RESPUESTA INMUNITARIA.

Inmunidad Innata

Se conoce a la respuesta inmunitaria innata como la primera lnea de defensa del

husped frente a los microorganismos. Este sistema lleva ese nombre debido a
que sus mecanismos efectores existen aun antes de que aparezca la noxa. Este
tipo de inmunidad debe su importancia a bsicamente tres funciones:
Es la respuesta inicial a los microorganismos, previene infecciones e incluso
puede eliminar completamente a cierto tipo de noxas.

Sus mecanismos efectores estimulan a la inmunidad adaptativa e influyen en

el tipo de respuesta.

La inmunidad adaptativa utiliza, adems de sus mecanismos, a los de la

inmunidad innata.

Componentes Principales funciones

Barreras epiteliales

Integridad Prevencin de la entrada de los

microorganismos
Pptidos antibiticos Destruccin de microorganismos
Linfocitos intraepiteliales Destruccin de microorganismos
Clulas efectoras

Neutrofilos Fagocitosis y destruccin de microorganismos

en la primera fase de la infeccin
Monocitos/Macrofagos Fagocitosis y destruccin de microorganismos
en fases tardas de la infeccin. Secrecin de
citoquinas
Clulas NK Lisis de clulas infectadas y activacin de
macrfagos.
Protenas efectoras

Complemento Destruccin y opsonizacin de microorganismos

Activacin de leucocitos
Lectinas de unin a manosa Opsonizacin de microorganismos y activacin
del complemento (va de las lectinas)
 Protena C reactiva Opsonizacin de microorganismos y activacin
del complemento.
Factores de coagulacin Aislamiento de los tejidos infectados.

Para comprender estas fenmenos de la inmunidad innata dividiremos su estudio

en: la apreciacin de sus componentes y sus principales funciones, para luego
abordar a sus mecanismos efectores.

Mecanismos efectores de la inmunidad innata

1. Barreras epiteliales
Las superficies epiteliales y su estado integro en conjunto forman una barrera fsica
que separan el medio del husped. Existen tres importantes interfaces, que son: la
piel, el epitelio respiratorio y el epitelio digestivo.
Estos epitelios adems de constituir una capa protectora, poseen otras
caractersticas que lo hace inmunolgicamente importante, tales como: la sntesis
de pptidos antibiticos, subpoblaciones de linfocitos intraepiteliales y clulas
dendrticas.

Pptidos antibiticos: La piel posee la capacidad de sintetizar y secretar protenas

con capacidad antibitica y antimictica denominados Defensinas. Estos son
pptido de 29-34 aminocidos, que aumentan sus concentraciones presencia de
IL1 y TNF (factor de necrosis tumoral), ambos secretados por los macrfagos
activos. El epitelio intestinal tambin produce una protena con potentes efectos antimicrobianos
denominada Criptocidinas.

Linfocitos T intraepiteliales: Este tipo de clulas es una subespecie de linfocitos

T y por lo tanto debera ser considerado como parte de la inmunidad adaptativa.
Pero, este linfocito T, presenta una limitada diversidad delas clulas T) no son (como el
resto de los linfocitos T), si no . Otra diferencia de granreceptor antignico,
adems las cadenas del TCR (receptor de
Importancia es el hecho de que estos Linfocitos T intraepiteliales no reconocen al
MHC (complejo mayor de histocompatibilidad) si no a una protena similar al MHC,
denominada CD1. Debido a estas notables desigualdades se considera al Linfocito
T intraepitelial como parte de la inmunidad Innata.

Una vez activado, el linfocito T intraepitelial, secreta una variada gama de citoquinas
pro inflamatorias como: IL1, TNF, Linfotaxinas e INF. -
Adems poseen una actividad citoltica mediada por Perforinas y Fas-FasL. Las
Perforinas, son pptidos que se unen a la membrana de la clula blanco, creando
un poro en esta, lo que lleva a la perdida de la homeostacia intracelular y la muerte
de la clula en cuestin. A diferencia de lo que ocurre con las Perforinas, que llevan
a la muerte celular por lisis de la membrana, Fas-FasL citoltico, denominado
Caspasas, que inducen a la clula blanco la apoptosis.son protenas de
membrana que al interactuar una con otra, activan a una complejo enzimtico

Linfocitos B-1: Los linfocitos B-1, son clulas presentes en el epitelio de la cavidad
peritoneal y que tambin deberan ser considerados como integrantes de la
inmunidad adaptativa, pero su receptor antignico, posee baja diversidad y su
estructura es similar a la del receptor del linfocito T intraepitelial. Debido a estas
caractersticas se considera al linfocito B-1, como parte de la inmunidad innata.
Las clulas B-1 secretan permanentemente IgM especfica para antgenos
compartidos por una amplia variedad de bacterias, tales como la Fosforilcolina y
el Lipopolisacarido o LPS.

2. clulas efectoras

Neutrofilos o leucocitos polimorfonucleares: son las clulas blancas ms

abundantes en la sangre, correspondiente entre y un 50% y 60% del total de
leucocitos.
 Los Neutrfilos alcanzan el
sitio de la infeccin en pocas
horas y son los responsables
de la primer oleada de
clulas encargadas de la
respuesta del husped. Si
este no es reclutado en
Un tiempo no mayor a 6 horas,
estos experimentan la
apoptosis. Los Neutrfilos
presentan en su interior
grnulos cuyo contenido es
rico en Lisozima, Colagenasa
y Elastasa.
Monocitos/Macrfagos:
Los monocitos son clulas
maduras precursoras de los
macrfagos, es decir, una vez
que el monocito es activado
este experimenta cambios
morfolgicos que lo adaptan
para sus nueva funciones como
macrfagos.
Los macrfagos son clulas de
mayor tamao y capacidad
fagocitica que los neutrfilos
Adems poseen la capacidad de unirse a otros macrfagos y as originar las
clulasgigantes, con una capacidad fagocitica an mayor. Los Macrfagos
constituyen la segunda oleada de clulas que acuden al sitio de la infeccin.
Existen, adems de los monocitos y macrfagos circulantes, otros macrfagos que
se encuentran como clulas residentes de cada tejido, por ejemplo: en el hgado
existen las clulas de Kupffer, en el SNC encontramos a la micrglia y en los
alvolos pulmonares a los macrfagos alveolares. Como el reconocimiento,
fagocitosis y destruccin del microorganismo por parte de los neutrofilos y los
macrfago son similares, se explicara a continuacin los mecanismos ntimos que
son aplicables a ambos tipo de clulas.

Reconocimiento:
Los macrofagos y neutrofilos, son capaces de reconocer a los microorganismos de
distintas maneras y cada una de estas de pende de receptores ubicado en las
membranas de estos fagotitos.
Receptores de Manosa: estos receptores son capaces de reconocer a los
residuos de manosa, que son el residuo terminal de glucoproteinas y glucolipidos
estructurales de las membranas de ciertas bacterias.
Receptores para opsonina: las opsoninas son partculas que recubren a los
microorganismos y facilitan su fagocitosis, estas partculas pueden ser: Ig, (la
IgG es una de las mas importantes), protenas del complemento (el fragmento
C3 es una potente opsonina), fibrinogeno, etc. Estas partculas son reconocidas
por sus receptores especficos ubicados en la membrana de los fagotitos.

