ndice

I. Introduccin
I.A. La contaminacin con hidrocarburos
I.B. El
suelo.
I.B.1. Estructura y componentes del
suelo......
I.B.2. Suelos contaminados con
hidrocarburos...........
I.C. Remediacin de suelos contaminados con
hidrocarburos..............
I.C.1. Tcnicas disponibles para eliminar hidrocarburos
......
I.C.2. Biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos: una tecnologa
Amigable
.
I.C.2.1. Factores que condicionan la biorremediacin de un
suelo........
I.C.2.2. Biorremediacin en reas de clima
fro.....
II. Hiptesis y
objetivos.....
III. Materiales y Mtodo
 BIORREMEDIACION DE LOS SUELOS CONTAMINADOS CON
HIDROCARBUROS EN CLIMA FRIO Y TEMPLADO

INTRODUCCION
I.A. La contaminacin con hidrocarburos: un problema alarmante
El crecimiento demogrfico y la industrializacin amenazan continuamente nuestro
ambiente.
El resultado de esto es la acumulacin de contaminantes qumicos en la biosfera,
especialmente en suelos y sedimentos. Para citar un ejemplo, Estados Unidos
produce anualmente entre 5-20 millones de toneladas mtricas de etileno,
propileno, cloruro de vinilo, benceno y etilbenceno y 1-5 millones de toneladas de
otros productos qumicos orgnicos. Tambin se producen aproximadamente 140
millones de toneladas de polmeros sintticos en todo el mundo. Si solo el 1 % del
crudo producido mundialmente ingresa al ambiente ya sea por derrames,
eliminacin de residuos o volatilizacin, esto equivale a 266 millones de barriles
producidos anualmente.
Muchos qumicos sintetizados en grandes volmenes difieren en su estructura con
los compuestos orgnicos naturales y resultan, por lo tanto, recalcitrantes para ser
biodegradados. Por ejemplo el diesel es utilizado comnmente para el transporte y
la limpieza de mquinas. Este combustible es una mezcla compleja de n-alcanos,
iso y cicloalcanos e hidrocarburos aromticos. Particularmente los hidrocarburos
aromticos son de gran preocupacin por su potencial carcinognico y mutagnico
(White, 2004). Debido a la importante utilizacin del diesel, se generan prdidas
en suelos y aguas subterrneas durante su almacenamiento, derrames
accidentales.
I.B. El suelo
I.B.1. Estructura y componentes del suelo
El suelo se define como la parte superior de la corteza terrestre, y est compuesto
por componentes minerales (meteorizacin de las rocas), componentes orgnicos
(humus y derivados, biomasa viva y muerta), gas (aire en el espacio existente en
los poros), y agua envolviendo partculas y el espacio capilar (Figura I.2). En
trminos generales, est formado por un 50 % de espacio libre (la mitad del
espacio poroso ocupada por gases y la otra mitad por lquidos); un 40-50 % de
slidos minerales (meteorizacin de las rocas) y un 0,5-5% de materia orgnica
(humus y derivados, biomasa viva y muerta) (Brock y Madigan, 2000). El suelo
constituye la interfaz entre la tierra, el aire y el agua, lo que le confiere la
capacidad de desempear tanto funciones naturales como de uso antropognico.
Segn las proporciones de arenas (2-0,05 mm de dimetro), limos (2-50 m de
dimetro), arcillas (inferior a 2 m de dimetro) y materia orgnica, principalmente
humus y derivados, existeuna gran variedad de tipos diferentes de suelos. Los
componentes minerales y la materia orgnica se distribuyen en el espacio
generando una estructura porosa. Los poros pueden contener agua o aire, de
manera que existen tres fases: slida, lquida y gaseosa.
3. La fase slida tiene la propiedad de adsorber molculas biolgicas importantes
como protenas y cidos nuclicos. Por ejemplo, algunas enzimas extracelulares
pueden mantener su actividad siendo adsorbidas por minerales de la arcilla o
atrapadas por los cidos hmicos.
Tambin el ADN puede ser adsorbido a estas estructuras mantenindose su
integridad, posibilitando de esta forma los procesos de transferencia de material
gentico (Transformacin)
4. La superficie de los componentes minerales del suelo pueden catalizar muchas
reacciones Por ejemplo los minerales de las arcillas y Mn (III y IV) y el xido de Fe
(III)catalizan las reacciones de transferencia de electrones como la oxidacin de
fenoles y polifenoles con la formacin de las sustancias hmicas (Nannippieri y
col., 2003).
I.B.2. Suelos contaminados con hidrocarburos
Durante las maniobras de extraccin, procesamiento y transporte de los
hidrocarburos, los suelos estn continuamente sometidos a derrames
accidentales. Cuando un suelo recibe un derrame cambia sus caractersticas,
tanto qumicas como biolgicas. Desde el punto de vista qumico, la principal
modificacin consiste en un incremento enorme del contenido de carbono (C).
