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UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE

FACULTAD DE QUMICA Y BIOLOGA


PRINCIPIOS DE SISTEMAS CELULARES

FOTOSNTESIS Y EFICIENCIA FOTOSINTTICA

INTEGRANTES: Francis Gonzlez

Javiera Tapia

PROFESOR: Eduardo Lpez

AYUDANTE: Rafael Berrios

FECHA DE ENTREGA: 23 de junio de 2017


1. INTRODUCCIN
La fotosntesis incluye todos los procesos por los cuales la energa lumnica absorbida es utilizada
para impulsar la sntesis biolgica. Este proceso es realizado por organismos auttrofos como las
plantas verdes, algas y algunas bacterias.
Para que los sistemas vivos puedan utilizar la energa lumnica, sta primero debe ser absorbida.
Esta funcin tiene lugar en los cloroplastos en donde se encuentran los pigmentos y enzimas
necesarias.
Diferentes pigmentos absorben energa lumnica a diferentes longitudes de onda. Diversos grupos
de plantas y algas tienen varios pigmentos asociados a la fotosntesis. En las plantas, la clorofila a
es el pigmento involucrado directamente en la transformacin de energa lumnica en energa
qumica. La mayora de las clulas fotosintticas tambin contienen un segundo tipo de clorofila (su
diferencia radica en la frmula molecular), la clorofila b que absorben luz de longitudes de onda
diferentes de las que absorbe la clorofila a (Barnes, 2006).
La clorofila y otras molculas estn empaquetadas en los tilacoides en complejos de varias protenas
llamadas fotosistemas. Cada unidad contiene unas 300 molculas de pigmentos que actan como
antenas recolectoras de luz. Existen dos fotosistemas diferentes, en el fotosistema I, la molcula
reactiva de clorofila a tiene un pico de absorcin de alrededor de 700 nanmetros y se conoce como
P700. El fotosistema II se conoce como P680, tanto el P700 como el P680 se encuentran en intima
asociacin con polipptidos integrales de la membrana tilacoide (Barnes, 2006).
En el proceso de fotosntesis existen dos etapas: la etapa dependiente de la luz (fase fotoqumica) y
la independiente de la luz (fase bioqumica). En la primera etapa la luz es absorbida por las
molculas de clorofila a. Los electrones de las molculas de clorofila a son lanzados a niveles
energticos superiores y se mueven a lo largo de la membrana tilacoide por una cadena de
molculas transportadoras de electrones hasta que llegan al aceptor final, el NADP +. El NADP+ se
reduce al recibir dos electrones y un protn y forma NADPH. El transporte de electrones esta
acoplado al movimiento de protones desde la estroma al interior del tilacoide. Cuando los protones
regresan a la estroma, impulsados por el gradiente de potencial electroqumico, a travs de canales
especficos, se sintetiza ATP a partir de ADP y fosfato inorgnico. En esta primera etapa tambin se
escinden molculas de agua. Esta escisin produce oxgeno libre que se difunde hacia el exterior.
En la segunda etapa ocurren las reacciones que fijan el carbono, el ATP y el NAPH formados en la
primera etapa, reducen el carbono del CO2 a un azcar simple. As la energa qumica almacenada
temporalmente en las molculas de ATP y de NADPH se transfiere a molculas que transportan y
almacenan energa en las clulas de algas o plantas (Barnes, 2006).

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La eficiencia con la cual los electrones son procesados en la fotosntesis por cantidad de luz
absorbida, se denomina eficiencia fotosinttica (mxima eficiencia quntica del fotosistema II). sta
se expresa como la relacin Fv/Fm, donde Fv es la mxima capacidad de quenching fotoqumico y
Fm es la fluorescencia mxima de la clorofila obtenido para intensidad de luz continua. En plantas
saludables que no han sido expuestas a ningn tipo de estrs bitico o abitico la relacin Fv/Fm
tomar un valor mximo de 0,85. (Sanclemente, 2007).
Como producto de la fotosntesis, se forma un esqueleto de carbono a partir del cual puede
construirse una variedad de molculas orgnicas, siendo los carbohidratos la mayor parte de los
componentes vegetales. Los azcares como la glucosa, fructosa y sacarosa se acumulan
especialmente en el jugo celular; los almidones son los carbohidratos de reserva y se encuentran en
forma de plastidios. Dada la importancia de estos compuestos se han desarrollado varios mtodos
para su determinacin (Cristancho, 2014). En este prctico se utilizar el mtodo de reaccin con
antrona sulfrica y lugol, para la determinacin del contenido de azcares totales y determinacin
del contenido de almidn, respectivamente. Esperndose la obtencin de una elevada cantidad de
almidn almacenada como reserva energtica en las hojas senescentes de la planta en estudio.