Receptor tipo Toll: Son protenas de la membrana capaces de reconocer a

molculas propias de las bacterias, como el LPS (en bacterias Gram negativas)
o el Peptidoglicano (en bacterias Gram positivas). Estos receptores tienen la
capacidad de heterodimerizarce unos con otros, de esta forma uno confiere la
especificidad del ligando y el otro la va de sealizacin intracelular.

Helices , que son capaces de reconocer a peque Receptores acoplados a protena

G: Estos receptores son protenas de transmembranas de sieteos pptidos
bacterianos, as como tambin a ciertas citoquinas y mediadores lipiditos
(prostaglandina E, leucotrieno B4, etc.). Receptores para citoquinas: uno de los ms
importantes es el receptor para INF, esta citoquina es la ms potente activadora
de macrfagos y es producida por las clulas NK Y los linfocitos T, en respuesta a
microorganismos.
Activacin:
Las cascadas de sealizacin intracelular depender de cual haya sido el
receptor estimulado, pero la respuestas final son bsicamente las mismas, la
fagocitosis y la migracin de las clulas al sitio de la infeccin.
La fagocitosis tiene dos finalidades:
Incluir al agente extrao dentro de vesculas denominadas Fagosomas,
que luego se unirn con los lisosomas, formando de esta manera el
Fagolisosoma. En el interior de este, se liberan sustancias microbicidas, como
el ROIs (intermediarios reactivos del oxigeno), NO (oxido ntrico), adems el
fagolisosoma contiene enzimas lticas que colaboran en la destruccin de los
microorganismos.
La otra importante funcin, consiste en tomar los pptidos antignicos de
los microorganismos y separarlos, para luego poder procesarlos y unirlos a las
molculas del MHC II (complejo mayor de histocompatibilidad tipo dos), y de
estas manera los macrfagos pueden actuar como clulas presentadoras de
antgeno (APC). verse ms adelante.
Clulas NK: Las clulas NK
son un tipo de linfocitos, que
participan en la inmunidad
frente a virus y a
microorganismos
intracelulares. La pregunta es:
Cmo puede una clula NK
reconocer a microorganismos
intracelulares?
Este tipo celular posee
molculas que reconocen al
MHC I (debe tenerse en cuenta
que el MHC I est presente en
todas las clulas del cuerpo), de
esta manera, si una clula
expresa pptidos antignicos
en su membrana
unidos al molculas del
MHC I, las clulas NK las
reconocern y sern activadas.
Otro mecanismo, consiste en la
activacin de las NK, en caso
de que no encuentren las
molculas del MHC I en la
superficie de otra clula, este
sistema es de gran utilidad, ya
que existen virus que inhiben la
sntesis de molculas de MHC I.
Adems de estos dos mecanismos, las clulas NK, participan de un sistema
conocido como Citotoxicidad mediada por anticuerpos. Esto consiste en la
activacin de las NK, frente a partculas que se encuentren recubiertas con
anticuerpos, (en general son IgG), esto se lleva adelante mediante un receptor que
poseen las NK, capaces de identificar la porcin Fc de las IgG.
Las funciones efectoras de las NK son, la destruccin de las clulas infectadas y
la activacin de macrfagos.
Las funciones lticas de las NK, son llevadas a cabo mediante dos protenas que
se encuentran en el interior de grnulos citoplasmticos, denominadas,
Perforinas y Granzimas.
Cuando las Clulas NK, son activadas liberan estos grnulos y de esta manera a
las protenas. Las Perforinas, crean un poro en la membrana de la clula blanco,
mientras que las Granzimas ingresan por este poro e inducen la apoptosis.
Las NK, son capaces de responder a la IL-12, esta citoquina es producida por los
macrfagos. En repuesta a la IL-12, las clulas NK liberan INF, que como
mencionamos con anterioridad, es la ms potente activadora de macrfagos.

3. Protenas efectoras:
Sistema del complemento: Este es un grupo de protenas plasmticas, cuyas
principales funciones son: La inflamacin, Opsonizacin de microorganismos y lisis
bacteriana.
El reconocimiento del microorganismo y la activacin del sistema del complemento,
se realiza a travs de tres posibles rutas: La va clsica, capas de reconocer a los
microorganismos recubiertos de anticuerpos. La va alterna, capas de reconocer a
estructuras propias de las bacterias. Y la va de las lectinas, que puede reconocer
a una protena plasmtica denominada: Lectina de unin a manosa, que reconoce
los residuos de manosa en las glucoproteinas y glucolipidos de la membrana de la
bacterias, a los cuales se adhiere y de esta manera puede ser reconocida por el
complemento.

