de operacin, pero ambas son igualmente
efectivas. Solamente los folculos entre 2 a 8 milmetros (mm) de dimetro proporcionan
ovocitos con un buen porcentaje de desarrollo, ya que los ovocitos adquieren la habilidad
de iniciar la meiosis cuando llegan al 80% de su tamao final.

Los ovocitos recuperados de folculos menores a 1.6 mm estn en crecimiento y todava no

han alcanzado un estado meiticamente competente, por lo que los ovocitos obtenidos de
folculos menores a 2 mm presentan una reduccin en el porcentaje de maduracin y
fertilizacin comparados con folculos mayores. El mximo nmero de ovocitos
recuperados por ovario, utilizando folculos mayores a 2 mm, son cerca de 10. Se ha
encontrado que los ovarios de vacas proveen un menor nmero de ovocitos aceptables que
las vaquillas productoras de carne, que son sacrificadas a los 2 a 3 aos de edad.

Seleccin de los ovocitos

La vaca es una especie mono-ovulatoria por lo que la mayor parte de los ovocitos obtenidos
tras la aspiracin folicular estn destinados a degenerar. Ello hace necesario estimar la
calidad de los ovocitos antes de utilizarlos para la maduracin In vitro, ya que solamente
una parte de los mismos tienen la capacidad de ser fecundados y soportar el desarrollo
embrionario.

La seleccin de los ovocitos se realiza generalmente en base a tres criterios: el dimetro del
ovocito, el aspecto de su citoplasma y las caractersticas del cmulo que los rodea. El
dimetro de los ovocitos condiciona su capacidad para madurar, de tal forma que los
ovocitos bovinos con un dimetro inferior a 110 m se encuentran todava en fase de
crecimiento y no han adquirido aun la capacidad para madurar.

Los ovocitos rodeados por un cmulo compacto formado por varias capas de clulas,
presentan mayores porcentajes de maduracin, fecundacin y de desarrollo hasta
blastocistos, que los que carecen de cmulo o los que estn rodeados solamente por la
corona radiata.

Diversos autores han tratado de establecer una relacin entre el aspecto del citoplasma y la
competencia del ovocito para madurar, ser fecundado y soportar el desarrollo posterior.
As, se ha comprobado que los ovocitos que presentan un ovoplasma oscuro muestran una
acumulacin de lpidos y un buen potencial para el desarrollo, mientras que los que
presentan un citoplasma plido tienen una baja densidad de orgnulos y escaso potencial de
desarrollo. Por otra parte, cuando el ovoplasma es negro, los ovocitos estn envejecidos y
tienen un potencial para soportar el desarrollo muy bajo.

Maduracin In Vitro de Ovocitos

La maduracin de ovocitos del ganado bovino se puede llevar a cabo in vitro, los cuales se
pueden fertilizar y continuar su desarrollo embrionario con xito. Se han desarrollado desde
soluciones simples de sales balanceadas hasta medios complejos para la maduracin de
ovocitos, basndose en los elementos que estn presentes in vivo, para proporcionar las
condiciones ideales, con el fin de obtener el mayor porcentaje de ovocitos madurados.

Algunos de los elementos que se han utilizado: osmolaridad, pH, gonadotropinas: hormona
folculo estimulante (FSH) y hormona luteinizante (LH), estrgenos (estradiol), clulas
somticas para co-cultivo (clulas del cmulos, granulosa, teca interna, oviducto, tero,
clulas del hgado de rata bfalo), aminocidos, factores de crecimiento (IGF-I, EGF, TGF-
y TGF-), suero de vaca en estro, suero fetal bovino (BFS, por sus siglas en ingls), y
seroalbumina bovina (BSA, por sus siglas en ingls).

El medio M-199 es el que generalmente se emplea en la maduracin de ovocitos, y

usualmente est suplementado con gonadotropinas (FSH/LH), estradiol, suero sanguneo y
piruvato, el cual da altas frecuencias de maduracin nuclear y expansin del cmulus
cuando se agrega FSH.

Las gonadotropinas son necesarias para el desarrollo y maduracin de los ovocitos. La LH

influye en la maduracin del ovocito, altera la concentracin de calcio dentro del
ovoplasma, incrementa la gluclisis e incrementa la oxidacin mitocondrial de la glucosa
dentro del ovocito. La FSH estimula la actividad aromtica de las clulas de la granulosa,
convirtiendo el microambiente folicular andrognico a estrognico. Adems, la FSH
incrementa la expansin de las clulas del cmulus que rodean al embrin, por lo que se
puede decir que la FSH interviene ms en el desarrollo que en la maduracin del ovocito.

Los estrgenos son importantes para la maduracin de los ovocitos, sensibilizan los
receptores de las clulas de la granulosa para responder a las gonadotropinas; si se utilizan
clulas de la granulosa como co-cultivo, no se requiere aadir estrgenos al medio de
cultivo. Hay un efecto favorable del estradiol en el medio de maduracin, el cual llega a ser
evidente en el da 7 del estadio de desarrollo del embrin.

El suero de vaca en estro, el BFS y la BSA son fuentes proticas, pero adems de contener
aminocidos tambin contienen hormonas, factores de crecimiento, vitaminas y otras
sustancias que el ovocito y el embrin requieren para su desarrollo. Se sabe que las clulas
somticas utilizadas para co-cultivo secretan ciertos factores que favorecen la maduracin
normal del ovocito, incrementando la fertilizacin y el desarrollo embrionario.

Por medio del co-cultivo con clulas de la granulosa del folculo ovrico y la seleccin
rigurosa de ovocitos de calidad recuperados de folculos mayores a 3mm se pueden obtener
un gran nmero de embriones, cercanamente a los porcentajes normales obtenidos con la
tcnica de transferencia de embriones in vivo. Los valores de desarrollo embriolgico hasta
mrula o blastocisto son: madurados y fertilizados in vivo, un 55%; madurados in vivo y
fertilizados in vitro, un 45%; y madurados y fertilizados invitro, de un 23 a 63%. Aunque
los ovarios de las vacas contienen miles de folculos en crecimiento menores a 1 mm,
todava es un reto para la ciencia madurar y cultivar ovocitos de este estadio, aunque ya se
ha tenido xito con ovocitos de ratn.

Fecundacin In Vitro

Una vez que disponemos de ovocitos maduros, el siguiente objetivo es lograr la

fecundacin de los mismos, para ello se incuban junto con espermatozoides capacitados en
un medio Tyrode, suplementado con fuentes energticas (piruvato, lactato) y albmina
srica. En la especie bovina, la capacitacin espermtica se ve favorecida por la
incorporacin de heparina al medio. No obstante, para lograr unos resultados ptimos es
necesario ajustar la concentracin de heparina y el nmero de espermatozoides para cada
eyaculado concreto.

Capacitacin espermtica: Para realizar una fertilizacin in vitro es esencial tener

disponible una forma de preparacin espermtica. Se han utilizado numerosos sistemas de
capacitacin, incluyendo medios con alto poder inico y glucosaminoglicanos como la
heparina y el sulfato de fucosa, envejecimiento, cambio de pH, ionforos de calcio y
cafena y fluido del oviducto. En general, cualquier agente que cause entrada de Ca++
dentro del acrosoma del espermatozoide, y cause un incremento en el pH, causar
capacitacin espermtica. Uno de los mtodos ms efectivos es el que utiliza
glucosaminoglicanos (heparina) para la capacitacin espermtica. Entre los mtodos mas
comnmente utilizados estn: el mtodo de percol, el mtodo swim-up y el mtodo de
filtracin glass-wool. Estos mtodos son utilizados en la capacitacin espermtica y
purificacin del semen. El mtodo del percol es uno de los mas utilizados, obteniendo con
l buenos resultados; el mtodo swim-up del semen es un procedimiento mas lento
(requiere 1 hora aproximadamente para su realizacin) y no ha dado mejores resultados que
el procedimiento que se realiza con percol (Monterosso et al., 1994); el mtodo de filtracin
Glass- wool es otra alternativa para la purificacin espermtica, que tiene la ventaja que
provee semen con una viabilidad cercana al 100%. Los lavados por sedimentacin y
resuspensin a travs de la centrfuga ayudan a separar los materiales indeseables
(crioprotectores) del semen congelado de una forma rpida y efectiva, adems aumentan la
motilidad espermtica.
La motilidad progresiva de los espermatozoides es un factor que se tiene que controlar en la
FIV para que el espermatozoide pueda llegar y penetrar la zona pelcida del ovocito
maduro. El toro es otro factor de variabilidad en la fertilidad, ya que ciertos toros o un
grupo de toros pueden presentar mas altos porcentajes de fertilizacin que otros.

La BSA se incluye normalmente en los medios de capacitacin espermtica, ya que se han

encontrado efectos benficos en la capacitacin de los espermatozoides. Se cree que tiene
una funcin importante en la separacin del colesterol y zinc sobre la membrana del
espermatozoide, estabilizndola durante la capacitacin.

Con una capacitacin espermtica apropiada, preincubacin e incubacin en medio libre de

suero a temperatura corporal, pH entre 7.6 a 7.8, la fertilizacin in vitro ha sido un xito
con porcentajes de fertilizacin tan altos como 70 a 80% en bovinos, as como tambin en
ovinos y caprinos.

Fertilizacin: Consiste en la interaccin entre los componentes del ovocito y los del
espermatozoide, activndose la segunda divisin meitica del ovocito y la restauracin del
nmero cromosmico del futuro individuo. La descondensacin de la cabeza del
espermatozoide ocurre dentro de 1 a 2 horas de haber penetrado al ovocito, y el proncleo
masculino se forma de 3 a 5 horas. La concentracin espermtica en la FIV es de 0.5 a 1
milln de espermatozoides por mililitro, y para lograr un buen porcentaje de fertilizacin
hay incubar por 24 horas despus de la maduracin y fertilizacin. Si se observan los 2
cuerpos polares dentro del gameto femenino quiere decir que se llev a cabo la
fertilizacin.

La fertilizacin generalmente se realiza en microgotas de HEPES, a un pH de 7.8. Tambin

se utiliza PHE (penicilamina, hipotaurina y epinefrina) como estimulante de la motilidad
espermtica.

Antes de la fertilizacin generalmente se retiran las clulas del cmulus de los ovocitos
maduros, y este proceso se puede realizar por pipeteo o la adicin de citrato de sodio al 3%,
sin efectos adversos, con el propsito de limpiar al ovocito.

Cultivo In Vitro

Los medios utilizados para el cultivo de los embriones bovinos han sido clasificados en tres
categoras: indefinidos, cuando se utiliza suero y cocultivo con clulas somticas;
semidefinidos, cuando se omite el cocultivo y el suero se reemplaza por albmina srica; y
definidos, cuando el suero se reemplaza por macromolculas como el polivinil alcohol o la
polivinil pirrolidona.

Una vez comprobada la posibilidad de eliminar el cocultivo con clulas somticas, el

siguiente reto fue el tratar de eliminar otros componentes causantes de la indefinicin del
medio, suero o albmina srica, sustituyndolos por macromolculas sintticas. Los
primeros estudios en los que se demostr la posibilidad de cultivar los zigotos bovinos
hasta blastocistos en un medio completamente definido, obteniendo un pequeo nmero de
gestaciones.
Los medios simples ms utilizados para el cultivo de los embriones bovinos son: el fluido
oviductal sinttico, cuya composicin esta en base a los componentes encontrados en el
fluido oviductal ovino, y el KSOM. Estos medios han sido suplementados con numerosos
componentes al objeto de satisfacer las necesidades nutricionales de los embriones. El
componente nuevo que ms ha contribuido a incrementar la eficacia de estos medios
simples son los aminocidos esenciales y no esenciales, Sin embargo, estos medios todava
necesitan ser mejorados sensiblemente, puesto que el cultivo de los embriones producidos
in vitro en el interior del oviducto incrementa notablemente la calidad de los mismos.

Ambiente Fsico y Qumico para el Embrin

Tanto el ambiente fsico como el qumico se deben mantener lo ms cercano posible al

ambiente uterino, ya que los embriones no toleran grandes cambios en ambos ambientes.
Las principales variables que se tienen que cuidar dentro de estos ambientes son:
temperatura, luz, atmsfera de gas, osmolaridad, pH, utilizacin de suero fetal de bovino o
seroalbumina bovina.

Temperatura. El embrin se puede mantener a la temperatura del cuarto por algunas horas
sin efectos adversos. La temperatura ptima para la maduracin in vitro de los embriones es
de 38 a 39C, mientras que para la fertilizacin y cultivo in vitro la temperatura ptima es
39C. Se han demostrado efectos detrimentales a los 40C, particularmente durante la
fertilizacin del ovocito y desarrollo del embrin, por lo que es absolutamente necesario
utilizar equipos de alta calidad con control preciso de la temperatura.

Luz. Como parte de la rutina de maduracin, fertilizacin y cultivo in vitro de los

embriones de bovino, es inevitable su exposicin a diferentes cantidades de luz natural y
artificial. Segn los resultados de un estudio realizado en conejos, se sugiere no
comprometer la maduracin y la fertilizacin in vitro si no es necesario. Los efectos
adversos se pueden dar particularmente por la luz ultravioleta, pero la inclusin de cido
para aminobenzoico (PABA) como ocurre en los mamferos, ha sido sugerida como medida
de proteccin. En un estudio realizado en Blgica con embriones de ratn se demostr que
la luz no es un factor limitante durante la micromanipulacin de los embriones. Por lo que
se recomienda no exponer los ovocitos o embriones a la luz ms de lo necesario, ya que los
eventos de maduracin ocurren normalmente en la obscuridad en el tracto reproductivo de
la hembra.

Atmsfera de gas. Es necesario tener un riguroso control de la atmsfera para incubar los
embriones, ya sea 5% de bixido de carbono (CO2) en aire, o 5% de CO2, 5% de oxgeno y
90% de nitrgeno, utilizando un mximo de humedad relativa para prevenir la evaporacin
del medio. Hay ciertas actividades que se realizan fuera de la incubadora (preparacin y
lavado de los espermatozoides, remocin parcial de cmulos del ovocito, etc.), quedando el
medio expuesto al aire; estas operaciones generalmente se realizan en la campana de flujo
laminar, donde la temperatura, humedad y la fase de gas son totalmente diferentes a las de
la incubadora. Auque el medio modificado TALP empleado est bufferado con HEPES, se
recomienda que estos procedimientos sean realizados lo mas pronto posible. Se ha
demostrado que una baja tensin de oxigeno (5%) es ms benfica para el desarrollo del
embrin de bovino en un medio libre de protena y en ausencia de clulas del oviducto de
bovino. Los diferentes cocultivos pueden requerir diferentes concentraciones de oxgeno
para resultados ptimos. El mecanismo exacto por el cual el CO2 ejerce su accin no se
conoce, posiblemente tenga efecto sobre el pH intracelular, el cual se sabe que es un
potente regulador del metabolismo. Cuando se utilizan microgotas de medio para el cultivo
de embriones cubiertas con aceite, el oxgeno agregado en la incubadora debe pasar a travs
del aceite para que sea consumido por el embrin.

Osmolaridad. Los embriones sufren rpida contraccin y expansin como resultado de

ligeros cambios en la concentracin de sales de los medios (coleccin, maduracin,
congelamiento, etc.), que pueden reducir la sobrevivencia de los embriones transferidos. Si
la osmolaridad del medio es menor a la del ambiente uterino, el embrin absorber agua y
se hinchar hasta explotar, y al contrario, si la osmolaridad es mayor, el tamao del
embrin se encoger lo cual tambin es detrimental para la sobrevivencia del mismo. La
membrana del embrin de bovino aparentemente es muy flexible, la cual tolera cambios en
osmolaridad entre 285 a 1700 miliosmoles (mOsm), la osmolaridad del medio se
recomienda mantenerla a 290 mOsm.

pH. Es importante mantener un pH de 7.4. Se pueden utilizar soluciones que presenten

cambios mnimos en el pH cuando son expuestas a la atmsfera, como el medio PBS (pH
7.4), y se debe tener cuidado de grandes cambios en el pH cuando se utilizan medios de
bicarbonato bufferado (MEM, TCM-199, Hams F-10) si estos se exponen a la atmsfera.
Cuando se usan estos medios el pH se mantiene por medio de una atmsfera artificial de
gases. Suero fetal de bovino o seroalbumina bovina. Se adiciona uno u el otro al medio para
reducir la adhesin de los embriones a la superficie de los tubos o cristalera. El suero
tambin suple algunos factores nutritivos, los cuales incrementan la viabilidad de los
embriones in vitro. Tambin se deben agregar al medio de congelamiento de los ovocitos,
ya que ambos se consideran como crioprotectores extracelulares.

Descripcin de la tcnica

La biotecnologa de la fecundacin In Vitro consiste en 5 pasos bsicos que son:

Aspiracin de los ovocitos, OPU

La aspiracin se hace con una jeringa de 5ml y una aguja de insulina:

Punzando unos milmetros (3mm) atrs del folculo extrayendo todo el contenido folicular,
se realiza la misma operacin a todos los folculos.

Luego se ponen en una caja de Petri con SSN 0.9% se observa al microscopio.

Se aspiran con micro pipeta y se van dejando en otra caja de Petri con SSN 0.9% para su
posterior clasificacin.

Clasificacin de la calidad de los ovocitos. (Observacin y bsqueda bajo el estereoscopio).

La clasificacin propuesta por Leibfried & First (1979) considera las caractersticas de las
clulas del cumulo (cobertura del ovocito) y del citoplasma (ooplasma o ncleo)
clasificndolos de I a IV.

GRADO I: Cmulos compacto presente, con ms de tres camadas de clulas. Ooplasma

con granulaciones finas y homogneas llenando todo el interior de la zona pelcida y de
coloracin marrn.

GRADO II: Cmulos compactos con rodeado total o parcial al ovocito, con menos de tres
camadas de clulas, ooplasma con granulaciones distribuidos heterogneamente, pudiendo
estar ms concentradas en el centro y ms claras en la periferia, ooplasma llena totalmente
en el espacio interior de la zona pelcida.

GRADO III: Cmulos presentes, menos compacto, mas expandido, ooplasma contrado,
menos homogneo y puede tener espacio entre la membrana celular y la zona pelcida, el
ooplasma llena irregularmente el espacio perivitelino o de la zona pelcida.

GRADO IV: ovocito desnudo sin cmulos, el ooplasma es homogneo de color marrn.

Los ovocitos de grado I, II, III son considerados como viables y encaminados al
laboratorios, los grado IV no deben ser llevados al laboratorio, sin embargo se recomienda
colocarlos y dejar que en el laboratorio se haga una segunda consideracin.

Otros ovocitos que podemos encontrar que igualmente no son considerados viables y no se
envan al laboratorio son:

EXPANDIDOS: ovocitos con cmulos no compacto y expandido, el ooplasma puede

presentarse homogneo o no.

DEGENERADOS: ooplasma condensado o contrado, con espacio muy grande entre la

membrana y la zona pelcida, tambin son considerados ooplasma con granulaciones muy
heterogneas y color casi translucido, pueden presentar o no clulas de cumulo.

PICNOTICOS: tambin conocidos con ncleo picntico, este proceso indica una
condensacin de la cromtica con posible necrosis celular, estos ovocitos son enviados al
laboratorio para una segunda consideracin.

Maduracin de los ovocitos, MIV

Al llegar los ovocitos al laboratorio, se debe hacer una reclasificacin de los ovocitos para
observar la calidad de estos ya que en el transporte puede disminuir su calidad a causa del
estrs de transporte.

Luego de la reclasificacin:

Pasar los ovocitos a la placa con gotas de medio de maduracin TCM-199 con sales de
EARLE.

Posteriormente meter a madurar a la incubadora a una temperatura de 38.8C a una

concentracin de un 5% de CO2 durante 24 horas.

Fecundacin de los ovocitos, FIV

Capacitar los espermatozoides mediante el gradiente de Percoll.

Sacar los ovocitos de la incubadora y pasarlos al medio de fertilizacin in vitro.

Colocar las placas con los ovocitos de FIV en la incubadora durante 22 horas.

Cultivo In Vitro del embrin, CIV

Sacar las placas de FIV y eliminar el exceso de clulas as como los espermas que no
fecundaron a los ovocitos.

Pasar a medio de cultivo CR.

Meter a la incubadora durante 20 horas.

DIA 3
Se observa durante tres das a partir de la fecundacin para observar la presencia o ausencia
de clivaje.

Se eliminan los ovocitos que no estn clivados.

Se agregan 45l de medio nuevo de CR.

Se regresan las placas a la incubadora.

DIA 6
Se observa la calidad y el nivel de clivaje.

Posteriormente se hace una seleccin de los embriones a transferir.

Se informa para saber cuntas receptoras se van a utilizar.

DIA 7
Se colocan los embriones seleccionados en las pajillas listos para la transferencia.

Se anota en un protocolo en qu estado de desarrollo se encuentra el embrin.

Posteriormente se colocan las pajillas en la transportadora de embriones a una temperatura

de 38.5C.

Referencias

Barlow, P., P. Puissant, P. VanDer Zwalmen, J. Vandromme, P. Triagaux, y F. Leroy.

1992. In vitro fertilization, development, and implantation after exposure of mature
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Bedford, J. M. y A. Dobrenis. 1989. Light exposure of oocytes and pregnancy rates after
their transfer in rabbits. J. Reprod. Fertil, 85:477-481.

Brackett, BG; Bousquet, D; Boice , ML; Donawicck, WL; Evans, JF; Doresell, MA.
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Capitulo 2
Kappa casena y su influencia en produccin de leche en
ganado suizo americano de Chiapas

Ruiz, E.A.(1), Rojas, R.I.(1), Herrera, J.G.(1), Medrano, J.F.(4), Cortez, C.(1), Ortega,
M.E.(1), Lemus, C.(2); Ruiz, H.(3)

1. Colegio de Posgraduados. Recursos Genticos y Productividad. 2. Facultad de

Medicina Veterinaria y Zootecnia, U.A.N. 3. Facultad de Medicina Veterinaria. UNACH.
Campus II. 4. Department of Animal Science University of California.

Resumen

Para evaluar la influencia de los genotipos del gen kappa casena en la produccin de leche
en ganado Suizo Americano, se extrajeron al azar 113 muestras de sangre, provenientes de
65 vacas y 48 cras de la regin Frailesca, Chiapas. La determinacin de los genotipos se
realiz por PCR-RFLP utilizando HinfI (endonucleasa de restriccin), presentando un
fragmento de 350bp, localizado en el exn IV, los genotipos encontrados fueron AA, AB y
BB que presentaron una frecuencia de 0.318, 0.354 y 0.327 y la frecuencia allica de 0.494
y 0.505 para el alelo A y B respectivamente. Al analizar los genotipos y su relacin con
produccin de leche se determin que las vacas con el genotipo BB presentaron mayor
rendimiento de leche a 305d, seguido por el genotipo AB, concluyendo que el alelo B es
determinante en la produccin de leche en la raza estudiada.

