TEMA 4: TRANSCRIPCIN Y TRADUCCIN.

INTERACCIONES RELEVANTES

TRANSCRIPCIN

Sntesis de ARN sobre una sola cadena de ADN molde. El ARN es

complementario a la cadena molde y equivalente a la codificante. El
proceso se produce por la enzima ARN polimerasa de forma
unidireccional de 5 a 3, (proximal distal).

Comienza cuando la RNA polimerasa se une a una regin especial del

DNA llamada promotor, en el inicio del gen. El promotor rodea al
primer par de bases que se transcriben, (punto de inicio). A partir de
ah, la polimerasa se desplaza a lo largo de la cadena molde hasta que
alcanza una secuencia terminadora. Esto define una unidad de
transcripcin, (desde el promotor hasta el terminador).

Unidad de transcripcin: secuencia de DNA que se transcribe a un

nico ARN, empezando por el promotor y finalizando en el
terminador.

Las secuencias antes del punto de inicio se describen como aguas arriba y las de despus aguas abajo. Las secuencias
se transcriben de izquierda (aguas arriba) a derecha (aguas abajo), es decir, que el RNA se transcribe de 5 a 3.

FASES DE LA TRANSCRIPCIN

1. RECONOCIMIENTO PROMOTOR: fase de regulacin, (que empiece o no la

transcripcin). Se une la polimerasa al DNA formando el complejo
cerrado, (ARN pol abraza al DNA) y el complejo abierto, (DNA
parcialmente desnaturalizado, burbuja de transcripcin).
2. INICIACIN: sntesis de los primeros enlaces de nucletidos en el RNA. La
polimerasa permanece en el promotor mientras los sintetiza, (9). La fase
se prolonga por los episodios abortivos, en los cuales la enzima forma
transcritos cortos, los libera y despus reinicia la sntesis de RNA. Termina
cuando la polimerasa logra extender la cadena y liberar el promotor.
3. ELONGACIN: formacin de la cadena. La enzima se desplaza y va
desenrollando la hlice de DNA, (burbuja). Los nucletidos son agregados
de forma homloga al extremo 3 de la cadena creciente de RNA
formando un hbrido DNA-RNA.
4. TERMINACIN: Reconocimiento del punto que determina el final de la
adicin de ms bases. Cuando se agrega la ltima, la burbuja se colapsa y
el hbrido se disocia. El DNA adquiere de nuevo su estado de hlice y el
RNA y la enzima son liberados.

La transcripcin ocurre por el apareamiento de bases complementarias

entre el DNA desenrollado transitoriamente y el RNA dentro de una
burbuja de transcripcin que est rodeada por la polimerasa ya que se
crea cuando sta se une al promotor.

La polimerasa es un complejo enzimtico grande y organizado, el sitio

cataltico rodea a la cadena molde.

RNA POLIMERASA EN EUCARIOTAS: 3 tipos de enzimas con 12 subunidades distintas, (algunas comunes y otras no).

1. Polimerasa I: sintetiza RNAr en el nuclolo. Es la que tiene mayor actividad.

2. Polimerasa II: sintetiza RNAhn, (heterogneo nuclear) en el nucleoplasma, que dar lugar al RNAm. Tiene 3
polipptidos mayores similares a los de E. coli 2, pero es ms compleja.
3. Polimerasa III: sintetiza RNAm pequeo en el nucleoplasma, (RNAt y otros).
Hay polimerasas ms simples en virus/fagos como en T7 que slo tiene un polipptido y es muy rpida.

RNA POLIMERASA DE E. COLI (BACTERIANA): Un tipo de RNA polimerasa se encarga de casi toda la sntesis de RNAm
y de toda la maduracin de RNAr y RNAt. Dicha polimerasa tiene 4 subunidades:

Subunidades y : forman el centro cataltico. Puede entrecruzarse con el molde de DNA, con el producto
de RNA y con los ribonucletidos de los sustratos. Peligro alto de mutar.
Subunidad : ensambla el centro de la enzima y mantiene la estructura, interviene en el reconocimiento del
promotor y en la interaccin de la RNA polimerasa con factores auxiliares.
Subunidad : interviene en el reconocimiento del promotor especficamente, slo aparece en la iniciacin
para reconocer el DNA, se separa del complejo en la elongacin.

