UNIVERSIDAD CATLICA DE SANTA MARA

FACULTAD DE CIENCIAS E INGENIERAS

QUMICAS Y BIOLGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA

VETERINARIA Y ZOOTECNIA

TEMA: Determinacin de Protenas totales y fraccionadas

CURSO: Laboratorio clnico

DOCENTE: Dr. Jorge Luis Zegarra Paredes

DE: Alexandra Constanza Daz Coloma

AREQUIPA 2017
 Practica N 8: Determinacin de Protenas

INTRODUCCIN

Las protenas totales de nuestro organismo son un conjunto de compuestos orgnicos

macromoleculares, de un peso molecular elevado, que estn formadas por molculas
llamadas aminocidos que se unen entre s por enlaces peptdicos.
La secuencia con la que estos aminocidos se encadenan y el nmero de cadenas de
aminocidos, determinan cul es la estructura primaria de las protenas.
Las protenas son introducidas en el organismo a travs de los alimentos, donde se se
dividen en aminocidos para formar posteriormente las nuevas protenas a travs del
proceso conocido como sntesis de protenas. Las protenas realizan multitud
de funciones en nuestro organismo para su correcto funcionamiento.
OBJETIVOS

Cuantificar en muestras sanguneas los niveles de protenas totales

Cuantificar en muestras sanguneas los niveles de albumina
Estimar en muestras sanguneas los niveles de globulinas

MARCO TEORICO

Las protenas totales son el resultado de sumar los distintos componentes proteicos
presentes en el organismo tales como: Alfa1, alfa2, beta gamma globulina y albmina.
Las protenas fraccionadas, al contrario que que las protenas totales, miden la cantidad
especfica de cada protena. Ambas pruebas, protenas totales y fraccionadas, son tiles
a la hora de determinar estados anormales y enfermedades que pueden afectar a
nuestro organismo.

I. Protenas totales

Significancia clnica
Hiperproteinemia: deshidratacin
Hipoproteinemia: desnutricin (-ALB, -GB) enteritis o nefritis (-ALB, +-GB)
Fundamento del mtodos

Mtodo Biuret

CuSO4
Protenas plasmticas compuesto coloreado azul violeta
Reactivos
Reactivo de biuret (CuSO4) 2- 8C
Muestras
Suero libre de hemolisis
Plasma (fibringeno)

MATERIALES

Materiales de laboratorio
Tubos Vacutainer rojo o amarillo
Agujas y holder Vacutainer
Tubos de ensayo 3 *100 ml
Micropipetas 10ul y 100ul
Cronometro
Puntas de Micropipetas
Gradillas

Equipos
Centrifugadora
Bao Mara
Fotocolormetro con cubeta termoestable 520 -560 nm

PROCEDIMIENTO

Mtodo Biuret
Centrifugar la muestra de sangre a 1500 2000 rpm por 10 15 minutos
 Separar el plasma de la muestra
Hacer la mezcla de tubos blanco , calibrador y las muestras

Tubo blanco Tubo calibrador Tubo de muestras

Muestra --- --- 0.01ml

Calibrador --- 0.01 ml ---

Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml

Mezclar e incubar a 37C por 10minutos o 20 minutos a temperatura ambiente

Calcular el factor de calibracin

 Factor de CC. de calibracin = 200 g/dl =
calibracin = Abs del calibrador 123.30 0.984

Medir la absorbancia de las muestras a 540 nm

Calcular los niveles de Protenas totales

PP totales g/dl = Factor de calibracin * Abs de muestra

Especificaciones de desempeo

Linealidad: hasta 15 g/dL.

Lmite de deteccin: 0.5 g/dL.
Sensibilidad analtica: 1 g/dL

Interferencias:

Hemoglobina sobre 0,3 gr/dL,

Bilirrubina sobre 220 mg/dL
Lipemia
 Rangos de referencia

II. Albumina

Significancia clnica
Hipoalbuminemia: deshidratacin
Hipoalbuminemia: dficit nutricional , nefritis , hepatitis
Fundamento del mtodos
RIA (radioinmunofluorescencia)*
Electroforesis de protenas*

Mtodo Verde de Bromocresol (BCG)

Albumina + verde de bromocresol Compuesto coloreado verde
Reactivos
Verde bromocresol (BCG) 4C 25C
Muestras
Suero libre de hemolisis
Plasma (fibringeno)

MATERIALES

Materiales de laboratorio
Tubos Vacutainer rojo o amarillo
Agujas y holder Vacutainer
Tubos de ensayo 3 *100 ml
Micropipetas 10ul y 100ul
Cronometro
Puntas de Micropipetas
Gradillas

Equipos
Centrifugadora
Bao Mara
Fotocolormetro con cubeta termoestable 570 -640 nm

PROCEDIMIENTO

Mtodo BCG
Centrifugar la muestra de sangre a 1500 2000 rpm por 10 15 minutos
Separar el plasma de la muestra
Hacer la mezcla de tubos blanco , calibrador y las muestras

Tubo blanco Tubo calibrador Tubo de muestras

Muestra --- --- 0.01ml

 Calibrador --- 0.01 ml ---

Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml

Mezclar e incubar a 37C por 10minutos o 20 minutos a temperatura ambiente

Calcular el factor de calibracin

Factor de CC. de calibracin = 100 g/dl =

calibracin = Abs del calibrador 123.30 0.811

Medir la absorbancia de las muestras a 620 nm

Calcular los niveles de Albumina

Albumina g/dl = Factor de calibracin * Abs de muestra

 Especificaciones de desempeo

Linealidad: hasta 8 g/dL.

Lmite de deteccin: 1 g/dL.
Sensibilidad analtica: 1 g/dL

Interferencias:

Hemoglobina sobre 0.25 gr/dL,

Bilirrubina sobre 2.5 mg/dL
Lipemia

Rangos de referencia
III. Globulinas

Significancia clnica
Controlar la accin de las enzimas lisosomales.
Inflamacin y dao del tejido.
Formacin de eritrocitos y plaquetas.
Inmunidad inespecfica

Inmunoglobulinas sricas o anticuerpos.

Fundamento del mtodos

Para estimar lo niveles de inmunoglobulinas sricas solo se necesita hacer una formula

Protenas totales albumina = Globulinas

RESULTADOS

Pacientes Protenas totales Albumina Globulinas

Canino 8.35 3.02 5.33
Bovino 6.15 4.12 2.03
Humano 8.07 4.74 3.33
Canino 6.08 3.71 2.37
Canino 6.57 5.45 1.12
Canino 7.26 4.34 2.92
Humano 7.93 6.36 1.37
Humano 7.08 5.75 1.33
Canino 7.31 5.63 1.68