2. OBJETIVOS

2.1 Objetivo general: Estudiar el proceso de fotosntesis, por medio de la extraccin de los
pigmentos que intervienen mismo y las reservas energticas almacenadas en las hojas
senescentes de la planta.

2.2 Objetivos especficos:


Medir la eficiencia fotosinttica de una muestra de hojas senescentes de una planta con el
PEA, Hansatech.
Medir la absorbancia de la muestra a 665 y 649 nanmetros y determinar la concentracin
de clorofilas a y b.
Determinar el contenido de azcares totales de la muestra.
Determinar el contenido de almidn de la muestra.

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3. MATERIALES Y MTODOS

3.1 Se seleccionaron y cortaron hojas que estuviera en fase de induccin a la abscisin

3.2 Se masaron tres porciones de hojas, una de 100 mg y dos de 500 mg.

3.3 Se agreg un volumen de nitrgeno lquido al mortero y se hicieron movimiento circulares para
enfriarlo completamente.

3.4 Se agregaron los 100 mg de hoja al mortero frio y se volvi agregar nitrgeno lquido.

3.5 Se molieron las hojas lo mximo posible.

3.6 Se aadieron 200 l de acetona 80% a las hojas molidas para macerarlas y luego se traspas la
mezcla a un tubo Eppendorf.

3.7 Se lav y sec el mortero para luego volver a enfriarlo con nitrgeno lquido.

3.8 Se repitieron los pasos 3.4 y 3.5 pero con 500 mg de hojas.

3.9 Se aaden 500 l de etanol fro 80% para macerar las hojas molidas y luego se traspasa la
mezcla a tubo Eppendorf.

3.10 Se repite el paso 3.8 y el 3.9, pero con 1 ml de agua en vez de etanol.

3.11 Se preparan tres tubos Eppendorf, cada uno con el mismo volumen en agua que cada una de las
muestras.

3.12 Se ponen las muestras en el equipo en paralelo con el tubo que contiene mismo volumen en
agua y se centrifug a mxima velocidad.

3.13 Al sobrenadante de la muestra con acetona se le aadieron 1300 l de acetona 25% y se agit
para mezclar.

3.14 Del sobrenadante de la muestra con etanol se recuperaron 100 l y se le agregaron 900 l de
antrona sulfrica, se dejaron reaccionando por ms de 15 minutos.

3.15 Se tomaron 50 l del sobrenadante de la muestra con agua y se mezclaron con 950 l de
solucin de lugol y se dejaron reaccionando por ms de un minuto.

3.16 Se dejaron dos hojas en las pinzas para medicin de eficiencia con el haz de la hoja hacia la
abertura, la cual se dej cerrada.

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3.17 Se prepararon las muestras control en cubetas para medir la absorbancia.

3.18 Se traspasaron las muestras preparadas a cubetas y se llevaron estas y las control al
espectrofotmetro.

3.19 Las muestras de acetona se midieron a 665 y 649 nm, las con etanol a 620 nm y las con agua a
583nm.

3.20 Se midi la eficiencia fotosinttica de las hojas.

4. RESULTADOS

4.1 Eficiencia fotosinttica.

Tabla 4.1: Datos entregados por el equipo PEA, para dos muestras de hojas senescentes.
Muestra Fv Fm Fv/Fm
1 1180 1907 0,618
2 1694 2211 0,766

Se observa en la tabla 4.1 los resultados obtenidos al medir la eficiencia fotosinttica, utilizando el
PEA, para dos muestras diferentes de hojas.

