TOXICOLOGIA

Manual de Prcticas de Laboratorio

Programa Educativo de Licenciado en Biologa

Febrero-Agosto 2010
Universidad Veracruzana
Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias
Regin: Orizaba-Crdoba

Antonio Prez Pacheco

Autor:

Dr. Antonio Prez Pacheco

Alumnos participantes:
Eduardo Padilla Cullar
Edith Blanco Rodrguez

PRLOGO
~2~
 El presente manual es la recopilacin de una serie de experimentos
realizados como parte de las actividades de investigacin del Laboratorio de
Toxicologa de la F.C.B.A. U.V., el cual recoge las experiencias de acadmicos y
estudiantes de nivel licenciatura y posgrado que han realizado tesis, estancias o
prestado un servicio social en este departamento.

El manual comprende 12 prcticas generales de la experiencia educativa de

Toxicologa ambiental del P.E. De Licenciado en Biologa.

El desarrollo de cada prctica implica la interaccin de tcnicas de muchas reas

de las Ciencias Naturales como lo son la Microbiologa, Citologa, Gentica,
Bioqumica, Qumica Analtica, Fisiologa, Farmacologa, Histopatologa, Higiene,
Fitoqumica, Mecnica y Biotica ya que la propia disciplina de la Toxicologa es
integrativa y requiere de diversos conocimientos tcnicos y prcticos de las reas
ya mencionadas.

Esperando que el inters por el mundo de la Toxicologa les sea de su agrado no

me resta ms que desearles que disfruten las siguientes pginas.

El Autor

Contenido
~3~
 1 Material y equipo empleado en el laboratorio de toxicologa
2 Identificacin de los reactivos empleados en el laboratorio de toxicologa
3 Muestreo biolgico de txicos
4 Determinacin de AAS en orina
5 Determinacin de flavonoides
6 Determinacin de THC usando el reactivo de Duquenois
7 Identificacin de txicos en leche
8 Txicos en suelos
9 Identificacin de txicos en frutos
10 Identificacin de sustancias txicas (alcaloides)

PRCTICA 1

Material y Equipo empleado en el Laboratorio de Toxicologa.

INTRODUCCIN

~4~
 Es fundamental que el estudiante de Toxicologa conozca la infraestructura

tecnolgica que tiene un laboratorio de Toxicologa, ya que es en este lugar donde

se lleva a cabo la experimentacin animal, el anlisis de muestras y la preparacin

de reactivos. Es importante reconocer los equipos y los materiales empleados en

cada experimento, prueba o determinaciones que se emplean.

OBJETIVO:

Reconocer los principales reactivos utilizados en el laboratorio de toxicologa, su

clasificacin y funciones.

MATERIAL:

Bitcora de laboratorio.

Cmara fotogrfica.

METODOLOGA:

-Realizar una visita al laboratorio de Toxicologa de la F.C.B.A. U.V., y ponerse en

contacto con el tcnico quien les explicar brevemente el uso de los equipos,
cristalera y material de laboratorio; de igual forma pueden consultar la bitcora de
reactivos y en base a esa informacin tomar fotografas, realizar esquemas o
dibujos para presentar sus resultados.

RESULTADOS:

Se sugiere enlistar los resultados en un cuadro que contenga el nombre del

material, su clasificacin y su uso; de igual forma se sugiere realizar otra visita a
otro laboratorio de toxicologa para comparar los recursos tecnolgicos, materiales
y humanos que tenga cada laboratorio.

~5~
CUESTIONARIO

1. Cmo se clasifican los materiales y equipo en el laboratorio de toxicologa?

2. Escriba diferencias entre la organizacin de de un laboratorio y otro.

3. Describa el uso de los equipos de uso ms frecuente en el laboratorio de

toxicologa.

PRCTICA 2

Identificacin de los reactivos empleados en el laboratorio de toxicologa

INTRODUCCIN

~6~
 Adems del recurso humano y tecnolgico que se cuenta en un laboratorio
de toxicologa; es importante conocer los reactivos principales que se emplean en
esta disciplina dependiendo para que tipo de pruebas o determinaciones se
emplean.

OBJETIVO:

Reconocer los principales reactivos utilizados en el laboratorio de toxicologa, su

clasificacin y funciones.

MATERIAL:

Bitcora de laboratorio.

Cmara fotogrfica.

