Bioprocesos Biosyst Eng (2013) 36: 109-116 DOI

10.1007 / s00449-012-0766-5

PAPEL ORIGINAL

produccin microbiana de un biocombustible (acetona-butanol-etanol) en un

biorreactor continuo: impacto de purga y retirada del producto simultnea

Thaddeus Chukwuemeka Ezeji Nasib Qureshi

Hans Peter Blaschek

Recibido: 11 Febrero 2012 / Aceptado: 31 mayo 2012 / Publicado en lnea: 23 Junio 2012
Springer-Verlag 2012

Abstracto etanol acetona butanol (ABE) fue producido en un sistema de
recuperacin de producto continua fermentacin de una sola etapa y gas de
arrastre integrado utilizando Clostridium beijerinckii BA101 y fermentacin de
gases (CO 2 y H 2). En este sistema, el biorreactor se aliment con una solucin de
azcar concentrado (250-500 g L- 1 glucosa). El biorreactor se sangr
semi-continuamente para evitar la acumulacin de sustancias y productos
sistema durante un largo periodo de tiempo, si butanol y otros metabolitos
microbianos en el biorreactor se mantienen por debajo del umbral de toxicidad.
Palabras clave butanol Clostridium beijerinckii
Simultnea de gas retirada del producto de extraccin Acetona

inhibidores. El sistema continuo se hizo funcionar durante 504 h (21 das)

despus de lo cual la fermentacin se termin intencionalmente. El biorreactor
produjo 461,3 g ABE a partir de azcar total de 1,125.0 g en volumen de cultivo 1
L, en comparacin con un proceso de control de lotes en la que 18,4 g ABE se Introduccin
produce a partir de 47,3 g de azcar. Estos resultados demuestran que ABE
fermentacin puede ser operado en una fermentacin y producto de La produccin de biocombustibles lquidos como el etanol y butanol mediante la

recuperacin de una sola etapa continuo integrado fermentacin ha llamado la atencin en todo el mundo por dos razones importantes: (1)

la seguridad energtica (produccin de biocombustibles a partir de residuos agrcolas

renovables a un precio econmico), y (2) el cambio climtico [ 1 , 2 ]. desarrollo

estratgico de la industria de los biocombustibles tiene un gran potencial para el bene fi

naciones ting con economas basadas en la agricultura. Butanol, fabricado actualmente

La mencin de marcas o productos comerciales en este artculo es nicamente con el propsito de
proporcionar informacin cientfica y no implica recomendacin ni aprobacin por el Departamento
de Agricultura de Estados Unidos. USDA es un proveedor y empleador que ofrece igualdad de
oportunidades.
a partir de materias primas del petrleo, es un producto qumico importante con muchas
aplicaciones en la produccin de disolventes, plastificantes, butilaminas, resinas amino,
acetatos de butilo, etc. [ 3 ]. Butanol no es tan ampliamente promovido como un
biocombustible como el etanol; Sin embargo, butanol tiene una serie de ventajas con

TC Ezeji (Y) respecto a etanol que tiene un mayor contenido de energa y es una combustin ms

Departamento de Ciencia Animal, Ohio State Agricultural Research and
Development Centre (OARDC), la Universidad Estatal de Ohio, 305
Gerlaugh Hall, 1680 Madison Avenue, Wooster, OH 44691, EE.UU.
e-mail: ezeji.1@osu.edu
limpia de combustible [ 4 ]. Butanol tambin es altamente txico para los microorganismos
que intervienen en su produccin [ 5 ] Y esto reduce la productividad de la fermentacin
butanol clsica.

N. Qureshi (Y) produccin econmica de bio-butanol a travs del etanol acetona butanol o
Unidad de Investigacin de Bioenerga, Departamento de Agricultura, ARS, Centro
fermentacin ABE se puede mejorar mediante la aplicacin de '' borde de corte ''
Nacional de Investigacin de Utilizacin Agrcola, 1815 N University Street, Peoria, IL
61604, EE.UU. correo electrnico Unidos: Nasib.Qureshi@ars.usda.gov la ciencia y la tecnologa. La '' borde de corte '' tecnologa de fermentacin
incluye el desarrollo de sistemas de reactores ms productivos, el uso de
soluciones concentradas de azcar, recuperar el producto empleando varias
HP Blaschek
tcnicas de separacin fi ciente de energa, y la integracin de procesos donde
Biotecnologa y Bioingeniera Grupo, Departamento de Ciencias de los Alimentos y
Nutricin Humana, Universidad de Illinois, 1207 W Gregory Drive, Urbana, IL 61801, la fermentacin y recuperacin de producto son
EE.UU.