Este aporte de C altera la relacin C:N:P.
Desde el punto de vista biolgico, la presencia de los hidrocarburos en un suelo
causa una reduccin notable de la diversidad de las comunidades que lo habitan
(Castle y col., 2006).
Los suelos contaminados suelen diferenciarse en dos categoras, Suelos
contaminados en forma aguda o Suelos contaminados en forma crnicas, en
base a su grado y tiempo de exposicin a los contaminantes.
Un suelo prstino (sin exposicin previa a los hidrocarburos) que recibe de manera
repentina una gran dosis de hidrocarburos puede ser definido como suelo
contaminado en forma aguda. El aporte repentino del contaminante condicionar
el desarrollo de diferentes miembros de la comunidad microbiana, permitiendo el
establecimiento y colonizacin de los mejores adaptados a la nueva condicin. As
mismo, y segn la composicin qumica del contaminante, este se distribuir en la
matriz segn procesos de adsorcin a las partculas del suelo, percolado a zonas
ms profundas, y/o eliminado por volatilizacin.
Por el otro lado, un suelo que sufri un evento de contaminacin que ocurri hace
tiempo o que recibe un evento de contaminacin constantemente, pueden
considerarse como un suelo contaminado en forma crnica.
Los suelos crnicos se distinguen de los agudos porque en los primeros se
pueden encontrar proporciones significativas de microorganismos adaptados a las
condiciones de stress generado por la contaminacin y por lo tanto capaces de
tolerar y degradar los contaminantes. Estos microorganismos han logrado
colonizar el suelo consumiendo las fracciones disponibles y fcilmente
degradables. Consecuentemente y con el transcurso el tiempo, las fracciones
disponibles se irn agotando y se acentuarn los procesos de adsorcin.
Este proceso de envejecimiento se produce por una serie de fenmenos como
son: la adsorcin con la materia particulada del suelo dentro de pequeos poros
(0.2-0.8 mm) inaccesibles para las bacterias; la absorcin a la materia orgnica del
suelo; la baja difusividad de los compuestos.
Con la intencin de superar la barrera que representa la baja disponibilidad del
contaminante, actualmente han sido publicados numerosos trabajos sobre las
estrategias que han desarrollado los microorganismos aislados bajo condiciones
limitantes del hidrocarburo
I.C. Remediacin de suelos contaminados con hidrocarburos
El tratamiento y recuperacin de suelos contaminados se puede definir como el
conjunto de operaciones realizadas con el objetivo de controlar, disminuir o
eliminar los contaminantes presentes.
I.C.1. Tcnicas disponibles para eliminar hidrocarburos
La necesidad de eliminar (o reducir al mnimo) el contenido de hidrocarburos
provenientes de la actividad humana ha llevado al desarrollo de diversas
estrategias. No existe, en la mayora de los casos, un nico procedimiento a
aplicar, y la eleccin de la estrategia a seguir depende del sistema afectado
(derrame en ecosistemas acuticos o terrestres), y las caractersticas fsicas y
qumicas de los contaminantes, como as tambin de su viabilidad econmica y
del tiempo estimado para su desarrollo (Reddy y Chinthamreddy, 1999).
Cuando los derrames ocurren en tierra, se plantean una serie de opciones que
involucran desde la atenuacin natural, hasta la aplicacin de tratamientos fsicos
y/o qumicos (Acharya y Ives, 1994; Araruna y col., 2004).
La atenuacin natural, tambin llamada recuperacin pasiva o intrnseca, se est
utilizando cada vez ms dado que se trata de un mtodo de recuperacin de
suelos .No obstante, a pesar de que puede ser utilizado en lugares muy variados,
raramente se suele aplicar dado que es un tratamiento mucho ms lento que los
que utilizan tecnologas ingenieriles (Mulligan, 2001). De acuerdo con la USEPA
(1999), la atenuacin natural consiste en utilizar procesos naturales para contener
la propagacin de la contaminacin procedente de los vertidos qumicos y reducir
la concentracin y la cantidad de los agentes txicos en las zonas contaminadas.
Los procesos naturales que se invocan para la recuperacin son biolgicos, como
la biodegradacin aerobia, anaerobia y cometablica, y procesos fsico-qumicos
como la volatilizacin, dispersin, dilucin, desintegracin radioactiva,
estabilizacin qumica y bioqumica, precipitacin y sorcin en partculas de
materia orgnica y arcillas del suelo. El xito de cada proceso de atenuacin
natural depender de las caractersticas geolgicas, hidrolgicas y microbiolgicas
de la zona afectada
En la actualidad, los tratamientos fsicos y/o qumicos solo se aplican en ciertos
casos y como primera accin de emergencia a fin de remover grandes masas de
contaminantes, a causa de su elevado costo y la perturbacin adicional que
generan sobre la zona bajo tratamiento. Algunos de estos mtodos destruyen el
suelo y otros alteran sus caractersticas de manera irreversible.
