Procesos Bioqumicos Involucrados en la Simbiosis entre leguminosas y Bacterias Fijadoras de

Nitrgeno

PROCESOS BIOQUIMICOS INVOLUCRADOS EN LA

SIMBIOSIS ENTRE LEGUMINOSAS Y BACTERIAS
FIJADORAS DE NITRGENO
RESUMEN
Los procesos bioqumicos de transformacin de la biomasa en energa son
aqullos que se llevan a cabo mediante diversos tipos de microorganismos, ya
sean contenidos en la biomasa original, ya sea aadidos durante el proceso.
Estos microorganismos producen la degradacin de las molculas complejas
constituyentes de la biomasa a compuestos ms simples, de alta densidad
energtica. Estos procedimientos se utilizan, fundamentalmente, para tratar
biomasa natural o residual de alto contenido en humedad que, si fuese tratada
por mtodos termoqumicos, dara unos rendimientos energticos
especialmente desfavorables, debido al alto calor de vaporizacin del agua.
Aunque la biomasa puede ser sometida a diversos procesos bioqumicos,
tambin denominados procesos de fermentacin, para su transformacin en
una gran variedad de productos, los procesos de fermentacin ms corrientes
para la obtencin de energa son la fermentacin alcohlica para producir
etanol (alcohol etlico) y la digestin anaerobia, para la produccin de metano.
La fijacin biolgica del nitrgeno atmosfrico, consistente en la reduccin de
N2 a NH4+ por la enzima nitrogenasa, es, despus de la fotosntesis, la ruta
metablica ms importante para el mantenimiento de la vida en la Biosfera.
Curiosamente, este proceso crucial slo puede ser llevado a cabo por unos
pocos grupos de seres vivos, todos ellos procariotas. Las bacterias fijadoras de
nitrgeno que se desarrollan de forma natural en el suelo, se conocen desde
hace ms de un siglo. Representan un biofertilizante ecolgico y se dividen en
dos grandes grupos: Las simbiticas, especficas de las leguminosas, como el
Rhizobium, y las libres, que viven en el suelo y no necesitan la planta para su
reproduccin, como el Azotobacter y el Azospirillum, entre los ms importantes
en agricultura.

PALABRAS CLAVE
Procesos Bioqumicos

Simbiosis

Leguminosas

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Nitrgeno

Bacterias Fijadoras De Nitrgeno

MARCO TERICO

Leguminosas.

Las leguminosas son una de las plantas esenciales para fijar ese nitrgeno
en el suelo, mediante sus races, gracias a unas bacterias beneficiosas
llamadas Rhizobium que se encuentran en ellas. stas bacterias
proporcionan a las plantas lo siguiente:

Acelera y potencia su crecimiento por la produccin de fitohormonas

Regenera el terreno de manera ecolgica y de forma gradual

Fertiliza los cultivos y aumenta su produccin

Facilita la absorcin de oligoelementos indispensables

En los climas ridos mejora las condiciones del suelo

Protege las races de hongos y bacterias patgenas

Las plantas germinan ms rpido y mejor

Bacteria fijadora de nitrgeno.

Las bacterias fijadoras de nitrgeno que se desarrollan de forma natural

en el suelo, se conocen desde hace ms de un siglo. Representan un
biofertilizante ecolgico y se dividen en dos grandes grupos: Las
simbiticas, especficas de las leguminosas, como el Rhizobium, y las
libres, que viven en el suelo y no necesitan la planta para su reproduccin,
como el Azotobacter y el Azospirillum, entre los ms importantes en
agricultura. El Azotobacter y el Azospirillum, en concentraciones
adecuadas, pueden sustituir al nitrgeno qumico (Urea, amonaco) sin
merma de la produccin y a menor coste. Otras ventajas comprobadas
del uso de estas bacterias como biofertilizante son: a) Producen
fitohormonas, como el cido indolactico y las citoquininas, capaces de
acelerar y potenciar el crecimiento de las plantas. b) Al permanecer vivas