Protena C reactiva: La
protena C reactiva, pertenece
a un grupo de protenas
denominadas: Proteinas de la
fase aguda. Porque, sus
niveles plasmticos aumentan
considerablemente durante los
estados infecciosos agudos.
Esta es una protena capas de
unirse a los fosfolipidos de las
cpsulas bacterianas,
actuando como opsonina.
Adems posela capacidad de
activar al complemento por la
via clsica.
 Rol de la inmunidad innata en la defensa del organismo.
El mecanismo que lleva adelante la inmunidad innata, es la inflamacin. Este es un
complejo proceso en el cual existe, un aumento de la permeabilidad capilar y
migracin de los leucocitos desde la sangre, hacia la zona afectada. Esto se logra
a travs de cambios estructurales en los capilares sanguneos, que permiten el paso
de los leucocitos desde la sangre al tejido. Adems, el reclutamiento celular se lleva
a cabo por las citoquinas, especialmente el TNF y las quimioquinas, encargadas de
activar y guiar a los fogositos hacia la zona afectada.
Durante las primeras fases de la inflamacin, son los neutrfilos los que actan,
luego acuden los macrfagos y finalmente los linfocitos.
El fin de la inflamacin es localizar a la infeccin a un solo sitio, impidiendo que esta
se propague y afecte a otros tejidos, esto es posible mediante las protenas de la
coagulacin que amurallan a la zona afectada. Adems proporcionan el lugar para
que los leucocitos se encuentren con los microorganismos, y puedan ejercer su
funcin.
Durante la inflamacin se liberan muchas otras citoquinas que estimulan a la
inmunidad adaptativa, para poder finalmente erradicar al patgeno, debido a que en
ausencia de este mecanismo de defensa, la inmunidad innata no puede controlar
completamente a la infeccin.
2. inmunidad Adaptiva
La Inmunidad adaptativa o inmunidad especfica, es un mecanismo de defensa
mucho ms evolucionado, que es estimulada luego de la exposicin a agentes
infecciosos, y cuya capacidad e intensidad defensiva aumenta despus de cada
exposicin subsiguiente a un determinado microorganismo.
Existen dos tipos de inmunidad adaptativa, la inmunidad celular y la inmunidad
humoral. Ambas actan en conjunto, con el fin de eliminar a los microorganismos,
pero se las divide de esta manera para poder estudiarlas detalladamente.
Principales caracteristicas de la respuesta adaptativa:
Diversidad: Es lo que
permite al sistema
inmunitario responder
a una gran variedad
de antgenos
extraos. Se estima
que el sistema
inmunitario puede
distinguir entre 109 y
1011 determinantes
antignicos
diferentes. Los
mecanismos
moleculares que
producen esta amplia
diversidad son
tratados junto con los
captulos y trabajos
referidos a los
Linfocitos B.
Especificidad: Da a
lugar a que cada
microorganismo
genere respuestas
especificas en su
contra.
Memoria: La
exposicin del
sistema inmunitario a un agente extrao mejora su capacidad para responder de
nuevo a este, ante una re exposicin. Es por esto que las respuestas inmunitarias
adaptativas, son ms rpidas y ms eficientes.
Especializacin: Genera respuestas ptimas para la defensa frente a los
microorganismos. As, la inmunidad celular y la inmunidad humoral son estimuladas
por diferentes microorganismos.
Autolimitacin: Permite al sistema inmunitario disminuir de intensidad frente a un
antgeno, a medida que esta va siendo eliminado. Devolviendo al sistema inmune a
su estado basal. Ausencia de autoreactividad: Es una de las propiedades ms
importantes del sistema inmune, que brinda la capacidad de reconocer lo propio de
lo extrao, y no reaccionar frente las sustancias antignicas propias. Esta propiedad
es compartida con la inmunidad innata.
Inmunidad celular
La inmunidad celular
recibe este nombre
debido a que sus
mediadores son
clulas, a diferencia de
la inmunidad humoral
cuyos mediadores son
molculas (verse ms
adelante). Las clulas T
o linfocitos T, son los
principales efectores de
la inmunidad celular.
Estos se encargan
bsicamente de
erradicar a los
microorganismos
intracelulares. Existen
dos subpoblaciones de
linfocitos T, los T
colaboradores o helper
(CD4+) y los T
citolticos o citotxicos (CD8+). A su ves los LTh (linfocitos Thelper), se subdividen
en TH1 y TH2.
Este tipo celular reconoce a los pptidos antignicos de los microorganismos
intracelulares, cuando se expresan en la superficie de la clula husped asociados
a molculas del MHC I o MHC II, de acuerdo a quien sea el Linfocito T efector, CD4+
o CD8+ respectivamente. En este trabajo se analizara de manera superficial los
mecanismos de reconocimiento y activacin de las clulas T, dejando los
mecanismos ntimos a los captulos y trabajos sobre Linfocitos T exclusivamente.
Luego se analizaran los mecanismos efectores de la respuesta celular y su
interaccin con los diferentes tipos celulares.

Reconocimiento del antgeno por los Linfocitos T

Para que la respuesta celular se lleve a cabo, los linfocitos T inactivos o naive
deben madurar a clulas efectoras. Ese paso se produce cuando las clulas T
reconocen a los antgenos. Los linfocitos T por si solos no son capaces de identificar
a los antgenos extraos, necesitan que estos les sean presentados. Para cumplir
esta funcion de gran importancia el sistema inmunolgico consta de un grupo de
celulas denominadas Celulas presentadoras de antigenos o APC (Antigen-
presenting cells), dentro de las cuales se incluyen a los: Macrfagos, Linfocitos
B, Clulas dendrticas y clulas de Langherans. Estas clulas comparten la
particularidad de que todas expresan en sus membranas molculas del MHC II, a
las cuales se les asocia el pptido extrano, y de esta manera se los pueden
presentar a las celulas T.
El reconocimiento de los antgenos por los Linfocitos T se hace en los rganos
linfoides, en la mayora de los casos en los ganglios linfticos. (Verse mas adelante)
en estos sitios anatmicos residen las clulas T naive, y es aqu donde se
transforman en clulas efectoras que luego de la expansin clonal y diferenciacin,
migran del ganglio linftico para entrar en la circulacin y dirigirse hacia el sitio de
la infeccin.
Adems de la presentacin del pptido extrao asociado a la molcula del MHC I o
MHC II, los linfocitos T necesitan coestimulacion. La coestimulacion consiste en el
reconocimiento de ciertas protenas asociadas a las molculas del MHC
denominadas justamente Coestimuladores. Esta interaccion genera una cascada
de senalizacion intracelular, que lleva a la expresin de ciertos genes codificadores
de protenas de membrana las cuales son receptores para citoquinas. Este
mecanismo prepara a los linfocitos T para recibir a su segunda coestimulacin, las
citoquinas. La citoquina ms importante en la etapa de expansin clonal es la IL-2,
esta es producida por los linfocitos T helper, ya sea para estimular a los CD8+ o a
s mismos.

Mecanismos efectores de la inmunidad celular

Linfocitos T Helper (TH1 y TH2). La principal funcin de las clulas T CD4+, es como
su nombre lo indica colaborar en la activacion y actividad de otros tipos celulares
mediante la secrecin de diversas citoquinas, que adems participan en el
desarrollo de cada subespecie.
Los linfocitos TH1 secretan principalmente INF, citoquina importante en la
activacin de macrfagos. Esta citoquina tambin estimula la diferenciacin de
CD4+ naive, a Linfocitos TH1, mientras que inhibe la diferenciacin a TH2.
A su vez, los TH2, secretan en primer lugar IL-4, IL-5 e IL-13, cuya principal funcin
es la maduracin y activacin de mastocitos y eosinofilos, mientras que inhibe la
activacin de los macrfago. Adems estimula la diferenciacin celular de los CD4+
naive, a Linfocitos TH2 e inhiben la diferenciacin hacia TH1.
Se puede apreciar que los efectos de las citoquinas secretadas por cada
subespecie, antagoniza las funciones de la otra, este sistema busca que la
respuesta iniciada por un antgeno especifico solo se desarrolle en el sentido mas
apropiado para su eliminacin.
La principal funcin de los TH Citoquinas Subespecie Subespecie
producidas TH1 TH2
es participar en la defensa INF +++ -
mediada por fagocitos, es decir, IL-4, IL-5, IL-13 - +++
frente a microorganismos que
IL-10 +/- ++
hayan podido ser fagocitados,
IL-3, GM-CSF ++ ++
esto se logra a travs de los
siguientes eventos: Luego de haber llegado al sitio de la infeccin los T H1 actan
en conjunto con los CD8+ estimulando la migracin de los monocitos de la sangre
hacia ellos, una vez realizado esto, se lleva adelante la interaccin entre macrfagos
y TH1 en la cual ambos generan estmulos para su expansin, el macrfago
estimula al TH1 secretando IL-12 y este, en respuesta, secreta INF para activarlo.
El macrfago activado, mejora su capacidad fagoctica, aumenta la secrecin de
citoquinas y la expresin de molculas del MHC II junto con sus coestimuladores.
En tanto los TH2 son los responsables de la defensa frente a helmintos artrpodos
y reacciones alrgicas, debido a que sus citoquinas activan a esosinofilos y
mastociots, a su vez, la IL-4, IL-5 e IL-13 tambin estimulan la produccin de IgE
por las clulas plasmticas. Estas dos funciones de aparente discordancia, son
complementarias, ya que los esosinofilos y mastocitos reconocen a los helmintos
que se encuentren recubiertos por IgE.
Linfocitos T citolticos: Este tipo celular recibe este nombre por su capacidad de
lisar a las clulas infectadas con microorganismos intracelulares, los cuales no
pueden ser eliminados por los fagocitos.
El primer paso es reconocer a las clulas infectadas. Los CD8+ reconocen a los
pptidos presentados por las molculas de clase I del MHC, las cuales pueden ser
expresadas por todos lo tipos celulares nucleados. Una vez que el linfocito T
citoltico interacta con el MHC I y sus coestimuladores, es activado y esto lleva a
la exocitosis de sus grnulos.
Los grnulos de lo CD8+ contienen las protenas Perforinas y Granzimas, cuyos
mecanismos de accin ya han sido expuestos. Los T citolticos tambin expresan
FasL, que interacta con Fas en la membrana de las clulas blanco e inducen la
apoptosis.