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110
conjunto. procesos de fermentacin integrados tambin mejoran agua y nutrientes
reciclar y reducir el coste del proceso. la productividad del reactor se puede
mejorar, ya sea mediante el empleo de tcnicas de reciclaje celular [ 6 - 9 ] o
utilizando mtodos de inmovilizacin celular [ 10 , 11 ].
Para la fermentacin simultnea y la recuperacin del producto a partir de
caldo de fermentacin, una serie de tcnicas se pueden utilizar incluyendo
adsorcin, extraccin de gas, pervaporacin, extraccin lquido-lquido, anaerbica a 35 C durante 14-16 h [ 5 ]. El cultivo con el crecimiento celular
perstraccin, smosis inversa, y otras tecnologas [ 12 ]. Todas estas tcnicas
tienen sus ventajas y desventajas. gas de arrastre, por ejemplo, es una tcnica
sencilla que no requiere membrana y productos qumicos caros, est libre de
formacin de la emulsin, y se puede realizar en el biorreactor con o sin un
(TGY) medio (g L- 1: triptona, 30; glucosa, 20; extracto de levadura, 10; L- cistena,
separador externo [ 13 - diecisis ]. Adems, los gases de fermentacin (CO 2 y H 2) puede
ser utilizado para la separacin del producto [ 17 ]. Hemos utilizado anteriormente
gas de arrastre tecnologa para reducir significativamente la toxicidad butanol a
la cultura y mejorar productividades en lote y sistemas de reactor discontinuo
alimentado [ 5 , 18 , 19 ].
Hemos demostrado que la produccin de butanol en un sistema de fermentacin de
alimentacin por lotes integrado junto con gas de arrastre para la eliminacin de producto
es ms e fi ciente que un sistema de recuperacin de producto de fermentacin por lotes [ 5
]. En este tipo de reactor discontinuo alimentado, 232,8 g L- 1 ABE se produce a partir de
500,1 g L- 1 azcar en comparacin con un reactor de control de lotes, donde
slo 17,6 g L- 1 ABE fue producido (60 h de fermentacin). La fermentacin de
alimentacin discontinua ces despus de un perodo de 201 h debido a la
acumulacin de sales, las clulas muertas, y otros bioproductos desconocidos.
Este tipo de sistema de reactor sera ventajoso para ABE fermentacin si se
impide la acumulacin de sales txicas y bioproductos por aplicacin de una
purga continua / semi-continua al reactor y la eliminacin de ABE txico por
gas de arrastre.
Debido a que el sistema integrado de recuperacin de producto de fermentacin
de alimentacin discontinua operacin ces a 201 h, hay una necesidad de disear
un sistema continuo de una etapa sencilla con purga y de recuperacin de producto
simultnea. Por lo tanto, el objetivo de la presente investigacin era disear y operar
un simple sistema de produccin de butanol continua de una sola etapa con purga
semicontinuo para evitar que las sales y los inhibidores de la acumulacin en el
reactor, extendiendo as la vida funcional del reactor.
materiales y mtodos
Microorganismo, mantenimiento de cultivo, y el
desarrollo de inculos
El microorganismo utilizado en este estudio fue Clostridium beijerinckii BA101. medir celular, glucosa, y las concentraciones de EBA.
Esta cepa se gener usando
NORTE- metilo- NORTE- nitrosoguanidina (NTG), junto con enriquecimiento
selectivo en el anlogo de glucosa no metabolizable
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Bioprocesos Biosyst Eng (2013) 36: 109-116
2-desoxiglucosa [ 20 ]. La cepa de tipo salvaje, de la que fue desarrollado
BA101 cultivo, se C. beijerinckii NCIMB 8052 (ATCC 51743). C. beijerinckii esporas
BA101 se mantuvieron en agua destilada estril a 4 C. Para C. beijerinckii activacin
de esporas BA101, 200-300 l L de esporas fue de calor conmocionado a
80C durante 10 min y 100 l medio carne L de esporas de choque trmico se
transfiri a 25 ml anxica Preesterilizadas cocinado (CMM; Difco TM; Becton,
Dickinson, and Company, Sparks, MD, EE.UU.), seguido de la incubacin
en CMM se utiliz como inculo de primer etapa. desarrollo de inculo activo
es un factor clave para el xito de la fermentacin ABE. Los inculos para el
reactor se desarroll en 125 ml de tornillo botellas tapadas (100 ml de
volumen de trabajo) que contienen extracto de triptona glucosa levadura
1). La glucosa y L- cistena fueron adquiridos de Sigma Chemicals (St. Louis,
MO, EE.UU.) y extracto de triptona y levadura fueron adquiridos a Difco
Laboratories (Detroit, MI, EE.UU.) Los medios de comunicacin en botellas
tapado sin apretar se someti a autoclave a 121 C durante 15 min y se enfri
a 37 C. Para crear condiciones anaerbicas, botellas tapado sin apretar con
medio TGY esterilizado se colocaron en la cmara anaerbica durante 48 h
para facilitar el intercambio de gases entre el medio y los gases en la cmara
anaerbica. Esto fue seguido por la transferencia de 5 ml de primera etapa
inculo en 95 ml de medio TGY en 125 botellas ml y posteriormente se
incub a 35 C durante 3-4 h hasta que la C. beijerinckii cultura BA101
alcanz una densidad ptica de 0,8-1,0 a 540 nm k. Esto se utiliz como
inculo de segunda etapa.
La produccin de la EBA en un reactor discontinuo
Para evaluar el rendimiento de la fermentacin continua y el sistema de
recuperacin, fermentaciones discontinuas se llevaron a cabo en un biorreactor
de vidrio de 2 L (fi New Brunswick Scientific Co., New Brunswick, NJ, EE.UU.)
como se describe anteriormente [ 5 ]. El biorreactor que contiene 1 l de medio
(glucosa 60 g L- 1 y extracto de levadura 1 g L- 1) fue tratado en autoclave a 121 C
durante 15 min seguido de enfriamiento a 35 C bajo una O 2 N libre 2 atmsfera.
Diez ml de cada uno de filtro de tampn esterilizado, mineral, y soluciones de
vitaminas [ 5 , 21 ] Se aadi (solucin P2), seguido de la inoculacin del
biorreactor con 50 ml de fase II inculos (caldo celular). El biorreactor se
mantuvo a 35 C y pH 5,0 (ajustado con NaOH 4 M). Para mantener las
condiciones anaerbicas en el biorreactor durante las primeras etapas de
crecimiento de las clulas, O 2 N libre 2 se utiliz para ras el espacio de cabeza
del biorreactor para 18 h de gas durante el cual el C. beijerinckii cultura BA101
producido suficiente gases de fermentacin (CO 2 y H 2) para mantener el
anaerbico biorreactor. Se tomaron dos muestras ml de cultivo a intervalos para
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Las muestras se centrifugaron a 10.000 rpm durante 2 min en una

microcentrfuga refrigerada. Claro sobrenadante se transfiri a un tubo fresco y
se almacena a -18 C hasta que se analiz para la glucosa residual y las
concentraciones de EBA. Los resultados de esta fermentacin sirvieron como
control para la comparacin con el proceso continuo.

