LABORATORIO DE

EXPERIMENTACION Identificacin:
ANIMAL
PROCEDIMIENTO NORMALIZADO
PROC-NT
DE TRABAJO
Elaborado por: Revisin: 5
ACTIVIDAD ANTILCERICA
Carlos Alberto Amaya Inicio de vigencia:

2017- 02- 11

Procedimiento normalizado de
trabajo

LABORATORIO DE
EXPERIMENTACION ANIMAL
LEA

CENTRO DE INVESTIGACIN Y
DESARROLLO EN SALUD
CENSALUD

UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

Documento controlado, prohibida su reproduccin parcial o total sin autorizacin.

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I. INTRODUCCION

El trmino de lcera se refiere a la prdida de sustancia de cualquier parte de la superficie

del cuerpo humano. As la lcera gstrica sera aquella prdida de sustancia que ocurre en
las zonas del aparato digestivo que estn expuestas al cido y pepsina que se secreta en el
estmago. Cuando esta lesin se localiza en el estmago se denomina lcera gstrica y
cuando lo hace en la primera porcin del intestino delgado se llama lcera duodenal.
La lcera gstrica es una enfermedad heterognea atribuible a una serie de factores, que de
forma aislada o en combinacin, actan produciendo un desequilibrio entre los elementos
agresivos y defensivos de la mucosa gastroduodenal que conlleva a la aparicin de lesiones
en el estmago y/o en el duodeno. Los factores etiolgicos ms frecuentes para la aparicin
de ulceras son la infeccin por Helicobacter pylori y el uso de analgsicos no esteroideos
(AINES).
Aqu se induce la ulceracin gstrica por administracin de indometacina, un
antiinflamatorio frecuentemente usado para tratar problemas de artritis, pero que puede
provocar de forma secundaria problemas gastrointestinales. En este modelo las ulceras son
inducidas por inhibicin de la sntesis de prostaglandinas, cuya funcin fisiolgica principal
es la de estimular la secrecin de muco y de cido gstrico.

Las plantas medicinales son importantes para la investigacin farmacolgica y el desarrollo

de medicamentos, no solo cuando los constituyentes de plantas se usan directamente como
agentes teraputicos sino tambin como materiales de base para la sntesis de los
medicamentos o como modelos para compuestos farmacolgicamente activos, por lo que,
la utilizacin de los modelos de dolor se justifica para el ensayo de nuevos tratamientos
farmacolgicos para el alivio de las ulceras gstricas, dentro de los cuales se incluye el uso
de plantas consideradas medicinales, con el fin de obtener resultados correspondientes a
efecto antilcerico en el documento que se expone.

Si analizamos los mtodos usados para el tratamiento de las heridas a lo largo de los
tiempos, encontramos que se han utilizado diferentes sistemas para curar. En la actualidad
estos sistemas de curacin han dado grandes avances Esto ha sido posible gracias a los

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modelos animales de dolor. Es necesario que este tipo de investigaciones se realicen bajo
las orientaciones de unas guas ticas para la experimentacin con animal consciente.

Las caractersticas fisiolgicas de la secrecin gstrica tanto para humanos como ratones es
muy similar, presentando inclusive secrecin de cido y pepsina con una distribucin de los
valores para pepsingeno srico tanto en humanos como ratones son similares.

Las ulceras gstricas se inducen de algunas de las siguientes formas: induccin por
indometacina, un medicamento antiinflamatorio, induccin por estrs de los individuos a
bajas temperaturas, induccin por administracin de etanol, entre otras.