INMUNIDAD HUMORAL

La inmunidad humoral recibe este nombre, debido a que sus mediadores son los
anticuerpos y las protenas del complemento. Debido a que muchas de las funciones
de la inmunidad humoral son mediadas por los anticuerpos, consideramos
conveniente hacer una breve resea sobre las propiedades y la estructura de estos.

Los anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig), son una familia de glucoproteinas

producidas por los linfocitos B en dos formas: unidos a membrana y de secrecin,
estos ltimos son los que actuan en la inmunidad humoral. Todas las Ig poseen una
estructura basica similar, compuesta por dos cadenas pesadas (H) idnticas unidas
entre s por enlaces covalentes y dos cadenas ligeras (L) unidas a las anteriores.
Tanto la cadena pesada como la de la ligera de las Ig se componen de regiones
variables (V) Nterminal y regiones constantes (C) carboxi-terminal. Cada una de
estas regiones V contiene tres regiones de hipervariabilidad independientes, que se
ensamblan espacialmente para formar el sitio de unin al antgeno.
Los anticuerpos se clasifican en diferentes isotipos dependiendo de las diferencias
de sus regiones C de las cadenas pesadas, las distintas clases se denominan IgM,
IgG, IgD, IgE e IgA.
La mayora de las funciones efectoras de los anticuerpos secretados son llevadas
a cabo por la por las porciones Fc de las regiones C de las cadenas pesadas.

Los anticuerpos de utilidad para la defensa del husped se encuentran en la sangre,

pero son producidos por los linfocitos B o las clulas plasmticas en los ganglios
linfticos. Incluso algunos anticuerpos pueden proceder de antiguas clulas de
memoria.
El sistema del complemento es otro de los grandes efectores de la inmunidad
humoral, en este trabajo e mencionaran las generalidades de sus mecanismos
efectores, dejando su estudio detallado a los trabajos especficos sobre el tema. Se
ha hecho hincapi en la importancia de los anticuerpos en la inmunidad humoral y
su origen en los linfocitos B. por lo tanto consideramos conveniente describir los
mecanismos de activacin de una clula B primero y luego los mecanismos
efectores de los anticuerpos.
Activacin de los Linfocitos B.
Aqu se har una cita textual del trabajo Linfocitos B, de la Catedra de Bioquimica-
UNNE, ao 2003. Realizado por: Dra. Nora Brandan, Dr. Alberto Luponio, Dra. Ma.
Fernanda Aguirre Ojea y el ayudante alumno Aquino Esperanza Jose.

Mecanismo de activacin por Ag T dependientes

Los Ag proteicos no pueden inducir por si solos la activacin de los Linfocitos B, si
no que requieren la estimulacin de los Linfocitos CD4+ (LTh).

Las clulas B especficas para el Ag, lo unen a su receptor, lo internalizan y lo

procesan en vesculas endosomicas. Estas protenas endocitadas son degradadas
por enzimas presentes en los endosomas y lisosomas para generar pequeos
pptido (10 a 30 AA) que podrn unirse a las molculas del MHCII. Estas son
sintetizadas en el Retculo endoplasmico rugoso y luego son transportadas al
endosoma donde se unen a los pptido. Luego este complejo pptido-MHCII se
expresa en la membrana y junto con estos se expresan otras protenas llamadas
coestimuladores. Finalmente en la membrana de Linfocito B se encuentran el
pptido unido a la molcula del MHCII y sus coestimuladores, cuyo fin es poder
presentar el Ag a los LTh.
(Fig. 5.) Por esta funcin a las clulas B se las incluye dentro del grupo de clulas
presentadoras de Ag (APC).
Los LTH presentan en su membrana receptores para el MHCII y ligndos para los
coestimuladores, que cuando interactan con estos activan a los LTh. Una vez
activados estos secretan citoquinas para estimular la proliferacin y diferenciacin
del Linfocito B. Las citoquinas no son especficas para cada Ag, aunque hayan sido
secretadas por la activacin de un LTh especifico.
Las citoquinas desempeas dos funciones principales: 1) Estimulan la proliferacin
y diferenciacin de los Linfocitos B. 2) Determinan que tipo de Ig se producir por
la activacin de las clulas B.

Mecanismo de activacin por Ag T independientes.

Si bien a la mayora de los Ag a los que nos vemos sometidos son Ag proteicos,
existe otro tipo que pueden ser: polisacridos, glucopeptidos y cidos nucleicos.
Estos Ag no son internalizados, si no que ejercen su accin por sealizaciones
intracelulares producidas por el receptor del Linfocito B.
Generalmente la respuesta producida por este tipo de Ag, se compone de Ac de
escasa afinidad y un repertorio de clulas de memoria bajo.
La importancia prctica de este tipo de reaccin, es que muchos Ag de las paredes
bacterianas son polisacridos y este es el mecanismo principal de la activacin de
los Linfocitos B en la inmunidad frente a las infecciones bacterianas.

Mecanismos efectores de los anticuerpos

Neutralizacin de microorganismos y toxinas. Los anticuerpos inhiben la

infectividad de lo microorganismos y asi su capacidad de producir daos.
Muchos microorganismos poseen molculas que interactan con protenas de
superficie de la clula husped, y de esta manera pueden ingresar al citosol. Los
anticuerpos pueden unirse a estas estructuras bacterianas e impedir as su ingreso.
Algo similar ocurre con las toxinas que daan a los tejidos. Estas deben actuar con
un receptor para ejercer su efecto, pero las inmunoglobulinas impiden esta
interaccin, dejndolas sin efecto.