Para citar alguna de las tcnicas, se encuentran:
-la desorcin trmica que consiste en el tratamiento del suelo contaminado en una
secadora en donde el mismo es calentado hasta temperaturas que causan la
volatilizacin y consecuente separacin fsica de los contaminantes de las
partculas de suelo.
-el lavado que consiste en la remocin de contaminantes del suelo tratndolo con
surfactantes qumicos biodegradables y agua. Esta estrategia no es en general
aplicable en suelos con ms del 30% de arcilla o limo.
-la oxidacin qumica que es un mtodos in situ el cual consiste en la oxidacin de
los contaminantes orgnicos utilizando oxidantes fuertes, como por ejemplo
permanganato de potasio.
- la incineracin que consiste en la quema a elevadas temperaturas del material
contaminado.
I.C.2. Biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos: una tecnologa
Amigable. En las ltimas dcadas, con el objetivo de eliminar hidrocarburos de
suelos contaminados, se han desarrollado diferentes estrategias econmicamente
atractivas y ms amigables con el medio ambiente que los mtodos
fsicos/qumicos disponibles. Todas ellas se basan en el aprovechamiento de las
capacidades metablicas de los microorganismos para degradar los
contaminantes y reciben el nombre genrico de procesos de biorremediacin.
La biorremediacin podra definirse como una biodegradacin asistida y
controlada que provee una solucin definitiva, diferencindose de otras
tecnologas que solo proveen una solucin temporal mediante el aislamiento y
contencin del contaminante (Crawford, 2002).
Esta tecnologa utiliza microorganismos, componentes celulares o enzimas libres,
con el fin de lograra la mineralizacin o bien una transformacin parcial del
contaminante en sustancias menos txicas o inocuas para el medio ambiente y la
salud humana (Rling y col., 2001).
Aunque no todos los compuestos orgnicos son susceptibles a la biodegradacin,
los procesos de biorremediacin se han utilizado con xito para tratar suelos o
lodos y sedimentos contaminados (Lina, 2010) incluso de ambientes fros
(Ruberto, 2009).
I.C.2.1. Factores que condicionan la biorremediacin de un suelo
La biodegradabilidad de una mezcla de hidrocarburos presente en un suelo
contaminado
depende de diversos factores como son: la presencia de una comunidad
microbiana degradadora potencialmente activa, la estructura molecular del
contaminante, su concentracin y biodisponibilidad, y factores ambientales como
la, temperatura, el pH, humedad del suelo, presencia de aceptores de electrones,
y la existencia de nutrientes inorgnicos
1. El pH, temperatura y la humedad. Cada cepa microbiana tiene un determinado
rango de tolerancia a factores ambientales como son: la temperatura, el pH y la
salinidad, los cuales pueden afectar al crecimiento y actividad de las poblaciones
microbianas. En consecuencia, cuanto mayor sea la diversidad de
microorganismos existentes, potencialmente mayor ser el rango de tolerancia. No
existen unas condiciones preestablecidas que sean ptimas en todos los casos,
pero en trminos generales los rangos ptimos para la biodegradacin son: pH
entre 6-8 y temperaturas entre 20-30 C (Alexander, 1999).
La variacin del pH del suelo afecta a la actividad microbiana y tambin a la
solubilizacin y adsorcin/absorcin de los contaminantes y de los iones. Las
formas catinicas (NH4+, Mg2+, Ca2+) son ms solubles a pH cido mientras que
las formas aninicas (NO3 -, NO2 -, PO4 3- Cl-)
Son ms solubles a pH alcalino .En general, el pH ptimo para el crecimiento de
las bacterias hetertrofas es neutro (pH 6-8), mientras que es ms cido para los
hongos (pH 4-5
La temperatura es uno de los factores ambientales ms importantes que afecta la
actividad
Metablica de los microorganismos y la tasa de biodegradacin (ver ms adelante
en Biorremediacin en reas de clima fro).
La humedad del suelo puede limitar de forma severa la biodegradacin,
fundamentalmente en suelos superficiales afectados por oscilaciones importantes
en el contenido de agua. No obstante el nivel ptimo de humedad depende de las
propiedades de cada suelo, el tipo de contaminacin y si la biodegradacin es
aerbica o anaerbica. Un dficit de agua puede disminuir el transporte de
nutrientes y de contaminantes, as como tambin la migracin bacteriana a travs
del suelo.