METODOLOGA:

-Realizar una visita al laboratorio de Toxicologa de la F.C.B.A. U.V., y ponerse en

contacto con el tcnico quien les explicar brevemente el uso de los reactivos
qumicos y elaborados, de igual forma pueden consultar la bitcora de reactivos y
en base a esa informacin tomar fotografas, realizar esquemas o dibujos para
presentar sus resultados.

RESULTADOS:

Se sugiere enlistar los resultados en un cuadro que contenga el nombre del

reactivo, su frmula qumica, su clasificacin y su uso; de igual forma se sugiere
realizar otra visita a otro laboratorio de toxicologa para comparar los recursos
qumicos entre uno y otro.

CUESTIONARIO

1. Cmo se clasifican los reactivos en el laboratorio de toxicologa?

2. Escriba diferencias entre la organizacin de reactivos de un laboratorio y otro.

~7~
3. Describa el uso de los reactivos de uso ms frecuente en el laboratorio de
toxicologa.

PRCTICA 3

Muestreo biolgico de txicos

INTRODUCCIN

El muestreo biolgico o dosimetra interna consiste en la determinacin

cuantitativa de la concentracin del txico o sus metabolitos en uno o ms medios
corporales del organismo expuesto.

~8~
Esta informacin se usa para estimar la exposicin que experimentan cada uno de
los tejidos del cuerpo, con el fin de estimar la magnitud de la exposicin ambiental
y para demostrar que existi una exposicin efectiva. El simple hecho de que el
txico se encuentre dentro del organismo es la prueba de que existi la
exposicin.

El diseo del muestreo biolgico consiste en seleccionar el medio biolgico que se

va a muestrear, la especie qumica que se deber analizar y el tiempo al que se
deber tomar la muestra. Es necesario asegurarse que las condiciones de
muestreo sean las que proporcionen observaciones de valores representativos del
nivel del txico en el organismo.

El anlisis del cabello es uno de los mtodos ms eficaces para detectar el

consumo de drogas e informar sobre el estado y el historial de dependencia de un
paciente, segn un estudio del Colegio Oficial de Farmacuticos de Madrid
(COFM), la Facultad de Farmacia y el Centro de Espectrometra Atmica de la
Facultad de Geolgicas de la Universidad Complutense de Madrid publicado en el
ltimo nmero de la revista cientfica 'Schironia'.

Adems de averiguar si un individuo est o no consumiendo drogas, este test

permite distinguir los distintos perfiles de consumidores --espordico, asiduo,
crnico o no consumidor--, ya que detecta el tiempo de permanencia de la droga
durante meses o aos, frente a las horas de las muestras de sangre o los tres das
de la orina.

En los casos de consumo de cocana, el anlisis del cabello ofrece una fiabilidad
diagnstica del cien por cien frente a la informacin obtenida en las entrevistas
personales. Adems, permite evaluar, por ejemplo en el caso de mujeres
embarazadas, el riesgo de que esta droga se incorpore al feto.

OBJETIVO: Determinar la presencia de txicos en orina y cabello.

MATERIAL

~9~
-Vasos de precipitados de 250 ml

-Mortero con pistilo

-Pipetas de 0.5-5 ml

-Alcuotas

METODOLOGA

1. Lavar el cabello por 30 minutos a temperatura ambiente y enjuagar con

agua destilada.
2. Efectuar un segundo lavado con etanol hasta considerar la remocin.
3. Dejar secar o ayudar a secar el etanol
4. Pesar la masa de cabello y pulverizar.
5. Sumergir la muestra pulverizada en 2 ml de ac. Clorhdrico. 0.1 M en bao
Mara por un tiempo de 30 a 40 min.
6. Medir el pH en caso de ser necesario ajustar un ph de 9 10 con
amoniaco.
7. Realizar una extraccin con una mezcla de etanol al 20 % y cloroformo
posteriormente agregar sulfato de sodio anhidro.
8. Se parar una alcuota de 2 ml llevarlo al espectrofotmetro a 540 nm

* Nota: Se aade etanol hasta cubrir la masa de cabello

**Nota: 2 partes de etanol por 5 de cloroformo

CUESTIONARIO

1. Explique la razn por la cual se utiliza el pelo para determinar la presencia de

drogas.

2. Que otros tejidos, rganos o fluidos secretados por el ser humano se pueden
utilizar para este tipo de estudios.

3. Mencione 5 tipos de drogas de uso frecuente y explique la toxicocintica en el

ser humano.