Palabras clave: ADN, Bovinos de leche, Calidad, Produccin de leche

Introduccin

La identificacin de marcadores moleculares relacionados con una mayor produccin y

calidad de leche en vaquillas a temprana edad y en reproductoras, es una herramienta
adicional en el proceso de seleccin, la cual se puede traducir en una mayor productividad
del hato y en una reduccin del intervalo entre generaciones. En la actualidad se conoce que
los marcadores de prolactina y somatotropina, influyen en una mayor produccin de leche
(Mehmannavaz et al., 2009; Alipanah et al., 2008) y la -lactoglobulina y kappa casena en
su composicin (Alipanah et al., 2008; Rojas et al., 2009), por lo cual se recomienda
incrementar la frecuencia de estos genotipos, mediante la identificacin y seleccin de
reproductores en los hatos.

El producto del gen de kappa casena (K-CSN) es una molcula compuesta por 169
aminocidos con dos variantes (A y B), que difieren en los aminocidos 136 y 148, donde
en la posicin 136 Thr (ACC) es cambiada por Ile (ATC) y en la posicin 148 Asp (GAT)
por Ala (GCT) para A y B respectivamente (Neelin, 1964; Schmidt, 1964; Lin et al., 1992).
El cambio en la posicin 148 es suprimido por un sitio con HinfI con sitio de corte
GANTC en la variante B, presente en la variante A. La kappa casena es la ms comn de
las casenas y las variantes son sintetizadas diferencialmente en la glndula mamaria de
animales heterocigotos (Debeljak et al., 2000).

El objetivo del estudio fue determinar la frecuencia allica y genotpica del polimorfismo
del gen K-CSN en vacas y vaquillas de reemplazo de la raza Suizo Americano en Chiapas y
relacionarlas con la produccin de leche.

Materiales y mtodos

Se utilizaron 113 muestras de sangre de 65 vacas y 48 cras de la raza Suizo Americano

provenientes de seis ranchos de cra de animales de registro, inscritos en la Asociacin
Mexicana de Criadores de Ganado Suizo, en la regin Frailesca del estado de Chiapas. Las
muestras se obtuvieron por puncin de la vena caudal utilizando tubos vaccutainer con
anticoagulante EDTA (2.5 mg/2.5 mL de sangre) y procesadas en el Laboratorio de
Fisiologa y Biologa Molecular del programa de Fitopatologa del Colegio de
Postgraduados, Mxico. La extraccin de ADN se realiz siguiendo la tcnica descrita
(Miller et al., 1988) con modificaciones. Para verificar la presencia del ADN, las muestras
se corrieron en electroforesis en gel de agarosa al 1%, durante 60 minutos a 86 voltios,
utilizando un volumen de 5 L de ADN y 2 L de buffer de carga, utilizando TBE 1X
como buffer de corrida. Para la determinacin de los genotipos de (K-CSN) se utiliz el
protocolo descrito por Medrano y Crdova (1990).

Para localizar el gen K-CSN se amplific un fragmento de ADN usando PCR con los
primers: Forward: 5 ATCATTTATGGCCATTCCACCAAAG 3 y Reverse: 5
GCCCATTTCGCCTTCTCTGTAACAGA 3` y se utiliz la siguiente mezcla de reaccin:
dH2O=19.125 l, 10xbuffer=2.5 l, 25mM MgCl2=1.5 l, 10mM dNTP=0.25 l, 10pmol
Primers=0.25 l cada uno, Taq polymerase 5UI=0.125 l y DNA a una concentracin de
(50ng aprox.)1 l, obteniendo un volumen final de 25l. La reaccin se proces en un
termociclador TECHNE TC-512 a 35 ciclos, desnaturalizacin 94C/30seg; alineamiento
60C/30seg; extensin 72C/30seg y extensin final 72C/5 min. La verificacin de la
presencia del gen K-CSN se realiz por electroforesis en gel de agarosa al 1%, utilizando 5
l del producto de PCR, 2 l de buffer de carga, adems de bromuro de etidio y TBE 1X
como buffer de corrida. Al comprobar la presencia del gen, las muestras fueron preparadas
para la digestin enzimtica con HinfI, utilizando la siguiente mezcla de reaccin:
dH2O=4.65l, Buffer NEB 2=2.25l, HinfI=0.6l (6 unidades) y producto de PCR=15 l,
teniendo un volumen final de 20 l. La incubacin se realiz en incubadora marca Boekel
Scientific Mod. 133000 a 37C por toda la noche. Despus de haber finalizado la digestin,
se verific en gel de agarosa al 3% con bromuro de etidio y TBE 1X, posteriormente se
coloc y visualiz en un transiluminador de luz ultravioleta Modelo Gel-Doc 2000, BIO
RAD, encontrando el polimorfismo del gen que consisti en la presencia de tres
genotipos (AA, AB y BB).

El anlisis estadstico consisti en determinar las frecuencias genotpicas, allicas y

equilibrio HW, las cuales se realizaron por el mtodo de conteo directo. La produccin
total de leche por vaca, se estim mediante muestreos peridicos con intervalos de 14 das,
con fecha fija dentro del mes, durante 10 meses, la cual fue ajustada a 305 d, 2x, EM,
usando factores de ajuste multiplicativos regionales (Ochoa, 1991).

La informacin de produccin de leche fue analizada con un modelo de dos criterios de

clasificacin sin interaccin usando el PROC GLM de SAS (SAS
Inst.Inc.,Cary,N.C.,2003). El modelo incluy los efectos fijos de subclase hato-ao-estacin
y genotipo de k-CSN y el efecto aleatorio de error.

Resultados

Usando los primers Forward: 5 ATCATTTATGGCCATTCCACCAAAG 3 y Reverse: 5

GCCCATTTCGCCTTCTCTGTAACAGA 3` se amplific un fragmento de 350bp,
correspondiente al gen de K-CSN. El producto de la digestin con la endonucleasa de
restriccin HinfI permiti diferenciar el polimorfismo del gen, mostrando el genotipo AA la
presencia de dos bandas de 132/134 y 84bp, el genotipo AB con tres bandas de 266,
132/134 y 84bp y el genotipo BB con dos bandas de 266 y 84bp (Ver Figura 1).
La frecuencia allica del gen K-CSN en ganado Suizo Americano se presenta en el (Ver
Cuadro 1), siendo mayor para el alelo B con 0.505 y menor para el alelo A con 0.495, con
112 y 114 alelos respectivamente. El genotipo ms abundante fue el AB con 0.354, seguido
por el BB con 0.327 y AA con 0.318.

Al analizar por separado los genotipos de vacas y cras, estos mostraron frecuencias
genotpicas de 0.246, 0.4 y 0.353 para vacas y 0.416, 0.291 y 0.291 para cras, cuyas
frecuencias allicas fueron 0.446 y 0.554 para vacas y 0.562 Y 0.438 en las cras. El alelo
A mostr la mayor frecuencia allica en las cras y la menor para el alelo B, sin embargo,
en vacas la mayor frecuencia fue para el alelo B.

El anlisis de las vacas en produccin mostr que el genotipo favorable para la produccin
de leche fue el BB con una produccin estimada de 3698.61kg lactancia-1 y, para los
genotipos AB y AA fueron 3281.95 y 3257.59 kg lactancia-1 respectivamente, notndose
una superioridad de 292.01 kg lactancia-1 del alelo B.

Por otra parte, se encontr que la poblacin muestreada se encuentra en equilibrio HW

(Hardy Weinberg), probablemente por utilizar toros de A.I. en comn.
Discusin

Las frecuencias allicas y genotpicas, as como la heterocigocidad encontrada en la raza

Suizo Americano son similares a lo reportado en diversas razas, aos, y nmero de
muestras en varias partes del mundo, encontrndose heterocigocidad en el rango de 0.345 a
0.58 en las razas Rubia Gallega, Pantaneiro, Criollo de Uruguay, Criolla Saavedrea de
Bolivia, Criollo argentino, Holstein y Criollo limonero en Venezuela (Viana et al.,2001;
Lara et al., 2002;Postiglioniet al.,2002; Ripoliet al.,2003; Poli et al.,2005; Kalashnikovaet
al., 2009 y Rojas et al.,2009). Sin embargo, Sulimova et al. (2006), analizando cinco razas
de ganado Ruso (Bestuzhev, Kalmyk, Russian Black Pied, Yaroslavl, and Yakutbreeds), no
observ heterocigocidad en ninguna de las razas y concluye que los marcadores de ADN
basados en el polimorfismo del gen de K-CSN es recomendada como una importante
prctica para determinar la calidad de la leche, de tal manera que el incluir en un hato toros
con el alelo B el efecto se ve reflejado rpidamente en la siguiente generacin, asegurando
de esta manera la calidad y produccin de leche de la poblacin. Estudios realizados en
toros de la raza Holstein, han reportado frecuencias del alelo B de 0.13 (Zadworny y
Kuhnlein,1990); asimismo, otros investigadores informan de frecuencias de los alelos A y
B de 0.16 a 0.30 en vacas Criollos, Ceb y Siboney de Cuba (Uffo et al.,2006). Estudios
realizados en las razas Criollos de dos comunidades campesinas de Huashcao y Ticllos,
Rivas et al. (2007) encontraron frecuencias allicas de 0.64 y 0.36; 0.50 y 0.50, para los
alelos A y B respectivamente, manifestndose heterocigocidad alta en el ganado criollo de
Ticllos y baja en el ganado de la comunidad de Huashcao. De igual forma, Alipanah et al.
(2008) en las razas Berrenda negro y Berrendo rojo, reportaron frecuencias de 0.17 y 0.31
para el alelo B . Por otra parte, Solarte et al. (2009) utilizando la tcnica PCR-SSCP
encontraron una frecuencia de 0.20 para el alelo B y una heterocigocidad observada de
0.279.

Con respecto a la estimacin del equilibrio HardyWeimberg (H-W), la mayora de los

estudios no han encontrado equilibrio H-W (P< 0.05), resultados que difieren a este
estudio, aun cuando se estudi una poblacin pequea; debido a que el gen influye en
ambas caractersticas deseables y que estn relacionadas, beneficiando as la produccin de
leche y a su vez el rendimiento de queso. Las diferencias pueden estar relacionadas con el
QTL de rendimiento en leche, ocasionadas por programas de seleccin orientados
principalmente a produccin de leche, ignorando la calidad, por no existir incentivos
econmicos para incluirlas en dichos programas, adems de usar un material gentico
comn en los diferentes hatos. En contraste, otro estudio realizado en ganado Suizo, en
Veracruz, Mxico report que el alelo A fue ms frecuente (Cervantes et al.,2007), pero no
estableci su relacin con produccin de leche.

Conclusiones

El gen de kappa casena puede considerarse como un buen marcador molecular

determinante en la produccin de leche, motivo para ser considerado en los programas de
seleccin asistida por marcadores moleculares.
El alelo B puede servir de referencia para mejorar la produccin y calidad de la leche en la
raza Suizo Americano, siendo deseable la introduccin de sementales que posean este alelo.

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Capitulo 3
Enfermedades del sistema reproductor: Bacterias que afectan
rganos genitales en fauna (domstica, silvestre/cautiva,
extica)

Giris, D.M.

Departamento de Ciencias Mdico Veterinarias, Facultad de Medicina Veterinaria y

Zootecnia, Universidad Autnoma de Chiapas

Introduccin

Las infecciones del aparato genital, afectan la fertilidad por alterar sus condiciones
fisiolgicas, perjudicando el transporte espermtico, incrementando la mortalidad de
espermatozoides o proporcionando un ambiente hostil para el desarrollo del cigoto, con
muerte embrionaria o fetal, as como el nacimiento de terneros dbiles o muertos. Todos
estos problemas se traducen en una disminucin de la capacidad reproductiva de los
animales, lo que conlleva a severas prdidas econmicas para el productor (Arthur et al.,
1991).

Las infecciones del tracto reproductivo son de tres tipos:

Infecciones endgenas. Son las ms comunes, y resultan de alteraciones de la microbiota

residente normal de la vagina.

Infecciones iatrognicas. Ocurren cuando inoculamos el tracto reproductor con

microorganismo (bacterias, virus, hongos) que han sido introducidos mediante
procedimientos de exploracin gineco-obsttrica.

Infecciones venreas. Causados por agentes parasticos primarios (protozoos, bacterias,

virus) que son transmitidos mediante actividad sexual por un reservorio / portador e
infectan a su pareja.

La mayora de las infecciones genitales en la hembra involucran al endometrio

(endometritis), el cual puede progresar al miometrio (metritis) y si esta infeccin involucra
la pared uterina, resulta en una perimetritis, peritonitis y septicemia. La infeccin de los
oviductos (salpingitis) es rara y el proceso de infeccin puede continuar hacia la crvix
(cervicitis) y de aqu a la vagina (vaginitis). Sin embargo, hay que considerar que las
infecciones genitales pueden ser desde una vaginitis, a cervicitis, a endometritis y as
sucesivamente (infecciones ascendentes).
Condicionantes para que ocurran trastornos en el reproductor

Inherentes al animal:

Temperamento (instinto-afectiva, aptacin-adaptacin, estado anmico, accesibilidad

territorial / individuo / grupo).

Genopatas (agenesia, hipoplasia, bi-cervix, aplasia cornual, etc.).

Organopatas (corazn, hgado, rin, cerebro, glndulas endocrinas, rganos linfoides,

etc.).

Desnutricin.

Fisiolgico (influencia endocrina).

Anatmico (mal posicin de rganos: torsin uterina. Mal posicin fetal).

Inherentes al ambiente:

Fsico-ambiental (luminosidad, temperatura, humedad / pluviosidad, etc.).

Traumatismo fsico-mecnico (fractura, luxacin, perforacin, incisin, etc.).

Qumicos (protena, lpido, carbohidrato, vitaminas liposolubles / hidrosolubles, minerales /

plaguicidas, frmacos, etc.).

Biolgicos (microbiota residente normal alterada, agentes parasticos: bacterias, hongos,

virus, protozoos, helmintos, insecta, arcnida, lepidosaurios, dinoflagelados, etc.).

La microbiota residente normal potencialmente patgena y agentes parasticos, pueden

colonizar / desarrollarse, multiplicarse, invadir e infectar pudiendo o no producir un estado
de enfermedad (depende del estado de inmunidad del individuo) sistmica o en el rgano
reproductor por dos vas: endgenas y exgena. La va endgena septicmica
(bacteremia, fungemia, viremia), puede ocurrir por agentes parasticos primarios (Brucela,
IBR, Neospora, Chlamydophila, etc.) que tienen tropismo hacia un rgano blanco o feto, lo
que provoca genitopatas como: vaginitis, cervicitis, endometritis, metritis, perimetritis,
salpingitis o muerte celular (espermatozoides, ovulo), muerte embrionaria, muerte fetal =
aborto / momificacin / maceracin. Por otra parte considerar que un agente biolgico
inmungeno activo (vivo) atenuado / modificado puede afectar al embrin / feto y producir
la muerte o infertilidad de los progenitores. Mientras que los agentes exgenos, por lo
general tienen un tropismo de rgano (hgado, rin, cerebro, pulmn, intestino, etc.), que
trae como consecuencia efectos sistmicos que afectan a la madre y ponen en riesgo la
viabilidad del feto. Sin embargo, los agentes exgenos no biticos (sustancias txicas:
Ixodicidas, herbicidas, antibiticos, desinflamatorios, vitaminas, minerales, etc.) producen
efectos citotxicos, embriotxicos, fetotxicos, nefrotxicos, hepatotxicos afectan el
funcionamiento de rganos y sistemas lo que ocasiona la muerte en el individuo (madre /
feto) o la viabilidad de un producto (becerro dbil, bajo desarrollo corporal, teratognesis).
Por ltimo, considerar condicionantes inherentes en el individuo congnitas / genticas
(agenesia, hipoplasia, teratognesis, etc.) que son causas de esterilidad. Todo lo
anteriormente mencionado, se traducir en repeticin de celos, das abiertos prolongados,
infertilidad, baja libido o esterilidad en el animal / hato reproductor.

Clasificacin de agentes etiopatognicos que afectan a la fauna

en Chiapas

A continuacin se presentan una serie de cuadros sinpticos de agentes etiopatognicos que

afectan a la fauna (domstica/silvestre) del estado de Chiapas y otros estados de Mxico. La
finalidad de esta presentacin, es la de proporcionar una gua actualizada
(nomenclatura/taxonoma) de agentes parasticos bacterianos que producen trastornos
reproductivos/sistmicos en diferentes especies animales incluyendo al humano, en donde
se describen brevemente sus efectos patognicos en el animal y los riesgos a la salud
humana (zoonosis). Dado a que los especialistas en reproduccin animal estn
exponindose frecuentemente a este tipo de agentes infecciosos con carcter zoontico, lo
que implica riesgos a su salud humana y la de su familia.
Cuadros sinpticos
Referencias

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Capitulo 4
Reproduccin en perros

Ocampo P.

Facultad de Medicina veterinaria y Zootecnia, Universidad Autnoma de Chiapas

Introduccin

En la actualidad la reproduccin de los perros es un tema controversial, en algunos casos se

cuestiona fuertemente el que se lleve a cabo, ya que hay una sobrepoblacin de perros sin
hogar; por lo que no se pretende incentivar sta prctica de forma irresponsable, sino al
contrario, es importante conocer del tema ya que reproductivamente los perros se
comportan muy diferente a las dems especies domsticas, por lo que es necesario tener el
completo conocimiento y comprensin de la fisiologa reproductiva de la perra, as como de
la estructura y funcin de las hormonas que participan en el ciclo reproductivo, para
realizar un adecuado manejo en la reproduccin en los perros, aproximarse a un diagnstico
e implementar el tratamiento adecuado en las diversas enfermedades que pueden afectar el
aparato reproductor y la fertilidad.

El ciclo reproductivo

La pubertad se presenta con el inicio de la actividad reproductiva, manifestndose en la

hembra con el primer proestro y en los machos con la aparicin de espermatozoides en el
eyaculado. En los perros como en otras especies, inicia cuando alcanzan el 70% de su peso
adulto, por lo que la edad en la que se presente variar dependiendo de la raza. Por lo
general las razas pequeas presentan la pubertad a los 6 meses, mientras que en razas
grandes al ao y medio o incluso, los 2 aos; es importante considerar que ciertos factores
pueden retrasar su presentacin, tales como dietas de mala calidad, estrs o enfermedad.

La madurez sexual se da cuando se alcanza la mxima capacidad reproductiva, la cual se

presenta entre el tercer y cuarto celo. En las perras, aun cuando pueden quedar gestantes
desde el primer celo, no se considera lo ms adecuado, ya que a esa edad an no se han
desarrollado completamente, en muchos casos an no alcanzan el peso adulto, y tambin el
nmero de cachorros puede ser reducido ya que la mxima tasa de ovulacin se presenta
durante la madurez sexual.

Ciclo estral de la perra

La perra de acuerdo a su ciclo estral se clasifica como monostrica no estacional,

presentando por lo general intervalos interestrales de 7 meses, que pueden ser muy
variables, extendindose en perras con ciclos normales de 4.5 a 13 meses ms, sin que
influya la estacin del ao. Las etapas del ciclo estral que presenta son: proestro, estro,
diestro y anestro.

Proestro

El proestro tiene una duracin de 3 a 20 das, se caracteriza por ser la etapa en la que la
hembra atrae a los machos, pero no acepta la monta, incluso puede llegar a ser agresiva. Se
puede observar la vulva hipermica, edematizada y con secrecin serosanguinolenta. Es
importante tener en cuenta que en las perras hay variaciones individuales, por lo que los
signos no siempre se manifestarn de la misma forma ni en todas las perras por igual,
tambin es por ello que el rango de duracin de sta etapa es grande.

La perra en proestro se encuentra bajo la influencia de los estrgenos que se sintetizan y

secretan en los folculos ovricos en desarrollo, durante sta etapa inicia la produccin de
progesterona debido a que empieza a haber luteinizacin de los folculos, sta es una de las
tantas caractersticas reproductivas que hace muy diferente a la perra de las dems especies
domsticas.

Estro

El estro es la etapa donde se lleva a cabo la ovulacin, as como el proestro tambin tiene
una duracin que va de 3 a 20 das, se caracteriza porque la hembra es receptiva al macho
(aunque hay perras que nunca lo aceptan, en esos casos se puede implementar la
inseminacin artificial), tiende a orinar con mayor frecuencia y hay disminucin en la
ingesta de alimento. La vulva puede estar edematizada, hipermica y con secrecin
serosanguinolenta.

Los estrgenos alcanzan su mxima concentracin de 1 a 2 das antes del inicio del estro, la
perra suele empezar a mostrar signos de celo constante slo cuando las concentraciones de
estrgenos circulantes, una vez elevadas, declinan.

La concentracin decreciente de estrgenos sricos es reflejo del proceso final de

maduracin del folculo varios das antes de la ovulacin.

La combinacin de una concentracin creciente de progesterona srica y decreciente de

estrgenos en los das finales del proestro estimula al cambio de conducta en la perra, quien
de no aceptar la monta pasa a ser receptiva y buscar activamente al macho. As tambin, las
concentraciones declinantes de estradiol y crecientes de progesterona dan lugar a la
secrecin sbita de la LH en la perra, con la cual inicia la ovulacin en 24 a 48 horas.

La ovulacin en la perra es espontnea, pudiendo tener folculos con varios ovocitos, que
son liberados como ovocitos primarios y transcurren de 48 a 72 horas para que maduren y
se conviertan en ovocitos secundarios, teniendo una viabilidad de 48 a 72 horas despus de
lo cual se forma el cuerpo lteo.
Diestro

En la perra el diestro tiene una duracin muy larga respecto a las dems especies
domsticas; en caso de estar gestante esta etapa tiene una duracin de 63 + 5 das, mientras
que en hembras vacas va de 80 a 100 das. La perra mantiene una conducta tranquila, no
receptiva al macho, sin embargo, tambin puede haber conducta de nidacin en el caso de
que est gestante o pseudogestante.

Despus de la ovulacin (que ocurre en el estro) se desarrollan cuerpos lteos en el ovario

dentro de las cavidades foliculares rotas, lo que da lugar a una poblacin celular capaz de
sintetizar y secretar progesterona durante el periodo de gestacin. El punto mximo en la
sntesis de progesterona de estos cuerpos lteos suele alcanzarse 20 a 30 das despus de la
ovulacin. Esta tasa mxima de secrecin ocurre alrededor de 2 a 3 semanas despus de
iniciado el diestro, persiste una meseta transitoria en la concentracin de progesterona
durante 1 a 2 semanas adicionales. En ese momento, las cifras de progesterona son mucho
mayores que las basales (< 0.5 ng/ml), por lo general entre 15 y 60 ng/ml.

Por lo tanto, el diestro es considerado una etapa progestacional, ya que al permanecer el

cuerpo lteo (habiendo o no gestacin), hay produccin de progesterona, lo que conlleva a
que se puedan presentar los siguientes eventos en esa etapa:

-Gestacin: En caso de que la hembra haya recibido montas frtiles.

