Cultivo celular

Obtencin de las clulas

Separarlas de la Matriz extracelular mediante tripsina y colagenasas (enzimas
proteolticas).
Secuestro del ion Calcio para que pierdan la adherencia a los contenedores
usando EDTA.
Agitacin suave.
Obtencin de un sobrenadado de todas las clulas del tejido.

Posteriormente se separan mediante:

Centrifugacin, adherencia al vidrio, unin a anticuerpos, anticuerpos unidos a
fluorocromos, microdiseccin con lser.
Posteriormente deben cultivarse en un recipiente adecuado (frascos), en una base
de una placa, superficie de plstico, en medios tamponados, con indicadores de
pH, con antimicticos y antibiticos a 37C, CO2 al 5% y 95% de aire.

Tipos de cultivo

Primario
Cultivos preparados directamente de un tejido u rgano que conservan sus
caractersticas originales, tienen proliferacin limitada y las clulas pueden ser
removidas para formar cultivos secundarios.

Secundario
Se multiplican hasta cubrir la superficie del recipiente. Pueden subcultivarse.
En el subcultivo mostrarn diferentes propiedades (dependiendo del origen), p.e.:
los fibroblastos secretarn colgeno, las clulas musculares se unirn y formarn
fibras contrctiles, clulas nerviosas extendern prolongaciones (axones), etc.
Cultivos continuos o lneas celulares
Algunas requieren de la inactivacin de los puntos reguladores mediante
oncogenes por VPH, Adenovirus, etc., ya que las clulas tienen lmite de divisin,
p.e. fibroblastos de 25-40 veces el cultivo.
Se encuentra apagado el gen que codifica para la telomerasa, la cual se encarga
de mantener los telmeros ntegros.
Tambin se activa el gen para la telomerasa Inmortalizacin, aunque no
siempre es suficiente.

Historia

Rous y Jones fueron los primeros en utilizar Tripsina y mtodos de asepsia, y as

obtener el primer cultivo celular.
Gey y Col. (1952) elaboran la primer lnea celular: clulas HeLa.
Khler y Milstein (1975) crean la Primer lnea celular productora de anticuerpos
Monoclonales.

Aplicaciones

Estudio de la cula:
*Metabolismo
*Control ciclo celular
*Modulacin de la expresin gnica
*Estudio del cncer
*Formacin de tejido nuevo