La fermentacin continua y recuperacin ABE por gas de

arrastre

A 2 L biorreactor (New Brunswick Scientific Co. c) que contiene 1 l de medio

(100 g L- 1 glucosa y 1 g L- 1 extracto de levadura) se someti a autoclave a 121 C
durante 15 min. Despus de enfriar a 35 C (O bajo 2 N libre 2 gas), 10 ml de cada
soluciones P2 de valores [ 5 , 21 ] fueron agregados. El biorreactor fue inoculado
con 50 ml de la fase II del inculo y la fermentacin se inici, como se describe
anteriormente [ 5 ]. La fermentacin transcurri durante 20 h seguido de la
recuperacin ABE por gas de extraccin usando CO 2 y H 2 como gases
portadores. Antes de iniciar la recuperacin ABE, lneas de conexin y entornos
Higo. 1 Un diagrama esquemtico de la produccin ABE continua y retirada del producto
de condensador se hicieron anaerbica por ushing fl con una cantidad simultnea usando gas de arrastre
adecuada de O 2 N libre 2 gas. Un doble cabezal peristltica Maestro fl ex TM bomba
(Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, EE.UU.) y la tubera Norprene 18 tamao se
utilizaron para reciclar CO 2 y H 2 gases (4.000-6.000 ml min- 1) a travs de los examen de los gases (CO 2 y H 2) producida. Cuando se observ la produccin de
orificios rociadores en el biorreactor. Las burbujas de gas producidas cerca del gas a ser menos que la producida durante la etapa activa de fermentacin (tal
fondo del biorreactor durante el proceso de reciclaje se saturaron o al menos como durante inicial 24-36 h), P2 de la accin media [ 5 , 21 ] Y se aadieron
parcialmente saturado con vapores de ABE como la migracin hacia el espacio soluciones de extracto de levadura en cantidades presentadas en la Tabla 1 .
de cabeza se produce biorreactor. Los gases se enfriaron en el condensador
de vidrio (62 9 600 mm, serpentn de enfriamiento externo
Procedimientos analticos

ABE y cido (actico y butrico) concentraciones se midieron usando un

rea de superficie
1.292 cm 2) a la 1 C y ABE se condens. La ABE despojado se bombe en el
colector de disolvente usando una bomba peristltica. Para enfriar el
condensador, una mquina de refrigeracin (Geneline) con circulador se utiliz
(Beckman Instruments, Palo Alto, CA, EE.UU.). Medio de enfriamiento fue de
50% (v / v) de etilenglicol y la velocidad de circulacin a travs del
condensador era de 600 ml min- 1. Un diagrama esquemtico del proceso se
muestra en la Fig. 1 .
El biorreactor se aliment continuamente (velocidad de dilucin promedio
0,03 h- 1) con un pienso estril mantenido bajo O 2 N libre 2 gas y que contiene
250-500 g L- 1 solucin de glucosa suplementado con 1 g L- 1 extracto de
levadura. Para mantener constante la cantidad de lquido en el biorreactor, se
aadi agua anxica estril y la tasa de flujo se vari con la velocidad de
eliminacin ABE del reactor. El biorreactor se sangr semi-continua, segn sea
necesario, para eliminar los inhibidores indeterminados [ 5 ] Y para mantener la
concentracin de clulas en el reactor dentro de 3-7 g L- 1. Feed, agua, y el
caldo celular se bombearon usando esterilizada tubo de silicona 13-14 tamao
y peristltica fl Maestro ex TM zapatillas. La fermentacin se control de forma
rutinaria mediante la medicin de la densidad ptica de la creciente C.
beijerinckii clulas BA101 y por visual
cromatgrafo Hewlett-Packard 6890 gas (Hewlett-Packard, Avondale, PA,
EE.UU.) equipado con un detector de ionizacin de llama (FID) y 1824 9 2 mm
(6 pies 9 2 mm) columna de vidrio (10% CW-20 M, 0,01% H 3 correos 4, apoyo
80/100 Chromosorb WAW) como se describe anteriormente [ 2 , 5 ].
productividad ABE, o la tasa de produccin, se calcul tal como se produce
total de ABE (g L- 1 volumen de cultivo) dividida por tiempo de fermentacin
(h). El rendimiento fue definido como gramos totales de ABE producido por
gramos totales de glucosa utilizada y se expresa como GG- 1. La tasa de
utilizacin de glucosa se defini como los gramos de glucosa utilizada por
volumen de cultivo litros para un intervalo de tiempo dado. Selectividad (una
medida de la eliminacin preferencial de ABE sobre otros componentes
presentes en la mezcla, tal como agua) se calcul como a = [ y / ( 1 - y)] / [x / ( 1 - x)],
dnde x y
y son fracciones en peso de ABE en caldo de fermentacin y condensado,
respectivamente.
La concentracin de glucosa se determin usando un hexoquinasa y
glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (Sigma Chemicals, St. Louis, MO, EE.UU.)
acoplado ensayo enzimtico como se describe en otro lugar [ 5 ]. La
concentracin celular se estim por densidad ptica y el mtodo de peso seco
de clulas usando una correlacin predeterminada entre la densidad ptica a

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tabla 1 Adems de las soluciones P2 acciones y extracto de levadura al biorreactor y las sales se encontr que eran responsables de la terminacin de la
fermentacin [ 5 ].

