METODOLOGIA

Cultivo

250 ml de mosto de uva

2.5 peptona
2.5 glucosa

20 ml de cultivo
Esterilizar

Anadir levadura activada

5% : 1 ml
Realizar a los 7 matraces

Bano Maria 28 Grados Centigrados

Preparacin DNS

Centrifugacin 400 RPM por 15 segundos

D.O Biomasa Sobrenadante

 SOBRENADANTE

4% Sacarosa (Azcar
Blanca)

200 ----- 100%

x -------- 4%
x = 8gr Sacarosa

200ml H2O Regular el pH con Ac. Actico Glacial

1,64gr neutato de sodio (3 gotas)
8gr Sacarosa pH final = 5
(12 Tubos)

Enzima + Sustrato
(Re suspendido) (Buffer)
(1ml de cada 5ml para cada

re suspendido) re suspendido)

5ml

Reaccin Enzimatica

t= 10"
T= 50 centgrados ACTIVAR

Se inactiva 2`
T= Ebullicin
 Preparacin de DNS

1gr DNS Agregar 40m H2Od

1,1gr NaOH y disolver los gramos
0,2 Fenol a Temperatura
30centigrados "Bao
Maria"

*Realizar todo el accedimiento

para Actividad Enzimatica
"Exo" (Sobrenadante)

Sal Rochelle

0,5mL de cada tubito + 3mL DNS( cada tubo)

5` ---- Ebullicin

20gr Enrasa a 50ml H2Od 1mL Sal Rochelle (cada tubo)

15mL H2Od (cada tubo)

Lectura en Espectrofotmetro (00= 550nm)

0 0,508
1 0,322
2 0,684
3 0,521
4 0,088
5 0,009
6 0,565
7 0,336
8 0,115
9 0,384
24 0,24
48 0,713