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durante aos y reproducirse en el suelo, no slo no lo degradan sino que

contribuyen a su enriquecimiento en nitrgeno y a su regeneracin de
forma ecolgica y gradual, incluso en terrenos de alta concentracin
salina. c) Se ha comprobado que fertilizando los cultivos con estas
bacterias y con nitrgeno qumico en un porcentaje entre el 20 y 50% del
utilizado normalmente, se consigue un aumento de produccin sobre las
cosechas obtenidas nicamente con fertilizante qumico al 100%. Esto es
debido a que, al liberarse la bacteria de su funcin fijadora de nitrgeno,
produce ms factores de crecimiento vegetal, En cereales de secano, esto
puede suponer el ahorro del abonado de cobertera. d) Crea una barrera
protectora contra hongos y bacterias patgenas en la raz de la planta,
por lo que sta crece ms sana y fortalecida. e) Producen enzimas que
solubilizan los fosfatos y los hacen ms accesibles a la planta, as como
factores que facilitan la absorcin de oligoelementos. f) Se ha
demostrado que resisten mejor las condiciones de sequa y los climas
ridos ya que se forman alginatos en las races de las plantas. g) Como
consecuencia de todo lo anterior, es un mayor desarrollo de las races de
las plantas, con el consiguiente beneficio general para sta, as como el
peso de los frutos.
h) Tambin se ha comprobado un mayor ndice de germinacin de
semillas comparada con otros sistemas de abonado. i) Las nuevas estirpes
de Azotobacter y Azospirillum son capaces de fijar un 72,64% ms de
nitrgeno atmosfrico, que las estirpes originales. Hay pues un cmulo
de ventajas para el usuario, econmicas, ecolgicas, A corto, medio y
largo plazo en la progresiva sustitucin de la fertilizacin qumica por las
bacterias naturales, totalmente inofensivas para el medio y el ser
humano.

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Fijacin biolgica de nitrgeno

Figura 01. Fijacin Biolgica del Nitrgeno

La reduccin de nitrgeno a amonio llevada a cabo por bacterias de vida

libre o en simbiosis con algunas especies vegetales (leguminosas y
algunas leosas no leguminosas), se conoce como fijacin biolgica de
nitrgeno (FBN). Los organismos capaces de fijar nitrgeno se conocen
como diaztrofos.

Esta propiedad est restringida slo a procariotas y se encuentra muy

repartida entre los diferentes grupos de bacterias y algunas
arqueobacterias. Es un proceso que consume mucha energa que ocurre
con la mediacin de la enzima nitrogenasa segn la siguiente
ecuacin:++321

2 +16+8 +8+ 23 +1616

El amonio, primer compuesto estable del proceso, es asimilado por los

fijadores libres o transferido al correspondiente hospedador en el caso
de la asociacin con plantas. Aunque el amonaco (NH3) es el producto
directo de esta reaccin, se ioniza rpidamente a amonio (NH4). En

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diaztrofos de vida libre, el amonio de la nitrogenasa es asimilada en

glutamato a travs del ciclo de sntesis glutamina sintetasa/glutamato.

La nitrogenasa, formada por dos metaloprotenas, ferroprotena y

molibdoferroprotena, est bastante bien conservada en todos los
microorganismos fijadores. Presenta un rango de actividad extendido
frente a otras molculas que contienen triples enlaces lo que ha dado
base a un prctico mtodo de deteccin y medida de la capacidad
fijadora, y a pensar en el posible papel detoxificador de esta enzima en el
ambiente primigenio de la tierra.
En muchas bacterias, la nitrogenasa es muy susceptible a la destruccin
por oxgeno (muchas bacterias dejan de producir fijar nitrgeno en
presencia de oxgeno). Tensiones bajas de oxgeno son aprovechadas por
diferentes bacterias que viven en anaerobiosis, respirando niveles bajos
de oxgeno, u obteniendo el oxgeno con una protena (p. ej.
leghemoglobina).
La fijacin de nitrgeno presenta un gran inters econmico y ecolgico.
De hecho, y como ejemplo, las altas producciones de soja a nivel mundial
son debidas a este proceso a travs de la aplicacin de inoculante
microbianos de calidad. Se da en todos los hbitats y equilibra el ciclo
biogeoqumico del nitrgeno al recuperar para la biosfera el que se pierde
por desnitrificacin. La implicacin en la fijacin simbitica de plantas tan
importantes en alimentacin humana y animal como las leguminosas, y
la posibilidad de extender esta propiedad a otras especies vegetales de
inters agrcola, con la consiguiente eliminacin de la necesidad de usar
fertilizantes nitrogenados, ha hecho de la FBN un tema de intensa
investigacin a lo largo de los aos.
La fijacin biolgica del nitrgeno atmosfrico, consistente en la
reduccin de N2 a NH4+ por la enzima nitrogenasa, es, despus de la
fotosntesis, la ruta metablica ms importante para el mantenimiento
de la vida en la Biosfera. Curiosamente, este proceso crucial slo puede
ser llevado a cabo por unos pocos grupos de seres vivos, todos ellos
procariotas (Sprent J. y Sprent P., 1990).
Los microorganismos fijadores de nitrgeno no constituyen un grupo
taxonmico homogneo, la nica caracterstica que comparten es la
presencia de la enzima nitrogenasa (Zehr J.P. y col., 1998). Dichas
bacterias comprenden organismos fototrofos, como bacterias
pertenecientes a la familia Rhodospirillaceae, Clorobiaceae y
Cianobacteriae; organismos quimioautotrofos, como bacterias de los
gneros Thiobacillus, Xanthobacter y Desulfovibrio y organismos
heterotrofos como las bacterias petenecientes a la familia Frankiaceae,