Tiempo (h) a la que se aadieron Cantidad de soluciones P2 stock Para prolongar el tiempo de fermentacin ms all de las 201 h previamente
soluciones stock P2 Aadido (mL) conseguido utilizando la fermentacin de alimentacin discontinua y la
recuperacin por extraccin de gas [ 5 ], Inhibidores, sales y ABE necesita ser
48 2.0
eliminado simultneamente del biorreactor durante la fermentacin. Un sistema
223 2.5
0,3 g de extracto de levadura a 293 h 112 de fermentacin ABE lote se inici con 100 g L- 1 glucosa en el medio de P2.
258 5.3 Despus de 20 h de fermentacin, 1,49 g L- 1 acetona, 2,71 g L- 1
270 2.5

293 5.0 un
butanol, y 0,09 g L- 1 etanol se midieron en el biorreactor, resultando en ABE
365 3.0
total de 4,29 g L- 1 ( Higo. 2 un). En esta etapa, la fermentacin continua y la
388 2.5
recuperacin del producto mediante separacin por arrastre de gas fueron
413 3.0
iniciados. Durante el curso de la fermentacin, se observaron fluctuaciones en
437 4.5
las concentraciones de acetona y butanol (Fig. 2 un). En 112, 150, 234,
un Adems de P2 solucin madre se aadieron 10 ml de solucin de extracto de levadura que contiene

270, 340, 437, y 504 h, se observaron mayores concentraciones de

540 nm y la clula de peso seco [ 5 , 18 ]. tasa de dilucin se define como alimentacin
velocidad de flujo (ml h- 1) por volumen de lquido en el reactor (ml) y se expresa como
h- 1. Por lo general, un reactor continuo se define como un sistema en el que la tasa de
alimentacin de flujo en ella y la tasa de flujo de salida del producto son iguales. En el
acetona y butanol. Aumento de las concentraciones de acetona y butanol
se acumularon debido al aumento de la actividad de fermentacin que
puede ser atribuido a la acumulacin de C. beijerinckii las clulas en el
biorreactor. La mayor concentracin de ABE (Fig. 2 un; 12,2 g L- 1) en el
biorreactor se obtuvo a 112 h. En 138, 199, 223, 305,

presente caso, el biorreactor se alimenta continuamente con una solucin de
alimentacin y el producto se retira de manera continua usando gas de arrastre donde
el producto era solucin ABE. Una purga tambin se elabor de una manera
semi-continua para mantener el nivel de lquido constante (inhibidores definido y unde
nivel por debajo de la toxicidad). Por lo que este biorreactor tena una corriente de
alimentacin y dos corrientes de producto (ABE rich corriente de condensado y el
caldo de fermentacin / purga). Dado que el nivel en el interior del reactor se mantuvo
365, y 471 h de fermentacin, inferior concentraciones ABE estaban
presentes en el biorreactor. En 223 h, la concentracin ms baja ABE
(0,64 g L- 1) se midi en el biorreactor. concentracin de etanol fue muy
baja, que van desde 0,0 a
0,19 g L- 1 durante toda la fermentacin.
Tambin se observaron las concentraciones de los cidos actico y butrico
a fluctuar durante el curso de la fermentacin (Fig. 2 segundo). las

constante, lo llamamos un sistema continuo. concentraciones de cido actico midieron durante el curso de la fermentacin
oscilaron entre 0,26 y 6,12 g L- 1

con la mxima concentracin (6,12 g L- 1) medido a 223 h. concentraciones

Resultados y discusin
Para evaluar el rendimiento de la fermentacin continua junto con sistema de
recuperacin de ABE, la fermentacin por lotes en ausencia de la
recuperacin del producto se llev a cabo en un 2 L biorreactor. La
fermentacin de lote produjo 18,4 g L- 1
ABE total en el 65 h resultante de la productividad y el rendimiento de
0,28 g L- 1 marido- 1 y 0,39 GG- 1, respectivamente. A 0 h de fermentacin, la
concentracin de glucosa en el biorreactor fue
60,4 g L- 1 y la concentracin de glucosa residual al final de la fermentacin fue
de 13,1 g L- 1. El cultivo fue incapaz de utilizar toda la glucosa para el crecimiento
y la produccin de ABE debido a la inhibicin butanol. Hemos llevado a cabo
con anterioridad por lotes [ 18 ] Y discontinuo alimentado [ 5 ] fermentaciones con
recuperacin ABE integrado por gas de arrastre que result en el consumo total
de glucosa de 161,7 y 500,1 g L- 1, respectivamente. Un total de 75,9 y 232,8 g L- 1
ABE se produce a partir de estas fermentaciones por lotes y fed-batch,
respectivamente, antes de las fermentaciones cesaron. inhibidores
indeterminados
de cido butrico en el biorreactor vari desde 0,10 hasta 1,69 g L- 1. Cuando
la fermentacin se termin despus de concentraciones de 504 h, actico y
cido butrico en el biorreactor fueron 1,64 y 0,53 g L- 1, respectivamente. Las
concentraciones butrico y cido actico bajo NAL relativamente fi sugieren
que fueron convertidos constantemente a la acetona y butanol.
Las razones potenciales por Abe fluctuaciones en ABE y las
concentraciones de cido pueden haber sido debido al agotamiento de los
nutrientes en el biorreactor y la difusin de O 2 a travs de conectores de tubos
[ 5 ]. Otra posible razn de estas fluctuaciones implica cambios morfolgicos de
la C. beijerinckii
clulas BA101 sobre el curso de la fermentacin [ 22 , 23 ]. Cuatro etapas
fisiolgicas diferentes de C. acetobutylicum
Se han notificado las clulas que se producen en un sistema de fermentacin
continuo [ 22 ]. Estos tipos de clulas incluyen en crecimiento activo, ABE producir,
esporulado, y las clulas muertas. se observ presencia de esporas cuando caldo
de cultivo se examin utilizando un microscopio, sin embargo, en crecimiento activo
y butanol producir C. beijerinckii no pudieron ser diferenciados. Del mismo modo, las
clulas muertas no pudieron ser claramente identi fi cada