-Pseudogestacin clnica: Anteriormente y errneamente se le conoca como gestacin

psicolgica; es un sndrome en el que una perra no gestante se comporta como si lo
estuviera, comienza generalmente con signos de comportamiento tales como inquietud,
actividad disminuida, preparacin del nido, agresin, lamido del abdomen y adopcin de
objetos inanimados; posteriormente, las hembras pseudogestantes pueden manifestar
aumento de peso, desarrollo de glndula mamaria, secrecin lctea y, a veces,
contracciones abdominales que semejan a las del parto. La presentacin de la
pseudogestacin clnica parece estar relacionada y depender de una exposicin prolongada
a niveles elevados de progesterona, as tambin se considera que puede ocurrir como
resultado de las concentraciones crecientes de prolactina o una aumentada sensibilidad a la
prolactina inducida por una rpida declinacin de los niveles de la progesterona en la fase
ltea. En los casos que los signos presentes son leves, se puede simplemente inhibir todo
aquello que pueda estimular la conducta, es decir, retirar objetos adoptados, destruir los
nidos realizados, as como nunca ordear a la perra, ya que esto lejos de disminuir la
secrecin lctea, solamente la estimular. En cuanto al uso de frmacos, el tratamiento de
eleccin es la administracin de drogas supresoras de la prolactina, especialmente los
agonistas dopaminrgicos como son la bromocriptina y cabergolina.

Es importante tener en cuenta que las perras que presenten sta condicin la desarrollarn
en los siguientes ciclos.

-Complejo hiperplasia endometrial qustica (HEQ) - Pimetra: Se define como la

acumulacin de material purulento en el interior del lumen uterino, es una enfermedad
hormonal dependiente de la progesterona, que cursa con una complicacin infecciosa,
prevaleciendo la infeccin por E. coli. Como se ha mencionado, durante el diestro, la
progesterona alcanza altos niveles sanguneos, y es la principal responsable de esta
patologa que compromete no slo el potencial reproductivo de la paciente, sino que
tambin puede llevarla a la muerte. Este complejo presenta una elevada prevalencia y se
observa frecuentemente en hembras de edad media y viejas, o bien en hembras jvenes que
han recibido tratamientos hormonales. El tratamiento de eleccin es la
ooforosalpingohisterectoma (OFSH) ya que por lo general se presentar en los siguientes
ciclos que la perra no est gestante, pudiendo comprometer la vida del paciente.

Anestro

El anestro puede tener una duracin de 3 a 9 meses, inicia despus del parto en las perras
gestantes y en las no gestantes, una vez concluido el diestro. En esta etapa las perras se
encuentran tranquilas y no hay atraccin hacia los machos.

Endocrinolgicamente el anestro suele ser definido como el periodo que sigue al diestro,
cuando las concentraciones de progesterona srica alcanzan niveles basales por debajo de
0.5 ng/ml.

Determinacin del momento ptimo para el apareamiento

El estro es la etapa donde se lleva a cabo el apareamiento, es importante tener en cuenta

que, como se mencion anteriormente, la duracin de esta etapa es variable as como los
signos que se pueden observar y por ello es necesario acudir a algunas herramientas para
determinar el momento ptimo de la monta:

Signos clnicos y comportamiento: stos tienen una variacin individual, en cuanto

a la duracin e intensidad de su presentacin, es por ello que en muchos de los casos no se
recomienda guiarse exclusivamente de ellos.

Medicin de niveles sricos de progesterona: La medicin de progesterona en sangre es una

prctica cada vez ms utilizada, la cual nos indica el momento de ovulacin, y por lo tanto,
los das indicados para la monta o inseminacin artificial (cuadro 1). Hay que recordar que
el perodo de mxima fertilidad para el servicio natural se extiende desde el da del pico de
LH hasta seis das despus del pico de LH, es decir, desde 2 das antes de la ovulacin hasta
4 das despus de la sta.
 Citologa vaginal exfoliativa (CVE)

Es una tcnica que consiste en la recoleccin de clulas vaginales por medio de un hisopo,
con las cuales se hace una impronta en una laminilla, se tien y se observan al
microscopio. Es un mtodo complementario econmico y de simple realizacin orientativa
para determinar la etapa del ciclo estral en que se encuentra una perra y tambin es de
utilidad para el diagnstico de algunas patologas como vaginitis y tumor venreo
transmisible (TVT).

La CVE se fundamenta en que todas las perras bajo influencia de folculos funcionales y en
maduracin estn bajo el efecto de concentraciones cada vez ms altas de estrgenos.
Estos causan engrosamiento de la cubierta vaginal, lo que aleja ms a las clulas de la luz
vaginal de su aporte sanguneo, por lo que durante el estro se obtendrn clulas
queratinizadas a diferencia de las obtenidas en las otras etapas del ciclo estral.

Para realizar una CVE es necesario contar con los siguientes materiales: guantes de
exploracin, torunda de algodn, hisopos de plstico largos estriles (nunca emplear de
madera), portaobjetos, tincin y microscopio compuesto.

Los pasos para realizar la CVE son los siguientes:

a) Limpiar los labios vulvares con un algodn limpio humedecido con agua, nunca
usar alcohol.

b) Extraer el hisopo de su empaque, antes de hacerlo es importante fijar o adosar el

algodn del hisopo con el objetivo de que el algodn no se vaya a desprender del palito de
plstico adentro de la perra. Nunca tocar el algodn con la mano, solamente se debe
manipular la porcin posterior del hisopo, hay que recordar que la parte que va a entrar a la
vagina (el algodn) debe estar estril para evitar transmitir algn tipo de infeccin a la
perra.

c) Exponer los labios vulvares entre el dedo medio y pulgar, en el caso de personas
diestras, se recomienda esto se haga con la mano izquierda.

d) Introducir el hisopo por la comisura dorsal de la vulva (evitar introducirlo en la fosa

del cltoris), a travs del vestbulo vaginal; una vez que se llega al cingulum, redirigir el
hisopo en direccin craneal de la perra.

e) Dar 3 giros con la mueca adentro de la vagina de la perra, recordar que se quiere
obtener las clulas de la pared vaginal.

f) Sacar el hisopo de una sola intencin. Todo el procedimiento debe tomar solo unos
segundos y rara vez produce dolor.

g) Una vez que se retire el hisopo, su punta de algodn se gira con suavidad de un
extremo a otro en un portaobjetos (para realizar la impronta de las clulas).

Debe haber espacio para tres impresiones lineales separadas. Es importante no tallar la
punta del algodn con el cristal, ya que el resultado es la obtencin de material no
diagnstico.

h) Teir la laminilla con tinciones como: Diff-Quick, Hemocolorante rpido, o bien,

puede ser usado el azul de metileno en aquellos casos que se tenga experiencia con la
identificacin de clulas.

i) Observar al microscopio con objetivo 10X.

Para determinar la etapa del ciclo estral de la perra o alguna patologa es necesario
distinguir el tipo y la cantidad de clulas presentes en la laminilla.

El tipo de clulas vaginales se basa en su morfologa. Esos diferentes tipos de clulas

representan etapas de la muerte celular. A medida que mueren las clulas vaginales
redondas y saludables, se vuelven ms grandes y de forma ms irregular. Los ncleos
dentro de las clulas epiteliales de la vagina tambin sufren cambios que reflejan muerte
celular: el ncleo se torna cada vez ms pequeo y despus picntico antes de que termine
por desintegrarse, lo que dar lugar a una clula anuclear.

Fig. 1 Clula parabasal

Clulas parabasales:

Son las ms saludables y pequeas de las clulas vaginales. Estas clulas son redondas o un
poco ovales y tienen un ncleo grande y cantidades relativamente pequeas de citoplasma
(figura 1), se considera la relacin ncleo-citoplasma es 1:1

Fig. 2. Clula intermedia

Clulas intermedias:

Son un poco ms grandes que las parabasales a dos veces su tamao. Estas clulas tienen
bordes irregulares uniformes ovalados o redondeados (figura 2). Tienen cantidades
relativamente mayores de citoplasma y muestran ncleos ms pequeos.

Fig. 3 Clula superficial

Clulas superficiales:

Son las clulas muertas tpicas que revisten la luz vaginal de perras en estro y son las ms
grandes que se identifican en la citologa. Tiene bordes citoplasmticos angulares, planos y
ntidos, adems de ncleos pequeos, picnticos y atenuados (figura 3).

Fig. 4 Clula anucleada

Clulas anucleadas:

Son clulas vaginales grandes, muertas e irregulares sin ncleo (figura 4). Esta muerte
celular se origina por engrosamiento de la cubierta vaginal, presente en el estro.

Los tipos de clulas presentes en las etapas del ciclo estral son las siguientes:

Proestro: El proestro puede clasificarse en temprano, medio y tardo. Las caractersticas

celulares sern diferentes en cada uno de ellos.

Proestro temprano: Puede haber eritrocitos, numerosas clulas parabasales e intermedias

pequeas y grandes. Es comn observar neutrfilos y bacterias. El fondo del frotis se ve
sucio debido a la presencia de secreciones vaginales que se tien ligeramente.

Proestro medio: Hay proliferacin de clulas intermedias grandes y superficiales que

reemplazan a las clulas parabasales e intermedias pequeas (figura 5). Pueden o no haber
eritrocitos, los neutrfilos desaparecen ya que son incapaces de atravesar las numerosas
capas epiteliales vaginales inducidas por los estrgenos.

Figura 5. CVE de proestro medio

Proestro tardo: Hay predominio de clulas superficiales (> 80 %) aunque todava se

observan clulas intermedias. No debe haber neutrfilos (a no ser que haya una vaginitis) y
puede o no haber eritrocitos. El fondo de la laminilla se ve claro.

Estro: Del 90 al 100% de las clulas son superficiales y anucleadas (figura 6). No se deben
observar neutrfilos ni bacterias, en caso de presentarse es indicio de una vaginitis severa
que puede afectar la fertilidad de las montas. Los eritrocitos pueden estar o no presentes. El
fondo permanece claro.
Figura 6. CVE de estro

Diestro: Las clulas superficiales y anucleadas disminuyen radicalmente hasta

aproximadamente el 20 %. En la laminilla se observan principalmente abundantes clulas
intermedias y parabasales (figura 7). La presencia de neutrfilos en el diestro se considera
normal. Se pueden observar clulas del diestro que consisten en un neutrfilo dentro de
una clula intermedia.

Figura 7. CVE de diestro

Anestro: Se observan clulas parabasales e intermedias pequeas. Puede haber pocos

neutrfilos y no hay eritrocitos. Se caracteriza por la presencia de moco, ncleos sueltos y
poca cantidad de clulas (figura 8).

Figura 8. CVE de anestro

Cuando se utiliza la CVE como herramienta para determinar las etapas del ciclo estral es
recomendable:

Evaluar la CVE con objetivo 10X.

Evaluar todo el campo celular en la laminilla.

Apoyarse de la historia clnica.

Es importante realizar una CVE cada tercer da, para evaluar los cambios
progresivos.
La CVE tambin es una herramienta de ayuda en el diagnstico de algunas patologas del
tracto reproductivo como vaginitis y tumor venreo transmisible (TVT).

Vaginitis: Es normal encontrar algunos neutrfilos y bacterias en las citologas de algunas

perras; sin embargo, cuando se presentan en exceso y de forma persistente en la CVE es
anormal y se considera una vaginitis (figura 9).

Figura 9. CVE de vaginitis

Tumor Venreo Transmisible (TVT): Es el tumor que se detecta con mayor frecuencia en la
CVE de las perras, en el frotis se caracteriza por una abundante cantidad de clulas que
tienen poco citoplasma y muchas de ellas se encuentran en mitosis (figura 10), pueden
presentarse eritrocitos y neutrfilos.

Figura 10. CVE de TVT

Evaluacin del macho

La evaluacin androlgica del macho es una prctica que muy pocas veces se lleva a cabo,
sin embargo, es muy importante en el proceso reproductivo, ya que el macho aporta el 50%
de ste y su evaluacin debe llevarse a cabo cuando se utiliza como semental; as como
cuando se sospecha de infertilidad, despus de haber presentado alguna enfermedad, de
forma rutinaria se recomienda 2 veces al ao, cuando se compra adulto o bien, cuando
llega a la pubertad.
La edad en la que comnmente se acepta que el perro alcanza la pubertad es de nueve
meses, pero vara ligeramente dentro y entre razas. Los espermatozoides aparecen por
primera vez en el eyaculado alrededor de los 7 a 9 meses de edad.

El macho debe ejecutar un patrn de comportamiento sexual que har exitoso el

apareamiento, el cual debe seguir las siguientes acciones: detectar, dominar, montar,
desenvainar, penetrar, eyacular, producir un eyaculado de buena calidad; sin embargo, ste
patrn solo podr llevarse a cabo completamente en un individuo sano, por lo que es
necesario llevar a cabo la evaluacin androlgica del perros que consiste en los siguientes
exmenes:

Examen clnico general

Debe incluir la resea, historia clnica haciendo nfasis en el historial reproductivo, as

tambin se debe realizar un examen fsico general poniendo especial importancia en
aspectos como la funcin cardiaca y respiratoria as como la integridad de los miembros
locomotores, articulaciones y columna vertebral, ya que stos son muy importantes para
que el macho pueda llevar a cabo la monta.

Examen del aparato reproductor

En l se deben evaluar los componentes del aparato reproductor, ya que cualquier

anormalidad en ellos afectar la fertilidad del macho. Se evala el escroto, testculos,
epiddimo, pene, prepucio y prstata.

a) Escroto: al tacto debe ser suave, no estar engrosado, los testculos deben deslizarse
fcilmente dentro de l, no debe haber adherencias, as como laceraciones o dermatitis. La
inflamacin del escroto puede alterar los procesos termorreguladores normales, afectando
la espermatognesis.

b) Testculos: Debe evaluarse que hayan descendido los dos, sean simtricos, firmes,
turgentes, tengan una superficie lisa, que no haya adherencias al escroto ni fibrosis, as
tambin que no haya dolor a la palpacin. Cuando estn blandos puede sospecharse de
degeneracin testicular, y de neoplasia u orquitis aguda cuando a la palpacin estn duros.

c) Epiddimo: Debe palparse para determinar que est completo, sin la falta de algn
segmento y poner especial atencin en la cola, la cual debe sentirse llena, ya que es un
indicativo de la capacidad de almacenamiento de espermatozoides.

d) Prepucio: Se evaluar que cubra por completo al pene, as como que no existan
laceraciones, fimosis ni parafimosis. Es normal observar una ligera secrecin amarillo
clara (esmegma), que resulta del proceso de renovacin normal de la mucosa prepucial.

e) Pene: Para evaluarlo, es necesario desenvainarlo por completo hasta detrs del
bulbo, procedimiento que no debe ser doloroso. Se valora que no hayan traumatismos,
cuerpos extraos (en razas de pelo largo es comn encontrar pelos adheridos a la mucosa
peneana), persistencia de frenillo, tumor venreo transmisible (TVT), el cual se aloja
inicialmente en el bulbo.
f) Prstata: Es la nica glndula sexual del perro, debe evaluarse en perros mayores a
5 aos, as como en aquellos que presenten tenesmo, disuria o bien, hematuria y/o
hemospermia. Su evaluacin se hace a travs de palpacin digital va rectal y tambin
puede emplearse la ultrasonografa; la asimetra, dolor o consistencia anormal es indicativo
algn tipo de disfuncin, siendo la hiperplasia prosttica benigna una de las ms comunes
en perros de edad avanzada.

Evaluacin de libido

La libido puede verse alterada en los perros no precisamente por problemas endocrinos,
sino tambin por problemas de comportamiento, algunas causas por las que se ve afectada
son aburrimiento, cansancio, estrs, maltrato, inexperiencia y presencia del dueo.

Evaluacin del eyaculado

Debe realizarse inmediatamente despus de haber sido colectado; en el caso de los perros,
el mtodo de coleccin que se emplea es mediante masturbacin.

Las caractersticas del eyaculado se presentan en el cuadro 2.

Las caractersticas que se evalan en el eyaculado se clasifican en macroscpicas: volumen,

color, pH y microscpicas: movilidad, mortalidad, morfologa y concentracin (cuadro 3).
Inseminacin artificial

La inseminacin artificial (IA) es una tcnica reproductiva que consiste en depositar el

semen del macho en el aparato genital de la hembra, sin la participacin del primero.

En las especies destinadas para la produccin es una biotecnologa usada principalmente

para reproducir el mejor material gentico, sin embargo, en los perros representa adems
una herramienta clnica, ya que generalmente se utiliza cuando los perros no pueden
aparearse de forma natural (por problemas anatmicos, de comportamiento, cuando estn
en lugares distantes) o bien, cuando se quiere prevenir enfermedades de transmisin
sexual.

Una de las ventajas que se tienen con la IA en perros es que el tamao de la camada es muy
similar a la obtenida con montas naturales, siempre y cuando se tomen en cuenta los
siguientes factores:
 Ambos reproductores deben estar sanos y con una condicin corporal adecuada (3
de 5).

Asegurarse que la hembra se encuentre en estro y en el momento ms prximo a la

ovulacin, para ello es til apoyarse en la CVE y la medicin de niveles de progesterona
srica.

Utilizar semen de buena calidad, para ello se recomienda evaluar previamente al

macho, ya que en caso de que el eyaculado no sea de buena calidad habr tiempo para
conseguir otro semental.

El manejo de la hembra y el macho debe ser cuidadoso y con el mnimo estrs.

Utilizar material apropiado y esterilizado.

El personal que realice la inseminacin debe estar capacitado para ello.

Las tcnicas ms comunes para realizar la IA son va intravaginal e intrauterina, en ellas

puede utilizarse semen fresco, refrigerado o congelado, dependiendo las circunstancias
(cuadro 4).
IA va intravaginal: Es la ms comn de las tcnicas, debido a que es sencilla y de bajo
costo. El depsito del semen se hace en la vagina craneal mediante una pipeta conectada
con una jeringa. La pipeta se introduce a travs de los labios vulvares, dirigindose primero
hacia dorsal llegando al cingulum, despus se dirige hacia craneal (como en la CVE). Una
vez que la pipeta se encuentra en el fondo de la vagina, el semen es impulsado a travs de l
mediante la jeringa y se deposita en la vagina craneal. Posteriormente, se retira la pipeta y
la hembra es mantenida de 3 a 5 minutos con el tren posterior elevado (en carretilla).

IA va intrauterina: No es usada con tanta frecuencia como la IA intravaginal ya que se

deposita el semen directamente en los cuernos uterinos en forma quirrgica, lo que implica
un mayor costo y riesgo anestsico.
Gestacin

La gestacin se define como el periodo comprendido entre la fertilizacin de un vulo por

un espermatozoide hasta el momento del parto, tiene una duracin de 63 + 5 das.

El mantenimiento de la gestacin en la perra depende de la progesterona que proviene del

cuerpo lteo, ya que la placenta no produce esta hormona en cantidades detectables. Una
diferencia importante respecto a las dems especies domsticas es que no es necesario que
se lleve a cabo el proceso de reconocimiento materno, debido a que el cuerpo lteo no es
lisado por prostaglandina, sino que se mantiene a lo largo de toda la gestacin.

La gestacin se divide en tres tercios:

Primer tercio: Se denomina periodo de preimplantacin. Los embriones se

mantienen dentro del oviducto durante 7 das post pico de LH y entran al tero como
mrulas tardas o blastocitos tempranos 10 das post pico de LH. La implantacin se da del
da 17 al 21.

Segundo tercio: Se denomina de embriognesis. En este periodo se lleva a cabo la

formacin de rganos, se desarrolla la placenta endoteliocorial, zonal, central. En esta etapa
los fetos son altamente susceptibles a daos producidos por drogas o sustancias altamente
teratognicas como corticoides, antimicticos, algunos antibiticos (sulfas, trimetoprim,
estreptomicina, tetraciclinas), etc. Se recomienda evitar tanto la vacunacin con virus vivo
modificado as como la medicacin en cualquier etapa de la gestacin.

Tercer tercio: Se denomina periodo de post-osificacin. Inicia a partir del da 42

cuando empieza a haber osificacin del feto. En sta etapa los fetos tienen un mayor
crecimiento y en las madres la glndula mamaria se desarrolla.

En cuanto a las necesidades nutricionales hay que tomar en cuenta que las primeras 6
semanas la alimentacin debe ser de mantenimiento; de la semana 7 a la 9 las necesidades
se incrementan en un 50%, en este periodo se recomienda hacer el cambio a alimento de
cachorro, el cual tiene mayor contenido nutricional
Para tener xito en la reproduccin de los perros es necesario tomar en cuenta los tpicos
abordados, desde la pubertad, ciclo estral, determinacin del momento ptimo para la
monta, evaluacin del macho, inseminacin artificial, gestacin y su diagnstico, ya que
todos en conjunto permiten tener un mayor conocimiento y de esta forma entender el
proceso reproductivo de los perros.
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Capitulo 5
Sistemas de Cruzamientos en Ganado Bovino

Yong, G; Macias, G. P.; Yamasaki, A.; Len, H.; Santiago, F.; Ibarra, C.E.; Ruiz,
E.A. Yamasaki, L.

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Autnoma de Chiapas.

Introduccin

Hace algunos aos, muchos productores de ganado bovino, tenan como objetivo tener
animales de raza pura, ya que se consideraba sinnimo de buen ganadero, sin embargo la
experiencia emprica pareca demostrar que los cruzamientos eran una buena opcin para
incrementar la produccin de carne y leche bajo condiciones tropicales.

El desarrollo de la ganadera en Chiapas, se dio en un inicio sin ningn control y

nicamente se esperaba incrementar el nmero de cabezas; con la introduccin de las razas
Cebunas (Bos indicus) se hizo el primer mejoramiento gentico por efecto de los
cruzamientos; mas tarde se fue introduciendo la raza Suizo Americano y Europeo (Bos
taurus) con la finalidad de incrementar la produccin de leche.

La expectativa de los cruzamientos como una alternativa a los sistemas de produccin bajo
condiciones tropicales fue impulsada por los resultados obtenidos por el grupo de Koger et
al (1973), sin embargo fue este mismo grupo quien observo que los resultados de estos
cruzamientos, no daban los resultados esperados en ese ambiente.

La experiencia en Amrica Latina Tropical ha demostrado que los cruzamientos son una
alternativa de mejoramiento gentico y que bajo ciertas circunstancias dan resultados y en
otras definitivamente se deben buscar nuevos sistemas de produccin.

Uno de los problemas que existen con los cruzamientos es que muchas veces nicamente
se considera el factor gentico y el potencial de sus progenitores, olvidndose de que las
condiciones ambientales juegan un papel determinante en la expresin del potencial
productivo, por lo que se requieren programas de manejo, medicina preventiva y de
alimentacin.

Los sistemas de produccin de leche bovina en el trpico se han basado principalmente en

la utilizacin de pastos y forrajes como fuente bsica de alimentacin, los cuales por
fluctuaciones en calidad y cantidad a lo largo del ao causan perodos de estrs nutricional
y, consecuentemente, una reduccin en la productividad animal.

Por lo tanto, la tarea de los genetistas de hoy es la de generar estrategias de cruzamientos y

sistemas de mejoramiento animal que sean sustentables, rentables y socialmente aceptables
por los productores.