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al grupo Rhizobiaceae y a los gneros Azotobacter, Enterobacter,

Klebsiella y Clostridium (Sprent J. y Sprent P., 1990). Estos organismos
pueden realizar la fijacin biolgica de nitrgeno ya sea
independientemente (a excepcin de las rizobiceas) o estableciendo
relaciones simbiticas con otros organismos. Son estas formas
simbiticas, concretamente las establecidas entre las rizobiceas y las
leguminosas, las que antiguamente eran aprovechadas para la
renovacin de los suelos mediante la prctica de la rotacin de cultivos;
hoy en da sin embargo, desde la aparicin de la revolucin verde en
agricultura, esta prctica se ha sustituido por la utilizacin de fertilizantes
qumicos a pesar del elevado coste energtico y ambiental que supone.
Para poder disminuir la dependencia a fertilizantes nitrogenados que est
adquiriendo la agricultura mundial se han propuesto varias alternativas
que abarcan desde la modificacin gentica de las plantas a la
optimizacin y mejora de la fijacin biolgica de nitrgeno (Vance C.P.,
2001).

Dentro de esta ltima opcin el sistema rizobiceasleguminosas es el

que ha sido estudiado ampliamente y en mayor profundidad. Ya en el
siglo XVI Leonhard Fuchsius dibuj leguminosas noduladas (Fuchsius L.,
1542) y en el siglo XVII, Malpighi observ ndulos en races de juda
(Phaseolus vulgaris) y de haba (Vicia faba) (Malpighi M., 1675). No fue sin
embargo hasta finales del siglo XIX cuando el botnico ruso Woronin
detect la presencia de bacterias en ndulos de lupino y alisos (Woronin
M.S., 1866). Unos aos despus Frank demostr que en suelos quemados
no se producan ndulos (Frank B., 1879) y a continuacin Hellriegel y
Wilfarth, que son los investigadores reconocidos universalmente como
descubridores de la fijacin simbitica, demostraron en varias
leguminosas el requerimiento de una infeccin previa para la formacin
del ndulo (Hellriegel H. y Wilfarth H., 1888). Posteriormente Beijerinck
corrobor la necesidad de una infeccin bacteriana para la formacin del
ndulo al infectar plantas de Vicia faba con cultivos puros procedentes de
ndulos de dicha leguminosa (Beijerinck M.W., 1888). No obstante, no ha
sido hasta en estos ltimos 20 aos cuando se ha empezado a
comprender este sistema ntimamente si bien an hay algunos puntos del
proceso simbitico que se desconocen.

Una de las incgnitas es la influencia de algunos nutrientes especialmente

requeridos por el sistema en el establecimiento y desarrollo de la
simbiosis, as como en la organognesis del ndulo. Concretamente se ha
observado que la deficiencia de un micronutriente, el boro (B), afecta

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drsticamente a la nodulacin llegando al punto de abortarla (Bolaos L.

y col., 1994), aunque no se ha probado la causa ltima de tan drstico
efecto. Tambin se ha sugerido la existencia de una relacin entre este
micronutriente y un macronutriente como el calcio (Ca2+). En este
sentido se ha observado que la relacin BCa2+ es importante para el
mantenimiento estructural de la pared celular (Kobayashi M. y col.,
1999), y que juega un papel en el proceso de simbiosis en leguminosas
(Carpena R.O. y col., 2000). Nuestras investigaciones van encaminadas
precisamente a profundizar en el conocimiento de las consecuencias de
la deficiencia del B en distintos pasos de la nodulacin y analizar el papel
que juega el Ca2+ durante dicha deficiencia, as como la relacin existente
entre ambos bioelementos a lo largo de todo el proceso de simbiosis. Un
segundo objetivo de nuestra investigacin en este campo es el estudio
del papel de dicha relacin B/Ca en condiciones de estrs salino, donde
hemos encontrado cmo los suplementos de B y Ca recuperan la fijacin
simbitica del nitrgeno, as como el desarrollo y la productividad de
plantas noduladas de guisante, muy inhibidas en condiciones salinas.

