PRCTICA DE LABORATORIO

EQUIPO TIZAYUCA
Proceso

Da 1:

1. Aislamiento en cultivo puro

Tomamos 9 ml de frmula salina estril
Tomamos 1 ml de la muestra de agua y mezclamos con la solucin salina, despus de tomar
la muestra sembramos en forma de estras

2. Siembra por estra cruzada

Sembramos la muestra con la solucin salina y sin solucin salina, otra muestra que
llevamos la sembramos de igual manera (sin solucin salina)
Despus de ponerle su identificacin a las siembras, llevamos nuestros cultivos a la estufa.

3.

Da 2:

1. Resiembra de las colonias seleccionadas

Ese mismo da hicimos una prueba piloto de la tincin de Gram.

Da 3:

1. Prueba de catalasa:
- Poner agua oxigenada o perxido de hidrgeno.
- Tomar una muestra de la colonia 1 y poner en contacto con el agua.
- Si el agua burbujea es positiva.
- Se repite el proceso con cada colonia.
2. Prueba de oxidasa:
- Poner un papel filtro sobre el porta objetos.
- Agregar oxidasa, de una a dos gotas sobre el papel filtro.
- Inmediatamente mezclar la colonia uno con la oxidasa.
- El color azul obscuro nos marca oxidasa la prueba como positiva.
- El resultado se obtiene de 10 a 15 segundos despus de haber mezclado.
 - Se repite el proceso con cada colonia

3. Prueba de tincin de Gram

- Marcar con lpiz graso el porta objetos, agregar una gota de agua, en seguida una
prueba de la primera colonia y fijar con calor hasta que se seque la gota.
- Agregar cristal violeta a la prueba por un minuto.
- Lavar.
- Agregar lugol a la prueba por un minuto.
- Lavar.
- Agregar alcohol acetona a la prueba por siete segundos.
- Lavar.
- Agregar safranina a la prueba por un minuto
- Lavar.
- Dejar secar y observar en el microscopio. (el proceso se realiz con las tres colonias)
 Es importante en esta prueba identificar si se tie de color
azul obscuro o color rojizo la prueba para saber si las bacterias
presentes son Gram positivo o negativo.

4. Pruebas Bioqumicas
1. Medio de cultivo: MR VP
Se toma la muestra de la colonia y se agita con el asa de siembra. (se repite con cada
colonia)
2. Medio de cultivo: Citrato de simos (semi-slido, verde)
se toma la muestra de la colonia sin flamear el asa y se siembra en forma de estras en
la superficie. (se repite con cada colonia)
3. Medio de cultivo: SIM
Se toma la muestra de la colonia, se siembra por picadura, sin agitar. (se repite con cada
colonia)
4. Medio de cultivo: urea
Se toma la muestra de la colonia y se agita en el lquido. (se repite con cada colonia)
5. Medio de cultivo: triple azcar hierro
Se toma la muestra de la colonia, se siembra por la superficie y despus se introduce el
asa hasta el fondo en forma recta. (se repite con cada colonia)
Da 4:

1. Resultados de las pruebas biogeoqumicas

1. VP: Se agregan dos gotas de naftol y una gota de KOH (hidrxido de potasio) (se repite
con cada colonia)
2. MR: Se le agregan dos gotas de reactivo de metilo. (se repite con cada colonia)
3. Citrato de simos: observacin en el color. (se repite con cada colonia)
4. SIM:
S: H2S cido sulfhdrico= Negro +
I: poner tres gotas de reactivo Ehilich= Rojo + indol +
M: turbio el medio de cultivo= movilidad +
(se repite con cada colonia)
5. Urea: Rojo intenso= positivo
6. TCI: Lactosa arriba= color amarillo +
Glucosa fondo= color amarillo +
Burbujas= produccin de gas
Coloracin negra = cido sulfrico +

Resultados:

Colonia 1 y 2: Pseudomonas Aeuroginosa.

Colonia 3: Enterobacter.