Opsonizacin y fagocitosis mediada por anticuerpos. Los anticuerpos del tipo

IgG, sobre todo las subclases IgG1 e IgG3, son capaces de recubrir a los
microorganismos y actuar como opsoninas, ya que promueven la fagocitosis de
estos. Muchos de los fogocitos poseen receptores para los fragmentos Fc de los
anticuerpos, de estos, el ms importante es el receptor Fc (Subtipo FcRI), capas
de reconocer a la porcin Fc de las IgG. Este receptor tiene mayor afinidad por las
Ig que se encuentran recubriendo a un microorganismo, que a las Ig libres. Una vez
que el receptor Fc reconoce a Ligando, se inicia el proceso de fagocitosis.

Las clulas NK, tambin poseen receptores Fc (Subtipo FcRIII), que, si bien tienen
menor afinidad que los receptores Fc de los fagocitos, pueden activarse frente a los
microorganismos recubiertos de anticuerpos. Este es un ejemplo del proceso
denominado Citotoxicidad dependiente de anticuerpos (ADCC). Otro tipo celular
que desarrollan un tipo especial de
ADCC son los eosinofilos, estos reaccionan frente a los helmintos recubiertos de
IgE. Los eosinofilos poseen receptores Fc para la IgE denominados FcRI, que al
interactuar con su ligando, lleva a la liberacin de los grnulos intracelulares. Este
sistema es de gran importancia, ya que los helmintos no pueden ser fagocitados, y
los eosinofilos contienen en sus grnulos protenas que destruyen a estos parsitos.
Activacin del complemento. Loa anticuerpos son capaces de e activar al
complemento por la va clsica (verse mas adelante).

Mecanismos efectores del sistema del complemento

Citolisis mediada por el complemento. El producto final de las reacciones entre

las protenas del complemento es la formacin del MAC (complejo de ataque a
membrana). Esta estructura forma pequeos poros en la membrana, que origina el
libre movimiento de agua y solutos entre el espacio extracelular y el intracelular,
conduciendo al microorganismo a una muerte osmtica.

Opsonizacin y fagocitosis. Durante la cascada de proteolisis de los componentes

del complemento, se generan pequeos pptido con funcin de opsoninas, capaces
de recubrir la superficie de los microorganismos e inducir su fagocitosis. Las
opsoninas mas potentes del complemento son el fragmento C3b (producido por
ambas vas de activacin) y C4b (producido solo por la via alterna). Dichos
fragmentos son reconocidos por los Receptores tipo 1 del complemento (CR1),
ubicados en la superficie de los fagocitos.

Estimulacin de la respuesta inflamatoria.

Otros fragmentos originados por las reacciones proteolticas, son inductores de la
respuesta inflamatoria aguda, debido a su capacidad de estimular la activacin de
los mastocitos y neutrofilos. El fragmento mas potente de todos es el C5a, este
interacta con su receptor (el cual pertenece a la familia de receptores de siete
hlices ) ubicado en la membrana de estas clulas. El fragmento C3a posee una
actividad 20 veces menor, y el fragmento C4a unas 2500 veces menor aun.

Activacin de Linfocitos B.
El fragmento C3d interacta con el Receptor tipo2 del complemento (CR2),
ubicado en las clulas B, e induce su activacin. Aqu se demuestra unos de los
mecanismos por el cual la inmunidad innata estimula a la inmunidad adquirida,
teniendo en cuent a que el complemento tambin pertenece a la primera

3. Citoquinas: El nexo entre la inmunidad innata y la adaptativa

Las Citoquinas son protenas sintetizadas y secretadas por las clulas de la
inmunidad innata y la adaptativa y median muchas de las funciones de estas. En
este apartado del presente trabajo se tratara de demostrar como la inmunidad innata
estimula a la inmunidad adaptativa a travs de las citoquinas, y esta ltima como
las utiliza para mejorar y poder aumentar su actividad. De esta manera podremos
ver a la respuesta inmunitaria como un todo integrado y no como dos sistemas
separados.
Iniciaremos describiendo las citoquinas que abundan en la inmunidad innata y como
estas estimulan a la inmunidad adaptativa, luego haremos lo mismo con las
citoquinas de la inmunidad adaptativa y su relacin con la primera.

Citoquinas de la inmunidad innata

TNF (factor de necrosis tumoral) e IL-1. Esta citoquina es producida principalmente
por los fagocitos activados, aunque tambin los linfocitos T y las NK pueden
sintetizarlo. El estmulo para la liberacin de TNF por los fagocitos es el LPS
(lipopolisacarido bacteriano).
La principal funcin del TNF consiste en estimular el reclutamiento de leucocitos a
la zona de la infeccin, esto lo logra de la siguiente manera:
Activa a las clulas endoteliales para que puedan expresar molculas de adhesin
(este mecanismo se explica mas adelante), cuyo fin es hacer la superficie celular
ms
adhesiva para los neutrofilos inicialmente y luego para los Linfocitos. (Observese
aqu como la inmunidad innata ya prepara el endotelio para la posterior respuesta
Adaptativa).

Induce a los macrfagos a secretar Linfotaxinas.

Linfotaxinas. Estas son protenas encargadas de reclutar a los leucocitos hacia el

sitio de inflamacin y activa a las clulas endoteliales, para que expresen en sus
membranas molculas de adhesin leucocitaria. Las linfotaxinas son producidas por
los macrfagos y otros tipos celulares en respuesta a citoquinas pro-inflamatorias,
como el TNF y la IL-1.

IL-12 (interleuquina 12).

Esta citoquina es uno de los principales y ms importantes nexos entre ambos tipos
de inmunidad. La IL-12 es sintetizada por los macrfagos activados y las clulas
dendrticas, esta acta sobre clulas de la inmunidad adaptativa tales como,
linfocitos T CD4+ y CD8+, de igual manera lo hace sobre las NK.
Estos tipos celulares frente el estmulo de la IL-12 producen INF, que, como se
menciono es el ms potente activador de macrfagos. Aqu demostramos como las
clulas de la inmunidad innata buscan la colaboracin de las clulas de la inmunidad
adaptativa para poder activarse.
Otra funcin de la IL-12 consiste en aumentar la capacidad ltica de los CD8+ y las
NK.
IL-10 (interleuquina 10).
La IL-10 es bsicamente una reguladora de la actividad de la IL-12.
Sorprendentemente son los macrfagos las clulas que producen IL-10, el objetivo
es simple, los macrfagos no solo secretan la IL-12 que es la mediadora de su
activacin, sino tambin produce su reguladora, la IL-10. IL-15 (interleuquina 15).
Esta citoquina es producida por los fagocitos en respuesta al LPS, la principal
funcin de la IL-15 es estimular la proliferacin de las NK. Pero tambin es un factor
de crecimiento y de supervivencia para los Linfocitos T CD8+ de memoria, este rol
es importantes para la inmunidad adaptativa.
Citoquinas de la inmunidad adaptativa
IL-2 (interleuquina 2). Cuando los Linfocitos T CD4+ reconocen a los antgenos, se
inicia una cascada de sealizacin intracelular que finaliza en la secrecin de IL-2 y
en la expresin del receptor para IL-2, es decir. Los CD4+, secretan esta citoquina
para estimularse a si mismos. La IL-2 es un factor de crecimiento para los Linfocitos
T, pero adems estimula el crecimiento y mejora la capacidad ltica de las NK,
cooperando de esta manera con la inmunidad innata.