FIJACIN BIOLGICA DE NITRGENO EN LEGUMINOSAS

Las rizobiaceas son un grupo muy heterogneo de bacterias que se han dividido
en cuatro familias: Rhizobiaceae, Phyllobacteriaceae, Hyphomicrobiaceae y
Bradyrhizobiaceae (Madigan M.T. y col. 2000). Dentro de estas familias slo
unos determinados gneros son capaces de efectuar el proceso de fijacin de
nitrgeno: Rhizobium, Sinorhizobium, Meshorizobium,
Bradyrhizobium, Azorhizobium y Allorhizobium. Con el fin de simplificar la
lectura nos referiremos a todos estos gneros como Rhizobium.

A diferencia de las cianobacterias y las bacterias pertenecientes al gnero

Frankia, las rizobiceas no pueden generar un ambiente anaerobio o
microaerobio en donde poder realizar la fijacin de nitrgeno por si mismas.
Para llevar a cabo el proceso estas bacterias han de encontrarse en las
inmediaciones de plantas de la familia de las fabceas e interactuar con las
mismas, originando una serie de reacciones en la planta que desencadenarn
la formacin de un rgano mixto nuevo, el ndulo simbitico, en el cual se
proporciona un entorno controlado, as como los nutrientes necesarios para
que la bacteria pueda efectuar el proceso de fijacin.

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Factores ambientales que influyen en la fijacin biolgica

del nitrgeno

Temperatura
Que la temperatura afecta a la simbiosis est claro, pero esta
interaccin es de modo indirecto aparece de un modo no
especfico a travs de los procesos metablicos de la planta
como respiracin, fotosntesis, transporte y transpiracin. En
las leguminosas estudiadas, que tienen un ciclo de Calvin
normal, su temperatura ptima es de 15 a 20 C. No se han
encontrado leguminosas tropicales con metabolismo C4. La
respiracin se incrementa con las altas temperaturas, esto
hace que haya una menor disponibilidad de carbono para la
simbiosis. Con menos de 7 C la nodulacin se hace muy poco

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probable. En el caso extremo de altas temperaturas, se reduce

el nmero de races laterales y pelos radicales, haciendo que
la probabilidad de nodulacin sea menor. A temperatura
extremas tiene lugar una degradacin de los ndulos. Otros
factores Otros factores posibles pueden ser los gases que hay
en el terreno, las enfermedades como hongos, virus o
micoplasmas (se ha estimado que estas enfermedades causan
una prdida de al menos el 24 % de las leguminosas del
forraje). Por ultimo debemos decir que las actividades del
hombre tambin han modificado las cantidades de fijacin de
nitrgeno, la mayor parte de las veces es en beneficio (como
puede ser la contribucin a la nodulacin con diferentes
fertilizantes que ofrecen minerales al suelo que ayuda a la
nodulacin).

Luz
La luz afecta a la simbiosis a travs de la fotosntesis,
controlando la cantidad de carbohidratos para el desarrollo y
funcionamiento del modulo. Existen evidencias de algunos
efectos directos de la luz sobre la nodulacin, as es por
ejemplo que la nodulacin es pobre bajo luz azul y mxima
bajo efecto de la luz roja - esto implica una evidencia de la
implicacin del fitocromo reversible en el proceso de
nodulacin). Se han hecho experimento con la defoliacin
gradual de las plantas y se ve claramente como hay una
reduccin en la fijacin del nitrgeno.

Oxgeno.
La nitrogenasa se inhibe en presencia de oxgeno por lo que
todos los microorganismos con este complejo enzimtico han
desarrollado estructuras para proteger la nitrogenasa:
heterocistes, exopolisacridos, consumir el oxgeno presente.

Cuando existe nitrgeno combinado como aminocidos,

nitratos, amonio, la actividad de la nitrogenasa se ve reducida
y se reprime la transcripcin de los agentes que la codifican.

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Agua
Las deficiencias en la disponibilidad de agua causan un bajada
en la fijacin del nitrgeno en leguminosas de todo el mundo,
de todos modos hay diferentes adaptaciones de estas plantas
a las diversas condiciones de sequa, como ejemplo podemos
citar a M. sativa que llega a proyectar sus races hasta siete
metros de profundidad.