Porque hacer cruzamientos

La razn es que ninguna raza es capaz de superar a todas las dems para todas las
caractersticas de inters productivo debido a las relaciones antagnicas existentes entre
estos caracteres (Aguirrezabala, 1992).

Antes de iniciar la importancia de los cruzamientos y como debemos hacerlos, bajo que
ambientes y que cuidados se necesitan, es necesario hacer algunas definiciones:

Raza. Generalmente se entiende como raza a un grupo de animales que mediante seleccin
tienden a parecerse entre ellos y a pasar esas caractersticas de manera uniforme a su
progenie, Lush J. (1940) lo define como un grupo de animales domsticos, llamada as
(raza) por consentimiento comn entre los criadores. Esta es una palabra acuada por los
criadores y de uso comn, por lo que debemos aceptarla como una definicin correcta.

Cruzamiento. Es el mtodo de apareamiento entre individuos que presentan entre s un

coeficiente de parentesco menor que la media de la poblacin.

Hibridacin. Cruzamiento entre individuos pertenecientes a especies diferentes. Ejemplo

Especie caballar x especie asnal.

Hetersis vigor hbrido. Fenmeno que consiste en que las descendencias de animales
no emparentados exhiben mayor vigor que el promedio de sus progenitores.

Heredabilidad. Es el porcentaje de la variacin fenotpica total que es heredada de los

padres.

Existe una gran diversidad de razas bovinas, producto de la seleccin natural y artificial en
diversas condiciones ambientales y sistemas de produccin; por lo tanto los cruzamientos
son sistemas de reproduccin dirigidos a obtener ventajas aditivas que se logran al mezclar
los genes de dos ms poblaciones racialmente diferentes.

Para poder elegir la raza ms adecuada es necesario considerar algunos factores como: las
condiciones medioambientales donde la nueva poblacin ser explotada comercialmente, el
propsito, objetivos, sistema de produccin y precisar las caractersticas que genticamente
se quieren mejorar, todo esto debe estar apoyado en un sistema de registro de control
zootcnico.

Es importante mencionar que el vigor hibrido ser mayor si las razas involucradas estn
adaptadas, as el vigor hbrido es mayor entre Ceb x Criollo que entre Ceb x Holstein; y
es mayor cuando las razas representadas en el cruzamiento, estn en la misma proporcin:
Holstein x Ceb, tiene mayor vigor hbrido que un animal Holstein x Ceb.

Tambin, se ha demostrado que el vigor hibrido es mayor cuanto ms nmero de razas

intervengan en el cruzamiento, siempre y cuando las razas estn en la misma proporcin.
Por lo que se sugiere que en el trpico la proporcin de sangre Ceb no disminuya por
debajo del 50%.

Objetivos de los cruzamientos. Los cruzamientos son realizados con el propsito de reunir
en un solo animal, las caractersticas deseables de dos ms razas. Las caractersticas en
las cuales se puede obtener un mayor nivel de vigor hbrido heterosis son entre otros:
Fertilidad, supervivencia del ternero, instinto materno, tasa de crecimiento, supervivencia
hasta la edad adulta y produccin de leche.

De igual manera, es frecuente encontrar opiniones de ganaderos profesionales que

intentan definir el grupo racial a usar con un grado de precisin que no es justificable. El
concepto popular de las bondades especiales de animales 5/8 europeo, es un ejemplo de
esta tendencia.

Introgresin de genes. La introgresin es el movimiento de genes de una especie a otra a

consecuencia de un proceso de hibridacin interespecfica seguido de retro cruzamiento,
esto generalmente se utiliza en animales en peligro de extincin; en produccin animal, es
frecuente el cruce con razas comerciales aprovechando los efectos de heterosis y la
eliminacin de los problemas derivados de la consanguinidad de las razas puras para
aumentar la productividad y aprovechar las ventajas de razas locales mejor adaptadas a
ambientes concretos (Gosey 1991; Schaeffer et al. 2011).

La sustitucin de razas se basa en la absorcin de una raza local por otra que es
introducida en absorciones sucesivas hasta que la raza local queda representada en una
mnima parte en la poblacin original. Son los llamados cruzamientos absorbentes.

La Heterosis o comnmente conocida como Vigor Hbrido es un fenmeno por el cual la

progenie de apareamientos entre lneas consanguneas o poblaciones puras excede el
rendimiento promedio de sus padres para un carcter dado. Mezzadra, C. (2005).

La utilizacin de la Complementariedad, que no es excluyente de la de la heterosis, se basa

en la conjuncin en los animales cruza de dos caracteres que son importantes en las razas
puras originales.

Se utiliza para mejorar la eficiencia global del sistema de produccin mediante el

cruzamiento de razas con un elevado mrito gentico para diferentes caractersticas (Simm,
1998).

Otra definicin de complementariedad es la capacidad de aprovechar los recursos genticos

para utilizar con mayor eficiencia los recursos nutricionales y manejo del sistema de
produccin (Aguirrezabala, 1992). Por ejemplo, supongamos el apareamiento de razas de
tipo materna de tamao adulto mediano (menos costos de mantenimiento) y destacada
habilidad materna y eficiencia reproductiva con razas especializadas en crecimiento y
rendimiento en rastro como Limousin. La complementariedad se explotar cuando se
puedan combinar estos recursos genticos con aptitudes distintas dentro de un mismo
sistema de produccin manteniendo la eficiencia.

Los cruzamientos pueden ser utilizados con el propsito de formar nuevas razas o
poblaciones compuestas. Algunos de los ejemplos ms comunes lo dan las razas derivadas
del ceb como Brangus, Bradford o Santa Gertrudis, cuya composicin gentica ms
difundida es de 5/8 de genes britnicos y 3/8 ndicos. El caso ms simple es el cruzamiento
de dos razas A y B y luego el cruzamiento de las siguientes generaciones entre s: F1 x F1,
F2 x F2, cuidando de practicar seleccin en cada oportunidad.

En el cuadro 1, se observa el comportamiento de animales F1 provenientes de sementales

ceb o europeos

Este trabajo de Cundiff y colaboradores (1993), demuestran claramente el efecto de la raza

del padre sobre las caractersticas productivas y reproductivas en los cruces de ganado
ceb.

El mejoramiento de las condiciones tropicales depende de varios factores relacionados con

el animal, el ambiente y la tecnologa de produccin; en el contexto del animal, y con base
en la sostenibilidad de los sistemas surge como una alternativa el uso de animales locales
Bos indicus (BI), en cruzamientos con razas lecheras especializadas Bos taurus, (BT).
Varios estudios han confirmado las ventajas del uso de Bos Taurus X Bos indicus en
condiciones tropicales Osorio-Arce y Segura-Correa (2005); Jurez et al (1999), Carvajal et
al (2002) y por otro lado, en el sureste mexicano se localizan muchos ranchos ganaderos
con vacas cruzadas que se adaptan al consumo de forrajes tropicales, al ordeo mecnico y
a la complementacin con concentrados. Sin embargo, la informacin disponible de los
animales cruzados con razas europeas, y adaptados a las condiciones locales proviene
principalmente de hatos pequeos y con pocos genotipos, Lopez y Vaccaro (2002).

En la figura 1. Se muestran los resultados obtenidos por Lpez et al (2009), quienes al

evaluar la produccin de leche de vacas con diferente porcentaje de genes Bos taurus (BT)
en el trpico mexicano, encontraron que a mayor porcentaje de genes BT, mayor
produccin de leche.

La Figura 1 muestra el efecto lineal y cuadrtico del porcentaje de genes Bos Taurus
PCTGEU en la produccin total de leche ( PTL). Como se observa en la misma figura, las
vacas con 78.0 % de genes BT tuvieron produccin de leche (PL) ms altas (2,898 kg)
comparado con 0, 25, 50, 62.5 y 75 %; dicha produccin fue 183.8, 42.7, 9.1, 2.6 y 0.1 %
ms alta para los animales con 0, 25, 50, 62.5 y 75 %, respectivamente.

Las diferencias entre genotipos para PTL lo atribuyen a efectos complementarios de los
genes heredados de las razas parentales. Los animales BT trasmiten a la progenie cruzada la
habilidad para mejorar el metabolismo de los nutrientes, mientras que los BI trasmiten
informacin de adaptacin al ambiente tropical, Madalena (1993).

Lo anterior sugiere que los mejores genotipos para PL probablemente se encuentren con
porcentajes de genes BT mayores a 50 % para las condiciones tropicales similares a las del
presente estudio. Rege (1998) en una revisin de varios estudios en condiciones tropicales,
estim que la PTL fue superior en 64.8 y 69.7 % para genotipos con porcentajes de genes
BT de 75 y 87.5 %, con respecto a genotipos BI. Lo anterior muestra el potencial que tiene
el incluir genes de BT en los genotipos para PL en condiciones tropicales.

En general, en el presente estudio los genotipos con 50 y 80 % de genes BT mostraron las

mejores respuestas en produccin de leche. Al analizar las variables de respuesta
incluyendo el efecto de heterosis en las vacas, en todas las variables el efecto de PCTGEU,
tanto lineal como cuadrtico, fueron no importantes (P>0.05), lo que sugiere que la
heterosis es la principal causa de las diferencias entre genotipos. Lo anterior es importante
en el diseo del sistema de cruzamiento que se pretenda utilizar.

Las condiciones climticas influyen en la cantidad de leche obtenida de diferentes formas;

una forma directa es alterando el metabolismo del animal por las temperaturas altas, e
indirectamente determinando la estacionalidad de la produccin forrajera Collier et al
(1983), Jonsson et al (1999)

En la figura 2, se presentan los resultados de Lammoglia et al (2013) en donde analizan

rendimientos Productivos y reproductivos de vacas lecheras en el primer cruzamiento
rotativo en el altiplano del centro de Mxico Es interesante observar que la produccin de
la primera lactancia fue diferente, de acuerdo con la raza (Figura 2). Sin embargo, las
vacas Holstein de primera lactancia tuvieron una mayor (P = 0.01) produccin por lactancia
que las vacas cruzadas F1J, F1M, y HJS.
Una de las conclusiones es que si el objetivo de un cruzamiento es la produccin de leche,
la raza Holstein es una buena alternativa.

Los cruzamientos son una herramienta para sincronizar recursos genticos (aditivos y no
aditivos) con los recursos ambientales y de manejo disponibles en el sistema. Los
cruzamientos aprovechan los efectos aditivos de las razas, as como las heterosis
(individual y maternal) y la complementariedad entre las razas.

Un sistema de cruzamiento exitoso ser aquel que sea capaz de explotar la heterosis y la
complementariedad, entendida esta ltima como la capacidad de combinar adecuadamente
los recursos genticos elegidos en una forma tal que sean capaces de utilizar eficientemente
los recursos nutricionales y de manejo existentes en el sistema de produccin.

Cruzamiento simple. Consiste en el uso de machos de una raza pura con hembras de otra
raza pura. Este tipo de cruzamiento permite utilizar la heterosis individual en el producto, y
si utilizamos las razas adecuadamente, tambin la complementariedad.

En el cuadro 2 se presenta un ejemplo prctico de un cruzamiento simple, en donde su

busca mantener el mayor grado de Heterosis.
Cruzamiento Alterno con tres razas. Este tipo de cruzamientos permite utilizar la heterosis
maternal manteniendo un hato en forma estable. Los cruzamientos rotacionales
dependiendo del nmero de razas que se utilicen pueden ser dobles (dos razas) o triples
(tres razas). Siempre se utilizan razas puras en forma alternada a travs de la va paterna,
mientras que las hembras son animales cruzados lo cual permite retener un porcentaje
importante de heterosis individual y materna. Ver cuadro 3.

Formacin de Razas Sintticas. En la creacin de una raza sinttica (ejemplos girolando,

suizbu, brangus) , se debe tener muy claros los objetivos que se persiguen con la creacin,
se selecciona las razas que van a participar y luego se combinan adecuadamente hasta
lograr un material gentico estable. La formacin de razas sintticas permite aprovechar el
fenmeno de heterosis y lograr mantener una composicin racial ptima, obtenida por la
adicin directa de genes. Debe considerarse el nmero de animales base sobre los cuales se
va a trabajar, este no debe ser muy pequeo. Una vez que una nueva raza sinttica est
formada, se la puede manejar como una poblacin pura, sin mezclas y sin ninguna
complicacin del manejo.
Las razas sintticas ofrecen la oportunidad de usar las diferencias genticas existentes entre
las razas para lograr y mantener ptimos niveles de comportamiento en rasgos tales como:
adaptabilidad a condiciones climticas, sanitarias y nutricionales; edad y peso a la pubertad;
peso al nacer y facilidad de parto, produccin de leche, estado corporal posparto, peso al
destete; tamao y peso adulto; rendimiento de la res; tasa de crecimiento, entre otros.

La primer razas sinttica conocida oficialmente se reconoce a la Santa Gertrudis, la cual

tiene una composicin racial de 5/8 Shorthorn y 3/8 Ceb, la cual fue realizado en el King
Ranch, alrededor de 1948. Sin embargo la razas Brahmn, fue formada entre otras razas por
la Guzerat, Nelore, Krishna, Gyr, Velley, Sindi, Indubrasil, Newat, Bora y otras. La raza,
Indubrasil fue formada por las razas Nelore y Guzerat.

En la figura 3. Se muestra el esquema de cruzamientos en forma directa e indirecta para la

formacin de la raza Brangus roja, de acuerdo al sitio, razas bovinas en Colombia (2014)

Para la formacin y utilizacin de las retrocruzas de las variedades intermedias,(1/4, y )

puede utilizarse indistintamente Angus rojo o negro, Brahmn gris o rojo, siempre y cuando
el producto final Brangus rojo (5/8 Angus y 3/8 Brahman) posea su capa cromtica color
rojo.

Es importante mencionar que cada asociacin de productores, establece los lineamentos

para el reconocimiento de la nueva raza.
En las figuras 4 y 5, se muestran los esquemas para lograr la obtencin de la raza Suizbu,
de acuerdo a los estatutos de la Asociacin Mexicana de Criadores de Ganado Suiz-bu de
registro A. C. (2014).
Para la obtencin del girolando, se inicio con un programa que inicio en el ao 1978,
(Olveira T. 2014) siguiendo el siguiente proceso, como se observa en la figura 8.
En las siguientes figuras (9, 10, 11, 12 y 13) se muestran diferentes esquemas para llegar a
la raza pura sinttica girolando, (Olveira T. 2014).
En la figura 15, se presenta una curva de lactancia estimada en funcin del da de
produccin, de Acuerdo a Silva et al. (2013).
En el cuadro 4, podemos observar, el resumen de 12 aos de programa de control de
produccin de leche de la raza girolando, en Brasil, (Silva et al. 2013).
Conclusines

Los cruzamientos son una herramienta eficiente en el mejoramiento de la produccin

animal, sin embargo debe ir acompaada de un proceso de seleccin para poder medir el
mejoramiento gentico, tal y como lo hacen os productores brasileos con la raza
Girolando.

Es importante que en Mxico, las asociaciones de razas sintticas, desarrollen programas de

control de produccin para poder medir el progreso gentico de sus hatos.

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Capitulo 6
Tecnicas de reproduccion asistida en pequeos rumiantes

Hctor Snchez Pineda(1), Arturo A. Trejo Gonzlez(2), Ma. Erndira Reyes

Garca(1) y Marisela Peralta Lailson(1)

1. Universidad Autnoma de Chiapas, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia

Cuerpo Acadmico: Sistemas de produccin de Pequeos Rumiantes en Chiapas.
2.Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Facultad de Estudios Superiores Cuautitln,
Ctedra de reproduccin y Gentica en Ovinos y Caprinos.

Introduccin

Las biotcnicas de la reproduccin tales como, la sincronizacin del estro, la conservacin

del semen, la inseminacin artificial y la transferencia de embriones constituyen tcnicas
valiosas de reproduccin asistida para incrementar la produccin y la calidad de los
productos obtenidos de los pequeos rumiantes.

Los caprinos y ovinos son animales productores de carne, leche y piel, ampliando las
opciones para el beneficio humano y algunas razas han mostrado ser especialmente tiles
en las zonas calidas, comprendidas entre los trpicos de cncer y capricornio.

El presente trabajo describe de forma general las bases de las tecnologas reproductivas
asistidas ms utilizadas en estas especies, como lo son; la Inseminacin artificial y la
transferencia de embriones.

Anatoma y fisiologa del aparato genital masculino

El aparato genital masculino est compuesto por los dos testculos, los epiddimos, las
glndulas accesorias y el pene (figura 1).
Los Testculos

Son rganos pares que presentan formas ovoides (Figura 1), pesando en los en caprinos,
300 a 400g y en los ovinos 500 a 600g dependiendo de la raza y son responsables por la
produccin de los espermatozoides. Por la accin de la testosterona, los testculos bajan
hacia la bolsa escrotal del cabrito y cordero a partir del el tercer mes de gestacin de la
madre, los testculos tienen una accin doble, consistente en la produccin de los gametos
masculinos los espermatozoides y las hormonas esteroides andrgenos que regulan la
produccin de los espermatozoides y la conducta sexual masculina.

Las Glndulas Accesorias

Son las, las vesculas seminales, la prstata (difusa en los ovinos y caprinos) y las glndulas
bulbouretrales, siendo en este orden, responsables por la secrecin del plasma seminal.

Pene y prepucio

El pene tiene dos funciones; el depsito del semen en la vagina (cpula) y la expulsin de
la orina (miccin). Se puede dividir en tres porciones; el glande, el cuerpo y las dos races
insertadas en el arco isquitico de la pelvis. En su parte interna est formado por tejido
cavernoso, que consiste de sinuosidades vasculares separadas por septos de tejido
conectivo. La ereccin se efecta de dos maneras; con la excitacin sexual los vasos que
drenan el pene se comprimen y los espacios del tejido cavernoso se llenan de sangre, con lo
que aumenta el tamao del pene, al relajarse la sangre sale del tejido cavernoso y el pene
queda flcido. Por otra parte, el pene tiene una curvatura en forma de S llamada flexura
sigmoidea, normalmente el pene mantiene esta forma de S, mediante el msculo retractor,
durante la cpula este msculo se relaja, provocando la extensin de la flexura. Es en este
momento que el pene se exterioriza a travs el orificio prepucial (Evans y Maxwell, 1987).

El glande presenta un apndice filiforme o prolongacin uretral, estructura que gira

rpidamente durante la eyaculacin distribuyendo el semen en la vagina de la hembra. El
pene est alojado en una invaginacin de la piel llamada prepucio (Delgadillo, 2005; Cortez
et al., 2005).

Los Espermatozoides

Los espermatozoides son las clulas responsables por la fecundacin de los ovocitos
liberados por las hembras, dando origen a los embriones. La produccin espermtica vara
en funcin de diversos factores, destacndose, la estacionalidad, la nutricin y los factores
climticos:

Estacionalidad

Trejo et al., (1990), mencionan que la produccin de espermatozoides coleccionados en

ovinos alcanz los valores mximos en el verano y otoo, mientras que se obtuvieron
valores mnimos durante la primavera. En cuanto a la tasa de espermatozoides anormales,
segua relacin inversa: mxima en la primavera y mnima en el otoo. Estudiando la
produccin espermtica de animales, Leidl (1958) encontr variaciones estacinales
importantes en el volumen del eyaculado y en la tasa de fructosa del plasma seminal. La
concentracin de fructosa en la estacin no sexual disminuy bruscamente, alcanzando un
valor idntico a aquel de animales castrados. Tales variaciones fueron acompaadas de
modificaciones histolgicas de clulas epiteliales de las vesculas seminales. Durante la
estacin sexual, las clulas en el epitelio glandular de las vesculas eran cilndricas altas,
con los ncleos alargados y voluminosos; fuera de esta estacin, se tornaron pequeas y
cbicas.

Las vesculas seminales liberan la totalidad de la fructosa, siendo el promedio anual de

produccin en la estacin sexual, de 1 039mg/100 mm. de plasma seminal; en cuanto que,
en la estacin no sexual, es de apenas 304,8mg (Iritani, 1964). En el mismo estudio, el
autor verific que las concentraciones de cido ctrico, cido lctico y de protenas en
caprinos, son significativamente ms elevadas en la estacin sexual que en la no sexual.

Las secreciones bulbouretrales en los chivos se caracterizan por concentraciones

importantes de nitrgeno no proteico, potasio, calcio y principalmente de una enzima tipo
fosfolipasa A (Roy, 1975). De acuerdo con Iratani (1961; 1963), la actividad de esta enzima
es significativamente ms elevada en estacin no sexual.

Las variaciones estacinales de la produccin espermtica son acompaadas igualmente de

variaciones estacinales en la calidad los espermatozoides eyaculados. As, 65% de los
eyaculados recoleccindos por Corteel (1980) en la estacin sexual presentaron calidad
suficiente para la utilizacin en inseminacin artificial, ya en la estacin no sexual,
solamente 50% eran portadores de esta calidad. Adems de la calidad in Vitro inferior, la
fertilizacin de cabras inseminadas con los espermatozoides de la estacin no sexual
tambin fue inferior a aquella de las cabras inseminadas conjuntamente con
espermatozoides de la estacin sexual; hubo 65% de partos resultantes de los
espermatozoides de la estacin sexual contra 54% de los espermatozoides de la estacin no
sexual.

Se destaca que las glndulas accesorias completan el ciclo espermtico, que es la secrecin
del plasma seminal a partir de la salida de los espermatozoides en la maduracin,
envolviendo los tmulos seminferos y la cabeza/cuerpo/cola del epiddimo, en 54 das en
los caprinos--y 49 en los ovinos.

Factores climticos

Muchos investigadores comprobaron que existen variaciones estacinales en la

caracterstica del semen y en la libido de carneros y chivos de diferentes razas. Las causas
de estas variaciones se deben en gran parte a los diferentes factores climticos, tales como
la luminosidad (Yates, 1949; Colas, 1973,80,81; Mies Filho, 1979, 80), la temperatura
(Dutt & Bush, 1956) y el rgimen de lluvias (Anderson,1964).

Mies Filho (1979; 1980) publica que carneros sometidos a un ritmo luminoso de 8 y 16
horas de oscuridad, por un perodo de 10 meses, presentaron durante el otoo y parte de la
primavera, un cuadro espermtico superior al de los animales control.

Colas (1980) mostr que el esperma de carneros sometidos a luminosidad creciente

(carneros de periodo) tiene una calidad media, inferior a aquella encontrada en los animales
de otoo.

Factores nutricionales

Sometiendo tres lotes de caprinos a los niveles energticos de alimentacin alto, medio y
bajo respectivamente, con retorno de cada uno al rgimen inicial, Hirde (1965) observ que
los animales sometidos al nivel bajo presentaron disminuciones en el volumen del esperma,
en el nmero de espermatozoides por eyaculacin, en la tasa de fructosa y en la motilidad
inicial de los mismos, habiendo incremento en la tasa de espermatozoides anormales. En el
nivel de alimentacin elevado hubo variaciones inversas a las del nivel bajo, sin observarse
algn efecto indeseable sobre la produccin espermtica, en cuanto que el nivel medio no
afect a los animales ni al esperma.

