Unidad 8.

Determinacin experimental del

coeficiente de reparto de barbitricos.

Marco Terico

El paso a travs de las membranas biolgicas y la distribucin en el organismo,

son dos factores determinantes en la capacidad de un frmaco para alcanzar la
diana biolgica con la cual va interaccionar para producir un efecto biolgico
determinado.

El coeficiente de reparto o coeficiente de particin (P) es un parmetro

fisicoqumico que permite determinar de modo cuantitativo, el grado de lipofilia
(tambin denominada hidrofobicidad) de una molcula, permitiendo inferir cmo se
comportar en el entorno de los fluidos biolgicos del organismo y como ser su
paso mediante difusin pasiva a travs de membranas biolgicas. Un ejemplo de
frmacos cuya actividad biolgica depende de su hidrofobicidad son los
barbitricos, sustancias con propiedades hipnticas y sedantes que actan a nivel
del sistema nervioso central (SNC). Es importante mencionar que para que una
sustancia pueda ejercer su efecto sobre el SNC debe atravesar la barrera hemato-
enceflica (BHE), la cual es una barrera de naturaleza lipoflica que existe entre
los vasos sanguneos y el sistema nervioso central. Dicha barrera impide que
muchas sustancias txicas la atraviesen permitiendo el paso de nutrientes y
oxgeno al cerebro. De no existir esta barrera muchas sustancias nocivas llegaran
al cerebro afectando su funcionamiento y tornando inviable al organismo. En el
caso de los barbitricos se ha podido determinar que su actividad sedante e
hipntica depende de su lipofilia presentndose el efecto sedante con molculas
menos lipoflicas y el efecto hipntico con molculas ms lipoflicas, que por ende,
tienen mayor facilidad de atravesar BHE para ejercer su efecto teraputico al
interactuar como agonistas de los receptores del GABA.

Como se mencion, el coeficiente de reparto es un parmetro cuantitativo que

representa la solubilidad relativa de una sustancia determinada en un sistema
compuesto por dos fases inmiscibles entre s, a una temperatura especfica. Dado

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que generalmente una de las fases est constituida por un disolvente orgnico, se
le denomina fase O, que es de baja polaridad, mientras que la otra generalmente
acuosa, constituida por agua o buffers, se le denomina fase W cuya polaridad es
alta. Es por esto que P representa el grado de lipofilia de una sustancia.

La expresin matemtica de P es:

P = Co/Cw

Donde:

C o = Concentracin (Molar o mg/L) de la sustancia en la fase orgnica

C w = Concentracin de la sustancia (Molar o mg/L) en la fase acuosa

Por convencin y con fines prcticos, se ha adoptado el uso del logaritmo base 10
de P conocido como Log P dado que el rango de alores que puede tomar P es
muy amplio. Por lo tanto, a un mayor valor de P o Log P, se puede afirmar que la
sustancia presenta mayor afinidad por la fase orgnica y por consiguiente su
carcter lipoflico es mayor.

Teniendo en cuenta que muchos frmacos presentan propiedades cido-base,

stos pueden sufrir ionizacin dependiendo del pH del medio en el que se
encuentren. Dado que los iones son mucho ms polares que los compuestos
neutros, la ionizacin complica la medida del valor de log P dado que subestimar
este valor de la especie neutra en sustancias donde la forma ionizable sea la
predominante de tal forma que habr que corregirlo teniendo en cuenta el pKa y el
pH. En el caso de sustancias ionizables no se habla de P si no de D o coeficiente
de distribucin el cual corresponde a un coeficiente de reparto aparente que toma
en cuenta la forma ionizada y no ionizada de la sustancia. Su expresin
matemtica para cidos y bases, respectivamente es:

Log D = log (Pn 10pka + Pi 10pH) log (10pka + 10pH)

Log D = log (Pn 10pH + Pi 10pka) log (10pka + 10pH)

Dado que la concentracin de las especies inicas en el disolvente orgnico

puede despreciarse en compuestos poco lipfilos, pues con frecuencia es de 30 a
50 veces menor que Pn, las ecuaciones pueden simplificarse para la mayor parte
de los cidos y bases a valores de pH no muy alejados de los valores de pKa.

Log D = log Pn log (1 + 10pH-pka)

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Log D = log Pn log (1 + 10pka-pH)

El coeficiente de reparto, se ve afectado por factores como:

1. Naturaleza qumica del producto: Porque el tipo y nmero de grupos

funcionales polares y no polares que una molcula presenta determinan su
carcter lipoflico o hidrofbico.

2. pH: Sustancias de naturaleza cida cuyo valor de pKa es bajo y sustancias

bsicas cuyo valor de pKa es alto, el pH va a influenciar el valor del
coeficiente de reparto dado que permite determinar la proporcin de
frmaco que se encuentra ionizada y que las especies ionizadas son
insolubles en la fase orgnica.

3. La temperatura: dado que la temperatura afecta la solubilidad de las

sustancias en los diferentes sistemas solventes, determina en qu
proporcin el frmaco va a estar disuelto en la fase orgnica y en la fase
acuosa.

4. El sistema disolvente: Dado que la solubilidad depende del disolvente

utilizado, existen diferencias en el valor de Log P determinado entre
diferentes sistemas disolventes.

Los disolventes empleados en la determinacin del coeficiente de reparto deben

cumplir con las siguientes caractersticas:
1. Simular lo mejor posible las condiciones de la interfase entre la membrana
celular y el medio extracelular.
2. Baja volatilidad
3. Ser econmico
4. Baja Toxicidad

Los disolventes ms empleados son el n-octanol y el agua que cumple con las
caractersticas anteriormente indicadas.

Los mtodos experimentales ms comunes para determinar el valor de LogP son:

Mtodo de agitacin en matraz (shake flask):

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En este mtodo se disuelve una cantidad de un soluto o sustancia de inters (por
ej. frmaco) en un volumen de n-octanol saturado con agua, al cual se le hace una
particin en un embudo de separacin, con agua saturada con n-octanol. Es
necesario tener presaturadas ambas fases para evitar la transferencia de
disolventes durante el proceso de particin pues se requiere solamente que el
frmaco se distribuya entre ambas fases. Una vez concluida la separacin de
fases, se determina la concentracin del soluto en cada fase mediante un mtodo
adecuado por ejemplo, espectrofotometra UV/VIS.

Mtodo cromatogrfico:

Mediante cromatografa lquida de alta eficiencia puede determinarse el Log P por

correlacin del tiempo de retencin del frmaco con el tiempo de retencin de
compuestos de referencia de estructura qumica similar con un valor de Log P
conocido.

De manera terica se puede calcular el valor de logP a partir de la constante de

hidrofobicidad (), para cada sustituyente en una molcula.