Factores de la planta
El establecimiento de una simbiosis efectiva entre las leguminosas y los rizobios
es un proceso complejo que implica mecanismos de sealizacin y
reconocimiento por parte de ambos simbiontes. Las races de las leguminosas
liberan flavonoides e isoflavonoides, compuestos fenlicos que inducen la
expresin de los genes de nodulacin en el microsimbionte. Como resultado,
los rizobios producen los factores de nodulacin, denominados factores nod.
El tipo de flavonoides liberado por cada especie de leguminosa es especfico
para activar los genes de nodulacin de una especie determinada de rizobio. La
activacin de estos genes de nodulacin en las distintas especies de rizobios
determina la sntesis especfica de factores nod (lipo-quitin-oligosacaridos). De
esta forma, estos factores nod activan de forma especfica la respuesta
simbitica en la leguminosa correspondiente. En la tabla siguiente se muestran
algunos ejemplos de especificidad rizobio-leguminosa.

La nutricin hace referencia a las necesidades qumicas de las plantas. stas

precisan carbono, hidrgeno y oxgeno para crecer. Estos elementos estn
presentes en el aire y el agua, pero las plantas tambin precisan seis nutrientes
que deben estar fcilmente disponibles. Nitrgeno, potasio, calcio, fsforo,
magnesio y azufre son absorbidos del suelo y brindan la base para un
crecimiento saludable. Adems de estos elementos, las plantas necesitan
cantidades traza de hierro, zinc, manganeso, nquel, molibdeno, boro, cobalto,
cloro y cobre. Estos elementos son cruciales para el crecimiento y la mayora
puede ser absorbido de suelos bien fertilizados. Diferentes especies de plantas
requieren niveles variables de estos elementos, por supuesto, pero los primeros
tres son a menudo requeridos en mayor cantidad. Los fertilizantes
complementan lo que puede estar faltando en el suelo, pero estos elementos
estn fcilmente disponibles para tu planta cuando son agregados y a menudo
sufren varios cambios antes de poder ser utilizables.

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Factores propios de la bacteria

Fimbrias. Son apndices que consisten de subunidades de protenas
que estn ancladas ya sea en la membrana externa de las bacterias
gramnegativas, o en la pared celular de las bacterias grampositivas.
Las fimbrias pueden ser rgidas o flexibles. La funcin principal de las
fimbrias es servir como soporte de las adhesinas, encargadas de
reconocer a su receptor en la clula hospedera.

Adhesinas. Las adhesinas son, por lo general, lectinas (protenas que

tienen afinidad por los azcares) y su funcin es la adherencia. La
mayora de las bacterias expresan ms de un tipo de adhesinas. En
algunos casos, la fimbria posee dos o ms adhesinas distintas para
dos o ms receptores diferentes y se les llama adhesinas fimbriales.
Las adhesinas que no estn en fimbrias son denominadas adhesinas
afimbriales y algunos ejemplos son: protenas de membrana externa
de las bacterias gramnegativas, cidos lipoteicoicos de bacterias
grampositivas, glucocalix, protenas F y M de Streptococcus sp. y
tienen como funcin unirse en forma estrecha a la clula hospedera.

Unin e internalizacin en clulas M. Las clulas M son clulas

epiteliales especializadas, que representan el 10% del total de
clulas presentes en las placas de Peyer. Estn localizadas en el
epitelio intestinal intercaladas con los enterocitos, justo por arriba
de los ndulos linfticos. La funcin principal de las clulas M es la
absorcin de partculas desde la luz gastrointestinal transportndola
hacia la regin vasolateral rica en linfocitos y otras clulas inmunes;
adems, debido a su bajo contenido en lisozima, pueden transportar
antgenos con una casi nula degradacin enzimtica. Las clulas M
son endocticas por naturaleza de modo que las bacterias que se
unan a ellas son internalizadas y transportadas al tejido linfoide.
Algunas bacterias utilizan a las clulas M como puerta de entrada
para llegar a los tejidos profundos.

Invasin bacteriana. Se define como el proceso por medio del cual

un microorganismo penetra al citoplasma de clulas no fagocticas
(clulas epiteliales o endoteliales), se replica dentro de stas, se
propaga a clulas adyacentes y finalmente destruye a las clulas. Un
patgeno intracelular es aquel microorganismo que se internaliza y
se replica dentro de clulas fagocticas profesionales (neutrfilos y
macrfagos).

Movilidad bacteriana. Es la capacidad que tiene la bacteria de

desplazarse de un lugar a otro por medio del flagelo, sin un sentido

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definido. Los flagelos son apndices largos los cuales se encuentran

fijos a la clula por uno de sus extremos y libres por el otro. El
filamento del flagelo bacteriano est compuesto de subunidades de
una protena denominada flagelina.

