Tema 29.

Mecanismos moleculares de sealizacin

Jerarqua de la sealizacin hormonal. Tipos de hormonas. Tipos de receptores hormonales.

Mecanismos bioqumicos generales de sealizacin. Receptores de membrana. Receptores
acoplados a protenas G. Segundos mensajeros hormonales. Protenas con actividad
enzimtica ligadas a membrana. Protenas efectoras. Receptores proten quinasas y ligados
a protena quinasa. Mecanismo de accin del glucagn y de la insulina. Receptor/efector del
xido ntrico. Mecanismo de accin de las hormonas esteroides y tiroideas. Papel de las
principales hormonas implicadas en la regulacin del metabolismo energtico.

BIOQUMICA-1 de Medicina
Departamento de Biologa Molecular
Javier Len

Tema 29
1

Clasificacin qumica de las molculas sealizadoras extracelulares

1. Pptidos y protenas.
- Oligopptidos: endorfinas, vasopresina, hormona liberadora tiroidea,
- Polipeptidos: Glucagn, Insulina, H. de crecimiento, renina, H estimulante de los folculos (FSH),
H luteinizante (LH), Horm estimulante del tiroides (TSH), eritropoyetina, factores de crecimiento,
interleucinas, etc

2. Derivados de aminocidos (AA):

serotonina (Trp), melatonina (Trp), GABA (Glu), glutamato, histamina (His), catecolaminas
(adrenalina, noradrenalina, dopamina) (Tyr), acetil-colina (Tyr)

3. Esteroides y derivados (precursor: colesterol):

cortisol, aldosterona, vitamina D, andrgenos, estrgenos, etc.

4. Hormonas tiroideas (derivadas de la Tirosina).

Tiroxina (T4) y Triiodotironina (T3)

5. Derivados del cido araquidnico:

prostaglandinas y leucotrienos

6. Oxido ntrico

Tema 29
2
 Clasificacin de receptores

Segn su localizacin celular

a) De membrana (de hormonas hidrosolubles)

De siete dominios / Acoplados a protenas G (GPCR)
Proten-tirosina quinasas
Asociados a proten-tirosina quinasas
Ser/Thr quinasas
Canales inicos

b) Intracelulares (de hormonas liposolubles)

De hormonas esteroideas (receptores nucleares)
De retinoides (receptores nucleares)
De hormonas tiroideas (receptores nucleares)
De oxido ntrico

Tema 29
3

Clasificacin de receptores

Segn su actividad bioqumica

a) Activan protenas G grandes

Acoplados a protenas G (GPCR)

b) Activan actividad protena quinasa (propia o de otra quinasa asociada)

Proten-tirosina quinasas
Asociados a proten-tirosina quinasas
Serina/Treonina quinasas

c) Se unen a DNA y regulan genes

Receptores de hormonas esteroideas, tiroideas y retinoides

d) Permiten o impiden el paso de iones

Canales inicos

e) Receptor=efector: Guanilato ciclasa (receptor de NO)

Tema 29
4
 Interruptores bioqumicos en sealizacin intracelular

RECEPTOR DEL ESTIMULO

GTP GDP
GDP GTP
Prot.G Prot.G SEAL*
GTPasa
INACTIVA ACTIVA

RECEPTOR
SEGUNDOS MENSAJEROS

Protena Tyr quinasa P

Tyr Tyr
Tyr fosfatasa Protena
Protena
sealizadora
sealizadora SEAL*
Ser/Thr fosfatasa
Ser Thr Ser Thr
Protena Ser/Thr quinasa P P
INACTIVA
ACTIVA

RECEPTOR
SEGUNDOS MENSAJEROS
Tema 29
5

Modificaciones covalentes postraduccionales que afectan la actividad de protenas

Fosforilacin

Ubiquitilacin

Glicosilacin (Ej: muchas protenas de membrana y secretadas)

Acetilacin (Ej: histonas)
Metilacin

Sumolizacin

Farnesilacin

Anclaje a
Farnesil-pirofosfato membranas
Protena

Miristoilizacin (AG-C14) y Palmitoilizacin (AG-C16) GDP

Tema 29
6
 Mecanismo de accin hormonal (hormonas hidrosolubles)