La capacidad de catalizar la sntesis de RNA define el componente mnimo (ncleo) de la polimerasa: 2. La

holoenzima es el complejo competente para la iniciacin: 2.

FACTORES DE TRANSCRIPCIN: MOTIVOS DE UNIN AL DNA

MOTIVO: segmento de protenas, (dominios), con estructura secundaria caracterstica, que interaccionan con el DNA.
Regin corta con una estructura secundaria particular, normalmente hlices .

HTH O HLICE-GIRO-HLICE: formado por dos segmentos peptdicos en -hlice,

rgidos, separados por una secuencia de aas flexibles que permite que las dos hlices se
aproximen entre s. Tienen un ngulo caracterstico y est presente en reguladores
procariticos y algunos eucariticos. Una hlice reacciona con el ADN hlice de
reconocimiento, la otra estabiliza la interaccin.

HOMEODOMINIO: genes hometicos, caractersticos del desarrollo animal.

Ampliacin del motivo HTH repetidamente en distintas protenas. Tiene 3 hlices, la 3
se une al DNA y las hlices 1 y 2 por fuera de la doble hlice.

DEDOS DE ZINC: Serie de aas que se unen a un ion de zinc formando un dominio independiente en la protena. Esta
unin obliga a un plegamiento de la cadena peptdica de forma que el motivo tiene una
conformacin alargada. Tipos:

1. Cys2-His2: residuos de cistena e histidina. Elemento estructural de unos 30 aas

de los cuales 2 Cys y 2 His aparecen en posiciones constantes. La secuencia
consenso es una secuencia ideal que representa los aas con mayor frecuencia
en cada posicin de un fragmento de DNA o una protena.
2. Cys2-Cys2: receptores de esteroides, (glucocorticoides). Sin histidina, forman dmeros.
Los residuos del primer dedo determinan a qu secuencia de DNA se unen y residuos en
el segundo dedo controlan el espacio entre las secuencias.

CREMALLERAS DE LEUCINA: secuencia de aas con un residuo de leucina en cada

sptima posicin. Tpicas en eucariotas. Posee interacciones entre los monmeros y los
aas bsicos interaccionan con el DNA. Son motivos de homo y hetero-dimerizacin.
Permite mantener las hlices juntas, une los monmeros y contina con la regin que
mantiene los contactos con el DNA.

HLH O HLICE-BUCLE-HLICE: motivos de homo y hetero-dimerizacin. El motivo permite que las protenas dimericen,
y una regin bsica cercana contacte con el DNA. Diferentes tipos de heterodmeros tienen diferente afinidad por
sitios de unin en el DNA y efectos muy distintos, (activan o reprimen), sobre la transcripcin.

bHLH: regiones bsicas que interaccionan con el DNA.

HLH: una de las unidades no tiene regiones bsicas por lo que no interaccionan con el DNA.
ANLISIS DE INTERACCIONES ADN-PROTENAS

RETARDO EN GEL O CAMBIO DE BANDA: Se detectan complejos DNA-protena. En un gel de electroforesis se detecta
porque las protenas retrasan la movilidad del DNA, con lo que la banda se retrasa. Se necesita un fragmento de ADN
definido obtenido por PCR.

Se usan geles no desnaturalizantes o nativos. En la prctica lo habitual es que parte de la banda se retrase y en principio
no hace falta marcar el DNA, pero hay que poner suficiente para verlo a simple vista, (cuando hay muy poca protena
se aade radiactividad). Con esta tcnica no podemos identificar secuencias para las que son afines las protenas, slo
podemos ver que se unen o no protenas, (regin promotora de nblA, sitios de unin determinados).

FOOTPRINTING: estrategias experimentales para mapear interacciones con protenas. Se usan para mapear el sitio
de unin a la protena. Si se tiene una protena unida al ADN y se ataca a ste con endonucleasas, stas no cortan el
fragmento protegido por la protena y puede ser detectado. Las estrategias inversas modifican la regin de inters con
lo que ahora la protena no puede unirse.