123

de, segundo cido actico (HAc) y cido butrico (HBU), do nivel de glucosa en el reactor, y re concentracin de clulas Bioprocesos Biosyst Eng (2013) 36: 109-116
Higo. 2 La produccin continua de ABE a partir de glucosa utilizando C. beijerinckii BA101 acopla con la recuperacin del producto mediante separacin por arrastre de gas. un La acetona, butanol, etanol, y ABE total
cuando se observa bajo el microscopio, aunque se observaron numerosas
clulas en fase de crecimiento estacionario no mviles. produccin continua de
ABE se sabe que fluctan fl y se ha informado anteriormente [ 11 , 24 ]. Aunque
hubo fluctuaciones en las concentraciones de EBA en el biorreactor, no se
espera una complejidad para ser visto durante la escala en marcha de este
procedimiento distinto de ajuste de la cantidad de reciclajes de gas que se
beneficiara el proceso. A menores concentraciones de EBA en el caldo, se
requerira una cantidad ms baja de reciclado de gas. Durante la recuperacin,
el gas de arrastre no elimina el cido del biorreactor hasta que stos se
convierten a ABE [ 5 , 18 ], Lo que sugiere que las fluctuaciones en las
concentraciones de cido () no eran el resultado de la extraccin de gas. Es
importante, por lo tanto, observar que en ABE cidos de fermentacin, actico y
butrico son compuestos intermedios metablicos y son producidos y luego
re-asimilado por C. beijerinckii clulas BA101 y convertido a acetona y butanol [ 5 ].
Una concentracin de glucosa de 40-70 g L- 1 se mantuvo (Fig. 2 c) en el
biorreactor por la alimentacin continua con un medio que contiene 250-500 g
L- 1 solucin de glucosa. La concentracin de azcar fl uctuated en el
biorreactor debido variada consumo de azcar debido a las fluctuaciones en la
concentracin celular, sangran y piensos azcar continua al biorreactor.
113
La concentracin de azcar en el biorreactor, sin embargo, estaba dentro del
intervalo que apoya el crecimiento clostridial adecuada y la produccin de ABE. La
adicin de medio de azcar y el agua vari con el tiempo y era dependiente de las
tasas de utilizacin de azcar, produccin ABE, y la recuperacin.
C. beijerinckii concentraciones de clulas BA101 se mantuvieron por debajo
de 6,0 g L- 1 ( Higo. 2 d) excepto durante las ltimas etapas de la fermentacin
cuando se permiti que la concentracin de clulas a aumentar lentamente
hasta 7,04 g L- 1. Para mantener las concentraciones de clulas por debajo de 6,0
g L- 1, Se aplicaron constante de purga biorreactor y la limitacin de nutrientes.
Una tasa promedio de purga fue de 13,9 ml h- 1 que es una fraccin de 0,014 del
volumen total de lquido en el reactor. La purga contena clulas microbianas, el
azcar residual y se dej durante nutrientes. Durante el curso de la fermentacin
(504 h) se elimin 6.990 ml de caldo de fermentacin. Para los clculos, ABE y
las concentraciones de glucosa presente en la purga se determinaron y
representaron mediciones de productividad y rendimiento. El lector
se inform que la recogida
caldo de fermentacin no se recicl y se ferment en un recipiente separado
hasta que se utiliz todo el azcar. Sin embargo, es posible reciclar dichas
corrientes por razones econmicas. productividades ABE se calcularon en
diversos momentos, y
123
114 Bioprocesos Biosyst Eng (2013) 36: 109-116

Higo. 3 La produccin continua de ABE en un

reactor asistido con la recuperacin del producto
de purga y simultnea por gas de arrastre. un ABE
productividades en diferentes tiempos de
fermentacin, y segundo tasa de utilizacin de
azcar

la productividad ABE ms alta (2,69 g L- 1 marido- 1) se obtuvo a 112 h (Fig. 3 un).

En el biorreactor lote control sin recuperacin ABE, la productividad ABE
de 0,28 g L- 1 marido- 1

fue obtenido. tasa de utilizacin de azcar tuvo un patrn fluctuante (fig. 3 b)

similar a productividades ABE (Fig. 3 un). La tasa de mayor utilizacin de
azcar de 6,97 g L- 1 marido- 1 se logr a las 48 h de fermentacin, lo que
sugiere C. beijerinckii
cultura BA101 fue muy activo en esta etapa. Del mismo modo, el cultivo continu
activo en 504 h con una tasa de utilizacin de azcar de 6,25 g L- 1 marido- 1. Tales
altas tasas de utilizacin de la glucosa dan fe de que las altas tasas de produccin
de ABE se puede lograr en clulas en suspensin de fermentacin continua.
Higo. 4 concentracin ABE en la corriente de producto en diferentes tiempos de fermentacin