Hormona

Receptor de membrana

Protena transductora que Segundo

interacciona con el receptor mensajero

Protena(s)
transductora(s)
citoslica y nuclear(es Enzimas efectoras

Cambios en la expresin
de genes

Efecto Biolgico

Tema 29
7

Cinco principales segundos mensajeros hormonales

N H2 O
N N
N HN

N N H2N N N

O CH2 O
O CH2 O
H H H H
H H H H
-
-
O P O OH O P O OH

O O
AMP Cclico (cAMP) GMP Cclico (cGMP)

Adenilato Ciclasa Fosfodiesterasa

ATP cAMP AMP

PPi H2O

PO32-
2- H O
H2C O C R1 O 3P 5
O O
| H
OH H
R2 - C O C H 1 41
OH OH
| H O
H H PO 32-
H2C OH

1,2- Diacil-glicerol Inositol 1,4,5 trisfosfato

Ca2+

Iones Calcio
Tema 29
8
 Receptores Hormonas/Citocinas
Muchas hormonas endocrinas, con efectos en el
Receptores asociados
metabolismo y receptores olfativos.
a protenas G
GLUCAGON, ADRENALINA, dopamina, serotonina,
histamina,, Glu, GABA, acetilcolina (musc.), quimiocinas

Hormonas y citocinas inductoras de proliferacin.

Receptores Tyr-quinasa PDGF, EGF, VEGF, FGF, NGF, GDNF
DE MEMBRANA

Hormonas y citocinas inductoras de proliferacin y

diferenciacin celular
Receptores asociados a Tyr-quinasas Eritropoyetina, trombopoyetina,
(JAKs)
GH, IL-6, IL-11, LIF, IL3. IL-5,
GM-CSF, G-CSF, IL-2, IL-4, IL-9

Receptor de Insulina e IGF1 INSULINA, IGF-1, IGF-2

Citocinas y hormonas relacionadas con la diferenciacin,

Receptores Ser-quinasa
apoptosis y metabolismo, pero normalmente no sealizan
Receptores de TNF cambios metablicos importantes ni inducen proliferacin
celular: TGF, BMPs,TNFs

Receptores canales inicos Angiotensina II, GABA (A), acetilcolina (nicotnico)

INTRACELULARES

Guanilato ciclasa citoslica Oxido ntrico

L OGIA
Receptores nucleares FISIO
Glucocorticoides, mineralocorticoides, progesterona,
estrgenos, andrgenos, retinoico, T3, vit D, eicosanoides

Tema 29
9

Estructuras de los receptores acoplados a protenas G

EXTRACELULAR

= receptor 7TM
= receptor en serpentina

Citosol

Dominio extracelular
(Sitio de unin del ligando)

Dominio intarcellar
(interaccin con protenas G)

Ligando

ACTIVACIN DE
PROTEINAS G

Tema 29
10
 Ciclo de las protenas G heterotrimricas

GDP

GTP

INACTIVACION ACTIVACION

GDP

GTP

Produccin de segundos mensajeros

Estructura de una protena G trimrica inactiva

Tema 29
11

Activacin de las protenas G

En el estado inactivo la subunidad
est unida a GDP y formando un
La subunidad G es complejo con las subunidades
desactivada por la hidrlisis
del GTP, dando de nuevo la
forma inactiva (unida a GDP),
la cual se reasocia con
complejo para dar el GDP
complejo trimrico inactivo
Pi
Ligando

GTP
GDP

GDP
La subunidad G activada
(unida a GTP) se disocia del
GTP
complejo e interacciona
con sus dianas celulares PROTEINAS
La unin del ligando induce la interaccin del
DIANA
receptor con la Protena G, y a su vez
estimula el intercambio de GDP por GTP

(Modificado de Cooper, The Cell Saunders, 1997l, pag 530)

ANIMACION GPort - PLC

http://entochem.tamu.edu/G-Protein/index.html

Tema 29
12
 Tipos de subunidades G

N
Ligando
H7 H1

G Protena G
G Hetero-
C G trimrica

Gs Golf Gi Gq Gt otras
(Transducina)

Estimula Inhibe Estimula Estimula Estimula

Adenilato Adenilato Fosfolipasa C Guanilato PLA2,
ciclasa ciclasa ciclasa canal de
K, etc

Tema 29
13

Activacin de adenilato ciclasa y PKA por protenas Gs y Gi

GT Adenilato
GDP GTP
P ciclasa
s s activa

Receptor
ATP
PPi

Regul. Regul. AMPc Regul.