Quimiotaxis. Se define como la capacidad que tienen las bacterias

de moverse hacia una fuente de nutrimentos. Las superficies
mucosas estn protegidas de la colonizacin bacteriana debido a
que estn siendo baadas constantemente con lquido y presentan
movimiento rpido. En tales casos, la bacteria mvil se dirige hacia
la membrana mucosa, teniendo mayor posibilidad de contactar la
superficie mucosa, a diferencia de las bacterias inmviles que
carecen de esta capacidad, apoyando esta idea se tiene que muchas
de las bacterias que colonizan el intestino delgado y la vejiga son
mviles.
Fases de la fijacin biolgica
Est compuesto por las siguientes etapas.

Fijacin: se produce cuando el nitrgeno atmosfrico (N2) es

transformado en amonaco (NH3) por bacterias presentes en los
suelos y en las aguas. Las bacterias del gnero Rhizobium sp. viven
en simbiosis dentro de los ndulos que hay en las races de plantas
leguminosas. En ambientes acuticos, las cianobacterias son
importantes fijadoras de nitrgeno.
Amonificacin: es la transformacin de compuestos nitrogenados
orgnicos en amonaco. En los animales, el metabolismo de los
compuestos nitrogenados da lugar a la formacin de amonaco,
siendo eliminado por la orina como urea (humanos y otros
mamferos), cido rico (aves e insectos) o directamente en
amonaco (algunos peces y organismos acuticos). Estas sustancias
son transformadas en amonaco o en amonio por los
descomponedores presentes en los suelos y aguas. Ese amonaco
queda a disposicin de otro tipo de bacterias en las siguientes
etapas.
Nitrificacin: es la transformacin del amonaco o amonio (NH4+)
en nitritos (NO2) por un grupo de bacterias del gnero
Nitrosomas para luego esos nitritos convertirse en nitratos
(NO3) mediante otras bacterias del gnero Nitrobacter.

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Asimilacin: las plantas toman el amonio (NH4+) y el nitrato (NO3

) por las races para poder utilizarlos en su metabolismo. Usan esos
tomos de nitrgeno para la sntesis de clorofila, de protenas y de
cidos nucleicos (ADN y ARN). Los consumidores obtienen el
nitrgeno al alimentarse de plantas y de otros animales.
Desnitrificacin: proceso llevado a cabo por bacterias
desnitrificantes que necesitan utilizar el oxgeno para su
respiracin en suelos poco aireados y mal drenados. Para ello,
degradan los nitratos y liberan el nitrgeno no utilizado a la
atmsfera.

Interaccin entre la bacteria y la planta

Se puede definir como rizosfera a la porcin de suelo ntimamente asociada a
las races de plantas en crecimiento con propiedades fsicas, qumicas y
biolgicas diferentes a las del resto del suelo y con una estructura
extraordinariamente compleja en la que inciden gran nmero de variables y en
la que se establecen multitud de relaciones biolgicas. De hecho, las
caractersticas fsicoqumicas de dicha regin hacen de ella un lugar muy
adecuado para el crecimiento de microorganismos (Bazin M.J. y col., 1990), de
los cuales los ms abundantes son las bacterias, en gran parte propiciado por la
presencia de los exudados de la planta ricos, entre otros, en compuestos
carbonados. Entre el 10% y el 30% de los fotosintatos de la planta son
secretados en los exudados radiculares (Bowen G.D. y Rovira A.D., 1999)
abarcando carbohidratos, cidos orgnicos, vitaminas, aminocidos y derivados
fenlicos. Entre dichos compuestos se encuentran los flavonoides (derivados del
2fenil1,4benzopirona) (Fig. 1) cuya composicin va a variar dependiendo de
la especie, y que adems de ser metabolizados, desencadenan una serie de
respuestas especficas en los rizobios circundantes apropiados. As, algunos de
estos flavonoides a concentraciones nanomolar, provocan la quimiotaxis activa
de los rizobios hacia la superficie radical (Snchez F. y col., 1991). En cambio,
estos mismos flavonoides a concentracin micromolar, activan en Rhizobium a
los genes responsables de la nodulacin (genes nod).

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Cada Rhizobium expresa constitutivamente un grupo de factores de