1. Estrategias de proteccin frente a digestin o modificacin: localizacin precisa del sitio de unin de una
protena a un fragmento de DNA. Requiere geles de secuenciacin y marcaje de DNA. Se usa DNA bicatenario
marcado en un extremo. Se intenta introducir un corte en cada cadena. Permite observar fragmentos
marcados con distintos tamaos. Se hace lo mismo en presencia de la protena y se vuelve a digerir con
nucleasas, (DNAasaI), donde se encuentra la protena, la endonucleasa no puede cortar.
a. Proteccin por NFAT: factores de la transcripcin.
2. Estrategias inversas: la modificacin interfiere con la interaccin: Los puntos en los que la ARN polimerasa
contacta con el promotor se pueden identificar con esta tcnica. Permiten la rotura en el enlace
correspondiente en la cadena polinucleotdica. El sitio de rotura se puede identificar de forma similar a la
anterior. La enzima protege al DNA contra el agente qumico. Se puede usar dimetilsulfato para modificar las
guaninas y generar menos bandas.

RECONOCIMIENTO DEL PROMOTOR EN BACTERIAS

Un promotor es una secuencia de DNA cuya funcin es ser reconocida por ciertas
protenas. Su secuencia difiere de otras del ADN cuyo nico papel es ser transcritas o
traducidas. La informacin para su funcin la determina la secuencia de DNA, su
estructura es la seal.

Slo la RNA pol puede iniciar la transcripcin y no sera posible sin el factor ; la RNA
pol puede separarse en dos, la enzima central que cataliza la transcripcin y el factor
que garantiza la unin estable y permanente de la RNA pol y el DNA.

La enzima central tiene afinidad general por DNA, no distingue entre promotores y
otras secuencias, generando sitios de unin dbil aleatorios. Sin embargo, el factor
introduce un cambio importante en la afinidad de la RNA pol por el DNA y le da el
poder de reconocer los promotores, sitios de unin especficos.

La iniciacin requiere una fuerte unin slo con los promotores, mientras que la elongacin requiere una asociacin
fuerte con todas las secuencias que la enzima encuentre durante la transcripcin. Este problema viene resuelto por
una asociacin reversible entre el factor y la enzima central, ya que cuando el factor se hace innecesario, es
liberado de la enzima central, (este factor ser reciclado por varias enzimas centrales distintas).

PROMOTOR DE E. COLI

Todos los promotores deben tener presente una secuencia esencial de nucletidos que constituyan una seal
conservada y reconocible para la polimerasa. Estos puntos reconocibles en el DNA pueden definirse como una
secuencia idealizada que representa la base que est presente con mayor frecuencia en cada posicin. Es lo que se
llama secuencia consenso.

La polimerasa se une principalmente a una cara del ADN: cadena codificante, por lo que slo una cara del promotor
contiene los puntos de contacto para la polimerasa. En los promotores bacterianos hay 4 elementos conservados:
 1. SITIO DE INICIACIN: generalmente una purina. Es frecuente que sea la base central de la caja CAT/CGT. Su
conservacin no es tan representativa como para considerarlo una seal obligatoria.
2. SECUENCIA -10: aguas arriba del punto de inicio hay una regin localizable, cuya secuencia consenso es
TATAAT, (caja TATA). Mayora de contactos de la polimerasa. Sus mutaciones bajan la eficiencia de la
polimerasa.
Implicada en la formacin del complejo abierto, (cuando se desnaturaliza una regin del DNA dentro de la
secuencia a la que se ha unido la enzima).
3. SECUENCIA -35: hexmero aguas arriba del punto de inicio. Su secuencia consenso es TTGACA, (caja GACA).
Implicada en la formacin del complejo cerrado que implica que el DNA sigua siendo dplex. Mayora de
contactos de la polimerasa. Sus mutaciones bajan la eficiencia de la polimerasa.
4. SEPARACIN ENTRE -10 Y -35: La secuencia en s no es importante, la distancia es crucial para que los dos
sitios conserven la separacin adecuada para la geometra de la RNA pol.

INTERACCIONES PROMOTOR-ARN POLIMERASA

MOLECULARES: proteccin y modificacin, (footprinting).

GENTICAS: mutaciones que afectan a la actividad promotora disminuyendo la frecuencia de iniciacin. Hace
que la funcin se produzca de forma distinta. Las supresiones se producen cuando hay una segunda mutacin en otro
componente restableciendo el fenotipo silvestre, (intragnicas o intergnicas).