BIBLIOGRAFIA

http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia
%20general/notas_de_microbiologia_de_los_al.htm

~ 10 ~
http://www.europapress.es/salud/noticia-analisis-cabello-permite-detectar-
consumo-drogas-tipo-adiccion-estado-paciente-20080717190413.html

PRCTICA 4

Determinacin del AAS en orina

OBJETIVO:

Determinacin de Acido Acetil-Salicilico (AAS) en orina.

~ 11 ~
GENERALIDADES:

El acido acetilsalicilico se administra usualmente por va oral, aunque puede ser

administrado por va rectal en forma de supositorios. Se absorbe rpidamente por
el tracto digestivo si bien las concentraciones intragastricas y el pH del jugo
gstrico afectan su absorcin. La aspirina es hidrolizada parcialmente a acido
saliclico durante el primer paso a travs del hgado y se distribuye ampliamente
por todos los tejidos del organismo.

La aspirina se une poco a las protenas del plasma, pero debe ser administrada
con precaucin a pacientes tratados con frmacos que se fijan fuertemente a las
protenas del plasma, como es el caso de los anticoagulantes y antidiabticos
orales.

Despus de la administracin oral y dependiendo de las dosis administradas se

observan salicilatos en plasma a los 5-30 minutos y las concentraciones mximas
se obtienen a los 0.25-2 horas. Las concentraciones plasmticas deben de ser de
por lo menos 100 g/ml para obtener un efecto analgsico y se observan efectos
txicos con concentraciones superiores a 400 g/ml. La aspirina se metaboliza en
un 99% a salicilato y otros metanolitos. La semi-vida de eliminacin del plasma es
de 15 a 20 minutos. Los salicilatos, pero no la aspirina, experimentan una cintica
de Michaelis-Menten (saturable).

En dosis bajas, la eliminacin es de primer orden y la semi-vida permanece

constante con un valor de 2-3 horas; sin embargo, con dosis ms altas, las
enzimas responsables del metabolismo se saturan y la semi-vida de eliminacion
puede aumentar a 15-30 horas. Por esta razn, se requieren entre 5 y 7 das para
alcanzarse unas condiciones de equilibrio ("Steady state").

Los salicilatos y sus metabolitos se eliminan principalmente por via renal, siendo
excretada por la orina la mayor parte de la dosis.

Aproximadamente el 75% de la dosis se encuentra en forma de acido salicilurico,

mientras que el 15% esta en forma de conjugados, sobre todo mono- y
diglucuronidos. El 10% restante esta constituido por salicilato libre. La
alcalinizacin de la orina aumenta la eliminacion de salicilato, pero no la de otros
metabolitos.

~ 12 ~
MATERIAL:

Tubos de ensaye de 13 x 100

1 Pipeta automtica de 200 ul

Puntillas para pipeta automtica

Gradilla

2 pipetas de 1ml

MATERIAL BIOLGICO:

Orina.

EQUIPO:

Espectrofotmetro

REACTIVOS:

Agua destilada

Reactivo de color

Acido Fosfrico.

~ 13 ~
TECNICA:

CALCULOS:

(mg/100 ml Problema mg/100 ml Testigo) (Factor de Dilucin)

(Abs. Problema Abs. Testigo) (Factor de Dilucin)

Donde:

Factor de Dilucin: 10
Abs. Problema: 0.085 nm.
Abs. Testigo: 0.010 nm.

El acido acetilsalicilico se absorbe rpida y completamente. Su absorcin puede

variar dependiendo de la disolucin del comprimido el pH y los alimentos. La vida
media del acido acetilsalicilico de 15 a 20 minutos para la molcula intacta. El
tiempo para la concentracin mxima es de 1 a 2 horas para el acido
acetilsalicilico. El acido acetilsalicilico se elimina por va renal en forma libre y
como metabolitos conjugados.

CUESTIONARIO

~ 14 ~
1. Por qu a un paciente con dengue no le es conveniente consumir cido
acetilsaliclico? Qu reaccin se provoca en el organismo?

2. Extrapola e interpola las diluciones y realiza los clculos respectivos.

3. Investiga a que familia de frmacos pertenece el cido acetilsalicclico y que

otros frmacos de importancia clnica estn en la misma familia.