Regul Regul.

Catal. Catal.

Catal. Catal.
Proteina quinasa A activa Proteina quinasa A inactiva (tetrmero:
(dmero) dos ubunidades reguladoras +
Dos subunidades catalticas

FOSFORILACION EN
SER/THR DE OTRAS
PROTEINAS EFECTORAS

Tema 29
14
 Actividad de la adenilato ciclasa
Exterior

N Adenilato
ciclasa
Citosol (9 isoformas)
C

PPi
NH2
NH 2
ATP N N N
N cAMP
N N
O- O- O- N
N
-O -P-O-P-O-P O- CH2 O CH2 O
O
O O O H H H
H
H H H
H -O P O
OH OH OH
O

cAMP
Fosfodiesterasa
(PDE)

AMP
Acumulacin de cAMP en una neurona estimulada con 10 nM serotonina 20 seg
(Alberts et al. Molecular Biology of the Cell, Garland Pub. 2002)

Animacin GPCR PLC-Ca (Keeley) http://entochem.tamu.edu/G-Protein/index.html

Tema 29
15

Activacin de PLC por protenas Gq

PIP2
Fosfolipasa C

DAG
GDP
GTP
q

Receptor

Salida de Ca++ de IP3

vesculas
del retculo endoplsmico

IP3 PKC
Ca++
Proteina quinasa C activa

Calmodulina Calcio
Activa
Inactiva Protena
Protena Quinasa C
quinasa C

Animacin GPCR PLC-Ca (Keeley) http://entochem.tamu.edu/G-Protein/index.html

Tema 29
16
 Sitios de corte de los principales tipos de fosfolipasas

io
Fosfolipasa A1 dator
Recor 23
Tema
O

O H2C O C R1
|
R2 C O C H
O
|
H2C O P O X
|
Fosfolipasa A2 O

Fosfolipasa C
(PLC) Fosfolipasa D
(PLD)
P
O
DAG P H 5
se
+ O ender
lta apr
H
IP3 OH H ce fa
1 4
No ha utura
OH OH la estr
H O
H H P

Inositol 1,4,5 trisfosfato

Tema 29
17

Transduccin de la seal olfativa

Adenilato ciclasa Na+ Canal inico

Receptor Ca++ (se abre por cAMP)

G (olf) Na+
Depo
Ca++ lariza
cin

The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2004

"for their discoveries of odorant receptors and the organization of the

olfactory system"

Howard Hughes Medical Institute

Columbia University
University of Washington; Fred
New York, NY, USA;
Hutchinson Cancer Research
Howard Hughes Medical
Center
Institute
Seattle, WA, USA. B 1947
b. 1946

Richard Axel Linda B. Buck

http://nobelprize.org/medicine/laureates/2004/

Tema 29
18
 Transduccin de la seal visual

Na+ Canal inico

LUZ (abierto por cGMP, se cierra al
Rodopsina Fosfodiesterasa Ca++
caer cGMP por la fosfodiesterasa)

Transducina
Se cierra el canal Hiperpo
larizaci
n

(Berg, Tymoczko and Stryer.

Biochemistry. Freeman and Co. 2002)
LUZ

11-cic-retinal all-trans-retinal

Isomerizacion Rodopsina: http://www.blackwellpublishing.com/matthews/rhodopsin.html

Tema 29
19

RESUMEN de proteinas Galfa

Canal de Na/Ca
Gs Ad Ciclasa [cAMP]
PKA Otras enzimas*
Ej: Adrenalina en adipocitos, TSH en tiroides, ACTH en suprarrenal, etc

* Glucgeno sintasa fosforilasa, Piruvato quinasa, Fosfofructoquinasa, CREB

Gi Ad. Cicl. [cAMP] PKA

IP3 canales de Ca++ [Ca++] citosol

Gq PLC
DAG PKC Otras enzimas
Ej: Vasopresina en hgado, acetilcolina en msculo liso, trombina en plaquetas,