Existen sitios protegidos por la

polimerasa pues hay regiones que
no son atacadas porque estn
protegidas, ms en la cadena
codificante donde hay dos bloques
de proteccin.

El inicio de la transcripcin es muy

dependiente del grado de
superenrollamiento del DNA.
Enrollamiento y desenrollamiento
ocurren de forma simultnea a
medida que la polimerasa
transcribe el DNA.

RELACIN ESTRUCTURA/FUNCIN EN : mutaciones y supresiones identifican zonas de interaccin. La supresin

evidencia la interaccin. Las mutaciones supresoras nos indican los sitios de contacto. contacta con el promotor
porque las mutaciones en suprimen mutaciones en las secuencias consenso.

FACTORES : E. coli tiene numerosos factores sigma, cada uno de los cuales provoca que la RNA pol inicie en un
conjunto de promotores definido por secuencias especficas -35 y -10. Usa los factores sigma alternativos para
responder a cambios ambientales generales. En condiciones normales el factor que se expresa es 70 y los
alternativos son activados en respuesta a cambios ambientales. Casi todos los factores pertenecen a la misma familia
de protenas y funcionan de la misma forma general.

REGULN: conjunto de operones con regulacin comn. Se asocian en relacin con situaciones ambientales, estrs,
choque trmico, etc y se produce la sntesis de nuevas protenas.
FACTORES : CONTROL TEMPORAL Y ESPACIAL DE LA EXPRESIN GNICA

ESPORULACIN EN BACILLUS SUBTILIS: La esporulacin implica la diferencia de una bacteria vegetativa en una
clula madre que lisa, y una espora que se libera. Es un proceso de minidesarrollo por expresin gnica
programada en el tiempo. Tiene ms factores y la esporulacin es un ejemplo de cambio en estos factores.

El ADN se replica, se segrega un genoma hacia un extremo de la clula y es rodeado por la capa de la espora. El
control gnico est dirigido por distintos que regulan distintos operones. La expresin gnica en el tiempo est
controlada por . Hay genes de esporulacin tempranos y tardos, programacin en el tiempo y diferenciacin en el
espacio; cambiando se producen cambios en el tiempo y el espacio.

hay regiones del fago reconocidas por el factor de la bacteria. Uno de los genes del fago codifica el del fago y
as puede reconocer genes de la infeccin. Luego por otro factor se desarrollan los genes del ciclo del fago.

INICIACIN EN EUCARIOTAS

Para que empiece la transcripcin se necesita la RNA polimerasa y factores de transcripcin, que son aquellas
protenas que no forman parte de la polimerasa y son necesarias en el inicio de la transcripcin.

El inicio en un promotor eucariota necesita un gran nmero de factores auxiliares para reconocer el punto de inicio
pues la RNA pol no reconoce los promotores, sino que se une cerca del punto de inicio, pero no hace contacto
directo con el promotor.

Son los factores auxiliares los que reconocen las secuencias promotoras y los que sirven para unirse a la polimerasa y
posicionarla correctamente en el punto de inicio.

Tres ARN polimerasas:

o ARN pol I: transcribe ARNr.
o ARN pol II: transcribe ARNm.
o ARN pol III: transcribe ARNt y ARNsn (nuclear pequeo).

RNA POLIMERASA I

RNA pol I est en el nuclolo y transcribe genes que codifican ARNr. Es la que ms actividad tiene. Transcribe a partir
de un solo tipo de promotor que consta de dos
regiones separadas:

NCLEO DEL PROMOTOR: rodea al punto de

inicio para que inicie la transcripcin. Es rico
en G-C excepto por un nico elemento
conservado, una secuencia corta rica en A-T,
que es la que rodea el punto de inicio.
UPE: elemento de control aguas arriba.
Aumenta la transcripcin.

Esta polimerasa requiere dos tipos de factores

auxiliares determinados:

1. UBF: afinidad por UPE. La unin de la protena a la regin UPE favorece la unin de otras protenas a la
regin posterior. Tiene funcin de reclutamiento, primero atrae a SL1 y segundo a la polimerasa.
2. SL1: unin posterior al ncleo de la polimerasa. Por s mismo no tiene especificidad por el promotor, pero
una vez que se ha unido UBF, el SL1 consta de 4 protenas. Una de ellas se une a la caja TATA. Es un factor de
posicionamiento.