II. DEFINICIONES

i. Ulcera gstrica: Prdida de sustancia que ocurre en las zonas del aparato
digestivo que estn expuestas al cido y pepsina que se secreta en el
estmago.
ii. Indometacina: La indometacina es un medicamento del tipo
antiinflamatorio no esteroideo derivado indol metilado relacionado con el
diclofenaco.
iii. Ranitidina: Medicamento parecido a la histamina, que se usa para el
tratamiento de lceras gstricas, reflujo y acidez estomacal.
iv. Pepsina: Enzima digestiva que se secreta en el estmago y degrada las
protenas consumidas.
v. Prostaglandina: Sustancia de naturaleza lipdica, que acta como mediador
de diferentes procesos que se llevan a cabo en el organismo. Bsicamente
actan como hormonas.
vi. Mucosa gstrica: Cubierta de consistencia mucosa que recubre las paredes
del estmago y lo protegen de la actividad enzimtica de la digestin.
vii. Hiperemica/o: Se refiere a un rgano o tejido con aumento de irrigacin
sangunea, y por lo general esta coloreado de un tono rojo intenso.
viii. Acido gstrico: Es una mezcla de sustancias secretadas por las clulas
epiteliales del estmago, que consiste de agua, cido clorhdrico, de potasio,
sodio, bicarbonato, enzimas y mucus.

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III. ALCANCE

Incluye a todo aquel personal de LEA (investigadores y estudiantes), as como a personas

en estancias cortas de capacitacin que tengan la intencin de realizar pruebas de actividad
antilcerica de una sustancia.

IV. RESPONSABLE

El coordinador de cada proyecto es responsable de supervisar que las actividades

enmarcadas en el presente documento se realicen de acuerdo a las buenas prcticas de
laboratorio y bienestar animal. El encargado de laboratorio es responsable de capacitar y
supervisar a todo el personal que participen en cualquier actividad que requiera la
aplicacin de las tcnicas aqu descritas.

V. SUSTANCIA DE REFERENCIA: (PATRON)

Cualquier sustancia considerada para un estudio de efecto antilcerico, preparada y

suministrada de acuerdo a la necesidad de la investigacin. Dentro se conocen las
siguientes sustancias y dosis, ejemplos:

*Ranitidina

Es un receptor antagonista del dihidrgeno (H2), qumicamente parecido a la histamina.

Compite con la histamina por los receptores H2 de las clulas gstricas causando una
inhibicin o supresin de la secrecin de cidos gstricos que estimulan los alimentos y
otros factores. La dosis es variable, en neonatos: 2 mg/Kg/da, divididos cada 12 horas de
forma oral y de forma intravenosa, 1,5 mg/Kg en dosis nica. Entre el ao de vida hasta los
16, se administra va oral en dosis de 4-8 mg/Kg/da repartidos en 2 dosis, mximo 300 mg
/da. Y para mantenimiento: 2-4 mg/Kg/da en dosis nica, mximo 150 mg/da. Y va
intravenosa 2-4 mg/kg/da administrados cada 6-8 horas; mximo 200 mg/da. Y en

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adultos, por va oral administrar con alimentos, antes del periodo de sueo. Y por va
intravenosa no deben administrarse ms de 10mg/min (4ml/min); y de forma intramuscular
sin diluir, a 10 mg/ml.

Omeprazol

Es un derivado bencilimidazlico sustituido, con alta potencia y selectividad en su accin

inhibitoria de la secrecin cida gstrica. Frmacos antiulceroso cuyo mecanismo nico de
actuacin para reducir la secrecin cida es la inhibicin de la enzima hidrgeno/potasio
adenosina trifosfatasa. En cuanto a la dosis para lceras gstricas: est aprobado su empleo
a dosis de 40 mg/da durante cuatro a ocho semanas, en adultos. Por va oral, el omeprazol
debe ingerirse antes de las comidas, preferiblemente por la maana. Si han de administrarse
dosis superiores a 80 mg al da nunca se ingerirn en una sola vez sino cada 6, 8 o 12 horas,
de acuerdo con la cantidad de frmaco administrada (dosis mxima/da = 360 mg). En
modelos animales, segn Arroyo (2009), se usa una suspensin de omeprazol/bicarbonato
de sodio 2 mg/mL (cada mL de suspensin contiene 2 mg de omeprazol en 84 mg de
bicarbonato de sodio), en las dosis indicadas, esto con la finalidad de elevar el pH gstrico
y evitar la degradacin cida del omeprazol.

