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Se han desarrollado diversos protocolos para la extraccin de ADN genmico, con un alto
grado de pureza. En general los protocolos consisten principalmente de dos pasos: lisis
celular y purificacin.
La lisis celular puede llevarse acabo por tres mtodos: fsicos, qumicos y enzimticos. Por
va fsica, uno puede romper la clula utilizando fuerza mecnica ( molienda con licuadora o
molino de perlas, por ejemplo) u ondas ultrasnicas. Por mtodos qumicos, se utilizan
usualmente soluciones detergentes con SDS (Dodecil Sulfato de Amonio), o CTAB (
Bromuro de Cetiltrimetilamonio). Algunas soluciones lticas tambin contienen agentes
quelantes como el EDTA que formando complejos con iones metlicos y as inhibir a las
DNasas. La lisis enzimtica puede acoplar la ruptura de la pared y/o membrana
celular(utilizando celulasas, fosfolipasas y lisozima) y la hidrlisis de protenas (endo y
exopeptidasas) para liberar a los cidos nuclicos. Para la purificacin se hace una extraccin
lq.-lq. con solventes orgnicos (fenol, cloroformo, alcohol isoamlico para precipitar
protenas) y la precipitacin del ADN con alcohol en alta presencia de sal. Los remanentes
celulares y algunas protenas se separan por Centrifugacin.
El ADN obtenido puede refrigerarse a 4 C por una o dos semanas, o congelarse a -20 C en
etanol al 70% v/v y conservarse por un largo periodo de tiempo (meses) o a -85 C para
conservarlo por aos. El ADN obtenido puede utilizarse para un sinfn de aplicaciones como
anlisis mdicos, filogenticos, edicin de genes, clonacin, secuenciacin, bsqueda de
enzimas, etc.
Objetivos
Resultados
*Nota: Debido a que nuestra muestra se cay, utilizamos los resultados del Equipo 1 para
este reporte.
Con las muestras de ADN, se realiz una Electroforesis en gel de Agarosa, para observar la
migracin del ADN. El gel se coloc en la caja de electroforesis () y se observ bandas
visibles de la muestra en el carril 2 y 6 como se muestra en la figura 1. Adicionalmente se
observaron, en el carril 3 y 6 unas bandas ms abajo (menor peso molecular) en el gel, las
cuales, corresponden a ARN, se puede mencionar que estas bandas se encuentran corridas.
Adems, como se muestra en la figura 1, en el carril 4 y 5 no se observa ninguna muestra.
Figura 1. Se pude observar en la figura el gel de agarosa con las diferentes muestras en cada carril
preparadas por diferentes equipos. El carril 1 se encuentra el marcador molecular, el carril 2 se
observa una banda, en el carril 3 se observa otra banda corrida, el 4 y 5 no se observa nada y en la 6
se observa una banda y un corrimiento.
Discusin
Para desnaturalizar y por tanto precipitar las protenas que pueden estar asociadas al ADN.
Despus de la adicin de un volumen de Fenol-Cloroforomo-Isoamlico , la muestra se agita
y se centrifuga; por densidad las protenas quedan en una pastilla en el fondo del tubo.
El ADN se precipit con la ayuda de EtOH y sal; el fundamento es que el EtOH rompe la
capa hdrica que tiene el ADN en solucin permitiendo la interaccin de los grupos fosfato
con los cationes de la sal, liberando as los puentes de hidrgeno de ADN-agua, y por tanto
el ADN precipita.
Si es menor que ocho significa un grado bajo de pureza, usualmente debido a contaminacin
por protenas. Si es cercana a 2 es ADN de alta pureza y se puede utilizar en PCR y
posteriormente en tcnicas de Ingeniera Gentica.
Referencias
Alberts B, Alberts B, Johnson A, Lewis J, et al.New York: Garland Science; 2002. Molecular Biology
of the Cell 4ta Ed.