Circunferencia escrotal

La circunferencia testicular en los caprinos vara de 28 a 32cm en y en los ovinos de 30 a

36cm, siendo este valor importante en la seleccin de los sementales ya que tiene una alta
correlacin con la produccin espermtica y con la fertilidad.
Anatoma y fisiologa del aparato genital femenino

El aparato genital femenino est compuesto por los ovarios y las vas genitales.

Ovarios

Son en nmero de dos, cada uno situado a un lado de la entrada de la pelvis y tienen la
funcin de producir los ovocitos y las hormonas sexuales.

Ovocitos

Son los gametos femeninos, liberados por los folculos preovulatorios, son clulas que, al
unirse con los espermatozoides dan origen a un embrin.

Oviducto

Es llamado tambin de tuba, es un rgano par o trompa y son responsables por la captacin
del ovocito, permitiendo el encuentro con el espermatozoide, dando origen a la
fecundacin.

tero

Es compuesto por los dos cuernos, un cuerpo y un cuello. Es el local donde se fija el
ovocito ya fecundado por el espermatozoide, creciendo y sufriendo modificaciones,
transformndose en embrin, despus en feto y finalmente en cabrito o cordero.

Crvix

Es llamado tambin de cuello uterino, el cual contiene en su dimetro interno, el canal

cervical, que tiene la funcin de hacer la comunicacin entre la cavidad uterina y la cavidad
vaginal, permitiendo la comunicacin entre la cavidad uterina y la cavidad vaginal,
permitiendo el paso del semen, ya sea en la monta natural o en la inseminacin artificial.

A lo largo del canal cervical se encuentran formaciones de anillos, nmero de 3 a 5 y

constituidos de tejido conjuntivo denso. En la oveja, estos anillos se proyectan como
compuertas para el Interior del canal cervical, impidiendo la instrumentacin y la
colocacin del semen en el interior de la cavidad uterina. Durante la preez, el cervix
permanece cerrado, abrindose en las pocas del estro, parto y patolgicamente en las
inflamaciones.

Vagina

Utilizada por la hembra en la monta, tiene forma tubular y, una longitud que varia entre 12
y 18 cm.
Vulva

Es la parte externa del sistema genital femenino.

Tecnologa del semen

Procesos para la conservacin del semen

El semen puede ser procesado de diferentes maneras, pudiendo ser usado:

a) fresco

b) enfriado

c) congelado

El semen fresco y el enfriado presentan fertilidad ms elevada.

El congelado se preserva por un perodo de tiempo indefinido si es mantenido en nitrgeno

lquido a la temperatura de -196 C y es de mayor aplicabilidad, cuando comparado al
semen enfriado a una temperatura de + 4 C cuya viabilidad mxima es de 48 horas.

Producto de la eyaculacin normal de un reproductor, el semen es compuesto de

espermatozoides producidos en los testculos y una fraccin lquida producida por las
glndulas anexas del aparato genital Masculino.

Seleccin del macho reproductor

En la prctica de la inseminacin artificial con semen congelado, se espera que la central de

inseminacin ofrezca el material gentico de un animal de comprobada capacidad
reproductiva y que consiga transmitir a sus descendientes todos los aspectos anhelados con
la tcnica.

Ya con la utilizacin del semen fresco o enfriado, la evaluacin del reproductor es

importante. Los machos caprinos y ovinos son animales precoces que a los cuatro meses de
edad pueden entrar, en pubertad, alcanzando la madurez sexual entre seis y siete meses
despus del nacimiento. Aunque sexual mente maduros, ellos tienen produccin de semen
inferior a la de los animales adultos, solamente son considerados adultos cuando alcancen
el peso, el desenvolvimiento corporal y la produccin espermtica ideal a la de su raza.
Generalmente, esto sucede alrededor de los dos aos de edad.

Un reproductor puede actuar activamente como donador de semen hasta los siete u ocho
aos de edad, cuando deber ser sustituido por presentar una disminucin en su potencial
reproductivo. En la seleccin de un reproductor deben ser observada algunas caractersticas
tales como:

a) los testculos deben ser simtricos, ovoides, firmes y presentes en bolsa testicular.
Animales con problemas de criptorquidismo (un o ambos testculos presentes en el
abdomen y no en la bolsa testicular), orquitis (inflamacin en los testculos) e hipoplasia
(carcter gentico de disminucin de tamao) deben ser descartados como reproductores,
pues esas alteraciones comprometen la fertilidad;

b) el animal debe ser exento de alteraciones peneanas o prepuciales;

C) debe presentar buen libido (inters sexual por la hembra);

d) debe tener integridad testicular (ausencia de miasis, garrapatas, gusaneras, micosis u

otras lesiones corporales).

e) debe ser exento de enfermedades;

f) no debe presentar hernia umbilical, tetas supranumricas o tetas Bipartidas;

g) presentar aspecto masculino.

h) no ser braquignata ni prognata;

i) tener buenos cascos y aplomos;

j) presentar espermograma dentro de los lmites de normalidad.

Obtencin del semen

En la recoleccin del semen de carneros y chivos se utiliza la vagina artificial, instrumento

que simula las condiciones de presin y temperatura de las vaginas naturales, constituida
por un tubo de PVC rgido, un tubo elstico de hule y una vlvula, por donde debe pasar el
agua a + 40 C.

En la extremidad de esta estructura se acopla un tubo colector graduado en dcimas de

mililitros. El acto de obtencin el semen es simple: se asegura la hembra en estro natural o
inducido, presentndola al macho. Cuando este efecta el salto se asegura el prepucio con
la mano, desviando el pene para dentro de la vagina artificial. La eyaculacin es
instantnea. El material recolectado debe ser protegido de la luz solar directa, del polvo, de
la agitacin y de cambios bruscos de temperatura.

Evaluacin del semen

El semen debe ser evaluado en cuanto a:

a) volumen: vara de 0,5 a 2,0 ml;

b) color: debe ser blanca en los ovinos y amarilla en los caprinos, desprecindose el semen
con coloracin rojiza o color chocolate, indicando presencia de sangre o pus,
respectivamente;
c) aspecto: variando de lechoso a cremoso, despreciando el semen acuoso o turbio,
indicativo de un pequeo nmero de espermatozoides.

d) concentracin: determinada en el microscopio o a travs de espectrofotometra y

significa la cantidad de espermatozoides en cada mililitro (mL) de semen. El valor normal
es de 3000 millones/mL, pudiendo alcanzar hasta 4000 millones.

e) motilidad: evaluada en el microscopio, presenta dos tipos: motilidad masal y motilidad

individual progresiva. La motilidad masal es el movimiento de masa de los
espermatozoides en el plasma seminal. Es semejante a las olas del mar y puede recibir una
evaluacin de 0 (sin movimientos) a 4 (movimientos muy fuertes), siendo utilizadas
muestras con valores mayores que 3. La motilidad individual progresiva es el movimiento
individual en flecha de cada espermatozoide, evalundose en porcentaje, se debern utilizar
muestras con 60% o ms de motilidad.

f) morfologa espermtica: la proporcin de espermatozoides patolgicos (sin cola, con

doble cola, con doble cabeza, etc.) dentro de la populacin espermtica, no debe sobrepasar
15%.

Dilucin del semen

Despus de la etapa de evaluacin, considerando tener la muestra de semen de buena

calidad, se prosigue la fase de dilucin, la cual debe tener concentracin final para cada
dosis, de aproximadamente 200 millones de espermatozoides por mililitro. En caso de no
disponer de medios para determinar con eficacia tal concentracin, se procede una dilucin
prctica con una parte de semen para nueve partes de diluyente (1:9), esto es, para 0.5 ml de
semen, se adicionan 4.5 ml de diluyente, obtenindose 15 ml de semen diluido, cantidad
suficiente para inseminar 30 hembras, ya que se utiliza 0,5 ml de la solucin para cada una.

Seleccin del diluyente

Un buen diluyente no debe ser txico para los espermatozoides, tener pH y presin
osmtica compatibles con la sobre vivencia espermtica; ser de bajo costo y de fcil
preparacin. Entre los existentes, se destacan los diluyentes a base de leche descremada y
yema de huevo.

En el momento de la inseminizacin se retira este tapn de alcohol polivinlico con la

ayuda de una tijera. Las dosis deben ser identificadas, principalmente cuando es utilizado
semen de reproductores distintos. La identificacin mnima debe contener la raza, el
nombre o nmero del reproductor y la fecha de embasamiento del semen.

Evaluacin del semen despus de descongelado

Transcurridos 15 a 30 das despus de la congelacin, se retiran del termo con nitrgeno,

muestras aleatorias de pajillas para descongelarlas. Las pajillas son sumergidas en "bao
Mara" a una temperatura de 37 c, durante 30 segundos. Las muestras descongeladas, son
evaluadas nuevamente de acuerdo con su motilidad individual progresiva, el porcentaje de
espermatozoides vivos en cada diluyente y las alteraciones morfolgicas, incluyendo la
integridad acrosomal.

Evaluacin de las alteraciones morfolgicas

Se efectan frotis de semen de cada muestra descongelada, utilizndose una solucin de

coloracin compuesta de eosina a 1%, de nigrosina a 3% y de citrato de sodio a 3% (Colas,
1980), Rosa de bengala al 1% o colorante de Wells y Awa (Trejo, et al., 1990). En cada
frotis evaluadas 150 clulas espermticas, observndose los defectos de cabeza, de las
piezas intermedias, de las gotas citoplasmticas tanto proximal cuanto distal y tambin del
flagelo, a travs del microscopio ptico, provisto de condensador de contraste de fase,
utilizando la lente ocular de 10X y objetivo de 100X para un aumento final de 1000X.

Reproduccin programada

Seleccin de las hembras reproductoras.

Una hembra ovina o caprina puede entrar en la pubertad entre los cuatro y ocho meses de
edad, pero slo puede ser utilizada como reproductora cuando llegue a un peso corporal
equivalente de 60 a 70 % del peso de una hembra adulta de su raza, lo que generalmente
ocurre a los doce meses de vida. Las hembras que son concebidas antes de ese tiempo,
dividen con el feto los nutrientes que seran utilizados para su desarrollo corporal, el cual
queda perjudicado, resultando en hembras de pequeo porte y cras debilitadas al nacer, en
relacin a las nacidas de hembras adultas. Para que una hembra sea seleccionada como
reproductora y destinada a la inseminacin artificial, dando origen a cras mejoradas en
cuanto a produccin y gentica, deben presentar las siguientes caractersticas:

a) ubre bien distribuida, con apenas dos pezones saludables. Se debe evitar el uso de cabras
ms de dos pezones o cuando estos son excesivamente grandes o gruesos.

b) buenas caractersticas raciales;

c) buena productora de leche;

d) presentar gestacin y partos normales;

e) ausencia de raquitismo o alteraciones seas;

f) buena fertilidad y proliferacin;

g) libres de enfermedades infecciosas o abortos.

Mtodos hormonales de sincronizacin del estro

La sincronizacin del estro, tiene por finalidad hacer que un grupo de ovejas o cabras
entren en estro en determinado momento, para as poder ser realizada la monta natural o
inseminacin artificial. Es un mtodo que trae muchas ventajas, sin embargo, slo puede
ser empleado en rebaos frtiles y nunca en ovejas o cabras subfrtiles o infrtiles,
cualquiera que sean las causas. Las ventajas de la sincronizacin del estro son observadas
en la programacin de los partos para pocas ms propicias a la supervivencia de las cras,
en la organizacin del manejo del rebao, en la produccin de leche y de carne,
posibilitando tambin, la reduccin del intervalo entre los partos.

La sincronizacin del estro por hormonas es realizada a travs de la combinacin de

sustancias en varias dosis. Un mtodo simple y eficiente es la preparacin de esponjas en
forma cilndrica, con una pulgada de base por tres centmetros de altura, aplicndose en la
misma 50mg de Acetato de Medroxi progesterona.

Se deja secar y despus se coloca dentro de un plstico protegindolo contra la luz solar y
posibles contaminaciones. En el momento ideal para la sincronizacin, se retira la esponja
del plstico y se aplica en la misma un antibitico, para evitar infecciones Luego, se lavan
las manos y con la ayuda del aplicador o con los propios dedos, se coloca la esponja en la
porcin profunda de la vagina.

En seguida, se corta el exceso de hilos dejndose sobresalir, apenas cerca de 2 cm para que
no pueda ser jalado por otro animal.

Despus de la colocacin de las esponjas, se siguen las etapas:

En el da 9 a 14 de permanencia de la esponja, se aplica una inyeccin intramuscular de 1

mg de prostaglandina y otra con 200 U.I. (unidad internacional) de gonadrotopina corinica
equina (eCG.). Las dos inyecciones son aplicadas en la misma ocasin, sin ser mezcladas y
en lugares diferentes .En el da 11, se retira la esponja de la vagina con mucho cuidado,
observando su aspecto en cuanto a la presencia de moco, sangre y orina. La inseminacin
artificial solamente deber ser realizada despus de transcurridas 38 a 42 horas de la
retirada de la esponja.

La esponja permanece en la vagina por un perodo de 14 das, siendo que, en el momento

de la retirada, se aplican por va intramuscular 200 U.I. de ECG. El momento ideal para la
inseminacin artificial es entre 55 60 horas despus de la retirada de la esponja y la
aplicacin de la inyeccin.

Efecto macho

Consiste en la retirada de los machos del rebao por un perodo mnimo de treinta das por
completa ausencia tanto visual como olfativa. Un experimento realizado por Chemineau
(1982), usando la metodologa que consisti de inyectar en la mucosa nasal de las cabras 2
ml de una solucin de sulfato de cobre a 2%, con la finalidad de tornarlas ansmicas (sin
olfato). En las otras cabras se aplic por va nasal 2 ml de agua destilada como grupo
control. Las cabras que recibieron 2 ml de solucin de sulfato de cobre a 2% no
consiguieron mantener el olfato, utilizndose como prueba excremento de perro pasado en
las fosas nasales, Las cabras que no tenan la capacidad de olfatear, no mostraron un pico
uniforme de LH (hormona luteinizante) y presentacin irregular del estro. Estos resultados
demostraron que el efecto macho se obtiene por la visin y por el olfato, siendo liberado
por el macho un olor caracterstico (feromona) producto del cido caprico, liberado por las
glndulas de Schutizel, localizadas en la base de los cuernos. Esta feromona puede ser
sentida por las hembras a una distancia de 20 metros. Se resalta que la ovulacin que ocurre
en un promedio 48 horas despus de la introduccin del macho, no presenta buena calidad,
esto puede ser explicado por causa de que este ciclo estrales bastante corto. El ciclo
siguiente se presenta regular y la ovulacin que lo acompaa es de buena calidad.

Monta controlada

En este tipo de monta, el macho slo se presenta a las hembras, para efectuar montas
controladas en hembras que se encuentran en estro. Cada hembra debe ser cubierta al
menos dos veces durante el estro con intervalo de 12 horas. Las montas ms eficaces son
sin duda las realizadas entre 12 y 24 horas despus de la aparicin del estro. La monta
dirigida permite una utilizacin ms racional del macho, evitando sobre todo las montas
ineficaces al inicio del estro. La monta realizada en buenas condiciones produce
frecuentemente ms de 80% de fertilidad. No obstante, el resultado depende directamente
de la condicin fisiolgica de los machos disponibles, sobre todo en lo referente a la
estacin. En los caprinos, fuera de la poca de reproduccin, el porcentaje de huevos
divididos puede ser inferior (fuera de poca 75% frente al 88% en la poca reproductora;
Baril y Vallet, 1990a). En este perodo. Algunos machos manifiestan una insuficiencia de
libido, junto con una baja fecundidad del esperma, lo que puede constituir un obstculo
serio para la utilizacin de este mtodo de fecundacin.

Tcnica de inseminacin artificial

Introduccin

Aunque los conocimientos sobre inseminacin artificial remontan al siglo XVIII, solamente
en el siglo XX la prctica pas a ser ejecutada, como manera de conseguir la multiplicacin
de descendientes de determinado reproductor o como mtodo eficaz de obtenerse, con
mayor rapidez, la mejora gen tica de los rebaos. Los europeos partieron enfrente,
destacndose Italia Rusia, Francia, Dinamarca e Inglaterra. Enseguida, vinieron los
norteamericanos y progresivamente, otros pases.

Para desarrollar sus programas de inseminacin artificial, los pases fueron criando los
propios modelos de aparatos para recoleccin en ovulacin del semen, diferentes
tecnologas de preparacin del material gentico) los medios de dilucin y de conservacin,
as como las formas de transferencia de tecnologas para los locales donde se encuentran los
rebaos.

Inseminacin artificial intracervical

La inseminacin artificial peri o endocervical en los pequeos rumiantes es una tcnica

simple y fcil de realizar, sin embargo, su eficacia es menor cuando es comparada con la
inseminacin artificial intrauterina.

La hembra debe ser manejada con calma y sin apuros, antes de la inseminacin
propiamente dicha. El tratador debe montarla, quedando con la espalda virada para la parte
anterior de la hembra, asegurndola firmemente por las patas, de modo que presente la
vulva para el inseminador.

La limpieza de la vulva y de la regin perianal debe ser hecha a seco, utilizndose papel
toalla o papel higinico; jams debe lavarse con agua.

Descongelamiento de la dosis

Tratndose del semen congelado, debe seguirse la orientacin de la central de inseminacin

artificial. Generalmente la tcnica de descongelacin consiste en sumergir directamente la
pajilla congelada, en agua de bao Mara calentada a 37 C, en el que se mantendr durante
30 segundos.

Preparacin del aplicador

Su uso consiste en las siguientes etapas:

a) corte de la extremidad de la pajilla lacrada con alcohol polivinlico;

b) introduccin de la pajilla en la porcin terminal, roscndola en el protector metlico

introduccin del mandril hasta sentir alguna resistencia, o sea, hasta que el mandril entre en
contacto con la pajilla.

Introduccin del vaginoscopio

Con el vaginoscopio previamente lubricado con vaselina o glicerina lquida, usando la

mano izquierda y con una fuente de luz encendida, se localiza el orificio externo del crvix.

Aplicacin del semen

El aplicador debe ultrapasar el crvix, sin traumatizarla de manera que el semen pueda ser
depositado, lo ms profundo posible, al empujar el mandril. En cabras, se debe alcanzar la
cavidad uterina, pero como el canal cervical y el crvix pueden tener fracturas, cal os,
hiperplasias o desvos, no se debe forzar la penetracin. En el caso de no conseguir alcanzar
la cavidad uterina, el semen debe ser depositado en el lugar de la obstruccin, pudiendo ser
intracervical profunda, intracervical superficial o intravaginal.

En la oveja, como el crvix no es permeable, lo mximo que se puede depositar el semen es

en la porcin intracervical superficial o en la intravaginal, jams tratando de ultrapasar el
canal cervical. Despus de la deposicin, el aplicador debe ser removido lentamente y la
hembra debe mantenerse contenida por algunos segundos
Inseminacin artificial intrauterina por laparoscopia

Con el propsito de disminuir las dificultades del transporte de los espermatozoides en el

tracto genital de la hembra, la inseminacin artificial, principalmente en las hembras
ovinas, cuando se utiliza semen congelado, es realizada por va intrauterina bajo control
laparoscpico. De este modo los espermatozoides se depositan ms cerca del lugar de
fecundacin. El animal anestesiado se coloca sobre una mesa de sujecin en decbito dorsal
con una inclinacin anteroposterior de 30 a 45. Es realizada una tricotoma (retirada de
pelos) en el campo operatorio, enseguida se lava y se desinfecta con alcohol yodado. Hecho
esto, se practica una primera puncin en el abdomen para colocar la cnula del endoscopio,
introduciendo por la misma un pequeo volumen de aire para separar las vsceras de los
rganos genitales y as tener una mejor visualizacin. Una segunda cnula es colocada en el
lado opuesto de la primera, por donde se introduce una pinza de manipulacin atraumtica
para la localizacin del tero; en caso de no ser encontrado, esta sujeta el tero y lo
posiciona de manera que la pinza pueda ser retirada para dar lugar al aplicador que va a
puyar con la aguja el cuerpo del tero, depositando as suavemente el semen. Cualquiera
que sea la especie y el mtodo de conservacin del semen, el porcentaje de fertilidad,
despus de la inseminacin artificial intrauterina es superior al que se obtiene por la
inseminacin tradicional o cervical.

Este mtodo de fecundacin permite por otra parte utilizar un menor nmero de
espermatozoides que en el caso de la inseminacin artificial intracervical. En la prctica, la
inseminacin artificial intrauterina tiene lugar 48-60 horas despus del final del tratamiento
de sincronizacin. Sin embargo, sabiendo de la variabilidad del inicio del estro y en
consecuencia, del momento de la ovulacin con relacin al final del tratamiento (Baril y
Vallet, 1990b), los estudios experimentales han demostrado que es preferible inseminar a
las cabras teniendo en cuenta el momento de la aparicin del estro, situndose el momento
ptimo entre las 20 y 24 horas despus del inicio del estro. Sin embargo, como en la cabra,
en caso de utilizacin de semen congelado. es preferible efectuar la inseminacin
intrauterina seis horas antes del inicio de las ovulaciones (Walker et al., 1989a).
Transferencia de embriones

Introduccin

La tcnica de trasplante embrionario est revelndose como una de las ms eficientes

biotcnicas de la reproduccin, teniendo en vista el mejoramiento gentico del rebao.

La importacin de razas exticas sin riesgos de enfermedades o de otros problemas, como

aquellos relacionados a la calidad gentica de los animales, es prcticamente inexistente
cuando se utiliza el trasplante embrionario. La tcnica permite a los criadores costos bien
bajos si son comparados al de los animales vivos, adems de no presentar cualquier peligro
sanitario, pues los embriones son prcticamente inmunes a virus y bacterias, por el hecho
de ser sometidos a sucesivos lavados antes de su congelamiento. La adaptacin al medio
ambiente de los animales nacidos de trasplante de embriones es extremamente beneficiosa,
por tanto las cras maman el calostro de la receptora, siendo un animal normalmente
adaptado al ambiente y ms resistente a determinadas enfermedades, a travs de las
inmunoglobulinas y anticuerpos contra otras enfermedades propias del medio tropical.

Preparacin fisiolgica de las receptoras

Caprinos

Se utiliza el mtodo francs "Chrono gest" (I.N.R.A.), que consiste en el uso de esponjas
intravaginales impregnadas con 45 mg de F.G.A. (acetato de fluorogestona), depositadas en
la porcin craneal de la vagina por un perodo de 10 das. En el 8' da, se realiza la
aplicacin intramuscular de 200 U.I. de ECG (gonadotrofina corinica equina) y 75C de
cloprostenol (anlogo sinttico de PGF 2OC). En el 100 da, se retiran la esponjas Y
enseguida son observados los celos con el auxilio de machos vasectomizados o por
observacin del comportamiento de las hembras trabajadas. En el 15' da del tratamiento,
las hembras son sometidas a un ayuno hdrico y alimentar por 24 horas y en el 16' da son
transportadas en el inicio de la maana al laboratorio para la realizacin de los trasplantes.