Ad. Cicl. [cAMP] Apertura de

G olf
canales de Ca++/Na+

Gt/transducina cGMP [cGMP] Cierre de

fosfodiesterasa canales Ca++/Na+

Tema 29
20
 Activacin de receptores tirosina-quinasa

Insulina, IGF-1, PDGF, EGF, VEGF, FGF, NGF, GDNF

Tyr Tyr
P P

La unin del ligando

provoca la dimerizacin Los receptores sufren
Centro activo
del receptor y activacin una autofosforilacin en
de la actividad
de su dominio Tyr-quinasa una o ms tirosinas de
protein Tyr-
quinasa la parte intracelular

Tema 29
21

Sealizacin por Protenas G-pequeas (Ras)

Farnesilo, para anclarse a la membrana

P P
RAS RAS
GDP GTP
P P P.Ad PI
Tyr Tyr
Receptor
activado GDP
GTP
Protena adaptadora Protena intercambiadora
que reconoce P-Tyr del de GDP/GTP (o GEF= GTP
receptor Exchange Factor), que es
(hay varias, se expresa activada por la proteina
una u otra segn el adaptadora
tejido) Hay tres protenas Ras y unas
50 protenas G-pequeas
(superfamilia Ras) en nuestro
P. Adaptadora = GRB2 genoma.
P. Intercambiadora de GTP (GEF) = SOS, RAL
P. G pequea = RAS, RHO, RAC Muchos tumores humanos tienen un gen Ras
mutado, que da lugar a una protena
constituvamente unida a GTP (=activa)

Tema 29
22
 Sealizacin por Protenas G-pequeas (Ras)

RAS GDP RAS

RAS
GTP
GDP

GTPasa
GTP GDP
Intercambiador de GDP/GTP
(GEF)
POr ej: SOS para RAS
Mutantes oncognicos
RAS no son sustrato de
las GTPasas

Tema 29
23

Ruta de sealizacin por protenas Ras

La unin del ligando induce dimerizacin y transfosforilacin del receptor en

Tyr. Una protena adaptadora (PA) reconoce estas Tyr-P y activa una protena
intercambiadora de GTP/GDP, que a su vez activa Ras.

P P
RAS RAF
P GTP
P P GEF ATP
Tyr P.Ad.
Tyr Tyr
La protena Ras
MAPKK activada une quinasa
P unida a membrana
Ser (Raf) y activa su
La quinasa MAPKK actividad quinasa. Raf
fosforila en Ser y en Tyr activa (fosforilando) a
a la MAPK, que es as ATP la quinasa MAPKK
activada. MAPK se MAPK
trasloca al ncleo donde P P
activa ciertos factores de Ser Tyr
transcripcin.
Ncleo

MAPK = ERK
Mitogen Associated Protein Kinase ATP
FACTORES DE P
P
TRANSCRIPCION
MAPKK = MEK

RAS: http://www.bio.davidson.edu/courses/Immunology/Flash/MAPK.html
Tema 29
24
 Transmisin de seal por PI3K

PI(4,5)P PI(3,4,5)trisifosfato = PIP3

PI(4)P PI(3,4)bisfosfato = PIP2

P P P
P 1 P 1
P P 4 P 3
4
Subunidad PIP2 PI(4)P
Catalitica P
P P ATP
Tyr Tyr
PI3K Pi
PTEN
Subunidad ADP
(fosfatasa)
Reguladora

Tema 29
25

O
C O CH
O
C O CH OH

H2C O P O H
OH
Fosfatidil-inositol-4-bisfosfato 1 4
OH OH
O
P

Fosfatidil-inositol-3-quinasa Pi
(PI3K) PTEN

O
C O CH
O
C O CH OH

H2C O P O H
OH
Fosfatidil-inositol-3,4-bisfosfato P 4
1 OH O
(PIP2) O
3 P

Tema 29
26
 Transmisin de seal por PI3K

PI(4,5)P PI(3,4,5)trisifosfato = PIP3

PI(4)P PI(3,4)bisfosfato = PIP2

P P P
P 1 P 1
RAS P P 4 P 3
4
GTP Subunidad PIP2 PI(4)P
Catalitica P
P P ATP
Tyr Tyr p110
PI3K Pi
PTEN
Subunidad ADP
(fosfatasa)
Interaccin directa Reguladora
RAS-PI3K