Cuando los dos factores se han unido, la polimerasa puede unirse al ncleo del promotor para iniciar la
transcripcin, formando una estructura muy tupida.
RNA POLIMERASA III

Tiene 3 tipos de promotores. El tipo 1 y 2 son promotores internos, de

control interno, ICR. Se encuentran aguas abajo del inicio de la
transcripcin. Tienen dos tipos de elementos,
dos secuencias cortas se encuentran
separadas por una secuencia variable:

A y C, tipo I.
A y B, tipo II. Si las secuencias estn muy
juntas se anula la funcin.
Promotores tpicos con 3 elementos, tipo III:
o ARNsn
o TFIIIA y TFIIIC: factores de ensamblaje, permiten la unin de TBP cerca del inicio.
o TFIIIB: factor de posicionamiento, permite la unin de la RNApolIII en el sitio de
inicio.

RNA POLIMERASA II

Tiene muchos promotores diferentes, para la organizacin general de un promotor

se define un promotor genrico, que ser la secuencia ms corta posible en la cual
la ARN pol II pueda iniciar la transcripcin.

Ese promotor genrico como mnimo debe tener una caja TATA y un sitio de
iniciacin Pirimidina-A-Pirimidina, donde A es el sitio +1. Sus factores de
transcripcin son:

1. Generales: aparato basal de transcripcin, se encuentran en casi todos los

promotores.
2. Especficos: de un tipo celular concreto, los ms abundantes e importantes
en eucariotas superiores.
3. Inducibles: aparecen en respuesta a determinadas seales ambientales.

El complejo de iniciacin se une a los promotores de ARN pol II en una secuencia

ordenada de asociacin de los factores de transcripcin:

1. Unin de TFIID: interacta con la caja TATA.

2. Otros factores se unen en un orden determinado.
3. Unin de la RNA pol II.
4. Algunos factores se unen despus.

FORMACIN DEL COMPLEJO DE INICIACIN Y TBP

El primer paso es la unin del factor TFIID a la caja TATA. TFIID tiene dos componentes, TBP que reconoce a TATA y
TAFs que son factores asociados dependientes del promotor.

TBP es un factor universal en eucariotas y comn a los tres tipos de iniciacin. Se une al DNA en la secuencia TATA
del surco menor en forma de silla de montar e induce una curvatura en el ADN de 80, afectando las interacciones
de otras protenas.

LIBERACIND E PROMOTORES TIPO II: requiere fosforilacin del extremo carboxi-terminal de la ARN pol II, (CTD). Se
fosforila la subunidad mayor de la polimerasa para que pueda empezar a trabajar.
TERMINACIN DE LA TRANSCRIPCIN EN BACTERIAS

Cuando la polimerasa encuentra una secuencia terminadora deja de

agregar nucletidos a la cadena creciente de RNA, libera el producto
terminado y se disocia de la molcula de DNA. La terminacin requiere
que los puentes de H que mantienen unido al hbrido se rompan y
adems se requiere tambin la adicin de protenas para interactuar
con la enzima central. La secuencia terminadora 3 SIEMPRE se
transcribe.

Se forman estructuras de horquilla en el ARN, importantes para la

terminacin pues interactan con la polimerasa. Hay cierto paralelismo
con la iniciacin pues las secuencias estn en cis, los puentes de H se
rompen y la polimerasa interacciona con el hbrido.

TERMINADORES EN E. COLI

Se han clasificado segn el requerimiento de factores adicionales por parte de la ARN polimerasa para terminar in
vitro.

- TERMINADORES INTRNSECOS: la pol puede terminar en sitios especficos en ausencia de

cualquier otro factor. Son los ms abundantes. Hay terminadores ms eficientes que otros.
Incluyen regiones palindrmicas. Tienen caractersticas estructurales, necesarias para la
terminacin:
o Horquilla en la estructura secundaria, rica en pares GC. Hace ms estable la estructura.
o Sucesin de residuos de U al final, apareamiento dbil ARN-DNA.
o Terminador: AAA en el ADN y UUU en el ARN.
- TERMINADOR DEPENDIENTE DE RHO: necesitan de la adicin de un factor. Hay mutaciones que demuestran
que el factor est implicado en la terminacin in vivo. Hay pocos terminadores dependientes de rho en E.
coli, pero s en fagos.
o Rho: protena esencial, implicada en la terminacin de transcritos.
o Secuencia rica en C y pobre en G: sitio rut.

