Tecnicas de Separacion Cromatografica

Caracterizacin de Materiales y Defectos
Tcnicas de Separacin Cromatogrfica
TCNICAS DE SEPARACIN. CROMATOGRAFA
1.- Introduccin
Cromatografa y mtodos de separacin clsicos. Separacin de

componentes de una muestra. No son tcnicas de caracterizacin
propiamente dicha
Las propiedades de los materiales dependen de los componentes y de la

proporcin existente entre ellos
No dan informacin de la naturaleza de los componentes, necesitan otros

mtodos de anlisis.
1.1.- Cromatografa y ciencia de materiales
Separacin de compuestos relacionados con la sntesis de materiales

Evaluacin de la actividad de materiales catalizadores y soportes slidos
en sntesis orgnica.
Desarrollo de nuevos materiales empleados en cromatografa
Seguimiento de una sntesis
Fco. Javier Gonzlez Benito

2.- Lugar que ocupa la cromatografa en la caracterizacin de materiales
Muestra
NO SI
Hay que solubilizarla?
NO
Es soluble? Digestin
NO Descompone NO Forma NO Otros
Es voltil?
trmicamente? plasma? mtodos SI
SI
SI SI SI
SI
GAS DISOLUCIN
Hay que separar SI SI Hay que separar

componentes?
Cromatografa componentes?
NO NO
Tcnicas y Mtodos de anlisis

3.- La cromatografa. Conceptos y definiciones
Cromatografa: mtodo fsico de separacin

Proceso cromatogrfico
Fase estacionaria (slido, gel o lquido). Lecho cromatogrfico o sorbente
Fase ligada
Fase inmovilizada
Fase mvil (gas portador, eluyente)
Cromatografa lquida
Cormatografa de gases
Cromatografa con fluido supercrtico
Eluir
Efluente
Muestra
Componentes
Zona o banda
Cromatograma
Cromatgrafo

3.1.- Mecanismos de separacin
a) Separacin por adsorcin (cromatografa de adsorcin)
Diferente afinidad de los componentes de la muestra sobre la superficie

de un slido activo (componentes con polaridad baja o media)
b) Separacin por reparto (cromatografa de reparto)
Diferente solublidad en fases estacionaria y mvil (Componentes con

polaridad media o alta)
[A] Fase mvil

Coeficiente de Reparto = K d =
[A] Fase Estacionaria

c) Separacin por tamao molecular (Cromatografa de permeacin de gel,

de tamiz molecular o de exclusin por tamaos).
Parmetros de columna
- Intervalo de trabajo: intervalo de M que pueden ser separados
- Lmite de exclusin: M mnimo a partir del cual las macromolculas no
experimentan retencin.
Molculas pequeas
Molculas grandes Las molculas pequeas penetran en los poros

de las partculas de gel, por lo que necesitan
ms tiempo para salir al final de la columna. Las
molculas grandes, en cambio, al no penetrar
Flujo del disolvente
Partcula polimrica (gel)

con poros en las partculas de gel se mueven con el
disolvente a una velocidad mayor de elucin y
Pared de columna salen antes de la columna. Por tanto, a mayor
cromatogrfica
masa molecular menor tiempo de elucin. Este
mtodo permite separar por tamaos
moleculares siendo posible obtener incluso
Disolvente
distribuciones de masas moleculares a distintos
tiempos de elucin.

d) Separacin por Intercambio inico

La separacin se basa principalmente en la diferente afinidad para el
intercambio de iones de los componentes de la muestra.
+ + + - Especies positivas
- +
- + + Especies negativas
- Las especies cargadas negativamente se unen a la
+
+ - matriz slida cargada positivamente y son

Partculas slidas (matriz)
retenidas, mientras que las especies positivas son
Flujo del disolvente
cargada positivamente
- - rechazadas. De esta manera en funcin de la
+ carga las especies se eluyen a distintos tiempos
+ + - Pared de columna dando lugar a la correspondiente separacin.
- - - cromatogrfica
- + + La elucin de las especies retenidas se consigue