INF (interfern gama). En repetidas ocasiones hemos mencionado el papel del

INF con los macrfagos, pero ahora mencionaremos otras importantes actividades
de esta citoquina. El INF es sintetizado mayoritariamente por los TH1 y las NK,
pero en pequeas cantidades tambin por los CD8+.

Aumenta la expresin de molculas de clase I y II en las APC (clulas presentadoras

de antgeno), inclusive aumenta la sntesis de las protenas TAP en estas clulas
Potencia los efectos del TNF, en relacin a la activacin de las clulas endoteliales.
Promueve la diferenciacin de los CD4+ inactivos a TH1.

Promueve en los Linfocitos B, el cambio de isotipo de cadena pesada a IgG. (Este

mecanismo se explica en los captulos y trabajos referidos a los Linfocitos B).
En relacin con la inmunidad innata, activa a los neutrofilos y mejora la capacidad
ltica de las NK
4. Anatoma de la respuesta inmune
Esta seccin del presente trabajo tiene de objetivo poder llevar al lector a una mejor
comprensin del tema, ubicando a los mecanismos y sistemas antes expuestos en
sus sitios anatmicos correspondientes y explicar la movilizacin celular y molecular
frente a un agente extrao.
Los microorganismos ingresan al cuerpo generalmente a travs de la piel, el tracto
respiratorio o el gastrointestinal. Todos estos tejidos constan de las defensas
propias que les confiere la inmunidad innata, pero, adems existe un tipo celular
presente en estos, las clulas dendrticas.
Las clulas dendrticas son un tipo celular originados en la medula sea,
relacionadas con la lnea de fagocitos mononucleares. La funcin de estas, es
capturar al antgeno extrao y transportarlo hacia los ganglios linfticos. El trayecto
desde los epitelios hasta los ganglios se realiza a travs de los vasos linfticos,
durante el cual las clulas dendrticas maduran mejorando su eficiencia como clula
presentadora de antgenos.

El ganglio linftico: estructura y rol en la inmunidad

Los ganglios linfticos son unos rganos de pequeo tamao ricos en linfocitos y
situado a lo largo de la cadena linftica. Histolgicamente, constan de una cpsula,
corteza interna y externa y medula. A su vez la cpsula se encuentra perforada por
los linfticos aferentes, en su sector cortical, mientras que en el sector medular
recibe a la arteria principal junto con la vena y los linfticos eferentes, estos ltimos
elementos conforman el denominado hilio.
En la corteza ubicamos unas estructuras que reciben el nombre de foliculos, los
cuales de acuerdo a su actividad se los denomina, primarios o secundarios (verse
ms adelante). Estos folculos se encuentran separados unos de otros por los
cordones medulares.

Disposicin de las clulas dentro del ganglio linftico. Los foliculos son la zona
B, debido a que el tipo celular ubicado ah son los Linfocitos B. los folculos
primarios contienen bsicamente clulas B maduras pero que no han sido
estimuladas, mientras que los folculos secundarios reciben este nombre, porque en
su interior se encuentran ubicados los linfocitos B que han sido activados y se
encuentran diferencindose y en expansin, esta zona del folculo recibe el nombre
de centro germinativo.
Los Linfocitos T se ubican en los cordones medulares, la mayora (el 70%) son
linfocitos CD4+, aqu tambin se encuentran las clulas dendrticas y los CD8+. En
tanto, en la medula es una zona de transicin, en donde se ubican los macrfagos
y los Linfocitos activados que estn por abandonar al ganglio hacia la circulacin.
Los linfocitos ubicados en los ganglios linfticos no permanecen estticos en estos,
al contrario, se encuentran migrando permanentemente.
Este proceso se denomina Recirculacion y asentamiento de linfocitos, y el objetivo
consiste en que los linfocitos no permanezcan en los ganglios en donde no hay
reaccin, si no, que circulen y busquen a los ganglios en actividad. De esta manera
se garantiza que estas clulas se distribuyan de la mejor manera posible para
contrarrestar al agente agresor y que no se desperdicien en zonas inactivas.

Proceso de activacin linfocitaria. Como mencionamos con anterioridad son las

clulas dendrticas las encargadas de transportar los antgenos hacia los ganglios
linftico, estos en su gran mayora son protenas que fueron fagocitadas y ahora se
expresan en la membrana de estas clulas a travs de las molculas de clase II del
MHC, pero existe un pequeo grupo de antgenos no proteicos y que no son
transportados por las clulas dendrticas, si no que viajan libres un el lquido linftico
y de esta manera alcanzan a los ganglios.
Las clulas dendrticas ingresan al ganglio por los vasos linfticos aferentes, y
entran en contacto de inmediato con la zona T. Aqui se produce la activacion de
los linfocitos T CD4+ y, de los escasos CD8+. Las clulas T CD4+, activadas
experimentan el proceso conocido como expansion clonal, en donde aumentan su
nmero y especificidad para ese antgeno en particular.
El siguiente paso consiste en la activacin de los Linfocitos B. Ahora con la
poblacin de
Linfocitos T CD4+ activos, es posible la activacin de las clulas B. una vez que las
clulas T colaboradoras activan a los Linfocitos B, estos comienzan el mismo
proceso que los primeros, la expansin clonal y diferenciacin a clulas de memoria
y clulas productoras de anticuerpos o clulas plasmticas.

Disposicin de las clulas activadas en el ganglio linftico y otros tejidos.

Cuando las clulas T CD4+ son activadas, y luego de que hayan activado a los
Linfocitos B, existen varios posibles destinos. (Ver imagen al final del texto)
Las cuales se hayan diferenciado a clulas efectoras, migran del ganglio hacia las
zonas de infeccin. Esta migracin celular es posible, debido a que los CD4+
efectores, expresan molculas de adhesin en sus membranas (LFA-1, VLA-4,
ligandos de E y P-selectinas, etc.), las cuales les permiten interactuar con las clulas
endoteliales del sitio de infeccin, que a su vez expresan los receptores y ligandos
para estas nuevas protenas de membrana de los T colaboradores. Este mecanismo
garantiza que los T helper, lleguen a destino y no a otro sector anatmico, ya que
solo podrn interactuar con las clulas endoteliales que expresen este tipo de
receptores y ligandos.

Molcula del CD4+ activado Ligandos en la clula endotelial Funcin

Ligando de selectina-P y E Selectina P y Selectina E Adhesin inicial debil
LFA-1 y VLA-4 ICAM-1 o VCAM-1 Adhesin estable

Las clulas T CD4+, que se hayan diferenciado a clulas de memoria pueden

permanecer en el ganglio linftico, migrar hacia los epitelios y residir en estos como
Linfocitos T intraepiteliales o migrar hacia los MALT (tejido linfoide asociado a
mucosas).
Por otra parte, los Linfocitos B que se hayan diferenciado a clulas productoras de
anticuerpos, permanecen en el ganglio linftico, desde donde comienzan a secretar
las Ig, y son estas las que entran en la circulacin. Otro destino posible de las clulas
plasmticas es la medula sea.

