MICROBIOLOGIA PRUEBAS

BIOQUIMICAS

ALUMNA:
GUTIERREZ HUMAN, ROSA
INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

LA PRUEBA DE INDOL
Fundamento:

La prueba de indol es un ensayo cualitativo utilizado para diferenciar microorganismos

en base a la capacidad para separar indol a partir de L-triptofano. Es necesario el
crecimiento previo del microorganismo en estudio en medios de cultivo con alto
contenido de L-triptofano, como ser los medios semislidos SIM Medio y MIO Medio o
el medio lquido Agua Triptona . Al agregar el reactivo de Ehrlich al medio de cultivo, el
indol generado se combina con el grupo aldehdo del p-dimetilamino benzaldehido del
reactivo incorporado y se forma un complejo de color rojo.
El indol es un compuesto que se genera mediante la desaminacin reductiva del triptfano
y esta reaccin es llevada a cabo por algunas bacterias que poseen las enzimas
denominadas en su conjunto triptofanasas. Para detectar la produccin de indol se utiliza
el medio Caldo triptfano y la lectura de la prueba se realiza con el reactivo de
Kovacs (alcohol isoamilo, p-dimetil aminobenzaldehdo y cido
clorhdrico concentrado) con el que el indol producido reacciona generando una
coloracin rosa intensa.
Medio MIO (Movilidad, Indol y Ornitina) Este medio como su nombre lo indica sirve
para observar la movilidad, la produccin de indol y descarboxilacin de la ornitina. La
movilidad se detectar por la presencia de turbidez alrededor del punto de inoculacin. El
indol se formar si la bacteria tiene la capacidad de producir la enzima triptofanasa que
desdoblar el aminocido triptfano en indol, cido pirvico y amonio. El indol es
incoloro pero al reaccionar con el reactivo de Kovacs (p-dimetil-aminobenzaldehido) que
se adiciona despus de que creci la bacteria, dar un color rojo violeta. Por lo que
respecta a la descarboxilacon de la ornitina como el medio tiene prpura de bromocresol
y una pequea cantidad de glucosa cuando esta se fermenta se produce un color amarillo
en el fondo (ornitina descarboxilasa negativa), sin embargo al descarboxilarse la ornitina
se produce putresina la cual es alcalina y sobrepasa la acidez dada por la fermentacin de
las glucosa resultando en un color morado en el fondo
AGAR DE HIERRO Y TRIPLE AZCAR (TSI)
Fundamento:

El agar TSI es uno de los ms usados para ver la fermentacin de carbohidratos en la

familia Enterobacteriaceae. Se pueden tener varias posibilidades de fermentacin de
acuerdo a las caractersticas metablicas del microorganismo como son: Utilizacin de
glucosa sola. Los microorganismos que fermentan solo la glucosa provocan en este medio
una reaccin alcalina en la superficie ( roja) sobre un fondo cido (amarillo, k/a) debido
a que realizan una degradacin aerbica de la glucosa en la superficie, convirtiendo el
piruvato en agua y dixido de carbono. Despus de 18 a 24 horas de incubacin como la
concentracin de glucosa es baja (0.1%), los microorganismos empiezan a utilizar las
peptonas que se encuentran en el medio, causando la liberacin de amoniaco y
produciendo un pH alcalino ( rojo) gracias al rojo de fenol que tiene el medio como
indicador de pH. En el fondo, como no hay oxgeno, se realiza una degradacin
anaerbica y el piruvato se convierte en lactato con lo cual el pH disminuye quedando el
pH cido (amarillo).

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Utilizacin de lactosa y/o sacarosa. Algunos microorganismos tienen la facultad de

fermentar la glucosa y la lactosa resultando una reaccin cida en la superficie (amarilla)
y cida en el fondo (amarilla, a/a). En este caso despus de 18 a 24 hrs como la
concentracin de lactosa es alta (1.0%), o sea 10 veces ms que la de la glucosa presente,
no se ha utilizado completamente y la acidez persiste tanto en el fondo como en la
superficie. En el caso de usar sacarosa la reaccin sera la misma. Sin utilizacin de
ninguna de las anteriores. En el caso de no utilizar ninguno de los carbohidratos presentes
(glucosa, lactosa y sacarosa), lo que se usara seran las peptonas, ya sea aerbicamente o
anaerbicamente. Slo utilizndolas aerbicamente dara una superficie alcalina (roja, k)
sobre un fondo sin cambio (sc) o sea k/sc). Si las usara aerbicamente dara una superficie
alcalina (rojo) sobre fondo alcalino (rojo) o sea k/k. En este medio tambin es posible
detectar la produccin de gas por la formacin de burbujas dentro del medio, y la
produccin de cido sulfhdrico, el cual reaccionar con un indicador con base de fierro
dando un color negro debido al sulfuro de hierro formado.
AGAR DE HIERRO Y LISINA (LIA)
Fundamento:

Algunos microorganismos son capaces de provocar la descarboxilacidon de los

aminocidos por induccin de enzimas especficas, el resultado de esta descarboxilacin
es la produccidon de una amina (o diamina) y dixido de carbono. Tal es el caso de la
produccidon de la enzima lisina descarboxilasa la cual al actuar sobre la lisina produce
una diamina llamada cadaverina. En el medio LIA se puede detectar la produccn de la
lisina descarboxilasa ya que se produce una reaccin coloreada por un cambio en el pH
del medio, que contiene como indicador prpura de bromocresol. Un cambio del color
original del medio (morado) hacia amarillo en el fondo indica una reaccidon cida por la
fermentacin de una pequea cantidad de glucosa en el medio. Si el microorganismo
produce lisina descarboxilasa, la accin de esta enzima sobre la lisina dar lugar a la
cadaverina, la cual provocar un cambio de pH hacia la alcalinidad dando un color
morado que sobrepasa la acidez debida a la glucosa. As pues, un fondo amarillo indica
que no se produce lisina descarboxilasa y un color morado que si es producida.
PRUEBA DEL CITRATO DE SIMMONS
Fundamento:

Ciertas bacterias tienen la capacidad de utilizar el citrato como nica fuente de carbono
en una serie de reacciones como sigue: CITRATO OXALACETATO + ACETATO
OXALACETATO PIRUVATO + CO 2 PIRUVATO ACETATO + LACTATO + CO
Los cidos orgnicos son posteriormente utilizados dando como producto final
carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El pH alcalino as logrado hace que el indicador de
pH en el medio, el azul de bromotimol vire de su color verde original a un azul intenso.

PRUEBA DE LA UREASA

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Fundamento:

La hidrlisis de la urea es catalizada en algunos microorganismos por una enzima

especfica, la ureasa, dando lugar a dos molculas de amonio, agua y dixido de carbono.
Todo esto da lugar a un cambio en el pH, lo que causa que cambie el color original del
medio (amarillo) a un color rojo bugambilia por el indicador rojo de fenol. De acuerdo a
la degradacin de la urea el color ser ms o menos intenso. (NH2)2C=O + 2H2O--->
CO2+2NH3+H2O (NH4)2CO3

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