Bismuto

Ha sido utilizado en diversos procesos patolgicos incluyendo problemas gstricos, hasta

que hace unos 45 aos, se retir por cuadros txicos neurolgicos. Sin embargo, la
aparicin de nuevos compuestos de tipo coloidal con escasa absorcin, tales como el
salicilato de bismuto y el subcitrato de bismuto han reavivado su uso. El subcitrato de
bismuto ha sido ampliamente estudiado como agente antiulceroso. Es una sal estable que
acta sobre las protenas, formando un complejo sobre el crter ulceroso protegindole de
la digestin pptica. Adems estimula la produccin de prostaglandinas y moco, y favorece
la epitelizacin. Por va oral en Nios: 8 mg/kg/da repartidos en 2 dosis y en Adultos: 240
mg/12h 120 mg/6h. Dosis mxima: 240 mg/12h. Este es el caso del subcitrato y en el
caso del subsalicilato la dosis es por va oral en dosis de 500 mg hasta un mximo de 4
g/da.

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Sucralfato

Es una sal de sulfato de sucrosa e hidrxido de aluminio, poco soluble en agua y que
cuando llega al estmago forma una suspensin viscosa que se fija sobre el crter ulceroso.
Ante la presencia de cido libera aluminio y se carga negativamente unindose
electrostticamente a protenas ms, pptidos, metales, frmacos y mucina. Su mecanismo
de accin es mltiple evitando la lesin aguda de la mucosa, disminuyendo la inflamacin y
cicatrizando la lcera. Acta inhibiendo la accin de la pepsina, estimula la sntesis de
prostaglandinas, de moco y de bicarbonato y facilita la divisin celular y restitucin de la
mucosa, estimulando el proceso de cicatrizacin. Es un frmaco con pocos efectos
secundarios. 4 dosis diarias de 1 gramo o 40-80 mg/kg/da, el comprimido debe disolverse
en 10-20 ml de agua destilada, administrando la suspensin por sonda nasogstrica o, si es
posible, por va oral.

Nizatidina

Es un antagonista de los receptores H2 de histamina, activo por va oral, similar a la

famotidina, ranitidina y cimetidina. La nizatidina est indicada en el tratamiento de la
enfermedad por reflujo gastroesofgico, el tratamiento agudo o de mantenimiento de la
lcera duodenal, y el tratamiento de la lcera gstrica activa. La nizatidina inhibe
competitivamente la unin de la histamina a los receptores H2 de histamina situados en la
membrana de las clulas parietales gstricas, reduciendo la secrecin gstrica de cido.
Dosis: Adultos: las dosis recomendadas son de 150 mg cada 12 horas o 300 mg de una sola
vez a la hora de acostarse, durante 8 semanas. Todo por va oral. Esta clasificado dentro de
los frmacos inhibidores de la secrecin cido gstrico, junto a la ranitidina y famotidina.

Pirenzepina

Es un frmaco inhibidor de la secrecin gstrica. Qumicamente es un derivado

benzodiazepinico. Se presenta en forma de sustancia blanca muy soluble en agua.
Promueve la cicatrizacin de la ulcera gstrica y combate el factor agresivo de la mucosa
gstrica. Crea un entorno de mantenimiento para la ulcera por estrs. La dosis media de
pirenzepina comprende entre 100 a 150 mg/da repartidos en tres dosis, consumida
preferiblemente antes de la comida, el tratamiento debe ser continuo por 4 a 6 semanas.

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Ejerce una accin anticolinrgica y parece capaz de diferenciar de los antagonistas

muscarnicos clsicos para discriminar los sitios con alta y baja afinidad que actan
selectivamente sobre los receptores muscarnicos de las glndulas exocrinas de la mucosa
fndica.