+
cambiando el pH del disolvente hasta igualarlo a su

- Disolvente punto isoelctrico o hasta invertir su carga neta.
- - +
+
+ -
+ -
-
- + +
Una separacin puede estar basada en la conjuncin de diversos

mecanismos
3.2.- Mtodos de anlisis cromatogrfico
a) Anlisis por desarrollo (cromatografa en papel o capa fina)
b) Anlisis por elucin (cromatografa de gases, cromatografa lquida)
c) Anlisis frontal
d) Anlisis por desplazamiento

ANLISIS POR DESARROLLO

Cromatografa en columna
Cromatografa plana
Fase mvil
Fase Mvil

Anlisis por elucin
Muestra Fase Mvil
Cromatograma
Sorbente
Volumen de fase mvil
Placa Porosa
Efluente
Anlisis frontal
Fase Mvil
Con la muestra A+B+C
Cromatograma
A+B+C
A
A+B +
A A B
+ +
A B C
Volumen de fase mvil

Placa Porosa
Efluente

3.3.- Clasificacin de acuerdo con la forma del lecho cromatogrfico
a) Cromatografa en columna
- Columna empaquetada
- Columna tubular abierta
b) Cromatografa plana (o de lecho abierto)
- Cromatografa en papel
- Cromatografa en capa fina (TLC)

3.4.- Clasificacin de acuerdo con el estado fsico de la fase mvil
a) Tcnicas cromatogrficas
- GLC
- GSC
- LLC
- LSC
b) Cromatografa de gases (siempre en columna)
c) Cromatografa Lquida (en columna o sobre plano)

- Cromatografa Lquida de Alta Eficacia o de Alta Presin, HPLC
d) Cromatografa con fluido supercrtico

3.5.- Tcnicas especiales
a) Cromatografa con fase invertida
b) Cromatografa con fase normal
c) Anlisis isocrtico (composicin F. mvil constante)
d) Elucin con gradiente (Composicin F. mvil cambia de forma

continua)
e) Elucin en etapas o escalonada (Composicin F. mvil cambia de

forma escalonada)
f) Cromatografa bidimensional (etapas adicionales de separacin)

3.6.- Parmetros bsicos en cromatografa
a) Retencin = capacidad real de la fase estacionaria para retardar la

salida de un componente.
- si caudal constante v t
- tM = tiempo muerto
- tR = tiempo de retencin
- tR = tiempo de retencin corregido = tR - tM
Figura tomada de:
-ALBELLA, J.M.; CINTAS, A.M.; MIRANDA,
T. y SERRATOSA, J.M.: "Introduccin a la
ciencia de materiales". C.S.I.C., 1993.

b) Factor de capacidad (retencin de un compuesto con independencia del

caudal)
Figura tomada de:
t'R t R t M
K'= =
tM tM
c) Dispersin de bandas
Parmetros caractersticos
de un pico gaussiano

3.6.- Parmetros bsicos en cromatografa Figura tomada de:

d) Eficacia
- Nmero de platos tericos
2
tR
n=

2
tR
n = 16
Wb
2
tR
n = 5.545
W h Debe evitarse el ensanchamiento de
bandas. Dependen de caractersticas de
-Altura equivalente de un plato terico = L/n columna, velocidad de fase mvil, etc.
(Para comparar columnas de diferente
longitud)
e) Separacin y resolucin
t 'R 2
- Retencin relativa = Sistema cromatogrfico
t 'R1
2t
- Resolucin Rs = Eficacia de columna
Wb1 + Wb 2
Figura tomada de:


4.- Tcnicas cromatogrficas no instrumentales
4.1.- Cromatografa en columna
El gradiente de presin necesario para el

desplazamiento de la fase mvil a travs
de la fase estacionaria se origina por
gravedad.
Figura tomada de:


4.2.- Cromatografa en capa fina
La elucin se consigue por el movimiento capilar ascendente de la fase mvil
a) aplicaciones analticas
y y
Rf = Rx =
x x
Aplicacin Aplicacin
y
y x x
Sustancia patrn
Frente del disolvente Frente del disolvente
b) aplicaciones preparativas