BIBLIOGRAFA

http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farma04/a015.htm

http://www.aspirina.com/aspirina01.htm

PRCTICA 5

DETERMINACIN DE FLAVONOIDES

Introduccin

Los flavonoides pertenecen a un grupo de compuestos naturales arreglados

bajo un sistema C6-C3-C6, en el cual dos anillos aromticos llamados A y B estn
unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo,
que en caso de existir es llamado anillo C. Se conoce como 10 clases de
flavonoides los cuales pueden encontrarse como aglicona o bajo la forma de
glicsidos con una o tres unidades de azcar, generalmente en los carbonos 3 y/o
7, siendo los azucares ms comunes la glucosa, galactosa, ramnosa, xilosa y
arabinosa. Es frecuente que diferentes azcares se hallen unidas a una misma
aglicona y en diferentes posiciones lo que hace mayor el nmero de glicsidos
~ 15 ~
conocidos; es tambin comn, que se encuentren en mezclas como agliconas y/o
glicsidos, aun de las diferentes clases siendo esto ltimo lo ms frecuente.

Se hallan presente en todas las partes de la planta, algunas clases se encuentran

ms ampliamente distribuidas que otras, siendo ms comunes las flavonas y
flavonoles y ms restringidos en su ocurrencia las isoflavonas, las chalconas y
auronas.

Aunque los flavonoides han sido empleados desde mucho tiempo como colorantes
de lana, se les atribuye diversas propiedades en las plantas, entre ellos podemos
citar (a) proteccin a los vegetales contra la incidencia de rayos ultravioleta y
visible, as como proteccin contra insectos, hongos virus y bacterias, (b)
atrayentes de animales con finalidad de polinizacin, (c) antioxidantes, (d) control
de la accin de las hormonas vegetales, (e) agentes alelopticas y (f) inhibidora de
las enzimas. Por otro lado, estos compuestos poseen tambin importancia
farmacolgica, resultado de algunas propiedades importantes atribuidas a algunos
representantes de las diferentes clases, como por ejemplo, antiinflamatorio,
antialrgico, antiulcerognico, antiviral, anticarcinognico; asimismo, son utilizados
para el tratamiento de la fragilidad capilar, de la diabetes, de las afecciones
cardiacas, entre otras.

Como caractersticas generales de estos compuestos debemos sealar su

solubilidad en agua y etanol, su carcter fenlico y su intensa absorcin en la
regin ultravioleta y visible del espectro debido a la presencia de sistemas
aromticos conjugados. Una clasificacin preliminar del tipo de flavonoide en un
extracto de planta, puede hacerse basado inicialmente en un estudio de sus
propiedades de solubilidad y de comportamiento ante reacciones de color; esto,
seguido por un examen cromatogrfico directamente del extracto y/o del extracto
hidrolizado.

En este experimento se describen los ensayos a realizar para detectar la

presencia de flavonoides en un extracto a travs de una sencilla reaccin de
coloracin y una cromatografa de capa delgada utilizando agentes cromognicos
adecuados. Para el ensayo cuantitativo es usual desarrollarlo de dos maneras, por
espectrofotometra ultravioleta visible utilizando reactivo de desplazamiento para
la determinacin de flavonoides totales y por cromatografa lquida de alta
resolucin. En esta prctica se est considerando el primer mtodo. Como
material vegetal puede utilizarse la manzanilla, la ruda, especies de geranio, entre
otras.

~ 16 ~
2. Procedimiento Experimental

2.1 Anlisis cualitativo

A. Tratamiento de muestra:

Pese 1g de muestra seca y pulverizada en un erlenmeyer de 50 mL, aada 5mL

de metanol y caliente por 10 minutos a 60C (s es posible hacerlo en el
ultrasonido). Filtre sobre un vial (extracto A).

B. Prueba a la gota: reaccin de Shinoda Coloque 20 gotas del extracto A en un

tubo de ensayo (o en una placa de toque), agregue 2 a 3 virutas de Magnesio y
unas gotas de cido clorhdrico concentrado. Observe el cambio de coloracin.

C. Cromatografa de capa delgada.

Utilice cromatofolio de slica gel 60F254 (Merck) de 10 cm x 3 cm.

Aplique 30 del extracto A a 1cm del borde inferior. La fase mvil es acetato de
etilo: metano : agua (100: 13.5: 10). Deje saturar la cmara cromatogrfica
(dimetro: 8cm, altura: 11cm).