VI. CRITERIOS DE CALIDAD

Ninguno

VII. DESCRIPCION DE LAS CONDICIONES GENERALES

7.1 Aspectos ticos

Los procedimientos aqu mencionados se realizarn en todas aquellas circunstancias en las

que definitivamente se considere lo indispensable la prueba in vivo, y en las que no existan
alternativas al uso del animal de laboratorio. La investigacin debe regirse por la conducta
en la que exista el principio de minimizar cualquier dolor o angustia que sea forzoso infligir
al animal.

7.2 Animales de laboratorio

Los animales sern asignados al azar en los distintos grupos, se mantendrn en ayunas de
solidos por 16 horas con libre acceso al agua, se colocarn en un ambiente climatizado de
22 1 C y se mantendrn mediante ciclos de 12 h de luz y oscuridad. Se puede hacer una
variacin: se puede aumentar el tiempo de ayuno de los animales a 24 horas o dejarlos con
libre acceso a la comida, ya que, segn Gonzlez (2007), se espera que esto aumente la
ulceracin.

7.3 Nmero y sexo

Para realizar estas pruebas preliminares, se usarn grupos de 3 ratones de un solo sexo.
Suelen ser 3 diferentes dosis de un extracto (baja, media y alta) y los dos controles el

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negativo que por lo general es agua destilada o solucin salina y el positivo o patrn que es
el medicamento comprobado.

7.4 Diseo experimental

Debe seleccionarse en primer lugar la especie vegetal de la cual quiere estudiarse la

sustancia para obtener la muestra con el fin de ser procesada en el laboratorio, este proceso
depender del estado en que se desee estudiar la sustancia, en este caso se presenta el
estudio con extracto acuoso, obtenido a partir de extracto seco de las muestras. Suelen
obtenerse 3 diferentes dosis de un extracto (baja, media y alta) y los dos controles el
negativo que por lo general es agua destilada o solucin salina y el positivo o frmaco de
referencia que es el medicamento comprobado.

VIII. PROCEDIMIENTOS: (Bioensayos)

Induccin de ulcera gstrica

Lesin gstrica inducida por indometacina.

Se basa en la administracin de forma subcutnea de la indometacina 10 mg/kg, con el fin

de inducir la ulcera gstrica en los individuos. En este modelo las ulceras son inducidas por
inhibicin de la sntesis de prostaglandinas, cuya funcin fisiolgica principal es la de
estimular la secrecin de muco y de cido gstrico. El proceso a seguir es:
Primero pesar e identificar los animales de experimentacin que deben estar en ayunas de
solidos por 16 horas con libre acceso de agua. Luego administrar intragstricamente las
sustancias de prueba (en volumen de 10 ml/Kg; el extracto vegetal en sus diferentes dosis,
Ranitidina 50 mg/Kg y el vehculo). Despus de una hora administrar subcutneamente la
indometacina 10 mg/Kg. Repetir la administracin de las sustancias de prueba despus de 3
horas de la indometacina, sacrificar los animales de forma eutansica. Luego abrir el
abdomen, localizar y retirar el estmago, lavarlo externamente y abrirlo por la pequea
curvatura. Descartar el contenido gstrico y lavar la mucosa interna ligeramente con agua
destilada. Mantener los estmagos en Beaker con solucin salina helada hasta inspeccin
en el estereoscopio. Y por ltimo determinar el ndice de lesin y el nmero de lceras,
segn tabla de puntuacin de lesin gstrica.

Lesin gstrica inducida por estrs.

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En este modelo el estrs es inducido por la inmovilizacin y manutencin de los animales