4.2 Clorofilas.

Tabla 4.2: Absorbancia medida a 649 nm y 665 nm, para una muestra de 0,1 g de hojas.
Absorbancia
Longitud de onda (nm) Hojas verdes Hojas amarillentas Hojas amarillas
649 0,431 0,048 0,013
665 0,535 0,074 0,007

En la tabla 4.2 se observan los resultados obtenidos en la medicin de la absorbancia para una
muestra de 0,1 g de hojas en distintos estados de maduracin, obtenidas para determinar la
concentracin de cada clorofila en la planta, mediante las siguientes ecuaciones.


= 13,96 (665) 6,88 (649)


= 24,96 (649) 7,32 (665)

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Tabla 4.3: Concentracin de clorofila a y clorofila b.

Concentracin

Clorofila Hojas verdes Hojas amarillentas Hojas amarillas


a 4,5033 0,7028 0,0083
b 6,8416 0,6564 0,2732

Se observa en la tabla 4.3 que la concentracin de clorofilas disminuye con el envejecimiento de las
hojas.

4.3 Contenido azucares totales y almidn.

Tabla 4.4: Absorbancia medida a dos muestras de 0,5 g de hojas a 583 y 620 nm.

Hojas verdes Hojas amarillentas Hojas amarillas


Absorbancia (A) a 583 nm 0,593 0,148 0,041
Absorbancia (B) a 620 nm 3,00 2,59 2,76

En la tabla 4.3 se muestran los resultados de absorbancia obtenidos para dos muestras diferentes: la
absorbancia (A), para una muestra de 0,5 g de hojas extradas con agua y mezclada con una
solucin de lugol, obtenida para determinar el contenido de almidn en la planta y la absorbancia
(B), para una muestra de 0,5 g de hojas senescentes extradas con etanol y mezclada con el reactivo
antrona sulfrica, obtenida para determinar el contenido de azcares totales en la planta.

5. DISCUSIONES

La senescencia es un proceso gentico que afecta los tejidos de la planta debido a que la cantidad de
auxina de la hoja disminuye y el nivel de etileno aumenta, esta mejorada produccin de etileno se
asocia a la perdida de clorofila y desvanecimiento del color observado en las hojas estudiadas.

La eficiencia fotosinttica de las dos hojas evaluadas fue inferior a 0,85 como se observa en la tabla
4.1, demostrando que el estado de senescencia genera estrs bitico en la planta reducindose su
capacidad de realizar quenching fotoqumico de energa en el fotosistema II.

Debido al estado de induccin a la abscisin en el que estn las hojas, la concentracin de


clorofilas, tanto a como b, disminuyen con la maduracin de las hojas como se muestra en la tabla

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4.3 y es debido a esta degradacin de clorofilas y a que pigmentos como las xantofilas son ms
resistentes que las hojas se aprecian cada vez mas amarillas en el proceso de envejecimiento.

La absorcin de azucares es menor para hojas ms viejas, expuesto en la tabla 4.4, debido a que a
medida que envejece la planta hay perdida de clorofilas y se reduce la capacidad del fotosistema II,
de modo que se dificulta la fotosntesis y se reduce el contenido de azucares. Adems de la
experimentacin se puede confirmar el contenido de almidn en las muestras ya que al agregar
lugol a las muestras estar se tornaron azul oscuro

6. CONCLUSIONES
Para dos hojas en induccin a la abscisin la eficiencia fotosinttica es 0,618 y 0,766. Al extraer 0,1

g de estas hojas con acetona 80% se obtuvo 0,7028 de clorofilas a y 0,6564 de clorofilas

b. De la extraccin mediante agua y etanol, se determin que con la senescencia el contenido de


azcares disminuye, lo que se ve expresado en menores absorciones.

7. REFERENCIAS
7.1 Barnes N, Curtis H, Flores G. (2006). Invitacin a la Biologa. 6a Ed. Editorial Mdica
Panamericana. (Buenos aires). pp: 80-85.

7.2 Cristancho L, Monroy R. (2014). Manual de mtodos generales para determinacin de


carbohidratos. Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia. (Tunja) pp: 2-3.

7.3 Sanclemente M, Pea E. (2007). Crecimiento y eficiencia fotosinttica de Ludwigiadecurrens


Walter bajo diferentes concentraciones de nitrgeno. Acta Biolgica Colombiana. Vol 13 N 1: pp:
178

7.4 Taiz L., Zeiger E. (2002). Plant physology 3 Ed. Editorial Universitat Juame. (Castello de la
plana). pp: 171, 172, 528, 529.