La acumulacin de aumento de las concentraciones de clulas (mayor de 10-12 g L- 1)

en el biorreactor como resultado la produccin de la EBA a un ritmo ms rpido que la 2,65 a 14,67, respectivamente. La selectividad depende de fraccin en peso de

capacidad de recuperar la EBA, lo que lleva a una acumulacin neta de la EBA en el ABE en caldo de fermentacin y la corriente recuperada. Una fraccin de alto peso

biorreactor (datos no mostrados). El aumento de la tasa de recuperacin ABE requerir ( x) en los resultados de caldo en una baja selectividad mientras que una baja x resultados

el aumento de la tasa de reciclaje de gas, que, a su vez, dar lugar a un aumento de la en alta selectividad. Una selectividad de mayor que 1 indica que se produjo el

formacin de espuma en el biorreactor y un requisito para una mayor adicin enriquecimiento que requerira menos energa para la separacin adicional de

anti-espuma [ 25 ]. El aumento de las concentraciones de clulas en el biorreactor, preferencia por membrana de pervaporacin o destilacin. La corriente

adems, resultar en un aumento en la viscosidad del caldo de fermentacin que puede recuperado (un total de 6903 ml) todava contena una cantidad significativa de

reducir la velocidad de eliminacin ABE mediante separacin por arrastre de gas. Por lo agua. intermedios de fermentacin tales como los cidos actico y butrico no se

tanto, es uno de los requisitos bsicos del sistema para mantener la masa celular dentro detectaron en el condensado durante gas de arrastre lo que sugiere que, o bien

de cierto rango, preferiblemente menos de 10-12 g L- 1 para gas de arrastre no elimina el cido del biorreactor o sus niveles de concentracin
(en el condensado) eran demasiado bajos para ser detectados por GC. Las
posibles razones para no quitar estos cidos pueden ser su baja presin de vapor

C. beijerinckii BA101. en condiciones de fermentacin, tales como bajas concentraciones, pH caldo, y

concentraciones de EBA en la corriente recuperada se determinaron y puntos de ebullicin. La eliminacin de los cidos actico y butrico del reactor por

una concentracin mxima de 102,2 g L- 1 se obtuvo a 112 h (Fig. 4 ). Una cualquier sistema de recuperacin no es deseable ya que estos son los

concentracin promedio de ABE en el recuperado streamwas 36,5 GL- 1, que intermedios de fermentacin y los precursores de acetona y butanol [ 18 ].

es mayor que la concentracin de ABE en un tpico ABE fermentacin

biorreactor [ 8 , 13 , 18 , 26 ]. Hubo poco cido (actico y butrico) de
acumulacin, y al final de la fermentacin, solamente 2,17 g L- 1 de cido total
se midi en el biorreactor. Adems, los cidos actico y butrico no se
detectaron en la corriente recuperada. Un total de 461,3 g de ABE fue Las fluctuaciones en las concentraciones de EBA en la corriente recuperada

producido por C. beijerinckii BA101 from1,125.0 g de azcar resultante en un durante la fermentacin butanol simultnea y la recuperacin por la desorcin del

rendimiento del ANABE y la productividad de 0,41 g g- 1 y 0,92 g L- 1 marido- 1, gas indican los cambios en las productividades de EBA con el tiempo (Fig. 3 a),
que es tpico de sistemas de fermentacin continua ABE [ 11 , 26 , 27 ].
fluctuaciones similares en la utilizacin de azcar por C. beijerinckii BA101 se

respectivamente (Tabla 2 ). selectividades ABE variaron desde 3,36 hasta obtuvieron durante el mismo perodo (Fig. 3 segundo). El examen de la Fig. 3 a, b

19,79 mientras que la selectividad individuo oscila para la acetona, butanol, sugiere que ABE productividad est relacionada

etanol y fueron 3.8 a 9.2, 3,86-11,69, y

123
Bioprocesos Biosyst Eng (2013) 36: 109-116 115

Tabla 2 Una comparacin de varios sistemas de fermentacin, junto con la recuperacin del producto mediante separacin por arrastre de gas

parmetros de la fermentacin Control (NPR) Con la recuperacin del producto mediante separacin por arrastre de gas

Lote Fed-batch Continuo

ABE producido (g L- 1) 18.4 0.8 75.9 4.55 232.2 11,61 461,3 20,76

Butanol en caldo (g L- 1) 11.0 0.5 8.5 0.05 3.7 0.04 4.3 0.04

Azcar total utilizada (g L- 1) 47.3 2.05 161,7 11.39 500,1 29.03 1,125.0 53.22

conversin Azcar (%) 78.3 3.0 100,0 95.1 5.0 93.7 2.2

El tiempo de fermentacin (h) sesenta y cinco un 127 un 201 un 504 segundo

Productividad (g L- 1 marido- 1) 0.28 0.01 0.60 0.04 1.16 0.06 0.92 0.04

Rendimiento (GG- 1) 0.39 0.47 0.46 0.41

tasa de dilucin (h- 1) N/A N/A N/A 0.03 do

referencias Lote; este trabajo [ 18 ] [5] Este trabajo

NPR no retirada del producto, N / A no aplica

un Fermentacin ces debido a butanol o otros productos qumicos txicos desconocidos

