Universidad San Francisco de Quito

Laboratorio de Biologa para Ingenieras

Informe No.1
Influencia de la concentracin en la actividad de la amilasa
Nombres y Apellidos: Andy Josu Espinosa Gutirrez
Profesor: Jaime Guerra Montalvo
Cdigo: 00112229 Seccin L
Fecha: 04/09/2017 Nota: _________/10 Grupo y horario: L, 14:30-16:00

INTRODUCCIN

La saliva es un fluido de gran importancia para la salud (Peng et al., 2012), ya que participa en
funciones bsicas en el mantenimiento de la integridad de tejidos orales (Spielmann et al.,
2011) y puede ser utilizado como un biomarcador para el diagnstico de enfermedades orales
(Martins et al., 2013). La amilasa es una protena muy abundante en la saliva (Bailey et al.,
2012) y es secretada por varias glndulas salivales, tales como la partida, las submandibulares
y las sublinguales (Peng et al., 2012), que realiza la digestin del almidn, glucgeno y otros
polisacridos (Fisher et al., 2006).
La funcin predigestiva de la saliva se realiza con un nmero de enzimas y una gama de
proteasas y nucleasas (Walsh, 2008). La amilasa es capaz de descomponer fculas y glicgenos
en componentes ms pequeos, como dextrinas y maltosa, y al descomponer carbohidratos
complejos la amilasa puede actuar como protector limitado, dado que ciertos carbohidratos
pueden adherirse a los dientes (Walsh, 2008).
En esta prctica se observ la accin de la enzima amilasa sobre el almidn a distintas
concentraciones; se comprob la pre-digestin del almidn mediante el rompimiento de enlaces
glucosdicos empleando el colorante lugol; se observ la fragmentacin del almidn en
componentes; y se observ el proceso de transformacin del almidn a latosa.

METODOS

Se prepar una disolucin de amilasa en un set de 5 tubos de ensayo, los cuales se los numero
del 1 al 5 a cada uno. Luego, se agreg 5mL de agua destilada a cada tubo de este set. Empleando
una probeta, se realiz varias disoluciones de la siguiente manera:
Tubo 1: se aadi 5mL de amilasa y se mezcl frotando el tubo entre las manos.
Tubo 2: se aadi 5mL de solucin de amilasa que se tom del tubo 1 y se mezcl.
Tubo 3: se aadi 5mL de solucin de amilasa del tubo 2 y se mezcl.
Tubo 4: se aadi 5mL de solucin de amilasa del tubo 3 y se mezcl.
Tubo 5 se aadi 5 mL de solucin de amilasa del tubo 4 y se mezcl.
A continuacin, se lav la probeta para emplearla en un nuevo set de 5 tubos de ensayo. Al igual
que con el set 1, se identific los tubos numerando del 1 al 5. Ahora, se empez por el tubo 5
del set 1, y se transfiri 2mL de este tubo al tubo 5 del segundo set, empleando una pipeta de
5mL. Despus, se lav la pipeta en agua destilada y se repiti el procedimiento para los tubos 4,
3 y 2, transfiriendo 2mL al tubo 4 del primer set al tubo 4 del segundo set y sucesivamente, de
modo que el tubo 1 del primer set no fue utilizado. Seguidamente se aadi 40 gotas de pH 6.8
de la solucin buffer a cada tubo del segundo set, y se mezcl los tubos adecuadamente entre
las manos. Luego, se aadi 2 gotas de lugol a cada compartimiento de las cuatro columnas de
la caja de muestras. Utilizando el segundo set de tubos, se emple el tubo 5 de este set para
agregar 1mL de la solucin de almidn 1% a tubo 5 y se lo mezclo frotando entre las manos.
Con esto, se registr el tiempo en el que color azul se modific. De este modo se procedi para
las 4 concentraciones de los tubos 4, 3 y 2 del set2 de los tubos de ensayo. Finalmente, se creo
una tabla en donde se coloc los resultados registrados.

RESULTADOS
 Tabla 1.
Tubo Tiempo [s]
1 36.5
2 79.3
3 127
4 244
5 370

Descripcin de la tabla: Tiempos de reaccin registrados.

Anlisis de la tabla: de los resultados obtenidos se puede observar que el tubo 1 es el que
reaccion ms rpido que los dems tubos, con un tiempo de 36,6 segundos; en tanto que, el
tubo 5 fue el que tard ms al registrar un tiempo de 370 segundos, es decir 6,1 minutos.

400
350
300
Tiempo [s]

250
200
150 Tiempo Reaccin de
100 mezcla [s]
50
0
1 2 3 4 5
Tubos

Figura 1.

Descripcin de la figura: Tiempo de reaccin de los tubos del set 2.