Ovinos

Se utiliza el mtodo francs "Chronogest"(I.N.R.A.), que consiste en el uso de esponjas

intravaginales impregnadas con 45 mg de F.G.A., depositadas en la porcin craneal de la
vagina por un perodo de 12 das, donde es realizada tambin la aplicacin intramuscular de
400 U.I. de E.C.G.

En el 120 da, se retiran las esponjas y enseguida son observados los celos con el auxilio de
machos vasectomizados o por observacin de comportamiento de las hembras trabajadas.

En el 18' da del tratamiento, las hembras son sometidas a un ayuno hdrico y alimentar por
24 horas y en e119' da son transportadas en el inicio de la maana al laboratorio para la
realizacin de los trasplantes.
Preparacin fisiolgica de las donadoras

Cabras

Se utiliza el mtodo francs anteriormente citado, Chrono gest(I.N.R.A.), el cual consiste

en la colocacin de las esponjas impregnadas con 45 mg de F.G.A. en la porcin craneal de
la vagina, permaneciendo por 10 das. En el 6 da, se aplican por va intramuscular 8 mg
de FSH (hormona folculo estimulante), siendo 4 mg en la maana y 4 mg en la tarde. En el
T da, 4 mg de FSH, siendo 2 mg en la maana y 2 mg en la tarde y en el 80 da, 4 mg de
FSH, siendo 2 mg en la maana y 2 mg en la tarde, haciendo un total de 16 mg.

En el 100 da, se procede a la retirada de las esponjas, realizndose tres servicios, con un
reproductor genticamente superior y de comprobada fertilidad, en intervalos de 12,24 y 36
horas. Transcurridos 17 das del tratamiento, se procede a la recoleccin de los embriones,
los cuales pueden ser transferidos a fresco para las receptoras preparadas dentro del mismo
perodo de las donadoras. Caso contrario, se puede procesar el congelamiento de los
referidos embriones siendo que, en promedio, de cada 10 embriones recoleccin dos, 6 de
ellos son perfectamente congelables y 4 pueden ser trasplantados a fresco. As como las
receptoras, las donadoras tambin deben ser sometidas a ayuno hdrico y alimentar 24
horas antes de realizar la recoleccin de los embriones. La figura 10 muestra el tratamiento
hormonal adoptado para las donadoras en un programa de trasplante de embriones en
cabras.

Ovejas

Se utiliza el mtodo francs anteriormente citado,"Chrono gest"(I.N.R.A.), el cual consiste

en la colocacin de las esponjas impregnadas con 45 mg de F.G.A. en la porcin craneal de
la vagina, permaneciendo por 12 das. En el 90 da, se aplican por va intramuscular 10 mg
de FSH, siendo 5 mg en la maana y 5 mg en la tarde. En el 100 da, 6 mg de FSH, siendo
3 mg en la maana y 3 mg en la tarde y en e111 da, 4 mg de FSH, siendo 2 mg en la
maana y 2 mg en la tarde, haciendo un total de 20 mg. En el 120 da, se procede a la
retirada de las esponjas, realizndose tres servicios, con un reproductor genticamente
superior y de comprobada fertilidad, en intervalos de 24, 48 Y 60 horas.

Transcurridos 19 das del tratamiento, se procede a la recoleccin de los embriones, los

cuales pueden ser transferidos a fresco para las receptoras preparadas dentro del mismo
perodo de las donadoras. Caso contrario, se puede procesar el congelamiento de los
referidos embriones siendo que, en promedio, de cada 10 embriones coleccionados, 6 de
ellos son perfectamente congelables y 4 pueden ser trasplantados a fresco. Las donadoras
ovinas, tambin deben ser sometidas a ayuno hdrico y alimentar 24 horas antes de realizar
la recoleccin de los embriones. La figura 2 muestra el tratamiento hormonal adoptado para
las donadoras en un programa de trasplante de embriones, en ovejas.

Mtodos de trasplante de embriones

Un esquema sobre el tratamiento de induccin, recoleccin y trasplante de embriones, es

mostrado en la figura 2.

Mtodo por laparoscopia

Este mtodo fue desarrollado con el fin de mejorar las posibilidades de repetir en hembras
donantes permanentes, la recoleccin de embriones, evitando adherencias en el tero,
oviducto y ovarios. El animal es anestesiado y colocado sobre la hamaca de sujecin con
una inclinacin antero-posterior de 30 a 45, afeitndose y desinfectndose el campo
operatorio. Se realiza una primera puncin a unos 4-5 cm delante de la ubre y a 10-15 cm a
la izquierda de la lnea blanca para colocar una cnula que se conecta con el endoscopio.
Despus de haber colocado aire en la cavidad abdominal para separar las vsceras de los
rganos genitales, se coloca una segunda cnula, al otro lado de la primera, con el objetivo
de introducir una pinza traumtica para la manipulacin del tracto genital. Utilizando la
pinza, se sujeta uno de los cuernos por la base con el fin de punzarlo (aguja de Mintz). Es
colocada una tercera cnula, para pasar una sonda de tres vas, donde se introduce el
extremo de la misma por el orificio de la puncin dentro de la luz uterina.

El globito introducido con la sonda (va 1) es inflado con la finalidad de obstruir la luz
uterina en la base del cuerno, donde es colocado el extremo de un catter (va 2). El otro
catter (va 3) es introducido por su extremidad lo ms cerca posible de la unin tero-
tubrica. La pinza es colocada sobre el istmo con el fin de evitar que el lquido pase para el
oviducto. Es inyectado por la sonda (va 3) en torno de 40-50 mi de lquido fisiolgico de
recoleccin que se recupera junto con los embriones por la sonda (va 2) colocada en la
base del cuerno (Baril et al., 1995).

Para efectuar el trasplante en la receptora se sigue prcticamente el mismo procedimiento

realizado en la recoleccin de la donadora. Esta operacin permite decidir si efectuar o no
el trasplante, as como seleccionar el cuerno, a travs de la respuesta ovulatoria. El
operador ya decidido que es posible realizar el trasplante en la receptora, escoge el cuerno
uterino que recibir los embriones, siendo sujetado por su parte superior (tercio prximo a
la unin tero-tubrica) con la ayuda de la pinza traumtica y punzado con una aguja de
Mintz, por donde sern colocados los embriones.

Mtodo por laparotoma o quirrgico

Despus de la anestesia se prepara el campo operatorio igual como para la recoleccin por
laparoscopia. Es hecha una incisin de 8 a 10 cm sobre la lnea blanca que comienza a 3-4
cm delante de la ubre, de permitiendo as exteriorizar los cuernos uterinos y contar con los
cuerpos lteos presentes en los ovarios. Como fue visto, la recoleccin de embriones se
realiza en los das 6-7, despus del ltimo servicio, en la cual se lava cada cuerno uterino
por separado. Es efectuada una puncin en la base del cuerno, a nivel del ligamento
intercornual para introducir una sonda de Folley y una aguja en la luz uterina,
obstruyndola a travs del globo inflado en el extremo de la sonda. En el otro lado del
cuerno, cerca de la unin tero tubrica, se realizar una segunda puncin, donde se
introduce un catter el cual se fija a una pinza atraumtica, permitiendo con que se de una
buena obstruccin, evitando el reflujo de lquido para la cavidad peritoneal. Son inyectados
despus de esto, entorno de 40 a 50 mi de liquido de recoleccin a + 37c ya sea en la base
del cuerno (va retrgrada) o cerca de la unin tero-tubrica (va antergrada). Por el
extremo opuesto mediante la sonda o el catter, es recuperado el lquido, junto con los
embriones, que sern depositados en una placa de petri.). Para el trasplante es realizada una
incisin de 7-8 cm en la lnea blanca, para exteriorizar los cuernos uterinos junto con los
ovarios, con el fin de decidir si conviene o no efectuar el trasplante. Decidido realizar el
transplante el operador selecciona el cuerno y realiza una pequea puncin con aguja de
punta cnica, evitando lesionar la mucosa uterina, depositando delicadamente los
embriones. Terminado el trasplante o la recoleccin, se coloca en la cavidad abdominal un
antibitico (para evitar infecciones) y posteriormente se sutura el peritoneo y la piel (Baril
et al. 1995).
Mtodo por va cervical

Para la recoleccin de embriones por va cervical el animal es anestesiado y enseguida es

introducido en la vagina un vaginoscopio con iluminacin para visualizar el cuello uterino
el cual es sujetado con una pinza atraumtica. El tcnico introducir un dedo en el recto del
animal con el fin de guiar el paso de la sonda de recoleccin en el orificio de el
crvix(Coonrod et al., 1986). El paso del catter dentro del orificio del cuello no siempre es
posible en la cabra y menos todava en la oveja. Al pasar los anillos de la crvix, llegando
al cuerpo del tero, se infla el globo con aire proveniente de una jeringuilla unida a la
sonda, permitiendo de esta manera que se obstruya el cuerpo del tero evitando el reflujo
del lquido para la vagina. Despus de obstruido el canal se inyecta el medio de recoleccin
(10 a 20 mi de PBS) en el tero (lavando los dos cuernos), recuperndose despus con la
ayuda de la sonda de recoleccin. Son practicados varios lavados sucesivos hasta totalizar
100 a 200 mi de medio lquido de recoleccin por hembra. Debido a la dificultad de
sobrepasar el cuello uterino y la imposibilidad de manipular los cuernos uterinos por
palpacin rectal como en los bovinos y equinos, la recoleccin de embriones por la va
genital natural es todava una tcnica poco desarrollada en lo que respecta a los pequeos
rumiantes.

De la misma forma ocurre con el trasplante, donde los embriones se expulsan en la base de
uno de los cuernos o dentro del cuerpo del tero, siendo siempre incierto el punto exacto
alcanzado por el extremo del catter. Por otra parte, este mtodo no nos permite conocer el
estado ovrico de la receptora, pudiendo depositar el embrin en el ovario que no posee el
cuerpo o cuerpos lteos, incluso en hembras sin ovulacin (Baril et al., 1995).

Medios lquidos para la recoleccin de embriones

El medio bsico para la recoleccin y conservacin de los embriones es conocido como

PBS (Phosphate buffered saline). Por ser un medio pobre en nutrientes, es necesario aadir
protenas a esta solucin salina para la sobre vivencia del embrin. Las protenas se aportan
al PBS, pudindose aadir ya sea 4% de BSA (albumina srica bovina) 10% de suero
fetal, de oveja o de cabra. En el caso de emplearse suero en lugar BSA, este deber ser des
complementado, con el fin de inactivar la protena que puede resultar txica para el
embrin. Los embriones pueden ser lavados, a travs de 10 baos de PBS sucesivos con el
fin de eliminar la presencia eventual de bacterias y virus. Esta prctica, recomendada por la
Sociedad Internacional de Trasplante de Embriones (I.E.T.S.) ofrece la garanta de poder
utilizar un embrin sano.

Calidad de los embriones

La calidad de los embriones tiene como base los aspectos morfolgicos, siendo el principal
factor de xito en el trasplante de embriones. El examen es hecho con una lupa monocular
de 80 aumentos como mnimo. La zona pelcida que garantiza la proteccin del embrin
debe aparecer ntegra (ausencia de fisuras) y ser perfectamente esfrica El grado de
desarrollo embrionario por lo que se refiere al da de la recoleccin es el principal factor
que ha de considerarse. Los embriones que presentan retraso en el desarrollo, superior a 48
horas se eliminan. De esta forma, un embrin recogido en e16 a17 da despus del inicio
del estro, normalmente debe haber alcanzado el estadio de mrula compacta/blastocito
(Moore; 1980).

Los embriones recogidos en el mismo da pueden mostrar diferencias en el desarrollo

embrionario, fenmeno que se observa frecuentemente entre los embriones de una misma
donante o de donantes diferentes de una misma especie. Adems en los caprinos, el
desarrollo embrionario precoz presenta un retraso de 12 a 24 horas respecto al observado en
los ovinos (Moore, 1980). Cualquiera que sea su desarrollo, el embrin debe ser esfrico y
con los contornos de clulas que le acompaan perfectamente visibles. Se puede, no
obstante, transferir un embrin de calidad dudosa, siempre y cuando el mismo sea
trasplantado con otro embrin de buena calidad (Baril et al., 1995).

Tcnica de biparticin de embriones

La principal biotcnica, que complementa el trasplante de embriones, para conseguir un

mayor ndice de gestacin, se llama biparticin o biseccin de embriones, Bsicamente es
un procedimiento en el cual los embriones en el estadio de mrula compactada o blastocito,
son divididos en el medio dando origen a dos hemiembriones. La divisin es hecha con la
ayuda de una lmina y un micromanipulador, que permite movimientos delicados los cuales
no perjudican el embrin. Esta tcnica es dividida en cuatro etapas, mencionadas a seguir:

a) se abre la zona pelcida con micromanipuladores;

b) se extrae delicadamente el embrin;

c) con una lmina de vidrio, el embrin es dividido en dos partes iguales;

d) una parte es introducida en la zona pelcida de origen y la otra en una zona pelcida
diferente.

La biseccin de los blastocitos en los das 9 y 10 permite obtener corderos con una eficacia
elevada (Chesne et al., 1987). Este fenmeno se puede explicar por la intervencin de una
seleccin natural. En el 100 da el embrin ya ha superado la etapa crtica que supone la
formacin del blastocisto.
Segn Baril et al., (1995) estos mtodos de duplicacin descritos para los embriones de
ovinos se puede aplicar en los embriones de caprinos. En esta especie, los datos disponibles
son menos numerosos que en los bovinos y ovinos. Sin embargo, varios autores han
demostrado su viabilidad con resultados muy interesantes (Tsunoda, et al., 1985; Zhang
Yong et al., ,1988).

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Capitulo 7
ADN. Pruebas de paternidad en sementales bovinos

Len, H; Ruiz, H.; Ruiz,E.A.; Len,O.

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autnoma de Chiapas

Introduccin

El cido ribonucleico (ARN) junto con el cido desoxirribonucleico (ADN) son los cidos
nucleicos ms importantes de la clula. Hoy en da actan como depositarios y trasmisores
de la informacin gentica de cada clula, tejido y organismo. James Watson y Francis
Crick transformaron la biologa con su descubrimiento del ADN en 1953 y dieron el primer
paso para lo que seran despus los avances del genoma humano (es la totalidad del
material gentico de posee un organismo en particular) y la clonacin de organismos
(reproduccin de manera idntica).
Identificacion de ADN

Actualmente los cientficos han aprendido a leer los planos del ADN y conocen el cdigo
mediante el cual se traducen. Este conocimiento ha proporcionado la posibilidad de
introducir modificaciones genticas en los organismos vivos mediantes tcnicas de ADN
recombinante. Entre los ejemplos de importancia mdica se encuentra la insulina y los
factores de coagulacin de la sangre que pueden fabricarse de manera menos costosa y ms
confiable en beneficio de la sociedad.
De igual manera, basndose en la gentica se puede tener el diagnstico de la
vulnerabilidad hacia determinadas enfermedades hereditarias de las personas,
determinacin de la paternidad, maternidad y procedencia de la humanidad. Sin lugar a
dudas, estos avances de la gentica molecular tambin en los ltimos aos han tenido una
repercusin en la productividad y en el mejoramiento gentico de la ganadera. En el
reporte del proyecto del genoma bovino (Elsik et al., 2009), los investigadores revelan que
existen genes identificados que codifican para la reproduccin, cantidad y calidad de la
leche, gen de la produccin de la doble musculatura, terneza de la carne, engrasamiento de
la canal, entre otros.

Los avances en gentica molecular ofrecen en la actualidad una nueva generacin de

tecnologa aplicada a la seleccin del animal; la capacidad de leer directamente la
informacin gentica del ADN, sin depender necesariamente de la medicin fenotpica del
carcter de importancia econmica.

Los marcadores genticos son especialmente tiles para los rasgos difciles de cuantificar
y seleccionar es decir caracteres costosos y complejos de medir con precisin sobre el
animal vivo. Tambin, se incluyen en esta categora las variables que se expresan tarde
(algunas pos mortem) en la vida del animal o solamente en un sexo como en hembras.
Ejemplos de estas caractersticas son: calidad de carne, eficiencia de crecimiento,
resistencia a las enfermedades y desempeo reproductivo.

No obstante, los caracteres econmicamente importantes (produccin y producto final) son

complejos por naturaleza, siendo controlados por varios genes que interactan entre s y
con factores ambientales. Estas son variables que a priori solo podran ser caracterizadas
utilizando modelacin estadsticas de pedigrees y valores fenotpicos, heredabilidades y
correlaciones genticas.

En resumen, los marcadores genticos en el ganado bovino tienen bsicamente tres

aplicaciones.

1.- Identificacin y parentesco animal.

2.- Deteccin de las caractersticas heredables.

3.- Ayuda complementaria en el mejoramiento gentico.

Pruebas de partenidad en la mejora genetica del ganado bovino.

La industria nacional del ganado bovino de registro se ha basado fundamentalmente en la

comercializacin de sementales y pie de cra con registro genealgico (pedigree) lo que en
cierta medida indica su valor gentico. Uno de los propsitos de las evaluaciones genticas
es obtener la mejor prediccin de los valores genticos de los animales y su respectiva
exactitud para la seleccin de futuros reproductores con el fin de mejorar caractersticas de
importancia econmica. Con base a estas evaluaciones se proporciona a los criadores y
productores comerciales de ganado una herramienta ms confiable y objetiva para la
seleccin y utilizacin de sementales y vientres. La existencia de errores de paternidad
pueden conducir a un sesgo considerable en los estimadores de correlaciones genticas
entre los efectos directos y maternos, lo que puede sesgar la estimacin de los parmetros y
valores genticos, as como reducir la ganancia gentica de la seleccin. Los errores en los
registros de paternidad no son exclusivos de Mxico, se han reportado este tipo de errores
en Israel de 5%, Alemania 4%, Irlanda 20% y Brasil 27% (Cuevas, 2013).

La tecnologa de identificacin basada en el anlisis del ADN es un medio poderoso para la

autentificacin y control de los sistemas tradicionales de identificacin de animales. En el
caso del ganado bovino, la identificacin biolgica basada en el uso de marcadores
moleculares del tipo de los microsatlites se ha convertido en la prueba ms precisa
(99.99%) para la identificacin y establecimiento de las relaciones genealgicas entre
individuos. Las pruebas de paternidad son necesarias en los programas de mejoramiento
gentico, entre otras cosas para la verificacin de la informacin proporcionada por el
productor de pie de cra y sementales, as como identificar la paternidad de los animales
producto de empadre mltiple.
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Manual del Departamento Tcnico de Reproduccin Animal (2009).

www.reproduccionanimal.com.mx
Capitulo 8
El papel de las biotecnologas reproductivas en la
conservacin de recursos zoogenticos de especies
domsticas

De La Torre, J.F.

Centro nacional de Recursos Genticos, INIFAP

Introduccin

Con excepcin de los guajolotes y algunas especies de abejas sin aguijn (meliponas), las
especies domsticas que hoy sustentan la produccin pecuaria en Mxico, no son
originarias del continente americano. Bovinos, equinos, ovinos, caprinos, porcinos y
gallinas fueron introducidos al continente americano, provenientes de la pennsula ibrica
(Espaa y Portugal) hace aproximadamente 500 aos, dando origen, despues de cinco
siglos de adaptacin a condiciones edafo-climticas y de produccin especficas, a razas
localmente adaptadas, hoy conocidas genricamente como criollas y con denominaciones
especficas de acuerdo a la regin donde permanecen, que en la actualidad juegan un papel
socioeconmico y ecolgico importante en diferentes regiones del Pas y que estan
fuertemente asociadas a grupos de poblacin de bajos recursos (Gallardo et al., 2002). Las
razas localmente adaptadas en Mxico son consideradas un recurso gentico valioso por su
capacidad de producir en condiciones adversas de clima y alimentacin y si bien son en
general consideradas de baja produccin, al ser entes biolgicos capaces de producir en
condiciones difciles y con bajos insumos, se vuelven opcin en su forma pura o en
cruzamiento para escenarios adversos, actuales o futuros. Las poblaciones criollas se
encuentran actualmente en su mayora bajo el esttus de amenazada o en extincin en
Mxico y por ello se requiere la aplicacin de estrategias de conservacin in situ y ex situ,
que ayuden a preservar esta fuente potencialmente valiosa de variabilidad gentica, de cara
a condiciones ambientales cambiantes (Martnez, 2005; Perezgrovas, 2003).

Por otra parte, la introduccin reciente de especies domsticas animales a nuestro pas
(segunda mitad del siglo XIX a la fecha), ha traido razas de bovinos especializadas en la
produccin de leche y carne, de cerdos, ovinos, caprinos y aves, con caractersticas
productivas sobresalientes, pero con mayores requerimientos de condiciones ambientales,
insumos y manejo. Los programas de mejoramiento basados en evaluaciones genticas y
orientados a necesidades especficas de produccin y el uso intensivo que se da a los
animales sobresalientes gracias al uso de herramientas reproductivas, van reduciendo el
espectro de variabilidad gentica de estas razas, generando la necesidad de que se
establezcan estrategias de conservacin ex situ que permitan conservar el germoplasma de
individuos relevantes a lo largo del tiempo y as preservar variabilidad gentica que pudiera
desaparecer ante la acelerada evolucin que experimentan estas razas y tenerlo disponible
para reintroduccin de germoplasma on caractersticas particulares al pool gentico de la
raza cuando as se requiera (CONARGEN, 1999).

Conservacin de recursos genticos

Los diferentes mtodos disponibles para la conservacin de recursos genticos pecuarios se

agrupan en dos principales formas: la conservacin in situ (conservacin de la especie en su
habitat de orgen o de domesticacin), que permite la continua evolucin y adaptacin de
especies en respuesta al medio ambiente, pero que deja mas expuestos a estos recursos a su
reduccin o desaparicin por destruccin o fraccionamiento de habitats ocasionados por
desastres naturales o por interferencia humana. La conservacin ex situ (conservacin del
germoplasma fuera de su ambiente natural) es por contraparte una forma inmediata y
segura de conservar el recurso gentico y tenerlo disponible en cualquier momento para
agregar variabilidad gentica a las poblaciones in vivo e incluso para reintroducir especies
cuya poblacin es escasa o extinta. As, estos dos mtodos son relevantes y
complementarios y aunque siempre ser la conservacin in situ la forma mas recomendable
para conservar la variabilidad de las poblaciones y promover cambios adaptativos a
condiciones ambientales y de produccin, la conservacin ex situ, que se da principalmente
en bancos de germoplasma deber ser una herramienta complementaria estratgica para
asegurar la supervivencia de las especies (Goodwin, et al., 2012).