5.- Mtodos instrumentales en cromatografa
5.1.- Cromatografa de gases (Gas-Lquido)
Distribucin de un componente entre una fase mvil

gaseosa y una lquida inmovilizada sobre la superficie
de un slido inerte.
Componentes bsicos
- Gas portador segn detector (He, Ar, N2, CO2, H2)

- Sistema de inyeccin de muestra
- Columnas
Control de caudal
Figura tomada de:

Medidor de caudal
5.- Tcnicas instrumentales en cromatografa
Mejora de un cromatograma por

programacin de temperatura en
columna
Figura tomada de:


Detectores
CARACTERSTICAS DEL DETECTOR IDEAL
Adecuada sensibilidad
Buena estabilidad y reproducibilidad
Una respuesta lineal para los componentes que se extienda a
varios rdenes de magnitud
Intervalo trmico de trabajo (25 400)C
Un tiempo de respuesta corto que lo haga independiente del
caudal
Alta fiabilidad y manejo sencillo
Respuesta semejante para todos los componentes
No destructivo

5.1.- Cromatografa de gases (Gas-

Lquido)
Detectores
DETECTOR DE IONIZACIN DE LLAMA
+
- Componente + H2/aire + encendido
elctrico iones + e-
Diferencia de potencial entre extremo de
-
quemador y electrodo colector (se mide la
corriente que pasa a su travs)
Efluente de
- Iones producidos n tomos de carbono la columna Aire
sensible a masa
- C-OH; -C=O; -X; -NH2 generan H2

pocos iones
- Insensible a: H2O; CO2; SO2 y NOx
-Detector de los ms utilizados para el

anlisis de compuestos orgnicos

Detectores
DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD TRMICA
- Cambios de conductividad trmica del gas portador por la presencia de analito.

- Sensor = hilo de Pt, Au W calentado (a potencia elctrica cte) cuya T depende
del gas circundante (su R cambia)
- Caractersticas:
* Simple
* Amplio rango dinmico lineal (~ 105)
* Respuesta universal (especies orgnicas e
inorgnicas)
* Carcter no destructivo
* Sensibilidad relativamente baja (~ 10-8 g de soluto/ml
de gas portador)

Detectores
DETECTOR TERMOINICO
- Detector selectivo de compuestos orgnicos con P y N.
- Efluente + H2 + llama gas caliente + bola de silicato de rubidio caliente

(a 180V respecto colector)
Iones Plasma (600 800C)

Detectores
DETECTOR DE CAPTURA DE ELECTRONES
- Detector selectivo de halgenos, perxidos, quinonas y grupos nitro.
- Efluente + emisor iones (gas portador) + rfaga de electrones
Corriente constante que vara en presencia de molculas capturadoras de e-
DETECTOR DE EMISIN ATMICA
plasma de He que atomiza y excita el efluente espectros de

emisin

Mtodos acoplados
- GC/Espectrometra de masas
- GC/espectroscopa IR
5.2.- Cromatografa de gases (Gas-Slido)
H2S; CS2; NOx; CO; CO2; gases nobles

(no se retienen en columnas Gas/Lquido)

5.- Tcnicas instrumentales en cromatografa
5.3.- Cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC)
- Alta sensibilidad
- Adaptacin a determinaciones cuantitativas
- Separacin de especies no voltiles
- Separacin de especies termolbiles

5.3.- Cromatografa de lquidos de alta resolucin
Instrumentacin para la cromatografa de lquidos
- Recipientes para la fase mvil y sistemas para el tratamiento de disolventes

(eliminacin de O2 y N2)
- Filtracin de disolventes
- Sistemas de bombeo
- Sistemas de inyeccin de muestra
- Columnas
- Precolumnas
-Termostatos
- Detectores: i) responden a propiedad de fase mvil; ii) responden a

propiedad del soluto.