Coloque la placa cromatogrfica en la cmara y deje hasta que la fase mvil se

mueva aproximadamente 8 cm del origen. Puede tambin ensayar con el sistema
acetato de etilo: cido actico. cido frmico: agua (100:11:11:26).

El anlisis cualitativo es muy simple de realizar. Para la cromatografa de capa

delgada se prefiere utilizar los cromatofolios de aluminio, los que pueden ser
adquiridos comercialmente, a fin de ahorrar tiempo, con la ventaja adicional que
puede ser utilizado al momento con otras dimensiones. Los solventes utilizados
son de uso comn y el revelado de las placas podra ser hecho con solucin
etanlica de cloruro frrico de no contarse con el NP-PEG.

CUESTIONARIO.

-Investigar que derivados vegetales o animales poseen flavonoides.

~ 17 ~
-Explique ejemplos particulares en la salud y en la ecologa en el que los
flavonoides tienen importancia.

4. Bibliografa

1. Lock, O. Investigacin Fitoqumica, Mtodo en el Estudio de Productos

Naturales. Fondo Editorial PUCP. Lima. 1994, pp. 114-130

2. Mabry, T.J., Markham, K.R. and Thomas, M.B., The Systematic Identification of
Flavonoids. Springer-Verlag, Berln. 1970, pp

3. Oliveira, C.M., et. al. Farmacognosia, da Planta ao Medicamento. Editora

DAUFSC, Florianapolis. 1999, pp. 489-493

4. Wagner, H., Bladt, S., Zgainski, E.M., Plant Drug Analysis A Thin Layer
Chromatography. Springer-Verlag, Berln. 1996, pp

5. Park, Y., Koo, M., Ikegaki, M., Contado, J., Comparison of the flavonoid
aglycone contents of Apis mellifera propolis from various regions of Brazil. Arq.
Biol. Tecnol. (1997) 40 (1), 97-106.

PRCTICA 6

DETERMINACIN DE TETRAHIDROCANABINNOL USANDO EL REACTIVO

DE DUQUENOIS

INTRODUCCIN

Prueba de Duquenosis - Levine. 200 mg. de la muestra con 25 ml. de ter de

petrleo, filtrar y evaporar a sequedad en bao de mara, luego agregar 2 ml. de
reactivo de Duquenosis.

Agregar 2 ml. de HCL y dejar en reposo por 10 minutos.

~ 18 ~
Observar los cambios de color. La coloracin violeta es debido al flurogucinol.
Trasvasar la solucin a un tubo de ensayo, agregar 2 ml. de cloroformo y agitar si
la marihuana est presente en la muestra el color violeta pasar a la capa
orgnica.

Disolver 0.5 ml. de acetaldehdo y 0.4 g. de vainillina en 20 ml. de alcohol de 95.

OBJETIVO: Determinacin de Cannabis sativa por destilacin con un solvente

orgnico.

MATERIAL:

2 Soporte Universal.

1 Refrigerante.

2 Pinza de 3 dedos.

1 Matraz de baln.

1 Mechero Bunsen.

1 Tripie.

1 Tela de Asbesto.

2 Mangueras.

1 Vaso precipitado.

REACTIVOS:

Duquenosis.

Cloroformo.

ter de petrleo.

Benceno.

~ 19 ~
PREPARACION DE DUQUENOIS:

1.- 0.5 ml de acetaldehdo mas 1 g de vainillina (extracto de vainilla) y aforar a 50

ml con alcohol etlico.

MATERIAL BIOLOGICO:

Cannabis Sativa.

TECNICA:

1.- A una porcin de material sospechoso se le agrega de 50 a 100 ml del solvente

indicado (cloroformo).

2.- Se hierve hasta obtener la esencia de la hierba (extracto).

3.- Se coloca 1 ml del extracto en un tubo de ensayo se agrega de 1 a 2 ml del

reactivo Duquenosis, se agita 1 minuto.

4.- Y se le aade 1 ml de acido clorhdrico concentrado este tomara si es positivo

una coloracin que puede ir dependiendo de la concentracin rosa, violeta, verde
y finalmente azul oscuro.

5.- Por ltimo aadir de 2 a 5 gotas de cloroformo, si el color pasa a la capa

clorofrmica va ser positivo.