2. Estructura qumica. De las distintas familias de hidrocarburos del petrleo, los
nalcanos y los alcanos ramificados (isoprenoides) de cadena intermedia (C10-
C20) son los sustratos ms fcilmente degradables por los microorganismos del
suelo, tendiendo a ser eficazmente biodegradados. Sin embargo, los alcanos de
cadena larga (>C20) son ms difciles de degradar debido a su elevado peso
molecular y su baja solubilidad en agua. Los cicloalcanos, por norma general, se
degradan ms lentamente que los n-alcanos y alcanos ramificados. Los
hidrocarburos policclicos aromticos (HAPs) de 2 a 3 anillos pueden ser
biodegradados eficazmente en el suelo en condiciones ambientales ptimas,
mientras que los HAP de 4 anillos, y especialmente, los de 5 o ms anillos
bencnicos presentan una mayor recalcitrancia y una baja solubilidad. Las
fracciones de resinas y asfaltenos son las que presentan una menor
degradabilidad debido a las complejas estructuras qumicas y a su elevado peso
molecular
3. Biodisponibilidad. Uno de los factores limitantes de la biodegradacin de
contaminantes en suelo crnicamente contaminados es la biodisponibilidad. La
adsorcin por la fase slida, el pequeo tamao de los poros, la alta tortuosidad
del sistema y la disolucin en la fase liquida no acuosa del suelo, conducirn a una
reducida difusin de los hidrocarburos, disminuyendo la disponibilidad hacia los
microorganismos (Johnsen y col., 2005).
I.C.2.2. Biorremediacin en reas de clima fro
La biodegradacin de contaminantes en suelos de reas fras es ms difcil de
lograr que la desarrollada en reas templadas. Aunque el traslado de estos suelos
para su tratamiento en reas templadas podra ser una solucin, no resulta
rentable ni viable en este caso.
Cualquiera sea la estrategia a emplear en un proceso de biorremediacin, el factor
abitico ms limitante en zonas de media o alta latitud es la baja temperatura. La
temperatura influencia el crecimiento y la actividad metablica microbiana,
afectando los componentes celulares, fundamentalmente protenas y lpidos y
disminuyendo los coeficientes de temperatura de las reacciones enzimticas
(Q10). As, la velocidad de crecimiento de cada microorganismo en particular,
variar en funcin de la temperatura de un modo caracterstico, como resultado de
la compleja interaccin de todos los factores involucrados.
Los procesos de biodegradacin de hidrocarburos se ven profundamente
afectados tambin por la temperatura. A bajas temperaturas cambian las
caractersticas fsicas y qumicas de los hidrocarburos, aumentando la viscosidad
del petrleo y se reduciendo la evaporacin de los alcanos de cadena corta
(altamente txicos) lo que disminuye la velocidad de biodegradacin as como la
transferencia de masa de sustratos y/o receptores de electrones en el suelo
congelado que son cruciales para los microorganismos adaptados al fro (Aislable
y col., 2006).
An en ambientes que presentan valores extremos de ciertos parmetros, es
posible aislar microorganismos adaptados a desarrollar en esas condiciones. En
1975, Morita realiz una clasificacin de los organismos adaptados a bajas
temperaturas de crecimiento que an hoy es utilizada como referencia.
CAPTULO II
HIPTESIS Y OBJETIVOS
II. Hiptesis y Objetivos
Hiptesis
_ Estrategias como la bioestimulacin y el bioaumento son herramientas
adecuadas para favorecer la biorremediacin de hidrocarburos en suelos aguda y
crnicamente
contaminados, an en ambientes de clima fro donde la biodegradacin se ve
limitada.
_ La bioestimulacin provoca cambios en las comunidades bacterianas de suelos
contaminados con hidrocarburos. Tales cambios conducen a una comunidad
eficientemente degradadora de hidrocarburos.
_ La presencia de un surfactante favorece la eliminacin de hidrocarburos en
suelos contaminados.
Objetivos
Objetivo general
_ Aportar nuevos conocimientos que contribuyan al desarrollo y la optimizacin de
estrategias de biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos, tanto
en reas de clima fro extremo (Antrtida) como templado (La Plata).
Objetivos especficos
_ Estudiar el efecto que tiene la mezcla de dos tierras de zona templada, con
diferente concentracin de hidrocarburos, sobre la estructura de las respectivas
comunidades bacterianas y sobre la eficiencia de eliminacin de hidrocarburos.
Analizar el efecto de la bioestimulacin con distintos nutrientes.
_ Analizar el efecto del agregado de compuestos surfactantes sobre la eficiencia
del proceso de biorremediacin.
_ Estudiar la dinmica de la comunidad bacteriana presente en los suelos
contaminados con hidrocarburos utilizados en los ensayos e identificar
taxonmicamente las poblaciones dominantes.