En tanto las clulas B que se diferenciaron a clulas de memoria pueden tomar los
mismos destinos que los T de memoria.
 5.Bibliografa
Cellurar and Mollecular inmunology. Abbas, Lichtman, 5ta edicion, Editorial Saunders. 2003.
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 REACCIONES ANTGENO ANTICUERPO

REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO
Las reacciones antgeno-anticuerpo se estudian ms fcilmente "in vitro" utilizando preparaciones
de antgenos y antisueros.

El estudio de las reacciones antgeno-anticuerpo "in vitro" se denomina serologa y es de especial

importancia en la microbiologa diagnostica.

En las reacciones antgeno-anticuerpo se distinguen 2 fases: la primera consiste en la unin del

antgeno con el anticuerpo y la segunda en las manifestaciones que resultan de dicha unin. La
primera fase se realiza por la combinacin de reas pequeas tanto del antgeno como del
anticuerpo, denominadas respectivamente determinante antignico y sitio activo, que al unirse
forman un complejo antgeno-anticuerpo. La reaccin es reversible, siguiendo, por consiguiente,
la ley de accin de masas y existen factores externos que pueden modificar dicha unin, como
son: el pH, la temperatura y la fuerza inica.

Dependiendo de la naturaleza del antgeno y del anticuerpo y de las condiciones de la reaccin se

pueden observar diferentes tipos de reacciones serolgicas:

Neutralizacin
Mediante anticuerpos especficos se pueden neutralizar toxinas, virus o enzimas, Los anticuerpos
neutralizantes requieren un solo tipo de combinacin con el antgeno para poder actuar y as
pueden ser univalentes, aunque anticuerpos bivalentes o multivalentes pueden neutralizar
tambin. Un antisuero que contiene anticuerpos neutralizantes contra una toxina se denomina
"antitoxina".

(a) Accin de una toxina (b) Neutralizacin

Precipitacin
La reaccin de precipitacin ocurre cuando se combina un anticuerpo, por lo menos divalente,
con un antgeno soluble y esto conlleva a la formacin de agregados que precipitan. Como las
reacciones de precipitacin son fcilmente observables "in vitro", stas resultan pruebas
serolgicas muy tiles, especialmente para medir concentraciones de anticuerpos. Para que la
precipitacin ocurra en forma mxima se necesita que tanto el antgeno como el anticuerpo estn
en concentraciones ptimas, cuando cualquiera de los reaccionantes estn en exceso no se
pueden formar grandes agregados antgeno-anticuerpo.
 Reaccin de precipitacin

Aglutinacin
Cuando un antgeno particulado reacciona con su anticuerpo especfico (divalente por lo menos)
se observa la formacin de grumos o agregados de estas partculas, esto se conoce como
aglutinacin. En estas reacciones el determinante antignico est sobre la superficie de una
partcula o de una clula.

Estas reacciones son ms sensibles que las de precipitacin para detectar pequeas cantidades de
anticuerpos, debido a que relativamente pocas molculas de anticuerpo pueden unir
efectivamente un gran nmero de partculas de antgeno en grumos gruesos macroscpicamente
visibles. Es por esto que cuando queremos aumentar la sensibilidad de una reaccin de un
antgeno soluble con su anticuerpo especfico, se transforma el antgeno soluble en particulado
adsorbiendolo o unindolo qumicamente a estructuras particuladas tales como esferas de ltex o
arcilla coloidal y de esta manera pueden ser detectados los anticuerpos por reacciones de
aglutinacin, estos ensayos se conocen como ensayos de AGLUTINACION PASIVA.

Tambin se pueden aglutinar glbulos rojos y este fenmeno se conoce como

HEMAGLUTINACION. Los anticuerpos pueden reaccionar con antgenos de los glbulos rojos, u
otros antgenos que se pueden adsorber a los glbulos rojos y observarse hemaglutinacin cuando
se una el anticuerpo especfico.

Apariencia de clulas bacterianas aglutinadas por anticuerpos contra (a) Antgenos somticos (b)
Antgenos flagelares

Inmunofluorescencia
Es una tcnica donde las molculas de anticuerpos son convertidos en sustancias fluorescentes,
unindoles qumicamente a compuestos orgnicos fluorescentes tales como isotiocianato de
fluorescencia o rodamina B Esto no altera la especificidad del anticuerpo pero hace posible su
deteccin cuando est unido a clulas o tejidos usando un microscopio para fluorescencia. Los
anticuerpos fluorescentes son de considerable utilidad en microbiologa diagnstica.
Preparacin de anticuerpos fluorescentes acoplando el colorante fluorescente isotiocianato de
fluorescena al anticuerpo

Para demostrar la presencia de antgenos o clulas bacterianas utilizando anticuerpos

fluorescentes, existen dos procedimientos: el mtodo directo y el indirecto.

En el mtodo directo, el anticuerpo marcado es especfico contra el antgeno.

Inmunofluorescencia. Mtodo directo

En el mtodo indirecto, la presencia del anticuerpo especfico sobre la superficie de la clula es

detectado por el uso de otro anticuerpo fluorescente dirigido contra el anticuerpo especfico.
Complemento
Adems de las reacciones antgeno-anticuerpo ya descritas, existen otros tipos de reacciones de
gran importancia en inmunidad donde participa el Complemento.

El complemento acta junto con los anticuerpos especficos para llevar a cabo varios tipos de
reacciones antgeno-anticuerpo que de otra manera no podran ocurrir, tales como: lisis de clulas
bacterianas, muerte de clulas bacterianas, hemlisis, etc.

El complemento no es un anticuerpo (por lo tanto no aumenta con la inmunizacin), sino una

serie de enzimas que se encuentran en el suero normal y que atacan a las clulas bacterianas u
otros agentes extraos. Estas enzimas, que se encuentran an en individuos no inmunizados,
son normalmente inactivas, pero se activan cuando ocurre una reaccin antgeno-anticuerpo.Una
de las principales funciones del anticuerpo es reconocer las clulas invasoras y activar el sistema
del complemento para que acte. Ciertos componentes del complemento son muy termolbiles,
se destruyen por calentamiento a 56C por 30 minutos, por otra parte los anticuerpos son
termoestables.

Acciones del complemento

Entre las principales acciones del complemento tenemos:

Lisis de los glbulos rojos (hemlisis)

Si un antisuero contra glbulos rojos se mezcla con una suspensin de glbulos rojos y se le aade
suero normal como fuente de complemento ocurre la lisis a los 30 minutos de incubacin a 37C.
La hemlisis se usa a menudo como prueba de la presencia de complemento en sueros
desconocidos o para medir la fijacin de complemento.

Lisis bacteriana
Especialmente de bacterias Gram negativas, cuando los anticuerpos especficos se combinan con
el antgeno de la superficie bacteriana en presencia de complemento.

Muerte microbiana
En ausencia de lisis ocurre la muerte microbiana cuando los anticuerpos especficos se combinan
con los antgenos de la superficie bacteriana en presencia de complemento.