transcripcin hlicelazohlice de la familia LysR (Schell M.A., 1993)
conocidos como NodD cuyo nmero y regulacin va a depender de la especie
de Rhizobium, as por ejemplo en Sinorhizobium meliloti hay tres copias de
NodD, siendo dos de ellas, NodD1 y NodD2, activadas por flavonoides mientras
que NodD3 es activada por SyrM (Symbiotic Regulator), homlogo de NodD
que adems de regular NodD3 induce la sntesis de exopolisacrido
(EPS) independientemente de la presencia de flavonoides (Swanson J.A. y col.,
1993). NodD se encuentra normalmente unida a unas regiones de ADN de 49
pb conocidas como nod boxes, que se encuentran en las regiones
promotoras de muchos genes implicados en la nodulacin, slo se produce la
induccin de estos genes cuando NodD se une a sus activadores (Schultze M. y
Kondorosi A., 1998). Entre los genes activados por NodD se encuentran los
genes nod, que codifican todo un paquete de enzimas encargadas de la
produccin de los factores Nod. Los factores Nod estn compuestos por un
esqueleto de NacetilDglucosamina unidos por enlaces 1,4 sintetizado por
NodA, NodB y NodC, que presenta una serie de modificaciones dependiendo
de la estirpe de Rhizobium y que van a otorgar de cierta especificidad al
proceso de nodulacin (Spaink H.P., 2000):

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1) Variacin en el nmero de monmeros de NacetilDglucosamina,

oscilando generalmente entre 3 y 6 unidades.
2) La presencia o la ausencia de modificaciones en la molcula indicadas
como Rn en la figura 2, entre las que podemos destacar la aparicin o no
de un grupo sulfato en el extremo reductor.
3) Distintos cidos grasos pueden ir unidos a la molcula dependiendo de la
estirpe rizobicea. Esta caracterstica hace que a los factores Nod se les
conozca tambin como lipooligoquitinas o, ms comnmente,
lipoquitooligosacridos (LCO en ingls).
4) La presencia o ausencia de cidos grasos insaturados especiales.

Sealizacin entre Rhizobium y la planta

La mera presencia de los factores Nod en concentraciones del orden 10 12 M es

suficiente para que en la planta se produzca la deformacin de los pelos
radiculares (Lerouge P. y col., 1990; Heidstra R. y col., 1994) pero se necesitan
niveles mayores, del orden de 107 a 109 M para provocar la formacin de los
precanales de infeccin, la divisin de las clulas corticales y la induccin de
genes implicados en las fases previas a la nodulacin, las nodulinas tempranas
(Truchet G. y col., 1991). Esta elevada sensibilidad a los factores Nod hace
suponer que debe existir un mecanismo mediado por receptores aunque an
no se han podido ni determinar el nmero ni identificarlos, no obstante se han
propuesto hiptesis:

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Nitrgeno

1) Modelo de un nico receptor (Hirsch A.M., 1992): se propone la existencia

de un nico receptor cuya actividad va a venir dada por la estructura del factor
Nod, el cual se integrara en la membrana celular de la planta a travs del grupo
acilo.
2) Modelo de dos receptores (Ardourel M. y col., 1994): con esta hiptesis se
plantea la posible presencia de dos receptores, ambos necesarios para iniciar el
proceso de nodulacin. Uno de los receptores no posee una especificidad muy
elevada en el reconocimiento de los factores Nod pero puede inducir la
deformacin del pelo radicular, la formacin del primordio del canal de
infeccin y la divisin de las clulas corticales an en ausencia de la bacteria. El
segundo receptor es ms especfico e induce la formacin del canal de infeccin
y del ndulo aunque siempre es necesaria la presencia de la bacteria. Este
modelo actualmente es el que va cobrando ms fuerza. As se ha descubierto un
posible receptor de factores Nod, que presenta una elevada homologa a
receptores tirosina quinasa (Endre G. y col., 2002), y que adems presenta
dominios de unin a otras protenas. Una de estas protenas poda ser una
protena G de membrana la cual tambin es necesaria para la percepcin de los
factores Nod (Pingret J.L. y col., 1998).

Uno de los primeros efectos que se observa tras la percepcin del factor Nod en
el pelo radicular es la entrada de Ca2+ al citoplasma (Felle H.H. y col., 1998;
Crdenas L. y col., 1999). Ello conduce a la activacin de ciertos canales
aninicos que originan la expulsin de Cl y por tanto la despolarizacin de la
membrana del pelo. No se conocen los mecanismos que inducen la entrada de
Ca2+, aunque se ha propuesto que podra estar mediado por protenas G (Pingret
J.L. y col., 1998) y mantenido por canales de Ca2+ sensibles a voltaje. Esta entrada
de Ca2+, adems de servir como mensajero para la induccin de genes y
activacin de protenas implicadas en la nodulacin, induce una reorganizacin
del citoesqueleto, que contribuye a la deformacin del pelo radicular hasta
llegar a una forma caracterstica del fenmeno de la nodulacin, el cayado del
pastor (Shepherds crook en ingls). Esta estructura generar una pequea
cavidad en donde la bacteria puede crecer y prosperar.