En Recursos Genticos Animales (RGA), la conservacin ex situ se puede dar a travs del
mantenimiento de poblaciones animales en condiciones controladas y la conservacin in
vitro de Germoplasma animal. En los pases en desarrollo, es mas comn observar que se
conservan poblaciones vivas, lo cual es sin embargo mas costoso que la conservacin del
Germoplasma e implica riesgos mayores para el adecuado mantenimiento de estas, por lo
que la recomendacin de FAO es que se implementen en estos pases estrategias de
conservacin in vitro de RGA (Gibson, et al., 2006). El trmino Germoplasma animal, se
refiere colectivamente a clulas que, por s mismas o en combinacin (primordialmente
embriones en estados de pre-implantacin, clulas espermticas y vulos) dan orgen a
descendencia viva. El Germoplasma animal se conserva en muy bajas temperaturas
(usualmente en nitrgeno lquido a -196 C). La crioconservacin de germoplasma animal
no solo tiene impacto como mtodo de conservacin ex situ de RGA, pero tambien es una
herramienta reproductiva utilizada en ganadera para diseminar ampliamente la gentica de
animales superiores a travs de la inseminacin artificial con semen congelado. Baste decir
que en 1998, mas de 250 millones de dosis de semen proveniente de toros genticamente
superiores fueron criopreservadas a nivel mundial y que mas de 100 millones de vacas
recibieron su primer servicio de Inseminacin artificial de esas dosis (Mazur, et al., 2008).

El documento de interlaken establece en su prioridad estratgica N 9 crear o potenciar los

programas de conservacin ex situ y lo justifica de esta manera: Las medidas de
conservacion ex situ proporcionan una garantia de seguridad frente a las perdidas de
recursos zoogeneticos sobre el terreno, bien a traves de la erosion o como resultado de
emergencias. Las medidas ex situ complementan las medidas in situ, con las que deberian
estar vinculadas, cuando proceda. Las colecciones ex situ tambien pueden desempenar una
funcion activa en los programas estrategicos de mejora genetica (FAO, 2007). La
conservacin ex situ, in vitro de RGA se establece pues como una prioridad para asegurar
que el valor gentico de animales con caractersticas favorables para la produccin o la
resistencia a enfermedades comprobadas, sea respaldada a travs de la crioconservacin del
germoplasma animal y su resguardo en bancos de germoplasma. En funcin de la capacidad
para generar descendencia de estos animales con caractersticas favorables, diferentes
fuentes de germoplasma animal (semen, embriones, vulos, clulas somticas) pueden ser
crioconservadas y eventualmente utilizadas bajo diferentes esquemas segn sea el propsito
de la regeneracin (Sonesson et al., 2002).

La crioconservacin de germoplasma animal demanda el concurso de conocimientos y

tecnologa en reas como la fisiologa animal, biologa celular, embriologa, cultivo in vitro
de clulas y criobiologa, entre otras. El mantener la viabilidad de los gametos, embriones y
clulas somticas despus de someter el germoplasma a procesos de coleccin, dilucin,
cultivo, co-cultivo, adicin de componentes orgnicos y qumicos, exposicin a subtancias
txicas (crioprotectores), enfriamiento y congelacin, es el gran reto que enfrenta la
conservacin de RGA y una grn cantidad de informacin se ha generado a partir de la
dcada de 1940, cuando de manera fortitua se descubrieron las cualidades crioprotectoras
del glicerl para la criopreservacin de la clula espermtica hasta nuestros das en que el
reto a vencer es la vitrificacin de vulos con tasas de sobrevivencia al proceso adecuadas.
En los siguientes prrafos se har una breve resea del estado del arte de las diferentes
biotecnologas reproductivas usadas como herramienta para la conservacin in vitro de
germoplasma animal.

Semen

La criopreservacin de semen esta respaldada por 65 aos de investigacin, desde el

descubrimiento de las capacidades crioprotectoras del glicerl (Polge et al., 1949) y es
actualmente una tecnologa de uso rutinario en todas las especies domsticas, tanto para la
conservacin de germoplasma como para el uso productivo (inseminacin artificial).
Adicionalmente, en virtud de que el volmen de un eyaculado se puede incrementar con el
uso de diluyentes fisiolgicos, es posible generar varios cientos de unidades de
germoplasma de una sola colecta de semen. Estos hechos colocan a la conservacin de
semen como el mtodo preferido y mas utilizado en los bancos de germoplasma, con la
desventaja, sin embargo, de que se esta conservando nicamente la mitad del acervo
gentico necesario para crear un individuo, y que para poder generar el genotipo que se esta
conservando, se requieren varias generaciones de cruzamiento absorbente (4 a 5 para
obtener animales con 94 a 97 % de la composicin gentica deseada) (Ollivier and Renard,
1995). En adicin, con el uso de semen como fuente de germoplasma, los genes
provenientes del genoma mitocondrial no son transmitidos a la descendencia, lo cual puede
resultar en variaciones en la transmisin de los caracteres deseados (Troy et al., 2001). Una
ltima consideracin en este apartado, es la dificultad que entraa la coleccin de muestras
de semen como recurso gentico, pues a diferencia de la coleccin comercial de individuos
de lto mrito genetico, que se realiza en instalaciones sanitariamente aseguradas, los
machos que se colectan como resultado de la identificacin de animales candidatos a
representar la variabilidad gentica en una poblacin, por lo general estan dispersos y
resulta muy complicado asegurar condiciones sanitarias al momento de la coleccin (FAO,
2012). Por ello, es importante contar con mtodos sensibles y especficos de evaluacin de
germoplasma post-criopreservacin, que permitan asegurar la calidad sanitaria del Recurso
genetico a resguardar. El factor sanitario es crtico cuando se trata de resguardar el semen
como germoplasma a largo plazo y con posible necesidad futura de distriburlo hacia otras
naciones. Por ello, investigaciones recientes orientadas a sustitur los componentes
orgnicos de orgen animal (yema de huevo, leche) con componentes vegetales con
propiedades similares (lecitina de soya) (Aires, et al., 2003; Ozanam, et al., 2011), resultan
relevantes para la conservacin de semen como germoplasma al suprimir la posibilidad de
transporte de enfermedades contenidas en componentes de orgen animal en el diluyente, a
travs de la distribucin nacional e internacional del semen.

La criopreservacin de semen en mamferos domsticos ha sido llevada en mayor o menor

medida a planos de uso rutinario para fines productivos y comerciales, lo que asegura la
disponibilidad de protocolos estandarizados y probados para fines de conservacin como
recurso gentico. En las aves, aunque existe informacin generada en los ltimos 50 aos
en la criopreservacin de semen de especies domsticas, incluyendo uso de crioprotectores,
congelacin lenta y rpida, mtodos de descongelado y mtodos de empaque y no obstante
que ya se ha congelado con xito semen de guajolotes, patos, gansos, palomas e incluso
algunas especies silvestres, los mtodos mas robustos y exitosos son los desarrollados para
gallos. Blesebois (2007) menciona que la investigacin en criopreservacin de semen aviar
con fines de conservacin de recursos genticos debe apuntar a tres objetivos: a)
Mejoramiento de predictores para reconocer machos con mejores posibilidad de producir
semen congelable; b) Estandarizacin de protocolos de congelacin de semen en especies
diferentes al pollo y c) Promover el desarrollo de criobancos de semen de ave
(mencionando que en la actualidad solo existen tres bancos de semen de aves consolidados,
en USA, Holanda y Francia).

Embriones

La criopreservacin de embriones es la mejor opcin para conservar la diversidad gentica

de una poblacin y ofrece la va mas rpida para restaurar una poblacin con caractersticas
favorables (FAO, 2012). Aunque la produccin de embriones a travs de multiovulacin y
coleccin no quirrgica (o mediante produccin de embriones in vitro) y su posterior
criopreservacin es una tcnica rutinaria en la actualidad (Mapletoft, 2012), sigue siendo,
con respecto a la produccin de semen un procedimiento que requiere mayor inversin, mas
recursos tcnicos y de equipamiento y la produccin por coleccin por animal es menor
(5.5 embriones congelables por coleccin para el caso de los bovinos). Por lo anterior, su
uso en bancos de germoplasma es mucho menor (menos del 5% con respecto al semen),
aunque existe consenso a nivel global de la importancia de incrementar el porcentaje de
conservacin en forma de embriones en los bancos de germoplasma (FAO, 2012).

Una cantidad importante de investigaciones se han realizado en torno a mejorar la calidad,

pero sobre todo la cantidad de embriones potencialmente viables que es capaz de producir
una hembra en un lapso de tiempo. En lo que se refiere a incrementar el nmero de
embriones congelables por tratamiento de superovulacin, es muy poco o que se ha logrado
con resultados inconsistentes; de hecho, en un estudio retrospectivo realizado sobre la
produccin de embriones en bovinos productores de leche, se observ que en perodo de 20
aos, aunque se intentaron procedimientos emergentes, la respuesta en terminos de
embriones congelables no aument (Hasler, 2006). En lo que se refiere a incrementar el
nmero de multiovulaciones y sus respectivas colectas embrionarias que se pueden dar en
un lapso determinado de tiempo, se ha generado una tecnologa denominada reciclado
rpido de donadoras que ha permitido reducir de 60-70 a 33-35 el intervalo entre
tratamientos de superovulacin sin menoscabo de la respuesta ovulatoria hasta en 18
tratamientos consecutivos, ofreciendo la posibilidad de casi duplicar la produccin de
embriones congelables por vaca por ao. (Hasler, 2003) . La produccin in vivo de
embriones se realiza con mayor o menor eficiencia en las diferentes especies de mamferos
domsticos y la posterior criopreservacin de los embriones es tambin un procedimiento
rutinario, realizado por el mtodo de congelacin lenta y en vigoroso desarrollo por el
mtodo de vitrificacin (Saragusty and Arav, 2011).

Una limitante importante para la produccin in vivo y crioconservacin de embriones con

fines de resguardo de recursos genticos es la falta de informacin del uso de estos
procedimientos en mamferos domsticos de razas localmente adaptadas. Es necesario, por
ejemplo, definir si estos animales presentan respuesta ptima a la superovulacin con
tratamientos hormonales tal y como se usan con razas modernas, toda vez que estos
primeros son por lo general de talla mas pequea y no estan sujetos a estrs por alta
produccin. En este sentido, Villaseor y col. (2013) encontraron que utilizando dosis
reducidas de Homona Folculo Estimulante con respecto a la dosis estndar recomendada
para ganado de carne la respuesta ovrica se redujo, contrario a lo que ocurre con ganado
cebuino y que en general la respuesta fue menor a la observada con razas modernas de
ganado europeo y cebuino. Lo anterior resalta la importancia de generar informacin
relacionada con procedimientos de obtencin y criopreservacin de embriones en razas
localmente adaptadas.

La produccin in vitro de embriones ha surgido en los ltimos aos como una alternativa
prometedora para la obtencin de embriones, tanto para fines comerciales como para la
crioconservacin de estos como recurso gentico. La obtencin de los vulos de animales
vivos a travs de la aspiracin folicular por la va transvaginal (TVA) permite la seleccin
de la hembra de la cual se obtendrn los gametos femeninos, que al fertilizarse in vitro con
semen de un macho seleccionado ex profeso para los vulos obtenidos, producirn
embriones con la carga gentica deseada. Esta tecnologa se ha desarrollado en la mayora
de las especies domsticas y en especies como el bovino han sido exitosas en producir
embriones a niveles comparables o mayores a la produccin in vivo de embriones
(Mapletoft and Hasler, 2005; Moreira, et al., 2010).

La verdadera limitante que se presenta con el embrin producido in vitro es la dificultad

para obtener adecuadas tasas de sobrevivencia embrionaria despus de la criopreservacin;
lo anterior debido a que el embrin producido in vitro presenta anormalidades morfolgicas
y fisiolgicas, entre las que destaca una excesiva acumulacin de lpidos
intracitoplasmticos con un efecto directo en la resistencia del embrin al proceso de
criopreservacin (De la Torre et al., 2006). Esta limitante ha sido resuelta desde dos
perspectivas. En primera instancia, con el desarrollo de medios para la maduracin,
fertilizacin y cultivo in vitro de vulos y embriones que son completamente definidos, es
decir, que no contienen componentes de orgen animal que necesariamente vienen con otros
compuestos indisociables. Esto no solamente presenta la ventaja de asegurar la calidad
sanitaria de los embriones que se producen (Hasler, 2010), sino que reduce
considerablemente la acumulacin de lpidos en el embrin (Summers and Biggers, 2003).
En segundo lugar, la utilizacin del mtodo de vitrificacin para criopreservar los
embriones. Este mtodo que es descrito en la siguiente seccin, ofrece una alternativa para
incrementar la viabilidad de embriones producidos in vitro despues de la criopreservacin,
en comparacin con el mtodo de congelacin lenta (Saragusty and Arav, 2011).

vulos

La crioconservacin de vulos tiene la importancia estratgica de permitir, junto con la

crioconservacin de semen, la realizacin de cruzamientos programados con fines
especficos, an cuando los progenitores ya no estn disponibles. Esta opcin cobra mayor
relevancia cuando se detecta un alto valor de la descendencia en una cruza especifica de
dos individuos. La crioconservacin de ovocitos como germoplasma, sin embargo, reviste
importantes dificultades tcnicas y es a la fecha una tecnologa en constante desarrollo
(Saragusty and Arav, 2011), por lo que es muy reducido el nmero de unidades de
germoplasma actualmente conservadas en los bancos de germoplasma a nivel mundial.
(FAO, 2012). La vitrificacin es el metodo de crioconservacin que mejores resultados ha
brindado en vulos; este mtodo requiere tiempos cortos de exposicin a las sustancias
crioprotectoras y una tasa de enfriamiento ultrarpida (+2000 C/min). Diversos mtodos se
han ensayado con relativo xito; sin embargo, todos ellos implican la exposicin en mayor
o menor grado al Nitrgeno Lquido, con la consecuente posibilidad de contaminacin
(Mapletoft y Hasler, 2005). El desarrollo de un mtodo asptico de vitrificacin de
ovocitos, sin que la muestra entre en contacto con el Nitrgeno Lquido es de vital
importancia para la crioconservacin de ovocitos en bancos de germoplasma.

Clulas somticas

Existe la opcin de crioconservar clulas somticas. Estas pueden ser utilizadas para
obtencin de cidos nucleicos con fines de caracterizacin molecular o con fines de realizar
trasplante nuclear (clonacin). Si bien la obtencin, preparacin y criopreservacin de
clulas somticas, as como la eventual extraccin de los cidos nucleicos son
procedimientos estandarizados y relativamente sencillos, la aplicacin de tecnologas como
la clonacin, traen la dificultad de requerir mayor aporte de tecnologa. Con miras a realizar
estos procedimientos a futuro, la crioconservacin de clulas somticas puede ser
considerada como una opcin razonable de conservacin en bancos de germoplasma animal
(Groenveld et al., 2008)

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Capitulo 9
Evaluacin de la capacidad reproductiva de los sementales
bovinos

Ruiz, H.; Len, H.; Ruiz, E.A.

Cuerpo acadmico: Biotecnologa reproductiva y mejoramiento gentico animal. Facultad

de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autnoma de Chiapas

Introduccin

Diferentes estudios en Mxico y en otras partes del mundo han indicado que la pobre
eficiencia reproductiva es una de las causas principales de los bajos ndices de
productividad en las explotaciones de ganado bovino.

En la ganadera bovina chiapaneca el toro como factor de produccin est ligado

directamente al destino productivo de una explotacin, ms an si se trata de una ganadera
de doble propsito. Es evidente que en una explotacin determinada, el nmero de
sementales es mucho menor que el de las vacas, pero no por eso, se debe olvidar que la
influencia del semental en la composicin gentica del rebao es muy alta. El toro es
responsable de la mitad del potencial gentico de las cras y por consiguiente sus
caractersticas productivas y reproductivas influyen en gran medida en el comportamiento
de las futuras generaciones.

Debemos recordar que cada toro tiene que prear a un mnimo de 25 a 30 vacas en un
periodo de tiempo muy corto, por lo cual si el semental tiene problemas reproductivos el
numero de vacas gestantes puede reducirse considerablemente; esta situacin se torna ms
critica cuando es un solo semental el encargado de gestar a todas las vacas del hato, ya que
al no ser apto para la reproduccin, los resultados al final del empadre puede ser desastroso.

El nmero de vacas que pueden ser servidas por un toro durante la poca de monta depende
de: la edad, salud, estado nutricional y la proporcin vacas por semental. Por lo tanto tiene
mucha importancia la evaluacin de los sementales en los hatos ganaderos. Sin embargo,
hemos visto en muchas ocasiones que tanto en explotaciones grandes as como los
pequeos productores dejan a un lado la evaluacin del potencial reproductivo de sus
sementales, sin tomar en cuenta el efecto negativo que ejerce un animal mediocre, desde el
punto de vista reproductivo, sobre la fertilidad del rebao.

Generalidades

La edad ptima de los sementales para la reproduccin se encuentran entre los 2 y 8 aos y
para realizar una prueba de fertilidad entre los 16 a 18 meses en el Bos taurus y de 20 a 25
meses en el Bos indicus (Ruiz et al., 2008).

El semental es responsable de la tasa de gestacin y de una proporcin de la produccin de

becerros, si falla una vaca en un lote, la produccin se reducir en la prdida de un becerro,
mientras que si falla un semental en ese mismo lote, la produccin de becerros ser del 0%,
el semental debe producir espermatozoides frtiles y mantener esta produccin adecuada
segn la demanda, ser capaz de identificar a las hembras en estro, montarlas y servirlas
(Len, 1990, Pimentel, 2001).

Examen clnico y fsico

El examen se inicia con la revisin de la historia clnica y la ananmesis, observar el estado

general del semental, temperatura, frecuencia respiratoria y cardiaca. Los animales
enfermos o convalecientes, as como los que han pasado por periodos febriles prolongados
o que han sufrido estrs, pueden tener afectada la calidad del semen e incluso la libido, por
lo cual debern ser evaluados posteriormente (Rangel, 1999).

Durante la evaluacin fsica del semental debe observarse en forma general lo siguiente:

En el momento que el semental est comiendo y rumiando.

Cuando el semental est caminando de preferencia en superficie dura para detectar

problemas en el aparato locomotor, claudicaciones y los aplomos de Los miembros
posteriores y anteriores.

Cuando el semental est echado y bebiendo (Ruiz et al., 2008).

Prueba de laboratorio: es importante que el semental est libre de enfermedades

reproductivas como: Brucella, Leptospira Tricomona. Campilobacter. Rinotraqueitis
infecciosa bovina (IBR), Diarrea Viral Bovina (BVD), de lo contrario enviar muestras al
laboratorio para descartar cualquiera de estas enfermedades.

Condicin corporal: Durante la evaluacin del examen fsico, se debe tomar en cuenta la
condicin corporal del semental, ya que tanto la obesidad como la desnutricin afectan el
desempeo reproductivo, se califica en el rango de 1 a 5, correspondiendo el calificativo 1
a un toro muy flaco y el calificativo 5 a un toro muy gordo u obeso.

Aparato locomotor: En la evaluacin del aparato locomotor se observa el estado de los

miembros anteriores y posteriores, principalmente el tren posterior, ya que es el que soporta
el peso del toro al momento que ste realiza la monta. Durante este examen se buscan
indicios de laminitis, abscesos de la suela, artritis, fisuras o grietas de las pezuas y
fibromas interdigitales, pododermatitis. Hay que considerar tambin trastornos de carcter
reversible como son pezuas muy largas que se pueden recortar y los que son irreversibles
como la paresia espstica y la parlisis progresiva (Rangel, 1999; Hafez y Hafez, 2000;
Kennedy et al., 2002).

Columna vertebral: Cuando los sementales presentan defectos de columna, es difcil que
logren montar y lograr la cpula. Los problemas que se presentan en la columna vertebral
son irreversible y se debe optar por cambiar el semental antes que se presenten prdidas
econmicas en la explotacin (Rangel, 1999).

Anquilosis: disminucin o abolicin de la movilidad de un articulacin.

Espondilitis: inflamacin de una o varias vertebras.

Escoliosis: desviacin lateral de la columna vertebral.

Examen de los rganos genitales externos

Testculos: La funcin principal de los testculos es la produccin de espermatozoides y

son los rganos sexuales primarios en el macho, adems de producir hormonas esteroides.
Son pendulosos con su eje longitudinal en posicin vertical, la forma del testculo en el Bos
taurus es ovoide y en el Bos indicus es cilndrico, presenta simetra, tono y elasticidad a la
palpacin. Para realizar el examen de los testculos se toma la base del escroto desde atrs
y se desplazan los testculos hacia la parte caudal y distal. Se debe inspeccionar la
simetra, forma, posicin, tamao, consistencia, desplazamiento y temperatura de ambos.
Entre los defectos importantes en los testculos se pueden encontrar: Orquitis, criptorquidia
(Unilateral y bilateral), testculos pendulosos, infantiles, torcidos o girados, asimtricos,
suaves esponjosos, adherencias, megalotesis, hematocele, varicocele, hidrocele (Hafez y
Hafez, 2000).

Circunferencia escrotal: La circunferencia escrotal ha demostrado ser una medida

confiable para predecir el peso testicular y la produccin de espermatozoides en los toros en
crecimiento. La produccin de espermatozoides es una funcin directa del tamao
testicular. Los testculos deben de ser desplazados con firmeza desde el cuello del escroto
hacia el fondo del mismo, y la cinta colocada en el dimetro ms ancho (Kennedy et al.,
2002).

Examen del epiddimo: Del epiddimo se examina la cabeza, ubicada en el polo dorsal del
testculo, presenta forma de capuchn ligeramente granuloso; el cuerpo se encuentra en
posicin media al testculo, siendo corto, liso y del grosor de un lpiz; la cola, ocupa el
polo ventral del testculo y el tamao es similar a la yema del dedo. Las anormalidades que
pueden encontrarse son epididimitis, absceso y asimetras (Rangel, 1999; Pimentel 2001).

Examen del pene: Al examinar el pene se pueden encontrar adherencias a tejidos

adyacentes y hematomas en distintas etapas, adems de fracturas del pene sobre todo en
toros con demasiada actividad sexual, esta lesin es ocasionada al momento de la cpula,
cuando la hembra cae de manera repentina por el mismo peso del toro. Es normal encontrar
en los sementales frenillo persistente, este defecto se soluciona realizando una ciruga, el
problema de este defecto que es altamente heredable (Galina y Valencia, 2008).

Exploracin de los rganos genitales internos

Mediante la palpacin transrectal se palpa la presencia, forma, tamao, consistencia,

sensibilidad, movilidad y simetra de las glndulas bulbouretrales, vesculas seminales y
prstata (Ruiz et al., 2008).

Vesculas seminales: es de gran importancia en el ganado bovino, debido a que aporta el

80% de lquido seminal en el eyaculado. Se encuentra localizada detrs de la cavidad
plvica, mide de 10 a 13 cm de largo por 5 cm de ancho, son conificadas lobuladas y
elsticas, presentan la forma de un racimo de uva. Desde el punto de vista clnico reviste
mayor importancia, ya que la mayora de las infecciones y anormalidades se presentan en
este rgano.

Mtodos de colecta de semen

Vagina artificial: Es el mtodo ms comnmente utilizado, por cuanto ofrece al macho,

condiciones parecidas a la vagina de la hembra.