RAF
RAS Fosfatidilinositol (3,4)-bisfosfato
(PIP2)

RECEPTOR
PI3K cat
PI3K reg

Tema 29
27

Activacin de PKB por PI3K

PI(4,5)P PI(3,4,5)trsisfosfato = PIP3

PI(4)P PI(3,4)bisfosfato = PIP2

P P
P P P 1
4 P
3
Subunidad PKB
Tyr Tyr P
Catalitica activa
P P ATP
PI3K
ADP
Subunidad
Reguladora

PKB
inactiva
SUPERVIVENCIA
PKB = AKT CELULAR

Tema 29
28
Los mecanismos moleculares de sealizacin basados en mltiples
protenas/enzimas sealizadoras desde el receptor consiguen

1. Mayor especificidad: afinidades altas (Kd ~10-9 - 10-10) y expresin especfica de

tejido de receptores y proteinas sealizadoras
2. Amplificacin de la seal por cascadas enzimticas
3. Mayor capacidad de desensibilizacin y adapatacin al estmulo continuado al
inhibirse protenas transductoras intermedias
4. Integracin de seales en la misma clula

La transduccin de seal implica amplificacin de la seal

RAS-domino http://www.learner.org/channel/courses/biology/units/cancer/images.html

http://es.youtube.com/watch?v=L9dsg0wJRR8

Tema 29
29

Transduccin de seal desde receptores de citoquinas

Eritropoyetina, Trombopoyetina,
GH, IL-6, IL-11, LIF, IL3. IL-5,
GM-CSF, G-CSF, IL-2, IL-4, IL-9

P JAK
JAK JAK P P JAK JAK P

P P P P Un tipo factor de
STAT STAT transcripcin (STAT)
La unin del ligando se une a Tyr-P del
provoca su dimerizacin y receptor y es a su vez
la unin de la quinasa JAK. fosforilado en Tyr por
JAK fosforila en Tyr al JAK.
receptor
P
P

Los FT fosforilados son

as activadas para
dimerizarse y translocarse
al ncleo. El dmero activa
la transcripcin de genes P
especficos. DNA
P

ACTIVACION DE LA TRANSCRIPCION DE GENES DE

RESPUESTA A LAS CITOCINAS

Tema 29
30
 Sealizacin desde receptores de TGF y de BMPs

BMP La unin del ligando a una cadena del

TGF receptor induce la actividad quinasa de la
otra
RI

S/T
P Co-Smad
Smad
RII
EL receptor fosforila en Ser/Thr un tipo de
P protena que es a su vez factor de
Smad Co-Smad transcripcin (Smad). Este FT fosforilado
dimeriza con otra protena

El dmero entra al nucleo y

activa genes

Ncleo

ACTIVACION DE LA TRANSCRIPCION DE
GENES DE RESPUESTA A TGFb y a BMPs

Tema 29
31

Sealizacin desde el receptor de la insulina

Insulina Receptor de insulina:

4 polipptidos unidos por
-S-S-
puentes diusulfuro

-S-S- -S-S-

P
PTyr Tyr P Otras
Tyr Tyr
P P
Insulin Receptor Substrate 1
IRS1 Catalitica
Tyr P
P
PI3K
RAS Prot. PKB
Adaptadora Regulad.

IRS1-Tirosina fosfatasa
-OH

MAPK
-OH
HO-

Pncreas, clulas beta Insulina InsR

GENES Otros tejidos IGF1 IGF1R
Otros tejidos IGF2 IGF2R
Tema 29
32
 Transmisin de seal por Insulina PKB glucgeno GLUT4
Glucosa
PI(4,5)P2 PI (3,4,5)P3
PI(4)P PI(3,4)P2

GLUT4
1 P P
P
P
Subunidad 4 3
P
Tyr-P Catalitica P
IRS1 ATP PKB Glucosa
fosforilado PI3K activa
Subunidad
Reguladora P GSK3
inactiva