Importancia de la fijacin biolgica de nitrgeno

Desde el punto de vista comn podramos decir que el sentido del nitrgeno
en las plantas es crear masa vegetal.

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Nitrgeno

Sin embargo, decir esto no es nada tcnico, por lo que vamos a aadir algunas
cosas ms. As veremos la verdadera importancia de este elemento en las
plantas.
El papel ms importante del nitrgeno en los cultivos es formar parte de las
protenas vegetales (lo que hemos comentado de crear masa.
Sin embargo, tampoco podemos olvidar su papel como reserva, ya sea en las
semillas (su capacidad de aguantar viva sin ser plantada o la energa que
necesita para transformarse en planta una vez es sembrada) u otros rganos
de reproduccin.

La dosis ptima de nitrgeno que debemos aportar a un cultivo depende de

tres factores: a) el cultivo; b) la fertilidad de la parcela en el momento de
realizar la aplicacin; y c) el objetivo que deseamos alcanzar. Por lo tanto, en
la mayor parte de los casos, la decisin de utilizar una determinada dosis no
puede tomarse a partir del mero clculo de las extracciones que lleva a cabo
el cultivo, tal como se ha venido haciendo durante muchos aos, siguiendo las
recomendaciones de los tratados clsicos de fertilizacin en agricultura.
Las recomendaciones agronmicas sobre fertilizacin estn basadas en
trabajos experimentales y son vlidas para cultivos y zonas concretas. Cuando
comparamos el aumento de produccin que experimenta un cultivo en
funcin de la cantidad de nitrgeno aplicada por hectrea (UA, unidades
arbitrarias), nos encontramos que la produccin bruta (E) deja de crecer a
partir de un determinado punto (1); se trata del ptimo agronmico. Si
observamos la funcin de produccin (D) que se obtiene cuando restamos el
coste del N aplicado (A) a la produccin bruta (E), obtenemos otro ptimo; se
trata del ptimo econmico (2) y finalmente, si furamos capaces de estimar
el coste ambiental que representa la aplicacin de N (B), restndolo de la
produccin bruta (E) obtendramos otro ptimo; en este caso, se tratara del
ptimo ambiental (3). De lo anteriormente expuesto se desprenden dos
conclusiones: a) Que la aplicacin ptima de N depende claramente del
objetivo que deseamos alcanzar (agronmico, econmico o ambiental); y b)
que los tres ptimos estn ntimamente relacionados entre s (N ambiental <
N econmico < N agronmico).

El Nitrgeno es un elemento primario de las plantas, se puede encontrar en

los aminocidos, por tanto forma parte de las protenas, en las amidas, la
clorofila, hormonas (auxinas y citoquininas, nucletidos, vitaminas, alcaloides
y cidos nucleicos.

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Nitrgeno

Las formas inicas que una raiz puede absorber son el nitrato (NO3+) y el
amonio (NH4+). Como la mayor parte del N del suelo est en forma orgnica
es necesaria una actividad microbiolgica que lo convierta en amonio o nitrato
(Nitrosomas y Nitrobacter) son las bacterias ms comunes en esta tarea). Si la
planta absorbe nitrato tiene que reducirlo a forma amoniacal antes de que
pase a formar parte de los compuestos orgnicos. El amnio no se acumula
sino que se incorpora directamente a compuestos como la glutamina,
procedentes del ciclo de Krebs

La deficiencia de N en plantas disminuye el crecimiento, las hojas son

pequeas y tampoco se puede sintetizar clorofila, de este modo aparece
clorosis (hojas de color amarillo). La clorosis empieza en las hojas de mayor
edad o inferiores, estas pueden llegar a caerse y si la carencia es severa puede
aparecer clorosis en las hojas ms jvenes. Disminuye el tamao de los frutos
y su cuajado.

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Nitrgeno

CONCLUSIONES
Los microorganismos son muy importantes ya que sin ellos la fijacin
del nitrgeno no sera posible.

Leguminosas como sthizolobium permiten el establecimiento de una

mayor diversidad y microorganismos benficos.

Muchas leguminosas solo derivan una parte del N. Cuando el N est

en forma de nitratos, la fijacin es pobremente expresada
Los ciclos nutricionales del suelo constituyen el corazn de la
microbiologa del suelo.
De hecho, sin los microorganismos del suelo, no habra prcticamente
ningn ciclo de nutrientes y la vida, tal como la conocemos no podra
existir.
El nitrgeno es el nutriente vegetal ms determinante y experimenta
diversas transformaciones. Existen dos formas de fijacin: la industrial
y la biolgica.

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anexos

FIGURA: Interaccin Entre La Planta Y Los Microorganismos

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