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Cmara de electroforesis
La cmara de electroforesis es un
dispositivo que permite la generacin de
un campo elctrico alrededor de un gel
donde se depositan las muestras. Este
campo se genera dentro de una solucin
amortiguadora en la que se encuentra
sumergido el gel que contiene las
muestras; el alto contenido de electrolitos
permite la transmisin de la corriente
elctrica, manteniendo el pH estable al
paso de la corriente. La cmara cuenta con
dos polos que se conectan a una fuente de
energa. En las cmaras
de electroforesis vertical el polo positivo
se encuentra en la parte inferior de la
cmara (figura 12-2A) y en las
horizontales, en uno de los extremos
(figura 12-2B). En ambos tipos de cmaras
el polo positivo se distingue con color rojo
y el negativo con negro.
Definicin
La mayora de las biomolculas poseen una carga elctrica, cuya magnitud depende del
pH del medio en el que se encuentran. Como consecuencia, se desplazan cuando se ven
sometidas a un campo elctrico.
Cada molcula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rpidamente una
velocidad constante al equilibrarse la fuerza impulsora (fuerza del campo elctrico) con
la resistencia al avance (fuerza de friccin o rozamiento) impuesta por el medio en el que
se desplaza.
Al ser el medio de soporte a su vez un polielectrolito, est constituido por iones, que son
atrados y as recubren los iones de la muestra, lo que altera el comportamiento de stos
en el campo. Todo ello hace que el tratamiento terico cuantitativo de la electroforesis
sea muy difcil y que esta tcnica resulte poco til para obtener informacin precisa sobre
la estructura de las molculas. Sin embargo, es enormemente til como tcnica analtica
y preparativa.
Papel: sencillo, pero con elevada adsorcin debido a los grupos hidroxilo de la celulosa.
Acetato de celulosa: los grupos OH estn acetilados, lo que reduce la adsorcin; baja
tincin de fondo; es posible transparentarla o disolverla para detectar y recuperar,
respectivamente, los componentes separados.
Almidn: pasta de almidn cuyos granos se han disgregado en un tampn caliente (se
hinchan). Actualmente se utiliza poco, ha sido sustituido por la poliacrilamida.
poliacrilamida
:
(vista parcial)
H-(CH2)12-SO4
Vertical
Se usa casi exclusivamente con gel de poliacrilamida (ms resistente fsicamente, no se
desliza), para protenas o para cidos nucleicos de pequeo tamao.
El gel puede rellenar tubos de vidrio (este formato ya apenas se usa) o estar contenido
entre 2 placas rectangulares.
Contacto elctrico y disolvente gracias al tampn que embebe el gel y llena las cubetas o
compartimentos del nodo y ctodo.
La muestra se deposita con micropipeta llenando un pocillo creado al polimerizar el
gel.
En cuanto a la composicin del gel hay dos variantes: electroforesis continua (un solo
tipo de gel) y electroforesis discontinua (2 tramos de gel de composicin ligeramente
diferente).
ETAPAS DE LA TECNICA DE ELECTROFORESIS