Promocin de la accin fagocitaria:

Cuando se combinan bacterias capsuladas con el anticuerpo especfico en presencia de

complemento se promueve la accin fagocitaria Este proceso en el cual los anticuerpos
especficos ms complemento hacen una clula susceptible a la fagocitosis se llama
OPSONIZACION.

Prueba de fijacin de Complemento

Una propiedad importante del sistema del complemento es que sus componentes son
enzimticamente alterados durante la reaccin, de modo que no reaccionarn en una nueva
secuencia de reacciones, es decir si el complemento es consumido durante las reacciones
antgeno-anticuerpo esto es llamado FIJACION DE COMPLEMENTO y ocurre cuando un
anticuerpo de tipo IgG o IgM reacciona con el antgeno en presencia de complemento, an
cuando ste no sea requerido en la reaccin.

La prueba de fijacin de complemento se lleva a cabo en dos fases. En la fase primera se mezclan
el suero del paciente (previamente calentado a 56C) y el antgeno en presencia de una cantidad
determinada de complemento; esta mezcla es generalmente incubada durante 30 minutos a 37C.
Si se forman los complejos antgeno-anticuerpo, el complemento es fijado. En la segunda fase se
aade el sistema indicador que consiste en glbulos rojos de carnero y anticuerpos contra
glbulos rojos de carnero. La ocurrencia de hemlisis indica que el complemento no fue utilizado
por lo tanto, en la fase 1 no se ha producido una reaccin Ag-Ac especfica. En cambio, la ausencia
de hemlisis, indica que el complemento ha sido fijado y por lo tanto que en la fase 1

se ha producido una reaccin Ag-Ac, en este caso se considera una reaccin de fijacin del
complemento positiva, mientras que en el primer caso se considera negativa la reaccin de
fijacin de complemento. (Fig. 11.16). Utilizando un antgeno conocido, esta tcnica puede ser
empleada para detectar y medir anticuerpos presentes en sueros. Al ocurrir la reaccin del
antgeno con los anticuerpos del suero, sta reaccin Ag-Ac se puede poner de manifiesto
mediante una prueba de fijacin de complemento.

Fijacin de complemento positiva

Incubacin
37C x 30

No hay hemlisis
Fijacin de complemento negativa

37C x 30 Incubacin

Hay hemlisis
 REACCIONES

Antgeno-Anticuerpo

Caractersticas de la Interaccin Antgeno - Anticuerpo

Especfica
Reversible
Dependiente de pH
Sensible a la Temperatura
Sensible a la fuerza inica

Fuerzas implicadas en la Interaccin

Antgeno - Anticuerpo
Puentes de hidrgeno
Fuerzas electrostticas (enlaces inicos)
Fuerzas de van der Waals
Enlaces hidrofbicos

AFINIDAD Y AVIDEZ
 Afinidad y Avidez de un anticuerpo por un epitopo

Afinidad
Suma de todas las fuerzas atractivas y
repulsivas entre un sitio de unin del
anticuerpo (paratopo) y el
correspondiente epitopo. Se define por
una constante de equilibrio (Ka), segn la
ley de accin de masas.

Avidez:
Fuerza con la que un anticuerpo
multivalente se une a un Antgeno
multivalente. Su valor es mucho mayor
que la suma de las afinidades.

Cintica de la Reaccin
(ecuacin vlida solo para molculas
monovalentes)
 K
Hapteno + Ac( Hapteno-Ac)
k

k (Hapteno-Ac
Ka= =
(Hapteno)(Ac)
k
[Ac] la concentracin de sitios libres de Ac
[Ac-H] la concentracin de sitios ocupados
del Ac

Los anticuerpos como sondas para

buscar antgenos de inters

Ventajas
 Especificidad
Sensibilidad
Estabilidad
Versatilidad en el diseo: ELISA, IFI, Western
blot, etc.
Tiempo de ejecucin razonable: inutos a ~ hrs
Costo conveniente
Infraestructura minima.

Los anticuerpos como sondas para

buscar antgenos de inters
Ej. Haptenos (drogas, toxinas, hormonas, etc).

Inmunizacin con
Carrier-hapteno

Antisuero

Anlisis de los Ac. unidos a:

Hapteno Hapteno Hapteno

libre en otra al
Protena mismo
carrier
 Tcnicas Inmunoanalticas
Reaccin de precipitacin En medio lquido
o Floculacin
o Nefelometra
o Precipitacin de complejos Inmunes

En gel
Inmunodifusin doble
o Inmunodifusin radial
o Inmunoelectroforesis
o Rocket electroforesis
o Contrainmunoelectroforesis
o Inmunoelectroforesis cruzda bidimensional de
Laurel
Reaccin de aglutinacin
Aglutinacin pasiva
Aglutinacin directa
Fijacin y actividad hemoltica del complemento

Reacciones en fase slida

ELISA o Western blot
 Reacciones de Precipitacin y Floculacin en
solucin
Reacciones de sueros humanos de pacientes con Tiroiditis de
Hashimoto auotoinmune.

Equivalencia

Tiroglobulina agregada

(mg)
 Inmunodifusin Doble
(o de Ouchterloni)

Suero humano
Ej: Mezcla de antgenos y suero
polivalente

AS (pozo central) : Antisuero de conejo anti-suero hum

HIg HSA HSA: Albmina humana purificada
HIg: Inmunoglobulina humana purificada

Suero humano
 Ensayo
Immunoturbidimtrico

Suero + Ag complejos insolubles

Aumenta turbidez de la solucin y puede
ser medida pticamente
Turbidez proporcional cantidad de protenas en
la muestra

puede incrementar con los

anticuerpos Unidos a ltex:
mayores agregados
Inmunodifusin Radial

Ag
 El tamao de los halos es Anticuerpo
incorporado al gel proporcional a la
concentracin del antgeno
Reacciones de Aglutinacin
Se considera aglutinacin cuando el
antgeno es particulado y tiene como
tamao mnimo el bacteriano

Aglutinacin Directa: Las

partculas o clulas
tienen un antgeno
intrnseco.
Aglutinacin Pasiva:
partculas o clulas a
las cuales se le agrega
el antgeno
 Reacciones en fase slida

ELISA
Western bots
Inmunofluorescencia
Cromatografa de Afinidad

ELISA
(Enzime linked
immunosorbent assay )

Deteccin de anticuerpos Deteccin de antgenos

e Antgeno

Determinacin de antgenos por

ELISA

[ Ag ] [ Ag ]
Caso de Haptenos Caso de Protenas
Western blot

Precipitado producto
enzimtico

Sustrato

Anti-anticuerpo-Enzima

Anticuerpo especfico

Quimioluminiscencia
 Inmunofluorescencia indirect

Anticuerpo anti-Acrosina

Se puede hacer con clulas

Anticuerpo anti-Ag de
embrin de ratn
vivas o fijadas,
Cromatografa de Afinidad

Purificacin de un
anticuerpo uniendo el
antgeno o a una resina
(sp). Sin embrago,
tambin se puede hacer
lo contrario.