MODELO DE ACCIN DE RHO

El factor Rho persigue a la pol a lo largo

del ARN y provoca la terminacin cuando
alcanza a la enzima haciendo una pausa en
un terminador dependiente de rho. Rho
desenrolla el hbrido RNA-DNA en la
burbuja de transcripcin. Se obtiene una
liberacin de ARN pol, rho y el ARN
transcrito.

El ARN de procariotas es policistrnico, se

transcribe y se traduce a la vez, por tanto,
hay ribosomas en el ARNm y rho no puede
funcionar mientras haya ribosomas, si no
hay ribosomas, rho llega al terminador y
acaba la transcripcin.

Las mutaciones tienen polaridad, sin funcin de aguas abajo, hay orientacin. Una mutacin en un codn de
terminacin har que se traduzca una protena mutante y el resto, aguas abajo, no se traducir.

Una mutacin sin sentido libera a los ribosomas, y entonces rho es libre de unirse o moverse por el ARNm,
capacitndolo para actuar sobre la ARN polimerasa en el terminador.
TERMINACIN DE LA TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTAS

En la terminacin se genera el extremo 3 de RNA naciente, (tanto en eucariotas

como en procariotas). En general la de eucariotas es la menos conocida. Los
terminadores estn mucho peor caracterizados y son ms complejos, presentan
caractersticas diferentes segn se trate de los tres tipos de RNA pol existentes.
Terminadores reconocibles:

1. ARN pol I: Secuencia de 18 pb en ARN reconocible por factor de

terminacin.
2. ARN pol III: Poli-U4 situada en una zona rica en GC.
3. ARN pol II: El extremo 3 se genera por corte y poliadenilacin.

TRADUCCIN

Sntesis de las protenas mediante la unin de aas segn el orden establecido por la secuencia de nucletidos del
ARNm y el cdigo gentico. Los codones del RNAm son ledos por los anticodones de los RNAt, (molculas
adaptadoras que portan aas gracias al ATP especficos para esos codones y hay una sintetasa para cada aa). Estos aas
se aaden a una cadena de protena en crecimiento, formndose los enlaces peptdicos en el interior del ribosoma.

RIBOSOMAS

Componentes esenciales que poseen diversos centros activos, construido a partir de protenas que se asocian con
una regin del ARNr. Ninguna de las actividades se puede reproducir por protenas aisladas o grupos de protenas,
slo funcionan en el contexto del ribosoma. Son:

Localizacin fsica de componentes: anlisis estructural.

Protenas y zonas del ARNr con funciones concretas: anlisis mutacional.

ESTRUCTURA RIBOSMICA: todos los ribosomas de una clula son idnticos. Constan de dos subunidades, cada una
tiene un ARNr principal y un nmero de protenas pequeas. El ribosoma bacteriano es 70S (50-30) y el eucariota es
80S, (60-40). Se ha averiguado su estructura por estudios con inhibidores, (antibiticos).

El ribosoma tiene 3 lugares de unin a ARN:

1. LUGAR P: unin al peptidil ARNt que acoge a la molcula de ARNt unido a la cadena
polipeptdica en crecimiento.
2. LUGAR A: acoge a la molcula de ARNt entrante cargada con el aa.
3. ocupado transitoriamente por ARNt antes de abandonar el ribosoma.

FUNCIN RIBOSMICA: fases de la traduccin.

1. Iniciacin: incorporacin del primer aminoacil-ARNt. La subunidad 30s

colocada sobre el punto de unin del ARNm se une a la subunidad 50s y a esto se
le une el aminoacil-ARNt. El primer aminoacil-ARNt entra en el sitio P, el resto
entra en el sitio A.
2. Elongacin: sntesis de uniones peptdicas. El ribosoma se mueve a lo largo
del ARNm y la cadena polipeptdica se extiende mediante transferencias desde el
peptidil-ARNt al aminoacil-ARNt.
3. Terminacin: liberacin del pptido. La cadena polipeptdica es liberada del
ARNt y el ribosoma se disocia del ARNm. Ocurre porque hay codones de STOP
para los que no existe un anticodn o RNAt complementario.