PKB
GLUT4
inactiva
(PKB = AKT)
GSK3
activa
Glucosa

Glucgeno Glucgeno
PI (3,4,5)P3 = Fosfatildilinositol 3,4,5-trisfosfato P Sintasa Sintasa
PI3K = Fosfatidilinositol-3-quinasa inactiva activa
PKB = Protena kinasa B
GLUT4 = transportador de glucosa Glucgeno

Tema 29
33

Sntesis de oxido ntrico

O
NH2 2 NADPH 2 NADP+
2 O2 HN CNH2
HN C NH2+ 2 H2O
CH2
CH2
CH2
CH2 + NO
NO sintasa CH2
CH2
(Hemo-FAD) H2N CH COO-
H2N CH COO-
Arginina Citrulina

Receptor del NO = Guanilato ciclasa soluble (citoslico)

cGMP
Hemo

(Lodish et al. Molecular

Cell Biology, Freeman Co.
2000)

GTP cGMP

Tema 29
34
 Activacin de PKG por cGMP

Terminal nerviosa

Acetil-colina
Clula de msculo liso

eNOS
Arg + O2 Citrulina + NO
cGMP RAPIDA
sGC RELAJACION DE
Clula MUSCULO LISO
endotelial GTP
PDE

VASODILATACIN
GMP

eNOS: Sintetasa de xido ntrico (endotelial)

sGC: Guanilato ciclasa soluble
PDE: cGMP fosfodiesterasa

Tema 29
35

The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1998

"for their discoveries concerning nitric oxide as a signalling
molecule in the cardiovascular system"

Robert F. Furchgott Louis J. Ignarro Ferid Murad

SUNY Health Science University of California University of Texas
Center Brooklyn, NY, School of Medicine Medical School at
USA. b. 1916 Los Angeles, US Houston ,USA
b. 1941 b. 1936

http://nobelprize.org/medicine/laureates/1998/illpres/medicine.html

Parece una irona del destino que me hayan

prescrito de nitroglicerina como medicina. La han
llamado Trinitrin para no confundir a los
farmacuticos y al pblico.
Tu querido amigo,

A. Nobel
Tema 29
36
Sildenafil: inihibidor de cGMP fosfodiesterasa

Especificidad del sildenafil sobre cGMP

fosdodiesterasas (PDEs)

Isozima Organo Actividad

PDE5 Pene 100%
PDE1 Corazn, cerebro, vasculatura 1,25%
GM
PDE3 Corazn 0.02%
NO PDE P
PDE11 Corazn, pituitaria, testculos 0.12%
cGMP PDE6 Retina 10%
sGC
(hay 11 isoenzimas PDE en total)
GTP

Tema 29
37

Activacin de PKG por cGMP

cGMP
sGC PDEs
GTP
GMP
+
RELAJACION DE
PKG MUSCULO LISO

cGMP

PKG cGMP PKG cGMP

Sube en respuesta a Oxido Nitrico Guanilato ciclasa

Baja en respuesta a luz Fosfodiesterasa Transducina

cGMP
Activa Proteina Quinasa G = PKG

Tema 29
38
 Las mismas seales y receptores distintas respuestas segn la clula
GPCR Adenilato ciclasa cAMP Activacion PKA glucogenolisis en HIGADO

apertura canal inico impulso nervioso en EPITELIO OLFATIVO

RESPUESTAS INDUCIDAS POR HORMONAS MEDIADAS POR AMPc

Tejido Hormona Respuesta

Higado Adrenalina, Glucagn Glucogenolisis

Msculo Adrenalina Glucogenolisis
Adiposo ACTH, Adrenalina Lipolisis lo
rse
Ovario LH Secrecin de progesterona
n d
Tiroides TSH Secrecin de hormona tiroidea pre
Corteza suprarenal ACTH Secrecin de cortisol u ea
q
Rin Vasopresina Reabsorcin de agua hay
No
RESPUESTAS A HORMONAS MEDIADAS POR IP3/DAG

Tejido Hormona Respuesta

Higado Vasopresina Glucogenolisis

Pncreas Acetilcolina Secrecin de amilasa
Msculo liso Acetilcolina Contraccin
Plaquetas Trombina Agregacin
Mastocitos (unin de antgeno) Secrecin de histamina

Hay diferencias en los niveles de protenas sealizadoras

intermediarias y/o distintas isoformas segn el tejido.
Tema 29
39