ESQUEMA:

OBSERVACIONES Y RESULTADOS:

Al extraer el principio activo de la Cannabis sativa, y realizar las reacciones

qumicas al agregar los reactivos de Duquenosis, acido clorhdrico y cloroformo, se
~ 20 ~
comprueba la existencia de THC en el extracto obtenido, por lo tanto el resultado
obtenido de esta prctica, es positivo la presencia de Cannabis Sativa en la
muestra sospechosa.

CONCLUSION: Los avances cientficos y tecnolgicos han posibilitado la

aparicin de procedimientos de purificacin de los principios activos de las drogas
y las sntesis de otro similares. Por otra parte por medio de la destilacin se
obtiene el extracto de la muestra sospechosa, por lo cual es una tcnica sencilla y
rpida de realizar, mostrando resultados precisos para confirmar la presencia de
ciertas sustancias en la muestra a examinar.

BIBLIOGRAFIA: Enciclopedia de tecnologa qumica. 1961. Tomo I. Editorial

Unin tipogrfica hispanoamericana.

Mxico Encarta 1999.

PRACTICA 7

Identificacin de txicos en leche

Introduccin

La leche representa un alimento importante para el humano, sin embargo por las
diferentes caractersticas y manejo efectuado al alimento, este es contaminado
con sustancias agrcolas, tales como herbicidas, insecticidas, fungicidas y hasta
medicamentos para el ganado como: antihistamnicos, antipirticos, antibiticos y
anablicos.

Objetivo

~ 21 ~
Material

Tcnica

Observaciones y resultados

Conclusin

Bibliografa

PRACTICA 8

Txicos en suelos

Introduccin

Objetivo

~ 22 ~
Material

Tcnica

Observaciones y resultados

Conclusin

Bibliografa

PRACTICA 9

Identificacin de txicos en frutos

Introduccin

Los residuos txicos de herbicidas, insecticidas y acaricidas fueron hallados en

alimentos naturales de consumo masivo en todo el pas. Hoy cada alimento
parece esconder un enemigo agazapado. Mientras los padres huyen de la
traicionera Scherichia coli y los vegetarianos buscan sustitutos de la carne, los
cientficos se ocupan cada vez ms de los residuos de plaguicidas presentes en
lcteos, granos, frutas y verduras: un mal bocado que inquieta a los grandes
~ 23 ~
importadores, como la Unin Europea, Rusia y los Estados Unidos. Segn los
expertos, los plaguicidas viven decenas de aos en la tierra y se trasladan muchas
veces con los vientos o son comidos por las vacas junto con el pasto, y as entran
a la cadena alimentaria hasta llegar a la leche que se consume en los hogares.
Gusto amargo. Malezas, insectos, caros, gusanos, caracoles y hongos son
algunos de los blancos preferidos de los plaguicidas, venenos con apellido
(tambin se los llama fitosanitarios o agrotxicos) que cuentan con ejrcitos de
defensores agropecuarios que invocan el uso y la dosificacin responsables de las
sustancias y el perodo de carencia. Esto ltimo se refiere al tiempo que, en
teora, debe transcurrir entre la fumigacin y la cosecha para que el consumo del
producto no sea txico. El problema es que estas buenas prcticas agrcolas no
siempre se cumplen. En algunos productores rurales hay un gran
desconocimiento de la normativa vigente y de los plaguicidas adecuados para
cada hortaliza o fruta, Tambin falta crear conciencia sobre los daos que puede
causar en el medio ambiente, al acumularse en suelos y aguas, y sus efectos
adversos en el ser humano, ya que muchos son cancergenos.

Objetivo

Identificacin de agentes contaminantes en las frutas de consumo comn.

Material

Material vegetal
Cetona
ter de petrleo
Mortero con pistilo
Agitador
Matraz Erlenmeyer
Probeta
Embudo de separacin
~ 24 ~
 Vaso de precipitado
Soporte universal
Papel filtro.

Tcnica

a) Macerar las frutas o verduras que tuvisemos para la identificacin.

b) A 100 gramos del macerado, agregarle 200 ml de cetona, mezclar y agitar
perfectamente por un tiempo de 2 minutos.
c) Posteriormente filtrar en una probeta y obtener 40 ml de la mezcla filtrada.
d) Obtenidos los 40 ml de la mezcla se le agrega ter de petrleo y se agita,
vertiendo rpidamente al embudo de separacin y tapando este a su vez
para evitar se volatilice.
e) Observamos la reaccin, y se paramos las capas, para as poder observarlo
al espectrofotmetro.