INICIACIN DE LA TRADUCCIN: necesita subunidades ribosmicas libres,

(factores de iniciacin). Cuando los ribosomas son liberados se disocian. Los
factores de iniciacin estn presentes solamente en las subunidades 30s
disociadas. Cuando las subunidades se reasocian para proporcionar un ribosoma
funcional en la iniciacin, liberan los factores.
 FACTORES DE INICIACIN (IF): solo en la subunidad 30s. Se liberan cuando 30s se asocia con la
subunidad 50s. Relacin con la formacin del complejo de iniciacin. Las bacterias usan 3
factores:

IF-3: subunidades 30s se unan de forma especfica a los puntos de iniciacin en el ARNm. Es
necesario para estabilizar las subunidades 30s libres.
IF-2: se une al ARNt de iniciacin y controla su entrada en el ribosoma.
IF-1: se une a las subunidades 30s slo como parte del complejo de iniciacin completo.

IF + 30S Buscan ARNm Entra el RNAt con el codn complementario Se pierden los IF
Ensamblaje

RECONOCIMIENTO EN PROCARIOTAS: La iniciacin ocurre en una secuencia especial del ARNm, es el sitio de unin
al ribosoma. Es el lugar donde las subunidades se asocian sobre el ARNm para formar un ribosoma intacto.

La subunidad 30s protege unas 30 bases coincidentes con la secuencia aguas abajo de unin al ribosoma SHINE-
DALGARNO, (complementarias del extremo 3 del ARN 16s). Esta secuencia est ausente en eucariotas.

Los codones de iniciacin suelen ser AUG (ms frecuente), GUG y UUG.

INICIACIN EN OPERONES PROCARITICOS

1 promotor seguido de ORFs, (puede pasar que el ribosoma traduzca 2 protenas seguidas, para ello debe tener 2
secuencias shine-dalgarno). Cuando no es as se llama ACOPLAMIENTO TRADUCCIONAL, (la distancia es muy
pequea).

Cuando termina la sntesis de la primera protena, el ribosoma abandona el ARNm y se disocia, entonces se
ensambla un nuevo ribosoma en la siguiente regin codificadora y se traduce el siguiente cistrn, (fragmento de gen
funcional).

INICIACIN DE LA TRADUCCIN EN EUCARIOTAS

El codn de inicio siempre es AUG que codifica para metionina. Los ARNm se modifican en el extremo 5 con
caperuzas, (cap), metiladas que marcan el extremo 5. Los ribosomas reconocen el cap y recorren una corta distancia
hasta que encuentran el codn de inicio. La unin de 40s al ARNm requiere de varios IF, entre los que figuran
protenas que reconocen el cap.

No hay secuencia complementaria al ARNr 18s.

40s se une al ARNm por la caperuza del extremo 5 y busca la secuencia de iniciacin.
Se necesitan ms IF que en procariotas.
La Metionina inicial no se modifica.

ELONGACIN

O crecimiento de la cadena polipeptdica tiene lugar mediante la formacin de enlaces peptdicos entre los aas
sucesivos. El aminoacil-ARNt entra al lugar A del ribosoma, que ya tiene ocupado el sitio P por el peptidil-ARNt.
Cualquier aminoacil-ARNt salvo el iniciador, puede entrar en el sitio A, (entrada mediada por el factor de elongacin
EF-Tu). EF-Tu acompaa al aa-ARNt al sitio A, (sin l no entrara), y luego abandona el ribosoma, (hidrlisis).

El EF-Tu se asocia con el ribosoma slo en el proceso de entrada del aminoacil-RNAt y debe unirse primero a GTP
activndose y formando un complejo EF-Tu-GTP que es el que se unir al aminoacil-ARNt en el sitio A y el complejo
EF-Tu-GTP se liberar. El que se desplaza por la cadena es el RNAr.

FACTORES AUXILIARES DE LA ELONGACIN (EF): protenas importantes para asegurar que las
reacciones ocurran de forma especfica y en un orden. Tienen accin secuencial. En procariotas:

EF-Tu: entrada del aa-ARNt en A. (eEF-1 en eucariotas).