Anlisis de la Figura:

Se analiz los 5 tubos correspondientes al set 2, y para cada tubo se puede observar el tiempo
registrado, y la relacin entre los tiempos correspondientes a cada tubo. Esta figura
muestra una curva en donde se puede observar que el valor mximo es en el tubo 5, y el
valor mnimo es en el tubo 1. Estos resultados mostraron la decoloracin del Lugol al
tornarse de color mbar, pero no siendo un proceso rpido para cada concentracin
contenida en los tubos. Siendo as, el tubo 1 se decolor en pocos segundos por lo que se
puede comprobar que la amilasa se encontraba en las condiciones adecuadas para
degradar al almidn, con un pH casi neutro y temperatura ambiente ideal. Para el caso del
tubo 5, presentaba un color azul intenso que representa la presencia de almidn, pero de
poca amilasa, lo que signific mayor tiempo de degradacin. Entonces, en esta grfica se
puede ver como actu la presencia de amilasa para la degradacin de almidn,
aumentando esta presencia del tubo 5 al 1, conteniendo el tubo 1 mayor cantidad de
amilasa.

DISCUSIN

Est claro que la saliva es un fluido corporal muy importante para la degradacin de
polisacridos (Fisher et al., 2006), y se presenta de manera multifuncional (Scannapieco et al.,
2000). En la mayora de casos su medida ha sido realizada en unidades de actividad enzimtica
por mililitro de saliva (U/mL), de donde la unidad U es definida como la cantidad de enzima que
 cataliza la conversin de 1mM de sustrato por minuto (Neyraud et al., 2012). Al momento de
obtener la saliva para la realizacin de la prctica, se procedi a masticar una lmina a manera
de chicle lo que estimul el flujo salival, ya que, durante la masticacin de chicle la tasa de flujo
alcanza su mximo durante el primer minuto; luego de este punto, se mantiene una tasa alta de
flujo a travs de masticacin continua (Walsh, 2008).
La digestin enzimtica se da en la boca con la enzima generada en las glndulas salivales,
llamada amilasa que acta sobre el almidn que es un polisacrido, y luego es descompuesto en
azucares simples, es decir en monmeros. Esto se observa al momento en que se agrega Lugol
al almidn, y ste cambia su color a azul marino que indica la presencia de almidn, evidenciado
al realizar este proceso para distintas concentraciones de amilasa en los correspondientes tubos
del set 2. Por lo que, a mayor presencia de la enzima el proceso de digestin se cumple de manera
ms rpida, a diferencia de concentraciones en las que la presencia de amilasa no era significante,
para un proceso rpido de digestin.

CONCLUSIN

En esta prctica se realiz una asociacin de la concentracin de la enzima amilasa y almidn,

para comprobar la pre-digestin del almidn. Por lo que, se observ la accin de la enzima
amilasa sobre el almidn a distintas concentraciones, se comprob la pre-digestin del almidn
mediante el rompimiento de enlaces glucosdicos empleando el colorante Lugol, se observ la
fragmentacin del almidn en componentes, y se observ el proceso de transformacin del
almidn a latosa. La presencia de mayor cantidad de amilasa incremento la digestin del
almidn, por lo que con esta enzima es posible tambin aumentar la digestibilidad del almidn
de granos con tasa de digestin lenta e intermedia, logrando mejorar la eficiencia de dietas con
esos granos.
La amilasa degrada el almidn y otros polisacridos, por lo que con ausencia de esta
enzima grandes cadenas de azucares que conforman el almidn, no podran ser
absorbidas por los animales y serian desechados del cuerpo sin poder ser empleados
para obtener energa (Fisher et al., 2006), por lo que esta enzima es muy importante para la
degradacin de polisacridos.

LITERATURA CITADA

Bailey UM, Punyadeera C, Cooper-White JJ, Schulz BL. Analysis of the extreme
diversity of salivary alpha-amylase isoforms generated by physiological
proteolysis using liquid chromatography-tandem mass spectrometry. J
Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2012 Dec 12; 9 11: 21
6

Fisher SZ, Govindasamy L, Tu C, Agbandje-McKenna M, Silverman DN, Rajaniemi

HJ, McKenna R. Structure of human salivary alpha-amylase crystallized in
a C-centered monoclinic space group. Acta Crystallogr Sect F Struct Biol
Cryst Commun. 2006 Feb 1; 62 (Pt 2): 88 93

Martins C, Buczynski AK, Maia LC, Siqueira WL, Castro GF. Salivary proteins as a
biomarker for dental caries-A systematic review. J Dent. 2013 Jan; 41(1):
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Neyraud E, Palicki O, Schwartz C, Nicklaus S, Feron G. Variability of human saliva

composition: possible relationships with fat perception and liking. Arch
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Peng Y, Chen X, Sato T, Rankin SA, Tsuji RF, Ge Y. PuriFcation and high-resolution
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Anal Chem. 2012 Apr 3; 84(7): 3339-46.

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Versin en lnea: http://www.redalyc.org/html/302/30235406/ (Fecha de
cosulta: 15 de Septiembre de 2017).

Scannapieco FA, Torres G, Levine MJ. Salivary alpha-amylase: role in dental plaque and
caries formation. Crit Rev Oral Biol Med. 2000; 4(3-4): 301-7.

Spielmann N, Wong DT. Saliva: diagnostics and therapeutic perspectives. Oral Dis. 2011
May; 17(4): 345-54.

Walsh, L. (2008). Aspectos clnicos de biologa saliva para el Clnico Dental. J Minimum
Intervention Dent. Versin en lnea: http://www.miseeq.com/s-1-1-2.pdf
(Fecha de consulta: 15 Septiembre 2017).