Electroeyaculador: El semental se coloca en una manga para su inmovilizacin, el cilindro

del electroeyaculador se lubrica y se introduce por el recto ocupando la cavidad plvica.
Los estmulos van de menor a mayor y en trmino de 5 minutos se obtiene el semen (Hafez
y Hafez, 2000; Brito et al., 2002)

Evaluacin del semen

Una vez colectado el semen por los mtodos antes mencionado, se evita la exposicin al sol
y se trata de mantener a temperatura de 37C, de preferencia en bao mara e
inmediatamente se procede a su evaluacin. Para el anlisis del semen se realizan
evaluaciones macroscpicas y microscpicas (Ruiz, 1992).

Examen macroscpico

Las caractersticas macroscpicas del semen pueden ser afectadas por la presencia de
clulas epiteliales, sangre, pus y suciedad e incluye los siguientes parmetros: Volumen,
color, olor, aspecto, pH

Volumen: El semen colectado por vagina artificial es de menor cantidad, pero de mayor
calidad en comparacin al electroeyaculador, ya que mediante este mtodo los animales
reciben estmulos elctricos en forma directa a las glndulas sexuales accesorias, as como
los nervios simpticos lumbares (Galina y Valencia, 2008).

Aspecto: El aspecto se divide entre acuoso y denso; cuando el semen presenta un aspecto
acuoso la concentracin espermtica es baja y la cantidad oscila entre 150 a 450 millones
de clulas espermticas por ml, mientras que el semen con aspecto denso, presenta una
concentracin de 500 a 850 millones de clulas espermticas por ml (Kennedy et al., 2002;
Ruiz et al., 2008).

Color: Usualmente el semen del toro es de color blanco marfil. El color amarillo limn que
se observa en algunos toros es normal, se debe a la presencia de riboflavina y es una
caracterstica hereditaria sin influencia alguna sobre la fertilidad y no se debe confundir con
orina ya que la orina tiene su olor caracterstico. El color rojo o caf indica que contiene
sangre fresca o sangre ya vieja (Hafez y Hafez, 2000; Galina y Valencia, 2008).

pH: Se mide con el papel tornasol o con el potencimetro. El pH normal del semen de
bovino es de 6.9 (6.4 7.8) (Hafez, y Hafez, 2002; Ferrugem, 2008).

Uno de los principales factores que afecta el pH de los eyaculados es el mtodo de colecta,
ya que el semen obtenido por el electroeyaculador presenta una mayor alcalinidad y una
baja concentracin espermtica en comparacin al semen colectado por vagina artificial
(Len, 1990; Galina y Valencia, 2008).

Examen microscpico

Para realizar esta evaluacin se necesita un microscpico compuesto, ya que se llevan a

cabo una serie de pruebas que van a determinar la calidad del espermatozoide, las
evaluaciones a realizar son las siguientes: movimiento en masa, movimiento individual,
concentracin espermtica, morfologa (anormalidades primarias y secundarias)

Motilidad en masa: Se efecta con una gota de semen sin diluir en un portaobjeto y se
observa al microscopio con el objetivo de 10X y con el uso de una placa trmica a
temperatura de 37C, la evaluacin se basa en la observacin de ondas o de movimiento de
remolino, segn valores presentados en la siguiente tabla.

Motilidad individual: El estudio se basa en la velocidad con que se desplazan los

espermatozoides en forma individual y rectilnea de un punto a otro sobre el campo
observado, Se utiliza una gota de citrato de sodio al 2.9% o solucin Hartmann, ms una
pequea gota de semen, ambas gotas se colocan sobre un portaobjeto y se mezclan para
luego colocarle un cubreobjeto con el fin de formar una capa fina y luego se lleva a la
placa trmica. Se observa al microscopio con los objetivos 10X, 20X y 40X el movimiento
individual de los espermatozoides (Rangel, 1999; Ruiz et al., 2008)

Concentracin Espermtica: La concentracin puede calcularse por varios mtodos a

partir de la muestra de semen. Entre estos mtodos, destacan la espectrofotometra, la
colorimetra, la citometra de flujo y el uso de cmara de recuento celular, como las de
Brker, Neubauer o Thoma (Kennedy et al., 2002; Ferrugem, 2008).

Morfologa espermtica: La morfologa predice las anormalidades de las clulas

espermticas, las cuales se clasifican en primarias y secundarias. La evaluacin se lleva a
cabo realizando un frotis utilizando una tinta china. En un portaobjeto se coloca una gota de
tinta china, dentro de sta se coloca una pequea gota de semen, y con la ayuda de otro
portaobjeto se realiza el frotis, se esperaran cinco minutos para ser fijadas las clulas
espermticas y luego se observa al microscopio con el objetivo de 100X (Pimentel, 2001).

Referencias

Brito, L.F.C., Silva, A.E.D.F., Rodrguez, L.H. Vieira, F.V., Deragn, L.A.G., Kastelic, J.P.
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Pimentel, C.A. 2001. Infertilidade no touro. En: Doencas de ruminantes e equinos, Editado
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Ruiz, H, H. 1992. Evaluacin de tres diluyentes en la conservacin del semen congelado

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Ruiz B., Herrera J.C., Ruiz H, C. Lemus, A. Hernndez, H. Gmez, J. R. Barcena y R.I.
Rojas. 2008. PR 50. Capacidad reproductiva de sementales activos en un sistema de
monta abierta de los GGAVATT en el municipio de Villaflores, Chiapas. Memoria, I
Simposio Internacional de Produccin de Rumiantes, La Habana, Cuba.
Capitulo 10
Inseminacion artificial en ganado porcino en condiciones
tropicales

Fernndez, A.; Len, H.; Ruiz, H.; Ruiz, E.A.

Facultad de Medicina y Zootecnia UNACH

Introduccin

La inseminacin artificial (IA) es una biotecnologa de la reproduccin que consiste en el

depsito del semen en el aparato genital de la hembra por medio de un instrumental
adecuado. En la especie porcina, los primeros intentos fueron realizados en la dcada de los
aos 30 por Milovanov el cual practic la IA con semen puro. Los primeros trabajos de
campo fueron realizados por investigadores japoneses quienes estudiaron la metodologa de
colecta de semen del verraco, as como la tcnica de la IA. Desde esos primeros trabajos
hasta nuestros das, la IA ha evolucionado enormemente desde un punto de vista tcnico,
permitiendo un crecimiento exponencial de esta biotecnologa a nivel mundial.

Hoy en da se estima que existen ms de 70 millones de cerdas en produccin en el mundo.

De ellas, ms del 25% son inseminadas. Sin embargo, es importante destacar que existen
importantes diferencias en cuanto a la aplicacin de esta biotecnologa en los distintos
pases productores. En el continente europeo el 40% de las hembras existentes en
produccin se reproducen con programas de IA. Entre ellos, Francia, Finlandia y Espaa se
destacan con el 70-80% del hato nacional inseminado. Estados Unidos, Canad y Mxico
inseminan el 50%, 30% y 30% respectivamente. En Asia se destaca China con el 27% de
hato inseminado y en Sudamrica Chile, Venezuela y Brasil tiene el 60%, 15% y 10%
respectivamente.

Evidentemente este mtodo de reproduccin se ha impuesto frente a la monta natural por

las ventajas que presenta:

1.- Disminucin del nmero de verracos en la granja.

2.- Utilizacin de verracos de alta calidad gentica permitiendo un mejoramiento general

del hato.

3.- Explotacin al mximo del manejo en grupos o lotes

4.- Obtencin de porcentajes de fertilidad iguales o superiores a los logrados en monta

natural

5.- Facilitacin del manejo, reduciendo el tiempo y trabajo/monta.

6 Mejor control de la calidad del semen y un mejor control sanitario.

Obtencin y procesamiento del semen de verraco

En aquellas granjas que producen su propio semen, la IA requiere la utilizacin simultnea

de tcnicas de colecta, dilucin, y conservacin del semen. (Knig 1976)

Obtencin del semen

Se han descrito 2 tcnicas para la colecta de semen del verraco, 1.- la tcnica de la mano
enguantada o bien, 2.- la utilizacin de una vagina artificial. Ambas tcnicas de colecta
pueden realizarse mediante el empleo de un potro de monta o de una cerda en celo. (Knig
1976)

Si bien se describen en la literatura estas dos tcnicas nicamente, narraremos en detalle la

primera por ser la de ms amplia utilizacin. La tcnica de la mano enguantada, se basa en
tomar con la mano el pene del verraco realizando presin sobre la extremidad imitando las
contracciones que realiza el crvix de la hembra durante la monta natural. Es importante
destacar que el principal objetivo es el de obtener semen de calidad bacteriolgica
aceptable. Para evitar las contaminaciones que perturben la conservacin del semen o sean
responsables de la transmisin de enfermedades a las cerdas, es importante la utilizacin de
guantes, material de colecta desechable y la correcta higienizacin previa del macho
donante. (Knig 1976)

A tal fin, es recomendable trabajar con un potro de monta limpio y si no se cuenta con ello,
higienizar la hembra en celo que se utilizara con el mismo fin. Asimismo, es conveniente
duchar al macho, limpiar y desinfectar el prepucio. Es aconsejable trabajar con material de
colecta limpio, seco y tibio. La utilizacin de material desechable destinado a recoger el
semen es muy recomendable dado que los sistemas de limpieza y esterilizacin son
difcilmente controlables.

El eyaculado del verraco se caracteriza por presentar cuatro fracciones, que en orden de
aparicin son: 1) La fraccin pre espermtica (fraccin clara acompaada de gel que
representa 5-20% del volumen total; 2) La fraccin espermtica (fraccin que proviene del
epiddimo y que posee el 70% de los espermatozoides del eyaculado, representando 30-
50% del volumen total); 3) La fraccin pos espermtica (fraccin epididimaria y secrecin
de glndulas anexas) fraccin pobre en esperma pero que representa 50-60% del volumen
total colectado y 4) La fraccin final clara, la cual servira de tapn mucoso durante la
monta natural evitando as el reflujo de esperma. (Knig 1976)
Para evitar la contaminacin del eyaculado es importante filtrar el semen durante la colecta
con filtros especiales o con 6 espesores de gasa. Asimismo, se debe extender el pene
perpendicular al cuerpo del verraco, para evitar la cada del fluido prepucial en el termo de
recolecta, o bien, utilizar una gasa o filtro que retenga el goteo del fluido prepucial. Del
mismo modo, se debe descartar la primera fraccin, desprovista de esperma y generalmente
cargada de bacterias. Esta fraccin evacua de la uretra de bacterias y restos celulares.

A partir de aqu podemos colectar solamente la fraccin rica (fraccin espermtica) o bien,
la fracciones 2 y 3 (fraccin espermtica + fraccin pos espermtica). Generalmente en las
granjas se utiliza la colecta de las fracciones 2 y 3 ya que el nmero de
espermatozoides/totales recolectados es mayor y por ende, optimizamos el nmero de dosis
por eyaculado. El porcentaje de fertilidad, el porcentaje de partos y el tamao de la camada
no se ven afectados.

A diferencia de las otras especies domsticas, la utilizacin de una vagina artificial no se ha

difundido. Esto es principalmente debido a lo "incmodo" del sistema y por otro lado, la
tcnica de la mano enguantada es ms simple de implementar. Sin embargo, es importante
destacar que la experiencia del operador resulta importante a la hora de iniciar un macho
joven, como as tambin, la obtencin de eyaculados de buena calidad. (Hafez y Hafez
2002)
Procesamiento y conservacin del semen

Antes de proceder a conservar el semen de un macho determinado, este debe ser evaluado
para comprobar su calidad y poder entonces decidir la cantidad de dosis a realizar. Las
evaluaciones de rutina que se realizan en diferentes muestras del eyaculado para ser
conservados en fresco o para congelar son:

1. Volumen.

2. Motilidad

3. Vitalidad

4. Nmero total de espermatozoides

5. Morfoanomalias.

6. Estado del acrosoma.

7. Funcionalidad de la membrana plasmtica.

8. Pruebas de capacitacin.

9. Evaluacin de diferentes parmetros bioqumicos (cationes, pH etc.).

La conservacin de semen fresco es el mtodo universalmente empleado. El mismo

consiste en la conservacin del semen durante uno a cinco das al estado lquido entre 15-
20C. El 99% de las inseminaciones realizadas en el mundo emplean este mtodo. . (Hafez
y Hafez 2002)

La conservacin de semen congelado o criopreservacin: fue desarrollada en esta especie

en la dcada de los 70. Al igual que en otras especies de inters zootcnico esta tcnica de
conservacin se basa en el almacenamiento del semen a temperaturas de -196 C. . (Hafez y
Hafez 2002)

Para la conservacin del semen en estado lquido es necesaria la utilizacin de diluyentes

con el fin de proteger a las clulas espermticas durante el tiempo de conservacin hasta su
utilizacin. Estos diluyentes basan su composicin en diferentes mezclas de sales y
azucares y no contienen yema de huevo o leche como en las dems especies. Algunos de
los diluyentes ms utilizados son: BTS, Vital, X-Cell, Kiev, Reading, Guelph, IVT,
Modena, MR-A. Los diluyentes de semen de porcinos peden clasificarse en: 1.- diluyentes
de corta conservacin (que permiten mantener el poder fecundante del semen durante 1-3
das; (BTS) diluyentes de media conservacin que permiten prolongar ese perodo a 4 das
(Vital, Kiev,) y finalmente, 2.- diluyentes de larga conservacin, ms complejos en su
composicin, que permitiran garantizar el poder fecundante hasta 5-6 das (X-cell,
Modena, MR-A) (Hafez y Hafez 2002)
Seguidamente a la evaluacin de calidad la dosis insemnate estar conformada con un total
de 3-4 x109 espermatozoides totales. Posterior a la dilucin del semen, debemos reducir la
temperatura en forma gradual (2 3 horas) hasta la temperatura de conservacin. Es
importante destacar que el semen fue diluido a 32-34C y temperatura de conservacin
ideal del semen de verraco vara entre 15-20C. A esta temperatura, existe una disminucin
del metabolismo y de la motilidad espermtica. Del mismo modo, tambin se contribuye a
frenar el crecimiento bacteriano. Est demostrado que es ms importante controlar la
fluctuacin de temperatura del semen conservado que la temperatura en s. As, una
conservacin de las dosis de semen a 20C mantiene mejor la viabilidad que una
temperatura de 17C pero con fluctuaciones constantes entre 15 y 20C. Temperaturas de
conservacin de semen diluido con diluyentes clsicos, por debajo de los 14C son
responsables de alteraciones de la membrana del espermatozoide repercutindose en el
poder fecundante del mismo. Temperaturas por encima de los 20C no bajan el
metabolismo espermtico ni frenan el crecimiento bacteriano, lo cual disminuye
enormemente la vida til del semen. luteotrpico (Pinheiro, 1980).

El procesamiento del semen se realiza de la siguiente manera;

a) Se prepara el agua tridestilada y por cada litro se le agrego un sobre de diluente al

matraz el cual se coloca en la platina caliente hasta llegar a una temperatura de 37C y se
coloca en el bao Mara (37C) para mantener su temperatura. (Castaeda, 2004).

b) Se preparan los termos para coleccin en los cuales se les coloca una bolsa de
plstico en el interior y se sujeto con una liga, en donde se le agregan 200ml de diluente
para proveer amortiguamiento a el semen depositado una vez listos de colocan en el bao
Mara a una temperatura de 37C. (Castaeda, 2004).

c) Se pasa al semental a la manga para recortarle los pelos del prepucio y limpiarle
con una hoja de papel estraza para evitar contaminacin del semen. Posterior mente se pasa
al rea de colecta donde se espera a que el semental se suba al potro de monta y se expone
el pene haciendo una presin generosa dejando libre la uretra poniendo el pene
aproximadamente a 5 cm del termo para depositar el semen colectado, una vez finalizada la
eyaculacin total se retira el filtro que contiene la tapioca y se tira a la basura y el termo se
paso al rea de evaluacin del semen. (Castaeda, 2004).

d) Se toma el termo y se extrae la bolsa de plstico que contiene el semen y se coloca

en la jarra graduada en donde se sujetan los sobrantes de la bolsa con una liga.
Posteriormente se pesa en la bscula digital para anotar el volumen obtenido y se puso en el
bao Mara. (Castaeda, 2004).

Evaluacin del semen

Para la evaluacin del semen se toma una gota del semen y se coloca en el porta objeto en
donde se observa en el microscopio en donde se evalan los siguientes parmetros:

a) Motilidad en masa: se evala con base a los tipos de movimiento de onda que
presentan los espermatozoides expresado en porcentajes en donde a todos los sementales
se les dio un valor de 85%.(Gordon, 1997).
b) Motilidad individual: se observa con el objetivo seco fuerte (40x) una gota de
semen colocada entre el porta y cubre objeto y se pone sobre la termo platina a 37C.
c) Aglutinacin: se observa con el objetivo seco fuerte (10x) en donde (+) que
significa poca aglutinacin y (++) que significa moderada aglutinacin.

d) Concentracin por mililitro: para obtener la concentracin por mililitro se coloca 2

ml de diluente en la cubeta de espectrofotometra y se toma una muestra del semen con la
micropipeta y se coloca el semen en la cubeta de espectrofotometra hasta obtener una
mezcla homognea la cual se coloca en el espectrofotmetro en donde arroja los resultados
de la concentracin por mililitro. (Gordon, 1997).

e) Concentracin total: para obtener la concentracin total simplemente se multiplico

la concentracin por mililitro por el volumen del eyaculado del semental.

f) Nmero de dosis: para calcular el nmero de dosis se utiliza la siguiente frmula:

g)

h) Diluente: para calcular la cantidad de diluente que se agrega se multiplica el nmero

de dosis por el volumen de las bolsas de inseminacin

Ejemplo: 48x 100ml= 4,800ml de diluente.

Envasado del semen.

a) El primer paso consiste en colocar el contra peso y la pinza en la manguera para

poder extraer el semen de el recipiente.

b) Se colocan las bolsas para semen en el equipo de llenado manual y se prosigue a

llenar las bolsas para envasado con una cantidad aproximada de 100ml.

c) Una vez llenas las bolsas para envasado se pasa a la selladora para 3 unidades en
donde se hace una prensin durante 5 segundos hasta sellar hermticamente las bolsas.
(Gordon, 1997).

d) Posteriormente se pasara al refrigerador a una temperatura de 17C para su

almacenamiento las cuales son enviadas a las diferentes granjas.
Ciclo estral

El ciclo estral de la cerda dura 21 das, con un intervalo de variacin de 18 a 24 das; a lo

largo de estos 21 das se reconocen dos fases y cuatro etapas. (Valencia).

Proestro

Dura de 2 a 3 das y se caracteriza por el crecimiento folicular. Entre 10 y 20 folculos

cresen rpidamente, al tiempo que hay un descenso en el numero de folculos ms pequeos
(Valencia).

Durante esta etapa, la progesterona desciende a sus niveles ms bajos. El nivel de

estrgenos aumenta a causa del crecimiento folicular, lo cual provoca el incremento del
tamao e hiperemia de la vulva. Estos cambios de la vulva se pueden apreciar entre 2 y 6
das antes del celo y son ms evidentes en las hembras primerizas (Valencia, 1986).

Los cambios en el comportamiento son graduales. La cerda se muestra alerta, busca el

verraco y est atenta a los movimientos de la explotacin. Puede adoptar una actitud de
macho y trompear e intentar montar a otras hembras. Atrae al verraco, pero no lo acepta
(Valencia, 1986).

Estro

El estro, celo, calor, o brama dura de 2 a 3 das. De acuerdo con su presentacin durante la
vida de la cerda, se clasifican en:

a) Puberal: es el primer estro e indica el inicio de la pubertad.

b) Pospartum: se presenta de 1 a 3 das despus del parto y generalmente es anovulatorio.

c) Posdestete: ocurre a los 7.5 a 2.5 das despus del destete.

d) Recurrente: el que se presenta durante el periodo no lactante hasta la concepcin.

Durante el estro, los folculos maduros alcanzan un tamao de 9 a 11 mm y casi al final de

esta etapa ocurre la ovulacin. En esta etapa, el tamao de la vulva disminuye. En
ocasiones se puede observar la salida de un lquido mucoso opalescente a travs de los
labios. La cerda se muestra inquieta, atenta a todo lo que ocurre a su alrededor; busca
intensamente al verraco o al personal de la explotacin, emite gruidos similares a los del
macho, su apetito disminuye y se deja montar (Valencia, 1986).

En presencia del macho la cerda centra su atencin en l, dirige sus orejas en esa direccin,
se le aproxima y desarrolla el fenmeno de inmovilizacin que consiste en que la cerda
permanece quieta, arquea el dorso y permite la monta (Valencia, 1986).

Ovulacin

La ovulacin en esta especie es espontnea y ocurre hacia el final del celo, 40 horas
despus del inicio del pico de LH, lo cual corresponde al segundo da del ciclo estral. La
ovulacin dura 3.8 horas, contadas entre la liberacin del primer ovulo y el ultimo
(Valencia, 1986).

Metaestro

Durante los dos das siguientes al estro se forman los cuerpos lteos a partir de la teca
interna y la granulosa. En un principio, se les denominan cuerpos hemorrgicos, ya que la
sangre ocupa el interior del folculo colapsado. Con la formacin de los cuerpos lteos se
inicia la produccin de progesterona (Valencia, 1986).

Diestro

Durante esta etapa, que es la ms larga del ciclo, los cuerpos lteos alcanzan su mximo
desarrollo y reciben un considerable aporte sanguneo. Al mismo tiempo en el ovario
existen alrededor de 50 folculos pequeos e inmaduros. En esta etapa, la hormona que
predomina es la progesterona, hasta que se produce la regresin de los cuerpos lteos
(Valencia,1986).

Tcnica de inseminacin

La tcnica de inseminacin ha sido descrita por Glossop (1991). El primer pas en la

introduccin del catter de inseminacin en la vagina a travs de los labios de la vulva. La
punta del catter debe de lubricarse antes de su utilizacin y dirigirse hacia arriba y hacia
adelante en la direccin de la configuracin espiral del crvix. Una vez en contacto con el
crvix el catter se gira en el sentido contrario a la aguja del reloj para que se fije en el
crvix. Se aplica el recipiente de semen al catter y se presiona con suavidad durante un
periodo de varios minutos para que el semen llegue al tero.

Para ayudar a las contracciones uterinas durante la IA se estimula a la cerda mediante

masajes en los flancos con las manos o ya sea montando a la cerda dando el mismo masaje
con las piernas (Castaeda, 2004).

Referencias

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Valencia Mendez Javier de J. Fisiologa de la Reproduccin Porcina. Ed Trillas, 3a
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Mendez, M; Zenteno, C. Manual Para el Establecimiento y Utilizacin de la inseminacin

artificial en grajas porcinas del Estado de Chiapas (Tesis). Tuxtla Gutierrez, Chiapas.
2006.
Este libro electrnico se termino de editar el dia 10 de Agosto de 2015. Se utiliz letra
Times New Roman para el cuerpo de texto y Arial los titulos. Se utilizo el procesadro de
palabras MS Word version 2010.