5.3.- Cromatografa de lquidos de alta resolucin
Instrumentacin para la cromatografa de lquidos
Figura tomada de:


6.- Bibliografa
D.A. Skoog, J.J. Leary, Anlisis Instrumental, McGraw-Hill, Madrid (1996)

H.H. Willard, L.L. Merritt Jr.,J.A. Dean, F.A. Settle Jr., Mtodos Instrumentales de anlisis,
Grupo Editorial Iberoamericana S.A. de C.V., Mxico (1991).
TECHNIQUES in liquid chromatography Simpson, Colin F. John Wiley & Sons (1984).
Liquid chromatography column theory Scott, Raymond P.W. John Wiley & Sons (1992).
Chromatography of polymers : characterization by SEC and FFF American Chemical Society
(1993).
Handbook of size exclusion chromatography Marcel Dekker (1995).
Cromatografa de exclusin por tamaos [Vdeo] Prez Dorado, Angel, CEMAV, Universidad
Nacional de Educacin a Distancia (1997).
Manual de cromatografa Loro Ferrer, Juan Francisco Gobierno de Canarias, Direccin
General de Universidades e Investigacin (2001).
7.- Direcciones URL tiles
http://www.uib.es/depart/dqu/dquo/pau/Cromatograf%92a/chrom10/chrom/GC/concept/
main.htm
http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Gas.htm

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Tcnicas de Separacin Cromatogrfica

TCNICAS DE SEPARACIN. CROMATOGRAFA

Cromatografa y mtodos de separacin clsicos. Separacin de

Las propiedades de los materiales dependen de los componentes y de la

No dan informacin de la naturaleza de los componentes, necesitan otros

1.1.- Cromatografa y ciencia de materiales

Separacin de compuestos relacionados con la sntesis de materiales

Fco. Javier Gonzlez Benito

2.- Lugar que ocupa la cromatografa en la caracterizacin de materiales

Hay que separar SI SI Hay que separar

Tcnicas y Mtodos de anlisis

Fco. Javier Gonzlez Benito

3.- La cromatografa. Conceptos y definiciones

Cromatografa: mtodo fsico de separacin

Fco. Javier Gonzlez Benito

3.1.- Mecanismos de separacin

a) Separacin por adsorcin (cromatografa de adsorcin)

Diferente afinidad de los componentes de la muestra sobre la superficie

b) Separacin por reparto (cromatografa de reparto)

Diferente solublidad en fases estacionaria y mvil (Componentes con

[A] Fase mvil

Fco. Javier Gonzlez Benito

3.1.- Mecanismos de separacin

c) Separacin por tamao molecular (Cromatografa de permeacin de gel,

Molculas grandes Las molculas pequeas penetran en los poros

Partcula polimrica (gel)

Fco. Javier Gonzlez Benito

3.1.- Mecanismos de separacin

d) Separacin por Intercambio inico

+ - matriz slida cargada positivamente y son

- + + La elucin de las especies retenidas se consigue

cambiando el pH del disolvente hasta igualarlo a su

Una separacin puede estar basada en la conjuncin de diversos

3.2.- Mtodos de anlisis cromatogrfico

a) Anlisis por desarrollo (cromatografa en papel o capa fina)

b) Anlisis por elucin (cromatografa de gases, cromatografa lquida)

d) Anlisis por desplazamiento

Fco. Javier Gonzlez Benito

ANLISIS POR DESARROLLO

Fco. Javier Gonzlez Benito

Anlisis por elucin

Muestra Fase Mvil

Volumen de fase mvil

Volumen de fase mvil

Fco. Javier Gonzlez Benito

3.3.- Clasificacin de acuerdo con la forma del lecho cromatogrfico

b) Cromatografa plana (o de lecho abierto)

Fco. Javier Gonzlez Benito

3.4.- Clasificacin de acuerdo con el estado fsico de la fase mvil

b) Cromatografa de gases (siempre en columna)

c) Cromatografa Lquida (en columna o sobre plano)

d) Cromatografa con fluido supercrtico

Fco. Javier Gonzlez Benito

3.5.- Tcnicas especiales

a) Cromatografa con fase invertida

b) Cromatografa con fase normal

c) Anlisis isocrtico (composicin F. mvil constante)

d) Elucin con gradiente (Composicin F. mvil cambia de forma

e) Elucin en etapas o escalonada (Composicin F. mvil cambia de

f) Cromatografa bidimensional (etapas adicionales de separacin)

Fco. Javier Gonzlez Benito

3.6.- Parmetros bsicos en cromatografa

a) Retencin = capacidad real de la fase estacionaria para retardar la