Observaciones y resultados

Los diversos vegetales o en este caso de frutos, poseen alguna sustancia txica
que en determinado momento puede generar algn impacto a la salud del
consumidor al rebasar las cantidades que ndica el Codex alimentarius.

Conclusin

Con la tcnica planteada es posible obtener informacin acerca de los

agroqumicos empleados en el cultivo.

Bibliografa

http://plagbol.org.bo/prensa/blog/2006/11/22/varios_estudios_en_argentina_detect
aron_restos_toxicos_de_plaguicidas_en_alimentos_de_gran_consumo.

~ 25 ~
 PRACTICA 10

Identificacin de sustancias txicas forenses (alcaloides)

Introduccin

Los ALCALOIDES: Sustancias normalmente producidas por los vegetales con un

nitrgeno en su molcula que les proporciona propiedades bsicas. Los alcaloides
fueron los primeros principios activos que se lograron aislar de las plantas. Se
trata de sustancias biolgicamente muy activas ya en pequeas dosis, as pues si
no se controla su posologa pueden producir toxicidad. Los alcaloides han sido
utilizados desde siempre, aunque en la antigedad solamente con fines mgico-
religiosos pues existen alcaloides que pueden llegar a producir alucinaciones,
alteraciones de la percepcin orgnica, etc. No en vano algunos de los ms
potentes estupefacientes deben su actividad a los alcaloides. Existe una gran
variedad de estructuras qumicas dentro de los alcaloides y ello es la causa de la
gran cantidad de acciones farmacolgicas diferentes que pueden ejercer. Son
muchos y muy variados los ejemplos: MORFINA (procedente del OPIO). Usada en
tratamientos sintomticos del dolor, para disminuir el peristaltismo intestinal as
como las secreciones bronquiales y adems como calmante de la tos. COCANA
(procedente de la hoja de COCA). Es un excitante del sistema nervioso y un tnico
que ayuda a soportar grandes fatigas. Tambin se ha utilizado como un excelente
anestsico local por su accin especfica sobre los nervios perifricos.
TEOBROMINA (procedente del CACAO). CAFENA (procedente del CAF y del
~ 26 ~
T). Ambos aceleran el ritmo cardaco, disminuyen la fatiga y aumentan la
diuresis. ATROPINA (procedente de la BELLADONA). Posee una accin
antiespasmdica y adems disminuye la secrecin sudoral. Tambin es un
alcaloide la PILOCARPINA (procedente del JABORANDI) que aumenta el
peristaltismo intestinal (accin contraria a la MORFINA) y produce hipersecrecin
sudoral (a diferencia de la ATROPINA). ERGOTAMINA (procedente del
CORNEZUELO DEL CENTENO). Actualmente usado como antimigraoso.
RESERPINA (procedente de la RAUWOLFIA). Posee una accin claramente
hipotensora. COLCHICINA (procedente del CLCHICO). Antitrmico y
antidoloroso muy utilizado en casos de gota.

Objetivo

Tanto extraer como identificar que plantas contienen alcaloides y en que

cantidades son txicos para el humano.

Material

Material vegetal
Cloroformo
Pinzas
Mechero
Mortero con pistilo
Tripie
Tubos de ensayo
Rejillas para tubo de ensayo
Agitador
Matraz Erlenmeyer.

Tcnica

1) Al material vegetal macerarlo y agregarle de 50 a 100ml de cloroformo.

2) Hervir hasta obtener un concentrado.
3) Obtener 1ml en el tubo de ensaye y agregar de 1-2 ml de reactivo de
Duquenois levine, agitar de 1 min. en adelante

Cuantificacin:
~ 27 ~
Se requiere del espectrofotmetro.
1) Acetaldehdo
Partes iguales.
2) cido clorhdrico concentrado
3) Cloroformo.

4) Aadir 1ml de cido clorhdrico y observar una coloracin rosa hasta un

azul.
5) Aadir de 2-5 gotas de cloroformo y observar el cambio de la coloracin.

Observaciones y resultados

Las plantas con mayor posibilidad de encontrar alcaloides corresponde a:

toloache, floripondio y huele de noche principalmente.

Conclusin

La mayora de estas plantas contienen alcaloides en menor o mayor proporcin,

pero se encuentran presentes para identificarlas con la presente tcnica.

Bibliografa

http://inistor.galeon.com/pagina2.htm

~ 28 ~
~ 29 ~