EF-Ts: regeneracin de EF-Tu. (eEF-1 en eucariotas).
EF-G: translocacin de A a P. (eEF-2 en eucariotas).
TRANSLOCACIN

Transferencia de la cadena polipeptdica del sitio P al sitio A; la formacin del enlace peptdico se debe a la reaccin
que ocurre entre el polipptido del peptidil-RNAt, que est en el sitio P, y el aa del aminoacil-RNAt que ocupa el sitio
A. Este paso se realiza gracias al EF-G que est activado por la hidrlisis de GTP y catalizado por la enzima peptidil-
transferasa.

El ribosoma avanza tres nucletidos a lo largo del ARNm. El resultado es expulsar al ARNt no cargado del lugar P, de
manera que pueda entrar un nuevo peptidil-ARNt. Proceso dependiente de GTP. El aa-RNAt va cambiando de sitio en
direccin A-P-E y las subunidades tambin se mueven.

MIMETISMO MOLECULAR: Similitud entre distintas molculas, como el aa-ARNt-EF-Tu-GTP

y el EF-G, compiten por el mismo sitio de unin. Cuando intenta entrar EF-G el anterior se
mueve de sitio, luego se va y vuelve a entrar el EF-Tu y as sucesivamente. El paso de una
fase a otra es por competencia. Los aa-ARNt van entrando y si no hay suficiente afinidad
salen del ribosoma.

La unin de los factores Tu y G se alternan segn los ribosomas aceptan un nuevo aa-ARNt,
forman uniones peptdicas y se translocan.

TERMINACIN

Existen 64 codones de los cuales 61 son asignados a aas y 3 son codones de terminacin: UAG, UAA y UGA. Los
codones de terminacin son reconocidos por factores de terminacin de protenas y no por molculas de aminoacil-
ARNt. El cdigo gentico es universal, redundante y degenerado.

Ninguno de los codones de terminacin est representado por ningn ARNt, son
reconocidos por los factores auxiliares de terminacin.

FACTORES DE TERMINACIN (RF): sus mutaciones reducen la eficacia de la

terminacin, (slo sufren puntuales).

1. RF-1 y RF-2 reconocen los codones de STOP, (sitio A) y activan la

hidrlisis del pptido. Aceptor H2O.
2. RF-3: libera RF-1 y RF-2 del sitio A.
3. RRF: factor de reciclaje ribosmico.
4. EF-G: tambin interviene en la elongacin.
5. IF-3: deja al ribosoma listo para un nuevo ciclo.
 MIMETISMO MOLECULAR: factores de elongacin, terminacin y reciclaje
mimetizan al complejo aa-ARNt-EF-Tu. El complejo del factor Tu, el factor de EF-
G y los factores de liberacin se pueden unir al mismo lugar del ribosoma.

Los errores ms importantes se dan en la iniciacin y la terminacin. Cuando hay

errores en aa-ARNt, es menos drstico porque se introduce en el sitio A un aa
similar.

ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL ARNr 16S: forma parte del sitio A.

1. ANLISIS MUTACIONAL CON INHIBIDORES: unidad 16s es esencial por participar en funciones concretas.
Tambin tiene actividad enzimtica. Relacionado con:
a. Asociacin de las subunidades.
b. Supresin de mutaciones de fin de mensaje, participa en el reconocimiento de codones de fin de
mensaje. (Cambia el ribosoma para que omita codones de STOP mutados).
c. Unin a ARNt y a factores de traduccin.
d. Complementariedad a ARNm (E. coli), secuencia Shine-Dalgarno, (qu regiones son importantes para
encontrar la secuencia).
e. Fidelidad, las mutaciones modifican la tasa de error disminuyndola.
f. Los contactos entre ARNrs se localizan en dos dominios del ARNr 16s y un dominio del ARNr 23s.
2. FIDELIDAD DE LA EXPRESIN GNICA: Se cometen ms errores en la traduccin que en la transcripcin. La
tasa de error tiene que ver con la velocidad del acontecimiento. Los cambios de aas tienen una tasa de error
de 10^-4, la mayora sin efecto fenotpico.