en frio, produce lesiones hemorrgicas agudas en la mucosa gstrica de los animales. El
proceso a seguir es:
Primero pesar e identificar a los animales de experimentacin que deben estar en ayunas de
solidos por 16 horas con libre acceso de agua. Administrar intragstricamente las sustancias
de prueba (en volumen de 10 ml/Kg; el extracto vegetal, Ranitidina 50 mg/Kg y el
vehculo). Despus de una hora de los tratamientos, anestesiar a los animales con ter y
someterlos a inmovilizacin con cinta adhesiva. Colocar los animales inmovilizados en los
contenedores apropiados que sern dejados en refrigeradora 4 C por 2 horas. Despus se
retiran a los animales de la refrigeradora, se liberan de los contenedores y se sacrifican los
animales de forma eutansica. Despus abrir el abdomen, localizar y retirar el estmago,
lavarlo externamente y abrirlo por la pequea curvatura. Descartar el contenido gstrico y
lavar la mucosa interna ligeramente con agua destilada. Mantener los estmagos en Beaker
con solucin salina helada hasta inspeccin en el estereoscopio. Y por ltimo determinar el
ndice de lesin y el nmero de lceras, segn tabla de puntuacin de lesin gstrica.

Lesin gstrica inducida por etanol.

En este modelo, la lesin de la mucosa gstrica ocurre independientemente de cualquier

efecto en la secrecin cida, pues es debido a un efecto necrotizante directo sobre la
mucosa gstrica. El proceso a seguir es:
Primero pesar e identificar a los animales de experimentacin que deben estar en ayunas de
solidos por 16 horas con libre acceso de agua. Administrar intragstricamente las sustancias
de prueba (en volumen de 10 ml/Kg; el extracto vegetal, Ranitidina 50 mg/Kg y el
vehculo). Despus de una hora, administrar intragastricamente etanol (75%, 1mL/100g).
Trascurrida una hora de la administracin del etanol, se sacrifican los animales de forma
eutansica. Luego abrir el abdomen, localizar y retirar el estmago, lavarlo externamente y
abrirlo por la pequea curvatura. Descartar el contenido gstrico y lavar la mucosa interna
ligeramente con agua destilada. Mantener los estmagos en Beaker con solucin salina
helada hasta inspeccin en el estereoscopio. Y por ltimo determinar el ndice de lesin y el
nmero de lceras, segn tabla de puntuacin de lesin gstrica.

Lesin gstrica inducida por cido Acetilsaliclico.

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El cido acetil-saliclico induce alteraciones gstricas que pueden ir o no acompaadas de

anemia. Este efecto es debido a la inhibicin de las prostaglandinas que son
citroprotectoras. Causando erosin en la mucosa y hemorragia por inhibicin de la
agregacin plaquetaria. El proceso a seguir es:
Pesar e identificar los animales de experimentacin que deben estar en ayunas de solidos
por 16 horas con libre acceso de agua. Administrar intragastricamente las sustancias de
prueba en volumen de 10 ml/Kg; el extracto vegetal, Ranitidina 50 mg/Kg y el vehculo).
Al transcurrir 4 h, se sacrifican los animales de forma eutansica. Luego abrir el abdomen,
localizar y retirar el estmago, lavarlo externamente y abrirlo por la pequea curvatura.
Descartar el contenido gstrico y lavar la mucosa interna ligeramente con agua destilada.
Mantener los estmagos en Beaker con solucin salina helada hasta inspeccin en el
estereoscopio. Y por ltimo determinar el ndice de lesin y el nmero de lceras, segn
tabla de puntuacin de lesin gstrica.

IX. RESULTADOS: INFORME DEL ENSAYO

El informe de ensayo incluir, a ser posible, la siguiente informacin:

Especie, cepa, origen, condiciones ambientales, rgimen alimentario, etctera.

Condiciones del ensayo.
Dosis (incluido, en su caso, el vehculo, sustancia patrn y tratamientos).
Observacin de la respuesta antiulcerica por sexo y por dosis.
Momento de la muerte durante el experimento o indicacin de que los animales han
sobrevivido al mismo (si es necesario).
Cantidades de alimento y peso corporal (si es posible).
Tratamiento estadstico de los resultados (cuando proceda).
Discusin e interpretacin de los resultados.
Conclusiones y recomendaciones.

X. BIBLIOGRAFIA

ACOFARMA. (2013). Indometacina/Bismuto Subsalicilato. Recuperado de

http://www.acofarma.com/

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GeOSc6hV6zEC

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