segundo La fermentacin se detuvo intencionalmente por el operador

do Tasa media de dilucin

a la tasa de utilizacin de azcar como la productividad tambin se puede calcular
multiplicando la tasa de utilizacin de azcar y el rendimiento ABE (rendimiento es un
factor de conversin ABE). La velocidad de circulacin del gas no fue un factor que
contribuye a las fluctuaciones en la produccin ABE, ya que se mantuvo constante
durante toda la fermentacin.
Esta investigacin demostr que una fermentacin y recuperacin del producto
empleando gas continuo arrastre con sangrado puede ser operado durante un
perodo de tiempo mucho ms largo que un sistema de alimentacin por lotes. El
uso de una solucin concentrada de azcar como alimento durante la fermentacin
continua ABE y la recuperacin se reducir el volumen de las corrientes de
proceso, e fl uents, y aumentar las concentraciones de EBA en la corriente
recuperada (Fig. 4 ). La destilacin adicional y concentracin de ABE de la corriente
recuperada requerirn menos energa que la necesaria para separar por
destilacin ABE de biorreactor efluente. Clculo de la energa necesaria para la
recuperacin ABE requiere un modelo econmico que est ms all del alcance de
En fermentaciones ABE, el rendimiento terico mximo basado en la utilizacin
de azcar es 0,40 GG- 1. En las presentes investigaciones, con un rendimiento de
0,41 GG- 1 se obtuvo que es mayor que el valor terico. La posible razn de mayor
rendimiento es la presencia de otras fuentes de carbono en los componentes del
medio, tales como extracto de levadura y componentes de tampn P2 (por
ejemplo, CH 3 COONH 4). Otra posibilidad para un mayor rendimiento puede ser la
utilizacin casi completa de los intermedios de reaccin, tales como los cidos
actico y butrico.
conclusiones
Un sistema de carga de fermentacin (sin recuperacin de producto) dio lugar a
la produccin de 18,4 GL- 1 ABE from47.3 GL- 1
glucosa. Este sistema no integrado de fermentacin dio como resultado una

estos estudios. Para nuestro conocimiento, este es el primer informe en una sola productividad y rendimiento de 0,28 g L- 1 marido- 1 y 0,39 GG- 1,

etapa de fermentacin continua butanol y la recuperacin del producto simultnea
utilizando corriente de gas. En este crecimiento de las clulas del sistema,
recuperacin de la fermentacin, y el producto se lleva a cabo en el mismo reactor.
Los resultados sobre la longitud de funcionamiento del biorreactor, azcar totales
utilizados, y el total de ABE producidos por caldo litros se presenta en este trabajo
el empleo de fermentacin continua y simultnea in situ de recuperacin ABE por
gas de arrastre son superiores a la reportada por Groot et al. [ 13 ], Donde se us
un separador independiente. En los presentes estudios, C. beijerinckii BA101 cepa
que fue desarrollado genticamente de C. beijerinckii
respectivamente. En comparacin con este sistema, un sistema de fermentacin
continuo operado con una purga y de recuperacin de producto simultnea result
en una produccin total de 461,3 g L- 1
ABE de 1,125.0 g L- 1 glucosa (en 1 L de caldo de cultivo). Esto result en una
productividad ABE de 0,92 g L- 1 marido- 1 y el rendimiento de 0,41 g g- 1. En este
estudio, la productividad se mejor byover triple (328%). Se observ que
shouldbe yielddidnot aumento como 0,41 GG- 1 es mayor que el rendimiento
terico debido a la presencia de carbonos no-glucosa (por ejemplo, CH 3 COONH 4).
En comparacin con un reactor de alimentacin discontinua donde fermentacin fall

despus de 201 h (ms de 8 das) debido a la acumulacin de los inhibidores de

desconocidos [ 5 ], Fermentacin continua e in situ recuperacin ABE mediante separacin

por arrastre de gas se hizo funcionar durante 504 h (21 das) despus de lo cual se termin

se utiliz NCIMB 8052. C. beijerinckii BA101 es una de las mejores cepas intencionalmente. Se concluye que un sistema continuo de fermentacin ABE con purga y

para la produccin de ABE y produce una cantidad significativa de ms de recuperacin de ABE simultnea por gas de arrastre puede ser operado durante un

(33,3-46,0%) ABE que el parental perodo prolongado de tiempo con buenos parmetros cinticos

C. beijerinckii NCIMB 8052.

123
116 Bioprocesos Biosyst Eng (2013) 36: 109-116

tales como la productividad y el rendimiento. Por lo tanto, se logra el objetivo 13. Groot WJ, van der Lans RGJM, Luyben KChAM (1989) por lotes y butanol continua
fermentaciones con clulas libres: la integracin con la recuperacin del producto mediante
sealado en la introduccin de este artculo.
separacin por arrastre de gas. Appl Microbiol Biotechnol 32: 305-308

Expresiones de gratitud Esta investigacin fue apoyada por el Consejo de Illinois de la

14. Ezeji TC, Qureshi N, Blaschek HP (2005) fermentaciones industrialmente relevantes.
alimentacin y de Investigacin Agrcola (CFAR) los nmeros de subvencin CFAR 0II-042-1 y
En: Durre P (ed) Handbook en Clostridia. Taylor & Francis, Nueva York, pp 797-812
la AIF CF 01E-35-1; y en parte por el noreste Sungrant (Universidad de Cornell) Nmero
Premio / Contrato GRT00012344. Nos gustara dar las gracias a Michael A. Cotta
15. Ennis BM, Marshall CT, Maddox ES, Paterson AHJ (1986) de recuperacin de producto
(Departamento de Agricultura de los Estados, Centro Nacional de Investigacin de Utilizacin
continuo por en gas de arrastre situ / condensacin durante la produccin disolvente
Agrcola, Peoria, IL, EE.UU.) y el Dr. James Kinder (Presidente del Departamento de Ciencia
de permeado de suero usando acetobutylicum Clostridium. Lett Biotechnol 8: 725-730
Animal de la Universidad Estatal de Ohio) para la lectura de esta manuscrito y comentarios
crticos.
16. Mollah AH, Stuckey DC (1993) Viabilidad de in situ de extraccin para la
fermentacin acetona-butanol continua por acetobutylicum Clostridium. Enz
Microbial Technol 15: 200-207
17. Maddox ES, Qureshi N, Roberts-Thomson K (1995) Produccin de
referencias acetona-butanol-etanol a partir de sustratos concentradas usando
Clostridium acetobutylicum en un proceso integrado de eliminacin de
fermentacin-producto. Proceso Biochem 30: 209-215
1. Drre P (1998) Nuevos conocimientos y desarrollos novedosos en clostridial
18. Ezeji TC, Qureshi N, Blaschek HP (2003) La produccin de butanol Clostridium beijerinckii BA101and
fermentacin acetona / butanol / isopropanol. Appl Microbiol Biotechnol 49: 639-648
recuperacin in situ mediante separacin por arrastre de gas. Mundial J Microbiol Biotechnol
19: 595-603
2. Qureshi N, Saha BC, Dien BS, Hector RE, Cotta MA (2010) Produccin de butanol (un
19. Qureshi N, Maddox ES, Friedl A (1992) Aplicacin de la alimentacin de sustrato continuo
biocombustible) a partir de residuos agrcolas: Parte I- uso de hidrolizado de paja de
a la fermentacin ABE: alivio de la inhibicin del producto utilizando la extraccin,
cebada. Biomasa bioenerga 34: 559-565
perextraccin, desmontaje, y de pervaporacin. Prog Biotechnology, 8: 382-390
3. Ezeji TC, Blaschek HP (2007) biocombustible a partir de butanol: avances en la
manipulacin gentica y fisiolgica de clostridios. BioWorld Europa 2: 12-15
20. Annous BA, Blaschek HP (1991) Aislamiento y caracterizacin de Clostridium
acetobutylicum mutantes con actividad amiloltica mejorada. Appl Environ
4. Anon (2007) biobutanol en el horizonte. Chem Eng Prog edicin de marzo, pp 10
Microbiol 57: 2544-2548
21. Qureshi N, Blaschek HP (1999) de recuperacin Butanol de soluciones modelo / caldo
5. Ezeji TC, Qureshi N, Blaschek HP (2004) etanol acetona butanol (ABE) de produccin de sustrato
de fermentacin por pervaporacin: evaluacin de rendimiento de la membrana.
concentrado: reduccin de la inhibicin por sustrato por la tcnica de alimentacin por lotes y la
Bioenerga Biomasa 17: 175-184
inhibicin del producto mediante separacin por arrastre de gas. Appl Microbiol Biotechnol 63:
22. Qureshi N, Paterson AHJ, Maddox ES (1988) Modelo para la produccin continua de
653-658
disolventes de permeado de suero en un reactor de lecho relleno usando clulas de Clostridium
6. Cheryan M, Mehaia MA (1983) Un biorreactor de membrana de alto rendimiento
acetobutylicum inmovilizada por adsorcin sobre bonechar. Appl Microbiol
para la fermentacin continua de lactosa a etanol. Lett Biotechnol 5: 519-524
Biotechnol 29: 323-328

7. Mehaia MA, Cheryan M (1986) cido lctico a partir de suero cido de permeado en un
23. Qureshi N, Lai LL, Blaschek HP (2004) ampliacin de un reactor de alta
biorreactor de reciclaje membrana. Enzym Microbial Technol 8: 289-292
productividad continua bio fi lm para producir butanol por las clulas adsorbidas de Clostridium
beijerinckii BA101. Trans Inst Chem Eng (Chem Eng Res Des) 82 (C2): 164-173
8. Afschar AS, Biebl H, Schaller K, Schugerl K (1985) Produccin de acetona y
butanol por Clostridium acetobutylicum en cultivo continuo con reciclado
24. Ennis BM, Maddox ES, Schoutens GH (1986) inmovilizado
celular. Appl Microbiol Biotechnol 22: 394-398
Clostridium acetobutylicum para la produccin de butanol continua de permeado de
suero. Nueva Zelanda J Dairy Sci Technol 21: 99- 109
9. Pierrot P, Fick M, Engasser JM (1986) fermentacin butanol acetona continuo con
una alta productividad por clula de ultrafiltracin y el reciclaje. Lett Biotechnol 8:
25. Ezeji TC, Karcher PM, Qureshi N, Blaschek HP (2005) Mejorar el rendimiento de
253-256
un gas a base de pelar sistema de recuperacin para eliminar butanol a partir de
10. Qureshi N, Schripsema J, Lienhardt J, Blaschek HP (2000) Produccin de
Clostridium beijerinckii fermentacin. Bioprocesos Biosyst Eng 27: 207-214
disolvente continuo por Clostridium beijerinckii
BA101 inmovilizado por adsorcin sobre ladrillo. Mundial J Microbiol Biotechnol 16:
26. Lai MC, Traxler RW (1994) A acoplado fermentacin continua de dos etapas para la
377-382
produccin de disolvente por acetobutylicum Clostridium. Enzym Microbial Technol
11. Huang WC, Ramey DE, Yang ST (2004) produccin continua de butanol por Clostridium
16: 1021-1025
acetobutylicum inmovilizada en una fi biorreactor de lecho fibroso. Appl Biochem
27. Mulchandani A, Volesky B (1994) Produccin de acetona-butanol-etanol por Clostridium
Biotechnol 113-116: 887-898
acetobutylicum mediante un giro fi ltro biorreactor de perfusin. J Biotechnol 34:
12. Maddox ES (1989) La fermentacin acetona-butanol-etanol: recientes progresos
51-60
en la tecnologa. Biotechnol gentica Eng Rev 7: 190-220

123
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